profoldin VRT100K简介
病毒 RNA 依赖性 RNA 聚合酶试验是使用黄病毒科（阳性、单链、包膜 RNA 病毒家族）中的 RNA 聚合酶开发的。该测定法基于在存在 NTP 的情况下，以 RNA 为模板，测定由 RNA 聚合酶合成的 RNA 分子。该试验可在 384 孔或 96 孔板中进行，用于检测黄病毒科 RNA 聚合酶的酶活性和高通量筛选抑制剂。
病毒 RNA 依赖的 RNA 聚合酶检测试剂盒-100（目录号VRT100K）包括 350µl 10 x 缓冲液、33µl 100 x 模板、33µl 100 xNTP（50 mM ATP 和 50 mM GTP）和 330µl 10 x 荧光染料。用于 384 孔板中病毒 RNA 聚合酶的 100 次测定。检测试剂盒包括除酶以外的所有试剂。
病毒 RNA 依赖的 RNA 聚合酶检测试剂盒-500（目录号VRT500K）包括 1550µl 10 x 缓冲液、160µl 100 x 模板、160µl 100 xNTP（50 mM ATP 和 50 mM GTP）和 1550µl 10 x 荧光染料。用于 384 孔板中病毒 RNA 聚合酶的 500 次测定。检测试剂盒包括除酶以外的所有试剂。
参考文件
Shu Yang 等人，Emetine 通过抑制病毒复制和减少病毒进入两种分子机制抑制寨卡和埃博拉病毒感染，Cell Discovery，第 4 卷，货号：31，（2018 年 6 月 5 日）。
试验方案
以下试验方案基于 384 孔板试验格式（板类型：Matrix 4318 或类似）。反应体积为 30 l，终测定体积为 60 l。对于 96 孔板测定（板类型：Costar 3915 或相似物），反应体积为 60 l，终测定体积为 120 l。
1. 反应：
各反应混合物的总体积为 30 l，包括 26.1 lH2O、3 l10 x 缓冲液、0.3 l100 x 模板、0.3 l100 xRNA 聚合酶和 0.3 l100 xNTP。将反应混合物在 37 ℃ 下孵育 60 min。
2. 检测：
用水稀释 10x 荧光染料，制成 1x 染料。将 30 l1 x 染料与 30 l 反应混合物混合。使用 485 nm 激发波长在 5 min 内测量 535 nm 处的荧光强度。
酶抑制试验方案
该测定法可在测定窗口、测定法线性和对竞争性抑制剂的灵敏度方面进行优化。ProFoldin 提供 HTS 分析开发服务。
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