耐高盐全能核酸酶(Salt Active UltraNuclease)同Benzonase Nuclease

耐高盐全能核酸酶(Salt Active UltraNuclease)同Benzonase Nuclease

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Salt Active UltraNuclease GMP-grade(耐高盐全能核酸酶)是一种来源于海洋微生物重组非特异性核酸内切酶,UltraNuclease相比在0.5M NaCl条件下具有最佳活性,广泛应用于生产工艺流程中,有效去除核酸污染。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)表达纯化,不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液粘度提高蛋白纯化效率及功能研究;还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业作为宿主残留核酸去除试剂,将宿主残留核酸至皮克(pg)级别从而提高生物制品功效和安全性;并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞(PBMC)的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供,储存于缓冲液(25 mM Tris-HCl5 mM MgCl2500 mM NaCl50% GlycerolpH 7.5)中,无色透明液体。

产品性质

来源

E. coli

分子量(Molecular Weight

24.7 kDa

等电点

9.61

纯度(Purity

99%

酶活(Enzyme Activity

250-300 U/μL

温度(Optimum Temperature

37℃(工作范围0-42℃

辅助因子(Cofactor

1-10 mM Mg2+

储存缓冲液(Storage Buffer

25 mM Tris-HCl5 mM MgCl2500 mM NaCl50% GlycerolpH 7.5

活性单位定义(Unit Definition

一定条件下,在底物过量时 37 30 min 260 nm 处吸光值变化 1.0 所需要的酶量定义为一个活性单位U)。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。若是打开包装后并4℃放置超过一周,建议过滤除菌防止微生物污染。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1样本准备

贴壁细胞:去除培养基,用PBS细胞,去除上清。

悬浮细胞:离心收集细胞,用PBS清洗细胞,6,000 rpm 离心10 min,收集沉淀。

大肠杆菌:离心收集菌体,用PBS清洗1次,8,000 rpm 离心5 min,收集沉淀。

2、样品处理

将收集到的细胞沉淀按照质量(g)与体积(mL)比1(10~20) 的比例进行裂解处理,也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞(1 g细胞约为109个)

3、酶的添加

1. 添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内,将pH调整成7.5-9

2按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加Salt Active UltraNuclease37孵育30min以上。也可以自行选定添加方案,在一定范围内增加酶量,消化所需时间相应减少。

】耐高盐全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响,初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清,进行后续相关实验。

若溶液偏酸性或者偏碱性,含有较高浓度的去垢剂、变性剂,应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220922

 

Q:你们有FDA的备案吗?(你们能提供备案凭证吗?提供申报材料?)

A:我们有DMF的备案证,如果后面后申报需求,我们可以提供全套的申报材料也可以协助申报。

Q:全能核酸酶残留检测的检测下限是多少?

A:检测下限 23 pg/mL,采用的是ELISA的方式,标曲范围:0.047~3 ng/mL

Q:这个酶的稳定性怎么样?

A:酶稳定性这块我们做过温度、ph、磷酸根离子、sds、反复冻融,运输等测试,均有不错的结果,具体实验数据老师如果有需要我们可以提供。

耐高盐全能核酸酶(Salt Active UltraNuclease)同Benzonase Nuclease

暂无内容

Salt Active UltraNuclease GMP-grade(耐高盐全能核酸酶)是一种来源于海洋微生物重组非特异性核酸内切酶,UltraNuclease相比在0.5M NaCl条件下具有最佳活性,广泛应用于生产工艺流程中,有效去除核酸污染。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)表达纯化,不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液粘度提高蛋白纯化效率及功能研究;还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业作为宿主残留核酸去除试剂,将宿主残留核酸至皮克(pg)级别从而提高生物制品功效和安全性;并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞(PBMC)的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供,储存于缓冲液(25 mM Tris-HCl5 mM MgCl2500 mM NaCl50% GlycerolpH 7.5)中,无色透明液体。

产品性质

来源

E. coli

分子量(Molecular Weight

24.7 kDa

等电点

9.61

纯度(Purity

99%

酶活(Enzyme Activity

250-300 U/μL

温度(Optimum Temperature

37℃(工作范围0-42℃

辅助因子(Cofactor

1-10 mM Mg2+

储存缓冲液(Storage Buffer

25 mM Tris-HCl5 mM MgCl2500 mM NaCl50% GlycerolpH 7.5

活性单位定义(Unit Definition

一定条件下,在底物过量时 37 30 min 260 nm 处吸光值变化 1.0 所需要的酶量定义为一个活性单位U)。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。若是打开包装后并4℃放置超过一周,建议过滤除菌防止微生物污染。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1样本准备

贴壁细胞:去除培养基,用PBS细胞,去除上清。

悬浮细胞:离心收集细胞,用PBS清洗细胞,6,000 rpm 离心10 min,收集沉淀。

大肠杆菌:离心收集菌体,用PBS清洗1次,8,000 rpm 离心5 min,收集沉淀。

2、样品处理

将收集到的细胞沉淀按照质量(g)与体积(mL)比1(10~20) 的比例进行裂解处理,也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞(1 g细胞约为109个)

3、酶的添加

1. 添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内,将pH调整成7.5-9

2按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加Salt Active UltraNuclease37孵育30min以上。也可以自行选定添加方案,在一定范围内增加酶量,消化所需时间相应减少。

】耐高盐全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响,初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清,进行后续相关实验。

若溶液偏酸性或者偏碱性,含有较高浓度的去垢剂、变性剂,应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220922

 

Q:你们有FDA的备案吗?(你们能提供备案凭证吗?提供申报材料?)

A:我们有DMF的备案证,如果后面后申报需求,我们可以提供全套的申报材料也可以协助申报。

Q:全能核酸酶残留检测的检测下限是多少?

A:检测下限 23 pg/mL,采用的是ELISA的方式,标曲范围:0.047~3 ng/mL

Q:这个酶的稳定性怎么样?

A:酶稳定性这块我们做过温度、ph、磷酸根离子、sds、反复冻融,运输等测试,均有不错的结果,具体实验数据老师如果有需要我们可以提供。

耐高盐全能核酸酶(Salt Active UltraNuclease)同Benzonase Nuclease

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Suramin hexasodium salt | 129-46-4

Suramin hexasodium salt | 129-46-4

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品性质

英文别名 (English Synonym)

Suramin hexasodium salt

中文名称 (Chinese Name)

苏拉明钠

靶点 (Target)

P2X purinergic receptor

通路 (Pathway)

Membrane Transporter/Ion Channel

CAS号 (CAS NO.)

129-46-4

分子式 (Formula)

C51H34N6Na6O23S6

分子量 (Molecular Weight)

1429.15

纯度 (Purity)

≥98%

溶解性 (Solubility)

溶于DMSO

 

运输和保存方法

-25~-15℃保存,有效期3年

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 粉末溶解前请先短暂离心,以保证产品全在管底。

3. 避光干燥保存,避免反复冻融。

4. 请勿吸入、吞咽或者直接接触皮肤和眼睛。

5. 本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。

 

使用浓度

【具体使用浓度请参考相关文献,并根据自身实验条件(如实验目的,细胞种类,培养特性等)进行摸索和优化。】

产品性质

英文别名 (English Synonym)

Suramin hexasodium salt

中文名称 (Chinese Name)

苏拉明钠

靶点 (Target)

P2X purinergic receptor

通路 (Pathway)

Membrane Transporter/Ion Channel

CAS号 (CAS NO.)

129-46-4

分子式 (Formula)

C51H34N6Na6O23S6

分子量 (Molecular Weight)

1429.15

纯度 (Purity)

≥98%

溶解性 (Solubility)

溶于DMSO

 

运输和保存方法

-25~-15℃保存,有效期3年

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 粉末溶解前请先短暂离心,以保证产品全在管底。

3. 避光干燥保存,避免反复冻融。

4. 请勿吸入、吞咽或者直接接触皮肤和眼睛。

5. 本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。

 

使用浓度

【具体使用浓度请参考相关文献,并根据自身实验条件(如实验目的,细胞种类,培养特性等)进行摸索和优化。】

EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 可逆性的金属蛋白酶抑制剂|CAS 6381-92-6

EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 可逆性的金属蛋白酶抑制剂|CAS 6381-92-6

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)是一种二价离子螯合剂,常与金属离子如锰(II)、铜(II)、铁(III)及钴(II)等形成复合物来抑制金属依赖性的酶促反应。同理,也能去除一些酶催化体系中痕量重金属引入的抑制效应。EDTA普遍应用于生物学各个领域,常用在电泳缓冲体中,金属依赖性的蛋白水解酶或者核酸酶反应,细胞消化或者样品解聚过程等等。EDTA是一种可逆性的金属蛋白酶抑制剂,有效浓度一般为1-10 mM。另外,EDTA常以二钠或者三钾盐的形式用作抗凝剂,作用机制在于它能够螯合血液中的钙离子从而阻止凝血发生。常用浓度为1.5 mg/mL血液。

本品是二钠盐形式的EDTA,室温下缓慢溶于水,最大浓度可达260 mM(约96 mg/mL),此时溶液pH约为4-6。常配制成0.5 M的储存液(pH 8.0),溶液保存或者煮沸都很稳定,可高压灭菌后再4℃存放。

产品性质

中文别名(Chinese synonym)

四乙酸二氨基乙烯二钠;托立龙;

英文别名(English synonym)

EDTA disodium salt, dihydrate; Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt, dihydrate;

CAS号(CAS NO.)

6381-92-6

分子式(Formula)

C10H14N2O8Na2·2H2O

分子量(Molecular weight)

372.24 g/mol

外观(Appearance)

白色结晶性粉末

纯度(Purity)

>99%

溶解性(Solubility)

溶于水,不溶于乙醇,乙醚

结构式(Structure)

EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 可逆性的金属蛋白酶抑制剂|CAS 6381-92-6

运输和保存方法

常温运输与保存。

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)本产品仅作科研用途!

HB181123

 

EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 可逆性的金属蛋白酶抑制剂|CAS 6381-92-6

暂无内容

EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 可逆性的金属蛋白酶抑制剂|CAS 6381-92-6

暂无内容

乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)是一种二价离子螯合剂,常与金属离子如锰(II)、铜(II)、铁(III)及钴(II)等形成复合物来抑制金属依赖性的酶促反应。同理,也能去除一些酶催化体系中痕量重金属引入的抑制效应。EDTA普遍应用于生物学各个领域,常用在电泳缓冲体中,金属依赖性的蛋白水解酶或者核酸酶反应,细胞消化或者样品解聚过程等等。EDTA是一种可逆性的金属蛋白酶抑制剂,有效浓度一般为1-10 mM。另外,EDTA常以二钠或者三钾盐的形式用作抗凝剂,作用机制在于它能够螯合血液中的钙离子从而阻止凝血发生。常用浓度为1.5 mg/mL血液。

本品是二钠盐形式的EDTA,室温下缓慢溶于水,最大浓度可达260 mM(约96 mg/mL),此时溶液pH约为4-6。常配制成0.5 M的储存液(pH 8.0),溶液保存或者煮沸都很稳定,可高压灭菌后再4℃存放。

产品性质

中文别名(Chinese synonym)

四乙酸二氨基乙烯二钠;托立龙;

英文别名(English synonym)

EDTA disodium salt, dihydrate; Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt, dihydrate;

CAS号(CAS NO.)

6381-92-6

分子式(Formula)

C10H14N2O8Na2·2H2O

分子量(Molecular weight)

372.24 g/mol

外观(Appearance)

白色结晶性粉末

纯度(Purity)

>99%

溶解性(Solubility)

溶于水,不溶于乙醇,乙醚

结构式(Structure)

EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 可逆性的金属蛋白酶抑制剂|CAS 6381-92-6

运输和保存方法

常温运输与保存。

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)本产品仅作科研用途!

HB181123

 

EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 可逆性的金属蛋白酶抑制剂|CAS 6381-92-6

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EDTA Disodium Salt Dihydrate 乙二胺四乙酸二钠盐二水 可逆性的金属蛋白酶抑制剂|CAS 6381-92-6

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MG-H1-d3 (Acetate salt)说明书

MG-H1-d3 (Acetate salt)说明书

MG-H1-d3 (Acetate salt)

化学名称:三氘甲基乙酰乙酸羟亚咪唑酮异构体(两种对映异构体的混合物)// 同义词:(S-2-氨基-5-5-[D3]甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑-2-]氨基)戊酸,甲基乙酰乙酸羟亚咪唑酮异构体-d3,(2S-2-氨基-5-((5-(甲基-d3-4-氧代-4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)戊酸

Art-Nr.:

HAA3002

Formel:

C9H13D3N4O3

Molare Masse:

231,27g/mol


相关货号:

货号

规格

价格

品牌

HAA3002.0005

5mg

300,00€

iris-biotech

HAA3002.0010

10mg

495,00€

iris-biotech

 




描述

美拉德反应产物(MRP)是食物加热处理的指标,也是营养质量的标志。它们也自然出现在人体中,称为高级糖基化终末产物(AGEs)。因此,它们是身体健康和疾病过程(包括炎症、糖尿病、癌症和衰老)的指标。因此,AGEs在化妆品、生物化学、食品和制药应用中受到广泛关注。

该材料以含有不同含量的酸反离子的盐形式提供。每个批次的净含量在相应的分析证书中指出。


参考文献

分离和鉴定5-甲基咪唑烷-4-酮衍生物作为甘油醛衍生的高级糖基化终产物;T. Usui, H. WatanabeF. Hayase;《生物科学、生物技术和生物化学杂志》,2006年,701496-8https://doi.org/10.1271/bbb.50584

串联质谱定量筛选细胞和细胞外蛋白质中的高级糖基化终产物;P. J. ThornalleyS. BattahN. AhmedN. KarachaliasS. AgalouR. Babaei-JadidiA. Dawnay;《生化学杂志》,2003年,375581-92https://doi.org/10.1042/BJ20030763

高级糖基化终产物(AGEs)的测定:通过6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺酯衍生化的色谱测定调查AGEs,并应用于Nepsilon-羧甲基赖氨酸和Nepsilon-1-羧乙基)赖氨酸修饰的白蛋白;N. AhmedO. K. ArgirovH. S. MinhasC. A. CordeiroP. J. Thornalley;《生化学杂志》,2002年,3641-14https://doi.org/10.1042/bj3640001

从核糖和胶原蛋白的体外反应中分离和表征高级糖基化终产物;R. G. PaulN. C. AveryD. A. SlatterT. J. SimsA. J. Bailey;《生化学杂志》,1998年,330(第3部分):1241-8https://doi.org/10.1042/bj3301241

检测和鉴定由精氨酸残基和甲基乙二醛反应产生的蛋白质结合的咪唑烷;T. HenleA. W. WalterR. HaenerH. Klostermeyer;《食品检验和研究杂志》,1994年,19955-58https://doi.org/10.1007/bf01192954

 

registech D-荧光素钾盐(D-luciferin potassium salt)


registech D-荧光素钾盐(D-luciferin potassium salt)

简要描述:registech D-荧光素钾盐(D-luciferin potassium salt)订购信息

详细介绍

产品咨询

 registech, D-荧光素钾,D-luciferin potassium,registech代理,registech产品,registech中国,registech中国代理,registech荧光素钾盐代理

 

D-荧光素钾(D-luciferin potassium)

Description/产品描述
D-Luciferin 作为荧光素酶的底物,存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下,Luciferin被氧化,产生蓝绿色的光(560nm),当底物过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、细菌、哺乳动物细胞的常用报告基因。由于没有背景干扰,因此可以很容易地检测出低至 0.02 pg水平的荧光素酶。

Quality / 质量

  1. 高纯度(>99%)
  2. 每批产品均经过发光效率检测
  3. 生物工程合成,生物安全性高
  4. 专业手性化合物合成,GMP工厂生产,含量高,背景干扰低

Storage / 贮存 
-20℃保存,4℃运输 

Application / 应用
1.In vitro分析 
2.In vivo分析(活体成像)
3.高灵敏度ATP分析

Protocol for In vivo analysis / 活体成像分析方法 
1.用DPBS(w/o Mg2+、Ca2+)配置D-luciferin工作液(15mg/mL)* ,0.2 um滤膜无菌过滤。 
2.注射量:10μL/g的体重,如10 g重小鼠,注射100μL储备液(1.5 mg Luciferin)。 
3.腹腔注射 (i.p.) 10-15分钟后,上机进行图像分析。

Protocol for In vitro analysis / 体外分析方法 
1. 用无菌水配置200×储备液(30mg/ml)*,立即使用,或-20℃保存。
2. 用预热好的*培养基1∶200稀释Luciferin储备液,配置工作液(150μg/mL)。 
3. 去除培养细胞的培养基。 
4. 进行图像分析前,向细胞中添加1×的Luciferin工作液,进行图像分析**。

* :溶解D-luciferin时要*。 
**:在图像分析前,将细胞进行37℃的短时间培养可以增加信号强度。 

Brand/品牌
 
SYNCHEM

Order / 订购

Product Size Regis  Price
D-Luciferin Potassium Salt 100 mg 1-360221-200 901
D-Luciferin Potassium Salt 1 g 1-360222-200 4913
D-Luciferin Potassium Salt 10 x 100 mg 1-360223-200 5083
D-Luciferin Potassium Salt 10 g 1-360224-200 44030
D-Luciferin Potassium Salt 10 x 1 g 1-360225-200 44030
D-Luciferin Potassium Salt 4 x 25 mg 1-360226-200 1105

 

Sacubitril hemicalcium salt | 1369773-39-6

Sacubitril hemicalcium salt | 1369773-39-6

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品性质

英文别名 (English Synonym)

Sacubitril hemicalcium salt

中文名称 (Chinese Name)

沙库必曲钙盐

靶点 (Target)

Neprilysin

通路 (Pathway)

Protease/Metabolic Enzyme

CAS号 (CAS NO.)

1369773-39-6

分子式 (Formula)

C24H28Ca0·5NO5

分子量 (Molecular Weight)

430.52

纯度 (Purity)

≥98%

溶解性 (Solubility)

溶于DMSO

 

运输和保存方法

-25~-15℃保存,有效期3年

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 粉末溶解前请先短暂离心,以保证产品全在管底。

3. 避光干燥保存,避免反复冻融。

4. 请勿吸入、吞咽或者直接接触皮肤和眼睛。

5. 本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。

 

使用浓度

【具体使用浓度请参考相关文献,并根据自身实验条件(如实验目的,细胞种类,培养特性等)进行摸索和优化。】

Sacubitril hemicalcium salt | 1369773-39-6

暂无内容

Sacubitril hemicalcium salt | 1369773-39-6

暂无内容

产品性质

英文别名 (English Synonym)

Sacubitril hemicalcium salt

中文名称 (Chinese Name)

沙库必曲钙盐

靶点 (Target)

Neprilysin

通路 (Pathway)

Protease/Metabolic Enzyme

CAS号 (CAS NO.)

1369773-39-6

分子式 (Formula)

C24H28Ca0·5NO5

分子量 (Molecular Weight)

430.52

纯度 (Purity)

≥98%

溶解性 (Solubility)

溶于DMSO

 

运输和保存方法

-25~-15℃保存,有效期3年

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 粉末溶解前请先短暂离心,以保证产品全在管底。

3. 避光干燥保存,避免反复冻融。

4. 请勿吸入、吞咽或者直接接触皮肤和眼睛。

5. 本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。

 

使用浓度

【具体使用浓度请参考相关文献,并根据自身实验条件(如实验目的,细胞种类,培养特性等)进行摸索和优化。】

Sacubitril hemicalcium salt | 1369773-39-6

暂无内容

Sacubitril hemicalcium salt | 1369773-39-6

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Luciferin potassium salt 说明书

Luciferin potassium salt (D-荧光素钾盐)说明书

产品货号

货号

规格

价格

78LUCA1001-25mg

25mg

¥130.00

78LUCA1001-100mg

100mg

¥700.00

78LUCA1001-1g

1g

¥2,500.00

78LUCA1001-10×1g

10×1g

¥22,000.00

 

保存与运输条件

冰袋运输,-20℃避光保存,有效期1年。

产品简介

D-荧光素是zui流行和多功能的生物发光底物。萤火虫荧光素酶/荧光素生物发光系统存在于萤火虫(Photinus pyralis)和其他几种甲虫中。荧光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP活化的荧光素。萤火虫荧光素酶通过荧光素的ATP依赖性氧化产生光。来自该反应的560nm化学发光在数秒内达到峰值,当荧光素和ATP过量存在时,光输出与荧光素酶活性成比例。萤火虫荧光素酶长期以来与抗体结合,并在荧光素作为检测底物的免疫测定中用作标记物。与HRP和碱性磷酸酶相比,荧光素酶对化学修饰的耐受性较差。该酶的一个特别优点是除了其高灵敏度之外,在哺乳动物组织中存在低内源荧光素酶活性。荧光素酶的另一个重要用途是卫生监测领域。荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染,因为存在于所有生物体中的ATP需要产生发光。这种ATP生物发光的主要应用是通过测试食品加工厂中的表面来确定质量,以确定是否存在设备或产品的污染。

操作方法

以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子,它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

1.用于体外生物发光图像测定的实施方案

1.1在无菌水中制备100mM(100-200X)荧光素原液。混合均匀。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

1.3从培养细胞中分离培养基。

1.4将荧光素工作溶液加入细胞中,并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。

2.用于体内生物发光图像测定的实施方案

2.1在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液,不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。

2.2过滤器通过0.2μm过滤器过滤灭菌溶液。立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

2.3在动物体重150mg / kg(或10μL/ g荧光素储备溶液)成像qian10-15分钟腹膜内(i.p.)注射荧光素。

注意:应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究,以确定峰值信号时间。

3.荧光素报告分析分子测定的实施方案

3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 立即使用,或单独使用等分试样,并储存在-20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。

3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液,其中含有3mM ATP,1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricine缓冲液,pH7.8。

3.3将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白。

3.4根据制造商的说明,使用荧光素工作溶液的普利光度计。

3.5注入200μl荧光素工作溶液,无延迟,10秒积分时间。

注意事项

D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液,溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备,并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。

D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。

如果检测ATP,请戴上手套并使用无ATP容器,尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压灭菌水进行所有试剂制备。