biochain Z7030031用户手册和说明

小鼠内皮祖细胞体外生长

产品编号：Z7030031

介绍

内皮祖细胞（epc）是内皮细胞系中的一种原始细胞类型。它们是骨髓来源的细胞，具有类似于胚胎血管母细胞的特性。这些祖细胞迁移到血液中，能够分化成各种成熟的血管内皮细胞类型。

epc在血管生成和血管生成中起着重要作用。近的证据表明

epc在肿瘤生长和转移中的作用。epc数目的改变与淋巴瘤、多发性骨髓瘤、lewis肺癌和肝细胞癌（hcc）有关。在各种疾病的发病机制中，包括冠状动脉疾病（cad）、缺血、肺动脉高压、脑血管疾病、急性心肌梗死、糖尿病、关节炎和伤口愈合中，epc的数量和功能也发生了变化。此外，epc对衰老和吸烟相关疾病有影响，提示epc在这些领域有潜在的应用。

epoc的规范与表征

从7-8周龄c57/bl6小鼠骨髓中分离出生物链小鼠内皮生长细胞（mepoc），并进行体外培养。我们的mepoc产品在第9-10次传代时作为冷冻保存或增殖细胞交付。该细胞被认为是晚期epc，因为它是cd 133-。每个冷冻瓶在1毫升冷冻培养基中含有大于5 x 10 ⁵细胞。我们的mepocs具有与内皮祖细胞相同的纺锤状形态。

保管部

对于冷冻保存的细胞，在接收时立即将细胞从干冰转移到液氮中，并将细胞保存在液氮中，直到需要进行细胞培养进行实验。

航运

冷冻保存的细胞在干冰上运输；增殖细胞在室温下运输。

epoc培养说明

一、MEPOC生长培养基的制备

我们推荐使用Biochain的MEPOC生长培养基（CAT Z7030033）培养我们的MEPC。

一。在室温水浴中解冻MEPOC生长介质补充剂（CAT Z7030034）。

2.在Mepoc基本培养基（CAT Z7030035）的瓶子（500 ml）中加入整个体积（25 ml）的EPOC生长培养基补充剂，制备Mepoc生长培养基。生物链的mepoc生长培养基不含抗生素，但如果担心污染，可以在培养基中添加抗生素。

三。使用前，在37°C水浴中加热部分mepoc生长介质。

二。解冻冷冻细胞

一。在37°C水浴中加热EPOC生长培养基。

2.用70%乙醇擦拭冰冻小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解冻冷冻细胞。

三。将细胞悬液无菌转移到15ml试管中。用1毫升生长培养基冲洗小瓶，并在15毫升试管中与细胞混合。以170克（或1400转/分）的速度离心5分钟，使细胞沉淀。除去上清液。加入5ml新鲜小鼠epc培养基，置于t25烧瓶中。

四。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。每隔一天换一次。健康的培养物显示纺锤体形态，培养2-3天后细胞数量应加倍。

三、亚培养细胞

一。当细胞达到100%汇合时进行继代培养。

2.在通过细胞前一天更换培养基。

三。在37°C水浴中加热Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生长培养基。

四。用Dulbecco的PBS冲洗细胞。

5个。用胰蛋白酶/EDTA溶液（1.5毫升/25平方厘米）培养细胞3-5分钟，直到大约90%的细胞开始分离。轻轻地填充血管使细胞分离。

6.加入相当于胰蛋白酶/EDTA体积1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶，轻轻摇动培养管混合。

7号。轻轻地重新悬浮细胞，并将细胞转移到15ml锥形管中。

8个。在室温下将细胞悬液在170 x g下离心5分钟。

9号。小心地去除上清液，不要干扰细胞颗粒。在生长培养基中重新悬浮细胞。

10个。将它们按1:5的比例放入新的培养皿中。

11号。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。每隔一天换一次。

iv.在充满mepoc生长培养基的t25、t75、t125和t225烧瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。

当烧瓶到达时：

一。从烧瓶中倒出大部分培养基，并在烧瓶中留适量。

2.在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。第二天换成中号，以后每隔一天换一次。健康的培养基在培养2-3天后，纺锤形细胞形态和细胞数量应加倍。

Related Products

mEPOC Growth Medium (Cat# Z7030033)

mEPOC Basal Medium (Cat# Z7030035)

mEPOC Growth Medium Supplement (Cat# Z7030034)

mEPOC Freezing Medium (Cat# Z7030036)

References

1. Asahara T, Murohara T, Sullivan A, Silver M, van der Zee R, Li T, Witzenbichler B, Schatteman G and Isner JM (1997). Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275:964-967.

2. Gupta M (2007). Circulating endothelial cells and circulating endothelial cell progenitors as surrogate markers for determining response to antiangiogenic agents. Clin Colorectal Cancer 6(5):337-338.

3. Gao D, Nolan DJ, Mellick AS, Bambino K, McDonnell K, Mittal V. Endothelial progenitor cells control the angiogenic switch in mouse lung metastasis. Science. 2008 Jan 11; 319(5860):195-8.

BioChain是高质量加工生物样品产品和分析服务的者，用于推进转化医学，伴随诊断和临床产品研发。BioChain的产品可用于DNA和RNA测序，PCR和RT-PCR，基因表达分析，DNA和RNA纯化，蛋白质提取和纯化以及蛋白质表达分析。BioChain的下一代测序一站式服务，从临床样品采集，样品制备，测序到生物信息学分析，将*改变行业。

除了我们*的生物标本和样品制备业务，BioChain正在进入临床应用领域，为癌症和生殖健康提供临床基因组学诊断产品和临床试验服务。BioChain致力于通过持续流程改进计划以竞争力的价格实现高质量的产品和服务。BioChain建立了全面的质量保证计划，以满足客户的满意度，并为我们的内部生产设施保持ISO 9001：2015和ISO 13485：2003认证。

Human EPOC freezing medium

人EPOC冷冻培养基

目录 ＃

Z7030006

概观

设计BioChain的内皮祖细胞生长细胞（EPOC）生长培养基并测试我们的人和小鼠内皮祖细胞生长细胞（hEPOC和mEPOC）。它包括两个组成部分：EPC基础培养基和EPC生长培养基补充剂。

描述

BioChain为细胞培养提供特定的培养基

· 

· 产品编号： Z7030006

· 大小： 50毫升

冷冻EPOC

1) 当EPC细胞达到90%~95%汇合时冷冻。

(2)37°C水浴中温Dulbecco‘s PBS(不含Ca2和Mg2)和0.05%胰蛋白酶/EDTA。解冻EPOC冷冻 g室温培养基。

3.去除EPOC培养基，用Dulbecco‘s PBS冲洗EPOC，用胰蛋白酶/EDTA溶液孵育EPOC，直到约90%的细胞开始脱落。莫尼 在显微镜下观察细胞以避免过度胰蛋白酶化。

4)加入相当于胰蛋白酶/EDTA溶液体积1/10的胎牛血清，中和胰蛋白酶。轻轻摇动文化容器混合。

5)将细胞悬液转入15 ml锥形管。取悬浮液的一个小别名来计数细胞。细胞悬液150×g，室温离心5分钟。

6.小心 把上清液拿掉。加入一定量的EPOC冷冻培养基，再悬浮细胞至0.5至1×10 6/ml.在每个冷冻瓶中分配1毫升。

7)将冷冻瓶放入冷冻容器中，慢慢地放入冷冻容器中。 在摄氏-80度的冷冻机中保持温度。第二天将小瓶转移到液氮中进行长期储存。

BioChain是高质量加工生物样品产品和分析服务的者，用于推进转化医学，伴随诊断和临床产品研发。BioChain的产品可用于DNA和RNA测序，PCR和RT-PCR，基因表达分析，DNA和RNA纯化，蛋白质提取和纯化以及蛋白质表达分析。BioChain的下一代测序一站式服务，从临床样品采集，样品制备，测序到生物信息学分析，将*改变行业。

除了我们*的生物标本和样品制备业务，BioChain正在进入临床应用领域，为癌症和生殖健康提供临床基因组学诊断产品和临床试验服务。BioChain致力于通过持续流程改进计划以竞争力的价格实现高质量的产品和服务。BioChain建立了全面的质量保证计划，以满足客户的满意度，并为我们的内部生产设施保持ISO 9001：2015和ISO 13485：2003认证。

目录 ＃

Z7030036

Mouse EPOC freezing medium

小鼠EPOC冷冻培养基

概观

设计BioChain的内皮祖细胞生长细胞（EPOC）生长培养基并测试我们的人和小鼠内皮祖细胞生长细胞（hEPOC和mEPOC）。它包括两个组成部分：EPC基础培养基和EPC生长培养基补充剂。

描述

BioChain为细胞培养提供特定的培养基

• 产品编号： Z7030036

• 大小： 50毫升

biochain Z5030012说明书

Malachite Green Phosphate Assay Kit

孔雀石绿磷酸盐检测试剂盒

总览

BioChain的孔雀石绿磷酸盐检测试剂盒基于对孔雀石绿，钼酸盐和游离正磷酸盐之间形成的绿色络合物的定量分析。通过分光光度计（600 – 660 nm）或酶标仪可以方便地测量反应迅速形成的颜色。非放射性比色测定试剂盒已经过优化，可提供出色的灵敏度和更长的保存期限。该测定方法简单，快速，只需一个添加步骤即可测定磷酸盐。可以在试管，比色皿或多孔板中进行测定。可以在96和384孔板中方便地进行测定，以高通量筛选酶抑制剂。

描述

BioChain的基于细胞的测定试剂盒可满足制药和生物技术客户不断增长的需求，这些需求源于从基因组学和蛋白质组学衍生出来的大量药物靶标。我们的客户正在寻求在基于细胞的系统中进行大规模筛选，因为准确而完整的细胞数据很有希望并可以代表生物的生理状况。该试剂盒配有用于该测定的所有试剂的完整系统和易于遵循的方案

孔雀绿磷酸盐检测试剂盒 (Z5030012)

孔雀绿磷酸盐检测试剂盒是基于对孔雀绿、钼酸盐和游离正磷酸盐之间形成的绿色复合物进行定量。可在分光光度计 (600-660 nm) 或酶标仪上方便地测定反应快速显色。对非放射性比色测定试剂盒进行了优化，以提供优越的灵敏度和延长的有效期。该测定法简单、快速，涉及磷酸盐测定的单个加入步骤。可在试管、比色皿或多孔板中执行测定。该试验可方便地在 96 孔和 384 孔板中进行，用于高通量筛选酶抑制剂。

关键特征

试剂非常稳定。由于我们的创新配方，不会发生试剂沉淀。因此，测定前无需过滤试剂，这是其他市售试剂盒的常见要求。

高灵敏度和宽检测范围：检测低至 1.6 pmole 的磷酸盐，有效范围为 0.02 M 至 40 M 磷酸盐。

快速方便：均匀的“混合和测量”测定法可在 20 min 内定量测定游离磷酸盐。

与常规实验室和 HTS 格式兼容：可在试管、比色皿或微孔板、分光光度计和酶标仪上进行测定。

在 96 孔和 384 孔板中观察到稳健且适用于 HTS：Z' 因子为 0.7-0.9。可在 HTS 液体处理系统上轻松实现自动化。

应用

磷酸酶测定：从肽、蛋白质或小分子底物中释放磷酸盐。

脂肪酶测定：从磷脂中释放磷酸盐

核苷三磷酸酶测定：从核苷三磷酸盐（ATP、GTP、TTP、CTP 等）中释放磷酸盐。

磷脂、蛋白质和 DNA 等中磷酸盐的定量

药物发现：高通量筛选磷酸酶抑制剂。

试剂盒内容物：在 96 孔板中进行 2,500 次测定

试剂 A：50 mL 试剂 B：1 mL 标准品：1 mL 1 mM 磷酸盐

储存条件。试剂和标准品在 4 ℃ 下可稳定储存 1 年。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时，应采取实验室试剂的常规预防措施。详细信息请参见材料安全数据表。

使用 96 孔板的程序

试剂制备。每次测定需要 20 L 工作试剂。通过混合 100 vol 试剂 A 和 1 vol 试剂 B（例如 5 mL 试剂 A 和 50 μL 试剂 B）制备足量的工作试剂。工作试剂在室温下可稳定储存至少 1 天。

重要提示：使用前必须将试剂恢复至室温。每次测定前，重要的是检查所有酶制剂和测定缓冲液中均不含游离磷酸盐。向 80µL 样品溶液中加入 20µL 工作试剂可方便地完成该操作。在 620 nm 处的空白 OD 值应低于 0.2，如果 OD 读数高于 0.2，检查磷酸水水平。双蒸水的 OD 读数通常低于 0.1。实验室清洁剂可能含有高水平的磷酸盐。*清洗后，确保实验室器具不污染磷酸盐。

• 磷酸盐标准品的制备。通过移取 40 L 1 mM 磷酸盐标准品，置于 960 L 蒸馏水或酶反应缓冲液中，制备含 40 M 磷酸盐的预混溶液。试管编号。

按下表所示稀释标准品。移取 80 L 标准品，一式两份，置于透明底 96 孔板的孔中。加入仅含水或反应缓冲液的空白对照。

2. 将 80µL 供试品转移至平板的不同孔中。

注：在酶反应的情况下，可通过加入特定抑制剂终止反应，或通过加入工作试剂直接终止反应。试验前可能需要稀释反应混合物（见一般注意事项）。对于 ATP 酶或 GTP 酶测定，ATP 或 GTP 浓度应低于 0.25 mM，如果反应混合物含有 > 0.25 mM 的 ATP 或 GTP，则用蒸馏水稀释样品。例如，如果 ATP 酶反应含有 1 mM ATP，则在反应结束时，在测定前用水将反应混合物稀释 4 倍。

• 向各孔中加入 20µL 工作试剂。轻敲微孔板轻轻混匀。

4. 室温下孵育 30 min，显色。

5. 在酶标仪上测定 600 nm-660 nm (620 nm) 处的吸光度。

对于 384 孔板中的测定，程序相同，只是标准品溶液和样品溶液的体积应为 40 L，工作试剂的体积应为 10 L。

图。96 孔板磷酸盐标准曲线。孵育 30 min 后，读取 620 nm 处的 OD。数据表示为平均 SD (n = 2)。有效检测范围为 0.02-40 M 磷酸盐。

一般考虑

孵育时间。显色反应在室温下 30 min 内完成。在 30 min 时读取 OD 值。

在高浓度磷酸盐 (> 100 M) 或存在高浓度蛋白质和金属（例如）的情况下，可能发生沉淀。

孔雀绿磷酸盐检测试剂盒