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arcticzymes Cod UNG说明书

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arcticzymes Cod UNG说明书

Cod Uracil-DNA Glycosylase

鳕鱼尿嘧啶-DNA糖基化酶

来自大西洋鳕鱼的鳕鱼尿嘧啶-DNA糖基化酶（Cod UNG）是通过中度热处理*不可逆地灭活的UNG酶。该酶在含有修饰的Cod UNG基因的重组大肠杆菌（ung-）菌株中产生。

高鲁棒性

不耐热，在55°C时*不可逆转地失活

污染控制

RT-PCR，RT-qPCR，qPCR和kPCR中污染控制的理想选择

PCR后分析

启用PCR后分析

 

 

真正的不耐热尿嘧啶DNA糖基化酶

当今市场上有几种可商购的尿嘧啶-DNA糖基化酶。如果您不打算在PCR后进一步分析PCR产物，则其中大多数是细菌来源的，效果很好。但是，如果要存储PCR产物用于下游分析（例如克隆和测序），则UNG的重新激活和随后PCR产物的降解是大多数商用UNG的问题。来自ArcticZymes的Cod UNG是当今一种可*加热且不可逆地失活的UNG。

图1.*，不可逆地热灭活的UNG是Cod UNG。

如图1所示，其中测试了各种UNG在热灭活后的残留活性。用dUTP和1个单位的5种不同的市售UNGs进行PCR。PCR后，将PCR产物在室温下孵育各种时间间隔，然后加热并随后冷却。PCR产物的凝胶电泳显示UNG重新活化，因此，除了Cod UNG外，所有测试的所有UNG的PCR产物都严重降解。

 

图2.用1 U Cod UNG（A）或1 U E.coli UNG（B）预处理并在室温下孵育3小时的测序PCR产物的色谱图。只有Cod UNG保留序列质量不变。

通过对PCR产物进行测序，进一步评估了PCR后序列的质量和完整性。用添加到预混物中的四种不同的市售UNG之一进行PCR。PCR后，将PCR产物在室温或4°C下以不同的时间间隔孵育。随后将样品纯化并测序。*分析了序列数据，重点是由于UNG重新激活而降低了序列质量。如图2和图3所示，用UNG处理的样品，除用Cod UNG处理的样品外，由于UNG的再活化而显示出严重的PCR产物降解。

0h6h24hControlCod UNGSupplier ASupplier BSupplier C0100200300400500600700800900Amplicon length (bp)

  0小时 6小时 24小时
控制 789 779 774
鳕鱼 781 785 785
供应商A 784 786 66
供应商B 792 48  
供应商C 801 221  

图3. UNG重新激活导致序列降解。经各种UNG预处理并在室温下孵育的PCR产物的序列数据。除与Cod UNG一起温育的样品外，所有样品均显示UNG的重新活化和PCR产物的严重降解。

聚合酶链反应

Cod UNG适用于所有市售的预混料。确保在先前的PCR实验中使用了包含dNTP混合物的dUTP。

  • 将0.25 U Cod UNG直接添加到25 µl PCR反应中
  • 在室温下预孵育5分钟
  • 运行PCR

在分析之前，将PCR产物在-20°C或4°C的温度下保存尽可能长的时间。

一站式RT-PCR

  • 将0.2 U Cod UNG直接添加到您的20 µl RT-PCR反应中
  • 在室温下预孵育5分钟
  • 在50- 55°C下逆转录您的RNA
  • 运行PCR

 

物产

Cod UNG适用于所有市售的预混料。确保在先前的PCR实验中使用了包含dNTP混合物的dUTP。

  • 将0.25 U Cod UNG直接添加到25 µl PCR反应中
  • 在室温下预孵育5分钟
  • 运行PCR

在分析之前，将PCR产物在-20°C或4°C的温度下保存尽可能长的时间。