RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,本产品含有 UDG 酶,可有效防止气溶胶污染的风险。
本试剂盒利用耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA,并利用 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer,Enzymes Mix 等,缓冲液中已含有 Mg2+和 dNTP 等,并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子,能够保证引物扩增效率的同时,进行多达四重的反应。
产品信息
货号 |
11214ES60 / 11214ES80 / 11214ES92 |
规格 |
100 T / 1000 T / 10000 T |
组分信息
组分编号 |
组分名称 |
11214ES60 (100 T) |
11214ES80 (1000 T) |
11214ES92 (10000 T) |
11214-A |
2×Hifair® VN MP Buffer |
1.25 mL |
12.5 mL |
125 mL |
11214-B |
Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus) |
150 μL |
750 μL×2 |
15 mL |
11214–C |
RNase Free H2O |
1.2 mL |
12 mL |
120 mL |
【注】1. 2×Hifair® VN MP Buffer 为 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。本组分含有 dNTP 和 dUTP。
- Hifair® VN Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON® Hot Start Taq DNA Polymerase 和 UDG 酶。
储存条件
-25~-15℃保存,有效期18个月。
使用说明
- 反应体系(以25 μL为例)
组分 |
体积(μL) |
终浓度 |
2×Hifair® VN MP Buffer |
12.5 |
1× |
Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus) |
1.5 |
– |
Primer/Probe Mix (10 μM) |
1-4 |
0.4 μM |
模板RNA |
1-5 |
– |
RNase Free H2O |
to 25 |
– |
【注】使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
1. 引物浓度:Primer Mix 中包含多对引物,也可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。
2. 探针浓度:Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
3. 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。
4. 反应体系:推荐使用 25-50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
5. 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头;避免交叉污染和气溶胶污染。
- 参考扩增程序
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
扩增反应 |
95℃ |
15 sec |
45 |
60℃b |
30 secc |
【注】a. 逆转录:42℃或者50℃均可,时间 10-15 min。
b. 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c. 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。
- 适用机型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™,ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™;
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000;
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96;
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230731
Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,本产品含有 UDG 酶,可有效防止气溶胶污染的风险。
本试剂盒利用耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA,并利用 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer,Enzymes Mix 等,缓冲液中已含有 Mg2+和 dNTP 等,并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子,能够保证引物扩增效率的同时,进行多达四重的反应。
产品信息
货号 |
11214ES60 / 11214ES80 / 11214ES92 |
规格 |
100 T / 1000 T / 10000 T |
组分信息
组分编号 |
组分名称 |
11214ES60 (100 T) |
11214ES80 (1000 T) |
11214ES92 (10000 T) |
11214-A |
2×Hifair® VN MP Buffer |
1.25 mL |
12.5 mL |
125 mL |
11214-B |
Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus) |
150 μL |
750 μL×2 |
15 mL |
11214–C |
RNase Free H2O |
1.2 mL |
12 mL |
120 mL |
【注】1. 2×Hifair® VN MP Buffer 为 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。本组分含有 dNTP 和 dUTP。
- Hifair® VN Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON® Hot Start Taq DNA Polymerase 和 UDG 酶。
储存条件
-25~-15℃保存,有效期18个月。
使用说明
- 反应体系(以25 μL为例)
组分 |
体积(μL) |
终浓度 |
2×Hifair® VN MP Buffer |
12.5 |
1× |
Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus) |
1.5 |
– |
Primer/Probe Mix (10 μM) |
1-4 |
0.4 μM |
模板RNA |
1-5 |
– |
RNase Free H2O |
to 25 |
– |
【注】使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
1. 引物浓度:Primer Mix 中包含多对引物,也可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。
2. 探针浓度:Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
3. 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。
4. 反应体系:推荐使用 25-50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
5. 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头;避免交叉污染和气溶胶污染。
- 参考扩增程序
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
扩增反应 |
95℃ |
15 sec |
45 |
60℃b |
30 secc |
【注】a. 逆转录:42℃或者50℃均可,时间 10-15 min。
b. 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c. 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。
- 适用机型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™,ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™;
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000;
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96;
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230731
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