quansysbio 111649RT说明书

发表于2024年12月19日由上海金畔生物科技有限公司

quansysbio 111649RT说明书

Q-Plex Rat Cytokine Inflammation (9-Plex)

用于测量IFNγ、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12p70、TNFα

物种特异性：大鼠
验证样本类型：细胞培养上清液、血清、血浆
所需样品量：最小。25 µL
预计检测时间： 3 小时（180 分钟）
测定内交叉反应性：所有分析物<1% 组内交叉反应性
检测类型：基于平面的多重 ELISA
检测方法：化学发光
多重格式： 96 孔实心板
目录编号： 111649RT

Analytes	Calibrator Range	Units	LLD
IFNγ	6000 – 8.2	pg/mL	5.3
IL-1α	5400 – 7.4	pg/mL	4.8
IL-1β	3200 – 4.4	pg/mL	2.9
IL-2	9800 – 13.4	pg/mL	8.7
IL-4	4000 – 5.5	pg/mL	3.6
IL-6	83000 – 113.9	pg/mL	74.0
IL-10	14000 – 19.2	pg/mL	12.5
IL-12p70	92000 – 126.2	pg/mL	82.0
TNFα	37000 – 50.8	pg/mL	33.0

产品概述

Q-Plex™ 大鼠细胞因子炎症 (9-Plex) 是一种基于 ELISA 的全定量化学发光检测，可同时测量九种生物标志物或分析物。每孔仅使用 25 µL 样品，可在 3 小时内对多达 80 个样品中的所有九种标记物进行检测。

Q-Plex 大鼠细胞因子 – 炎症 (9-Plex) 为研究人员提供了一种易于使用且具有成本效益的方法，可以为每个样本生成细胞因子谱。Q-Plex™ 板是通过在每个孔的底部以定义的阵列吸附九种不同的捕获抗体而构建的。我们的高品质试剂有助于确保您的结果的准确性。

所有 Quansys Q-Plex™ Multiplex 和 Singleplex 检测都需要使用 Q-View™ 软件来读取和解释测试结果。该软件的全功能免费试用版可供下载、安装和用于分析您的第一个套件。在试用期结束时，需要购买许可证才能继续使用 Q-View 软件。

Q-Plex 阵列经过开发和优化，可与 Q-View 成像仪配合使用。Quansys 不保证从其他成像仪获得的结果，并且并非所有成像仪都与 Quansys Q-Plex 阵列兼容。

一步法多重荧光定量逆转录RT-qPCR试剂盒 One Step RT-qPCR Kit

发表于2024年12月13日由上海金畔生物科技有限公司

一步法多重荧光定量逆转录RT-qPCR试剂盒 One Step RT-qPCR Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

Hifair^® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。独特的 Buffer和酶的设计，可用于一步法 RT-qPCR 冻干反应体系的配制和产品设计。

本试剂盒利用耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA，并利用 UNICON^® HotStart Taq DNA

Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干 Buffer，Enzymes Mix 等，并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩

增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。

本试剂盒中匹配了冻干保护剂，可以用于冻干。

产品信息

货号	11831ES60 / 11831ES80 / 11831ES92
规格	100 T / 1000 T / 10000 T

组分信息

组分编号	组分名称	11831ES60(100 T)	11831ES80(1000 T)	11831ES92(10000 T)
11831-A	4×Hifair^® Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
11831-B	Hifair^® Lyo-Enzyme Mix	100 μL	1 mL	10 mL
11831-C	冻干保护剂	800 μL	8 mL	80 mL

【注】1) 4×Hifair^® Lyo-Buffer 为 Lyo Multiplex One Step RT-qPCR kit 的简写。

2) Hifair^® Lyo-Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase 和 UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

运输条件

1. 保存方式：

Part 1： 11831-A【 4×Hifair^® Lyo-Buffer 】、11831-C【冻干保护剂】，-25~-15℃ 保存，有效期 1 年。

Part 2： 11831-B【 Hifair^® Lyo-Enzyme Mix 】，2~8℃ 保存，有效期 6 个月。

运输方式：冰袋运输。

使用方法

反应体系（以25uL体系为例）

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair^® Lyo-Buffer	6	1x
Hifair^® Lyo-Enzyme Mix	1	–
冻干保护剂	8	–
Primer Mix(10μM)	1	0.1-1 uM
Probe Mix(10μM)	0.5	0.05-0.5 uM
模板RNA	5	–
DEPC H₂0	up to 25	–

参考扩增程序

1）常规扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃^a	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	45
扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

2）快速扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃^a	2 min	1
预变性	95℃	2 sec	1
扩增反应	95℃	1 sec	45
扩增反应	60℃^b	13 sec^c	45

【注】a. 逆转录：42℃或者50℃均可。

b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

产品简介

本试剂盒利用耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA，并利用 UNICON^® HotStart Taq DNA

Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干 Buffer，Enzymes Mix 等，并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩

增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。

本试剂盒中匹配了冻干保护剂，可以用于冻干。

产品信息

货号	11831ES60 / 11831ES80 / 11831ES92
规格	100 T / 1000 T / 10000 T

组分信息

组分编号	组分名称	11831ES60(100 T)	11831ES80(1000 T)	11831ES92(10000 T)
11831-A	4×Hifair^® Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
11831-B	Hifair^® Lyo-Enzyme Mix	100 μL	1 mL	10 mL
11831-C	冻干保护剂	800 μL	8 mL	80 mL

【注】1) 4×Hifair^® Lyo-Buffer 为 Lyo Multiplex One Step RT-qPCR kit 的简写。

2) Hifair^® Lyo-Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase 和 UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

运输条件

1. 保存方式：

Part 1： 11831-A【 4×Hifair^® Lyo-Buffer 】、11831-C【冻干保护剂】，-25~-15℃ 保存，有效期 1 年。

Part 2： 11831-B【 Hifair^® Lyo-Enzyme Mix 】，2~8℃ 保存，有效期 6 个月。

运输方式：冰袋运输。

使用方法

反应体系（以25uL体系为例）

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair^® Lyo-Buffer	6	1x
Hifair^® Lyo-Enzyme Mix	1	–
冻干保护剂	8	–
Primer Mix(10μM)	1	0.1-1 uM
Probe Mix(10μM)	0.5	0.05-0.5 uM
模板RNA	5	–
DEPC H₂0	up to 25	–

参考扩增程序

1）常规扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃^a	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	45
扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

2）快速扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃^a	2 min	1
预变性	95℃	2 sec	1
扩增反应	95℃	1 sec	45
扩增反应	60℃^b	13 sec^c	45

【注】a. 逆转录：42℃或者50℃均可。

b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

一步法多重荧光定量逆转录RT-qPCR试剂盒 One Step RT-qPCR Kit

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avidity BirA500-RT说明书

发表于2024年12月7日由上海金畔生物科技有限公司

avidity BirA500-RT说明书

BirA500-RT-BirA500-RT：BirA生物素蛋白连接酶冻干反应试剂盒，250.00美元

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）激活生物素形成5'-腺苷酸生物素，并将生物素转移至生物素受体蛋白（例如AviTag™肽）。它还起着生物素操纵子阻遏物的作用。该蛋白质由birA基因编码。

请注意：我们强烈建议使用AviTag™氨基酸序列，而不是其他生物素化肽序列。BirA酶以2倍于天然底物（BCCP）的反应速率对AviTag™序列进行生物素化处理，并且比使用中的其他肽序列高出一个数量级或更多。与其他Biotinylation-of-Peptide序列相比，AviTag™需要较少的酶量和较短的孵育时间，从而很大程度地减少了与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

这是BirA500试剂盒的冻干版。

产品信息

套件随附以下内容：

BirA两（2）个小瓶，每瓶20uL 1mg / mL冻干的BirA生物素-蛋白质连接酶（总共40ug）

储存缓冲液一（1）瓶500uL BirA重悬浮缓冲液

SuperMix一（1）管; 5mL的10x SuperMix缓冲液

ATP一（1）管；氩气下275 mg的ATP

附加试管5个标记为2mL的试管，用于SuperMix / ATP储存

BirA生物素蛋白连接酶（EC 6.3.4.15）通过ATP中间体（生物素5'-腺苷酸）以高效，针对性的方式将d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白质上。酶促生物素化蛋白的下游应用是多种，重要和强大的。通常利用*的生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用来进行亲和层析或将蛋白质固定在表面或底物上。通过抗生物素抗体或抗生物素蛋白/链霉亲和素-报告酶偶联物（-HRP，-碱性磷酸酶）或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化的MHC分子的多聚体形式是免疫生物学中流行的工具。

当与我们的AviTag™生物素受体肽氨基酸序列结合使用时，生物素化作用是天然大肠杆菌BCCP底物的两倍，并且比其他肽序列生物素化作用高一个数量级或更多。因此，与其他可用序列相比，AviTag™序列需要更少的BirA酶和较短的孵育时间即可完成生物素化反应。如果需要考虑蛋白质的不稳定性或蛋白酶活性，这对于下游的成功可能很重要。

我们的BirA酶是野生型大肠杆菌，由birA基因编码，并通过传统方法纯化至纯度超过99％。该酶的其他名称包括：生物素连接酶；生物素操纵子阻遏蛋白 birA; 生物素全酶合成酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；生物素-[乙酰-CoA-羧化酶]连接酶；生物素-[乙酰-CoA羧化酶]合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；乙酰辅酶A全羧化酶合成酶；生物素：脱羧羧化酶连接酶；生物素全酶合成酶；HCS。

RT基本型磁力搅拌器88880008/88880010

发表于2024年11月22日由上海金畔生物科技有限公司

RT基本型磁力搅拌器88880008/88880010

物料类型	液-液	适用物料	其他
动力类型	电动	布局形式	立式
搅拌方式	其他	每次处理量范围	4L

美国Thermo RT基本型磁力搅拌器88880008/88880010/888800012，实验室小巧方便型。即插即用，是实验室日常搅拌的理想应用。
进口，现货不多，！

RT基本型磁力搅拌器88880008/88880010/888800012

产品简述：

Thermo Scientific RT基本型磁力搅拌器即插即用，性能可靠，非常适合日常搅拌应用。该产品有三种规格可选 (120mm、170mm或220mm)——全部都采用扁平、轻量化设计，占用空间极少。RT基本型磁力搅拌器具有耐化学腐蚀的聚丙烯材料材质顶板和机身、能确保实验过程中搅拌均匀的强力磁性耦合器以及不会发热的无刷直流电机。模拟速度控制范围150到2500转/分钟。所有型号均配备两个防滑硅胶盖板，增强防滑保护。

主要特点

扁平轻量化设计，占用空间少
内置强力磁性耦合器，确保实验过程中搅拌均匀
采用无刷直流电机，不会发热或“烘烤”样品
聚丙烯材质顶板和机身，耐化学腐蚀性能好
三种规格可选—120mm、170mm或220mm
模拟速度控制：150到2500转/分钟
可拆式插头
所有型号均配备两个防滑硅胶盖板（1白，1黑）
能耗低
2年质保

RT基本型磁力搅拌器88880008/88880010/888800012

技术参数：

货号	88880008	88880010	88880012
机制	无刷直流电机	无刷直流电机	无刷直流电机
搅拌容量（H₂O）	2L	4L	5L
转速范围（rpm）	150-2500	150-2500	150-2500
大样品量（锥形瓶）	15kg	20kg	25kg
材质	聚丙烯	聚丙烯	聚丙烯
加热面板直径	120mm	170mm	220mm
整体尺寸(DxH)	130×130×65mm	185×185×65mm	230×230×65mm
能耗	5W	6W	6W
电源	230V, 50/60Hz	230V, 50/60Hz	230V, 50/60Hz
认证	CE	CE	CE

订货信息：

88880008	磁力搅拌器RT基本型，120mm直径，2300V, 50/60 Hz
88880010	磁力搅拌器RT基本型，170mm直径，230V, 50/60 Hz
88880012	磁力搅拌器RT基本型，220mm直径，230V, 50/60 Hz

RT基本型磁力搅拌器88880008/88880010

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)

发表于2024年11月15日由上海金畔生物科技有限公司

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，缓冲液中已含有Mg²⁺和 dNTP , 有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重扩增反应。并添加了dUTP/UDG 系统，可有效防止气溶胶污染的风险。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	13894ES60 (100 T)	13894ES80 (1000 T)	13894ES92 (10000 T)
13894-A	5×Hifair^® V Universal MP Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13894-B	Hifair^®V Universal Enzyme Mix	120 μL	1.2 mL	12 mL

【注】

a. 5×Hifair^® V Universal MP Buffer 为Hifair^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。

b. Hifair^®V Universal Enzyme Mix 主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase、UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase和UDGase。

适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C储存，有效期12个月。本品避免反复冻融。建议分装保存。

反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
5×Hifair^® V Universal MP Buffer	6	1x
Hifair^® V Universal Enzyme Mix	1.2	–
Primer/Probe Mix^a	x	–
模板RNA^b	1-5	–
RNase Free H₂O	to 30	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪

头。避免交叉污染和气溶胶污染。

a. 引物探针混合液浓度：Primer/Probe Mix 中包含多对引物和探针，通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整；探针终浓度也可以根据对荧光曲线和荧光增峰的要求在 0.05-0.5 μM范围内进行调整。

b. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	40-45
扩增反应	60℃^a	30 sec^b	40-45

【注】：退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

a. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

b. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220729

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	13894ES60 (100 T)	13894ES80 (1000 T)	13894ES92 (10000 T)
13894-A	5×Hifair^® V Universal MP Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13894-B	Hifair^®V Universal Enzyme Mix	120 μL	1.2 mL	12 mL

【注】

a. 5×Hifair^® V Universal MP Buffer 为Hifair^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。

b. Hifair^®V Universal Enzyme Mix 主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase、UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase和UDGase。

适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C储存，有效期12个月。本品避免反复冻融。建议分装保存。

反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
5×Hifair^® V Universal MP Buffer	6	1x
Hifair^® V Universal Enzyme Mix	1.2	–
Primer/Probe Mix^a	x	–
模板RNA^b	1-5	–
RNase Free H₂O	to 30	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪

头。避免交叉污染和气溶胶污染。

b. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	40-45
扩增反应	60℃^a	30 sec^b	40-45

【注】：退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

a. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

b. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220729

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一步法RT-qPCR探针试剂盒|Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit

发表于2024年11月12日由上海金畔生物科技有限公司

一步法RT-qPCR探针试剂盒|Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板，使用基因特异性引物，利用耐热Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并搭配使用探针和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase，配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。

本试剂盒以预混的Mix形式提供，2×Hifair® Ⅲ P buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等，优化了有效抑制非特异性 PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，适用于荧光标记探针的高特异性检测系统。此外，Hifair® UH Ⅲ Enzymes包含比例优化的Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	11145ES50 (50 T)	11145ES70 (200 T)
11145-A	2×Hifair® Ⅲ P buffer	500 μL	2×1 mL
11145-B	Hifair® UH Ⅲ Enzymes	50 μL	200 μL
11145-C	Hieff® 50×High Rox	20 μL	80 μL
11145-D	Hieff® 50×Low Rox	20 μL	80 μL
11145-E	RNase free ddH2O	500 μL	2×1 mL

【注】P buffer 为Probe buffer 的简写，UH 为UNICON-Hifair 的简写。

适用机型

High Rox 适用机型：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™

Low Rox 适用机型：ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

不需要 Rox 校正的仪器型号：

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用 RNase free 耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系（以 20 μL为例）

组分	加入量	终浓度
2×Hifair® Ⅲ P buffer	10 μL	1×
Hifair® UH Ⅲ Enzymes	1 μL	–
Hieff® 50×High Rox or Low Rox	0.4 μL	–
Gene Specific Primer Forward (10 µM)	0.4 μL	0.2 μM
Gene Specific Primer Reverse (10 µM)	0.4 μL	0.2 μM
TaqMan Probe (10 µM)	0.2 μL	0.1 μM
模板 RNA	Total RNA: 1 pg-1 µg	–
RNase free ddH2O	to 20 μL	–

【注】:

a 所有试剂使用前应充分混匀。

b 参比染料：Rox的添加，可根据不同仪器型号进行选择，具体可参考【适用机型】。

c 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

d 探针浓度：探针终浓度可在50 nM-250 nM之间调整。

e 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

f 模板稀释：一步法RT-qPCR灵敏度极高，推荐将模板稀释后(如稀释至2-5 μL/样本)加入反应体系中，这样可以有效提高实验的重复性。

g 反应体系：建议以大体系进行实验，如20 μL或50 μL。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃a	15 minb	1
2	预变性	95℃	30 sec	1
3	扩增反应	95℃	10 sec	45 cycles
3	扩增反应	60℃	30 secc	45 cycles

【注】:

a 对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提升扩增效率和灵敏度。

b 逆转录时间可以根据模板的复杂程度进行调整，时间为5min时可满足大多数基因的鉴定。

c 不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

HB220304

[1] Liu CX, Li X, Nan F, et al. Structure and Degradation of Circular RNAs Regulate PKR Activation in Innate Immunity. Cell. 2019;177(4):865-880.e21. doi:10.1016/j.cell.2019.03.046(IF:36.216)
[2] Liu CX, Guo SK, Nan F, Xu YF, Yang L, Chen LL. RNA circles with minimized immunogenicity as potent PKR inhibitors. Mol Cell. 2022;82(2):420-434.e6. doi:10.1016/j.molcel.2021.11.019(IF:17.970)
[3] Chen S, Luo X, Wu W, et al. The long non-coding RNA MACC1-AS1 promotes nasopharyngeal carcinoma cell stemness via suppressing miR-145-mediated inhibition on SMAD2/MACC1-AS1 axis. Biomed Pharmacother. 2020;125:109986. doi:10.1016/j.biopha.2020.109986(IF:4.545)
[4] Wang J, Ren D, Sun Y, et al. Inhibition of PLK4 might enhance the anti-tumour effect of bortezomib on glioblastoma via PTEN/PI3K/AKT/mTOR signalling pathway. J Cell Mol Med. 2020;24(7):3931-3947. doi:10.1111/jcmm.14996(IF:4.486)
[5] Bi X, Jiang Z, Luan Z, Qiu D. Crocin exerts anti-proliferative and apoptotic effects on cutaneous squamous cell carcinoma via miR-320a/ATG2B. Bioengineered. 2021;12(1):4569-4580. doi:10.1080/21655979.2021.1955175(IF:3.269)
[6] Liu D, Wan L, Gong H, Chen S, Kong Y, Xiao B. Sevoflurane promotes the apoptosis of laryngeal squamous cell carcinoma in-vitro and inhibits its malignant progression via miR-26a/FOXO1 axis. Bioengineered. 2021;12(1):6364-6376. doi:10.1080/21655979.2021.1962684(IF:3.269)
[7] Shi M, Chen X, Li H, Zheng L. δ-tocotrienol suppresses the migration and angiogenesis of trophoblasts in preeclampsia and promotes their apoptosis via miR-429/ ZEB1 axis. Bioengineered. 2021;12(1):1861-1873. doi:10.1080/21655979.2021.1923238(IF:3.269)
[8] Tan Q, Lin S, Zeng Y, et al. Ginsenoside Rg3 attenuates the osimertinib resistance by reducing the stemness of non-small cell lung cancer cells. Environ Toxicol. 2020;35(6):643-651. doi:10.1002/tox.22899(IF:3.118)
[9] Liu X, Huang J, Xie Y, Zhou Y, Wang R, Lou J. Napabucasin Attenuates Resistance of Breast Cancer Cells to Tamoxifen by Reducing Stem Cell-Like Properties. Med Sci Monit. 2019;25:8905-8912. Published 2019 Nov 24. doi:10.12659/MSM.918384(IF:1.980)
[10] Guo W, Wei B, Cheng T, Xu X, Ruan F, Xiang M. The Na+/K+ ATPase Inhibitor Ouabain Attenuates Stemness and Chemoresistance of Osteosarcoma Cells. Med Sci Monit. 2019;25:9426-9434. Published 2019 Dec 11. doi:10.12659/MSM.919266(IF:1.980)
[11] Wu X, Wang Y, Zhong W, Cheng H, Tian Z. The Long Non-Coding RNA MALAT1 Enhances Ovarian Cancer Cell Stemness by Inhibiting YAP Translocation from Nucleus to Cytoplasm. Med Sci Monit. 2020;26:e922012. Published 2020 May 20. doi:10.12659/MSM.922012(IF:1.918)
[12] Wu X, Wang Y, Zhong W, Cheng H, Tian Z. RNA Binding Protein RNPC1 Suppresses the Stemness of Human Endometrial Cancer Cells via Stabilizing MST1/2 mRNA. Med Sci Monit. 2020;26:e921389. Published 2020 Feb 23. doi:10.12659/MSM.921389(IF:1.918)

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	11145ES50 (50 T)	11145ES70 (200 T)
11145-A	2×Hifair® Ⅲ P buffer	500 μL	2×1 mL
11145-B	Hifair® UH Ⅲ Enzymes	50 μL	200 μL
11145-C	Hieff® 50×High Rox	20 μL	80 μL
11145-D	Hieff® 50×Low Rox	20 μL	80 μL
11145-E	RNase free ddH2O	500 μL	2×1 mL

【注】P buffer 为Probe buffer 的简写，UH 为UNICON-Hifair 的简写。

适用机型

High Rox 适用机型：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™

Low Rox 适用机型：ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

不需要 Rox 校正的仪器型号：

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用 RNase free 耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系（以 20 μL为例）

组分	加入量	终浓度
2×Hifair® Ⅲ P buffer	10 μL	1×
Hifair® UH Ⅲ Enzymes	1 μL	–
Hieff® 50×High Rox or Low Rox	0.4 μL	–
Gene Specific Primer Forward (10 µM)	0.4 μL	0.2 μM
Gene Specific Primer Reverse (10 µM)	0.4 μL	0.2 μM
TaqMan Probe (10 µM)	0.2 μL	0.1 μM
模板 RNA	Total RNA: 1 pg-1 µg	–
RNase free ddH2O	to 20 μL	–

【注】:

a 所有试剂使用前应充分混匀。

b 参比染料：Rox的添加，可根据不同仪器型号进行选择，具体可参考【适用机型】。

c 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

d 探针浓度：探针终浓度可在50 nM-250 nM之间调整。

e 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

f 模板稀释：一步法RT-qPCR灵敏度极高，推荐将模板稀释后(如稀释至2-5 μL/样本)加入反应体系中，这样可以有效提高实验的重复性。

g 反应体系：建议以大体系进行实验，如20 μL或50 μL。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃a	15 minb	1
2	预变性	95℃	30 sec	1
3	扩增反应	95℃	10 sec	45 cycles
3	扩增反应	60℃	30 secc	45 cycles

【注】:

a 对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提升扩增效率和灵敏度。

b 逆转录时间可以根据模板的复杂程度进行调整，时间为5min时可满足大多数基因的鉴定。

c 不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

HB220304

Q：标准曲线扩增效率小于 90%或者大于 110%，线性关系不好，这样的问题如何解决？

A：加样误差。加大模板稀释倍数，提高加样体积，使不同稀释度的加样体积更准确；

标准品降解。重新制备标准品；

模板浓度太高。存在反应抑制，增加模板稀释倍数；引物扩增特异性不好。重新设计引物。

Q：反应结束无扩增曲线出现

A：反应循环数不够，可适当增加循环次数。一般设置为 40，需注意过多的循环会增加背景信号，降低数据可信度；

确认程序中是否设置了信号采集步骤。三步法扩增程序应该将信号采集设置在 72℃延伸阶段，两步法一般在退火延伸阶段收集；

确认引物是否降解。长时间未使用的引物应先通过PAGE 电泳检测完整性；模板浓度太低。减少稀释度重复实验；

模板降解。重新制备模板。

Q：实验重复性差如何解决？

A：加样体积不准。定期校正移液器，将模板高倍稀释，以大体积加入反应体系中；定量PCR 仪器不同位置温度控制不一致，定期校准仪器；

模板浓度太低。模板浓度越低，重复性越差；做 4-6 个复孔，删除其中重复性不好的孔。

Q：模板的稀释液如何选择？

A：Nuclease-Free water、DEPC 水或实验室自备的 ddH2O 都可以。不推荐使用 TE 作为稀释液，TE 里有EDTA 会抑制酶的活性。

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

发表于2024年10月29日由上海金畔生物科技有限公司

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。独特的Buffer设计，在体系中不包含影响冻干工艺的化学试剂，可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。

本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	13117ES60 (100 T)	13117ES80 (1000 T)	13117ES92 (10000 T)
13117-A	4×Hifair®V Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13117-B	Hifair®V Lyo-Enzyme Mix	100 μL	1 mL	10 mL
13117-C	DEPC-treated Water (DNase、RNase free)	1.5 mL	15 mL	150 mL

【注】1) 4×Hifair®V Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

2) Hifair®V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex，Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™，Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®,Opticon® 2, Chromo4™，Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000，Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler®96，Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

运输与保存方式

冰袋运输。

4×Hifair®V Lyo-Buffer -20℃保存，有效期1年，Hifair®V Lyo-Enzyme Mix 4℃保存。有效期6个月。

本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途！

反应体系（以25 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair®V Lyo-Buffer	6	1×
Hifair®V Lyo-Enzyme Mix	1	–
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.2 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.1 μM
模板 RNA	1-5 μL	–
RNase Free H₂O	to 25 μL	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃^a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
3	扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】

a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间 10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

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产品名称	货号	规格
Hieff Unicon^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit	11213ES60	100 T
	11213ES80	1000 T
	11213ES92	10000 T
Hieff Unicon^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)	11214ES60	100 T
	11214ES80	1000 T
	11214ES92	10000 T
Hieff UNICON^® HotStart Direct Taq DNA Polymerase,热启动直扩用抗体修饰突变体Taq酶	10717ES72	250 U
Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶单克隆抗体	31303ES60	100 μg
Hifair^® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶	11300ES92	10000 U
Hifair^® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶	11300ES93	5×10000 U
Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)	10703ES10	10 KU
	10703ES60	100 KU
	10703ES70	200 KU
Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制剂	10603ES05	2 KU
	10603ES10	10 KU
	10603ES20	100 KU
	10603ES60	200 KU
Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG	10303ES60	100 U
Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG	10303ES76	500 U
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES72	250 μL
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES80	1 mL
COVID-19-pseudovirus（2019-nCOV假病毒）	11900ES03	1 mL
SARS-pseudovirus（SARS假病毒）	11903ES70	1 mL
MERS-pseudovirus（MERS假病毒）	11904ES70	1 mL

HB201130

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	13117ES60 (100 T)	13117ES80 (1000 T)	13117ES92 (10000 T)
13117-A	4×Hifair®V Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13117-B	Hifair®V Lyo-Enzyme Mix	100 μL	1 mL	10 mL
13117-C	DEPC-treated Water (DNase、RNase free)	1.5 mL	15 mL	150 mL

【注】1) 4×Hifair®V Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

2) Hifair®V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

运输与保存方式

冰袋运输。

4×Hifair®V Lyo-Buffer -20℃保存，有效期1年，Hifair®V Lyo-Enzyme Mix 4℃保存。有效期6个月。

本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途！

反应体系（以25 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair®V Lyo-Buffer	6	1×
Hifair®V Lyo-Enzyme Mix	1	–
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.2 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.1 μM
模板 RNA	1-5 μL	–
RNase Free H₂O	to 25 μL	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃^a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
3	扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】

a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间 10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

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产品名称	货号	规格
Hieff Unicon^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit	11213ES60	100 T
	11213ES80	1000 T
	11213ES92	10000 T
Hieff Unicon^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)	11214ES60	100 T
	11214ES80	1000 T
	11214ES92	10000 T
Hieff UNICON^® HotStart Direct Taq DNA Polymerase,热启动直扩用抗体修饰突变体Taq酶	10717ES72	250 U
Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶单克隆抗体	31303ES60	100 μg
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	10603ES60	200 KU
Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG	10303ES60	100 U
Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG	10303ES76	500 U
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES72	250 μL
dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES80	1 mL
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HB201130

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)

发表于2024年10月12日由上海金畔生物科技有限公司

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Unicon^® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行，简化了实验操作，本产品含有 UDG 酶，可有效防止气溶胶污染的风险。

本试剂盒利用耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA，并利用 UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，缓冲液中已含有 Mg²⁺和 dNTP 等，并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子，能够保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。

产品信息

货号	11214ES60 / 11214ES80 / 11214ES92
规格	100 T / 1000 T / 10000 T

组分信息

组分编号	组分名称	11214ES60 (100 T)	11214ES80 (1000 T)	11214ES92 (10000 T)
11214-A	2×Hifair^® VN MP Buffer	1.25 mL	12.5 mL	125 mL
11214-B	Hifair^® VN Enzyme Mix (UDG plus)	150 μL	750 μL×2	15 mL
11214–C	RNase Free H₂O	1.2 mL	12 mL	120 mL

【注】1. 2×Hifair^® VN MP Buffer 为 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。本组分含有 dNTP 和 dUTP。

Hifair^® VN Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON^® Hot Start Taq DNA Polymerase 和 UDG 酶。

储存条件

-25~-15℃保存，有效期18个月。

使用说明

反应体系（以25 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
2×Hifair® VN MP Buffer	12.5	1×
Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus)	1.5	–
Primer/Probe Mix (10 μM)	1-4	0.4 μM
模板RNA	1-5	–
RNase Free H₂O	to 25	–

【注】使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

1. 引物浓度：Primer Mix 中包含多对引物，也可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。

2. 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

3. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

4. 反应体系：推荐使用 25-50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

5. 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头；避免交叉污染和气溶胶污染。

参考扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃^a	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	45
扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】a. 逆转录：42℃或者50℃均可，时间 10-15 min。

b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230731

产品信息

货号	11214ES60 / 11214ES80 / 11214ES92
规格	100 T / 1000 T / 10000 T

组分信息

组分编号	组分名称	11214ES60 (100 T)	11214ES80 (1000 T)	11214ES92 (10000 T)
11214-A	2×Hifair^® VN MP Buffer	1.25 mL	12.5 mL	125 mL
11214-B	Hifair^® VN Enzyme Mix (UDG plus)	150 μL	750 μL×2	15 mL
11214–C	RNase Free H₂O	1.2 mL	12 mL	120 mL

【注】1. 2×Hifair^® VN MP Buffer 为 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。本组分含有 dNTP 和 dUTP。

Hifair^® VN Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON^® Hot Start Taq DNA Polymerase 和 UDG 酶。

储存条件

-25~-15℃保存，有效期18个月。

使用说明

反应体系（以25 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
2×Hifair® VN MP Buffer	12.5	1×
Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus)	1.5	–
Primer/Probe Mix (10 μM)	1-4	0.4 μM
模板RNA	1-5	–
RNase Free H₂O	to 25	–

【注】使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

1. 引物浓度：Primer Mix 中包含多对引物，也可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。

2. 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

3. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

4. 反应体系：推荐使用 25-50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

5. 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头；避免交叉污染和气溶胶污染。

参考扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃^a	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	45
扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】a. 逆转录：42℃或者50℃均可，时间 10-15 min。

b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230731

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)

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一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

发表于2024年9月24日由上海金畔生物科技有限公司

一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Unicon^® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒，已经添加了冻干保护剂，可用于冻干。

产品组分

组分编号	组分名称	13667ES60 (100 T)	13667ES80 (1000 T)	13667ES92 (10000 T)
13667-A	4×Hifair^®V Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13667-B	MgCl₂（25 mM）	500 μL	5 mL	50 mL
13667-C	10×Hifair^®V Lyo-Enzyme Mix	10 μL	100 μL	1 mL
13667-D	冻干保护剂	700 μL	7 mL	70 mL

【注】10×Hifair^®V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

运输与保存方式

1.运输方式：冰袋运输。

2.保存方式：Part 1：13667-A【4×Hifair^®V Lyo-Buffer】-20℃保存，有效期1年。

13667-D【冻干保护剂】-20℃保存，有效期1年。

Part 2：13667-B【MgCl₂（25 mM）】4℃保存，有效期3年。

13667-C【10×Hifair^®V Lyo-Enzyme Mix】4℃保存，有效期6个月。

3.本品避免反复冻融。建议分装保存。

反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair^®V Lyo-Buffer	6	1×
Hifair^®V Lyo-Enzyme Mix	0.1	–
MgCl₂ (25 mM)	2.5
冻干保护剂	7 μL
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.2 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.1 μM
模板 RNA	1-5 μL	–
RNase Free H₂O	to 25 μL	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

参考扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃^a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
3	扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】
a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间 10-15 min。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

注意事项

1.辅料配方发生微量的变化，需重新测定冻干参数，并做相应调整。

2.冻干设备要求：

冷阱盘管表面温度≤-60℃

板层温度≤-45℃，温度均一性±1℃（性能详细说明及验证方案咨询金畔生物技术人员）

可做压升测试（冻干生产前，做泄漏率测试）

3.环境要求：

溶液分装及配置尽量在万级层流保护下进行，环境空间尘埃掉落进溶液中成为冻干过程的晶核，影响溶液的结晶的过冷度，导致产品质量不一致性。

4.真空控制

掺气方式：建议掺入气体为高纯氮气

5.冻干试剂 MIX 工艺参数设定参考（冻干设备升华效率≥1mm/小时）

		温度	斜率时间	时间	真空 Pa	备注
预冻	1	-45℃	——	2 h	——	常温最快速率降温
预冻	2	-45℃	——		——	保持，根据包材验证保持时间
真空	3	-45℃	——		15
升华阶段	4	-40℃		10 h	15	无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温
	5	0℃	2 h	0 h	15	无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温
	6	25℃	2 h	4 h	15	无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温
解析干燥	7	30℃		2 h	0
含水量控制	8	压升测试重试时间：30 min				压升测试：2 min<5 Pa

6.实验过程中请使用RNase free耗材。

7.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

8.本产品仅作科研用途！

相关产品

产品名称	货号	规格
10×Hieff Unicon^® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl₂)	13168ES60	100 T
	13168ES80	1000 T
	13168ES92	10000 T
Hifair^® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶（无甘油版）	11301ES12	12 KU
Hifair^® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶（无甘油版）	11301ES75	300 KU
Hieff Unicon^® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 50 U/μL	10724ES01	100 μL
	10724ES94	1 mL
	10724ES95	25 mL
	10724ES96	100 mL
Murine RNase Inhibitor (40 U/µL, Glycerol-free)	10701ES05	2 KU
	10701ES10	10 KU
	10701ES20	20 KU
	10701ES60	100 KU

HB210715

Hieff Unicon^® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒，已经添加了冻干保护剂，可用于冻干。

产品组分

组分编号	组分名称	13667ES60 (100 T)	13667ES80 (1000 T)	13667ES92 (10000 T)
13667-A	4×Hifair^®V Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13667-B	MgCl₂（25 mM）	500 μL	5 mL	50 mL
13667-C	10×Hifair^®V Lyo-Enzyme Mix	10 μL	100 μL	1 mL
13667-D	冻干保护剂	700 μL	7 mL	70 mL

【注】10×Hifair^®V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

运输与保存方式

1.运输方式：冰袋运输。

2.保存方式：Part 1：13667-A【4×Hifair^®V Lyo-Buffer】-20℃保存，有效期1年。

13667-D【冻干保护剂】-20℃保存，有效期1年。

Part 2：13667-B【MgCl₂（25 mM）】4℃保存，有效期3年。

13667-C【10×Hifair^®V Lyo-Enzyme Mix】4℃保存，有效期6个月。

3.本品避免反复冻融。建议分装保存。

反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair^®V Lyo-Buffer	6	1×
Hifair^®V Lyo-Enzyme Mix	0.1	–
MgCl₂ (25 mM)	2.5
冻干保护剂	7 μL
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.2 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.1 μM
模板 RNA	1-5 μL	–
RNase Free H₂O	to 25 μL	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

参考扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃^a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
3	扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

注意事项

1.辅料配方发生微量的变化，需重新测定冻干参数，并做相应调整。

2.冻干设备要求：

冷阱盘管表面温度≤-60℃

板层温度≤-45℃，温度均一性±1℃（性能详细说明及验证方案咨询金畔生物技术人员）

可做压升测试（冻干生产前，做泄漏率测试）

3.环境要求：

溶液分装及配置尽量在万级层流保护下进行，环境空间尘埃掉落进溶液中成为冻干过程的晶核，影响溶液的结晶的过冷度，导致产品质量不一致性。

4.真空控制

掺气方式：建议掺入气体为高纯氮气

5.冻干试剂 MIX 工艺参数设定参考（冻干设备升华效率≥1mm/小时）

		温度	斜率时间	时间	真空 Pa	备注
预冻	1	-45℃	——	2 h	——	常温最快速率降温
预冻	2	-45℃	——		——	保持，根据包材验证保持时间
真空	3	-45℃	——		15
升华阶段	4	-40℃		10 h	15	无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温
	5	0℃	2 h	0 h	15	无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温
	6	25℃	2 h	4 h	15	无斜率控制型冻干机，可分6个阶段升温
解析干燥	7	30℃		2 h	0
含水量控制	8	压升测试重试时间：30 min				压升测试：2 min<5 Pa

6.实验过程中请使用RNase free耗材。

7.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

8.本产品仅作科研用途！

相关产品

产品名称	货号	规格
10×Hieff Unicon^® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl₂)	13168ES60	100 T
	13168ES80	1000 T
	13168ES92	10000 T
Hifair^® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶（无甘油版）	11301ES12	12 KU
Hifair^® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶（无甘油版）	11301ES75	300 KU
Hieff Unicon^® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 50 U/μL	10724ES01	100 μL
	10724ES94	1 mL
	10724ES95	25 mL
	10724ES96	100 mL
Murine RNase Inhibitor (40 U/µL, Glycerol-free)	10701ES05	2 KU
	10701ES10	10 KU
	10701ES20	20 KU
	10701ES60	100 KU

HB210715

一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

逆转录预混液(含gDNA污染去除)|RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR

发表于2024年9月19日由上海金畔生物科技有限公司

逆转录预混液(含gDNA污染去除)|RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair^® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR是Hifair^® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)的升级版，可在同一管中进行逆转录和基因组去除两个反应，操作简便，可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和RNA降解的风险。本产品中5×Hifair^® One Step RT SuperMix中含逆转录反应所需的全部试剂（Hifair^® V Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, Oligo(dT)₁₈ Primer, Random Primer, dNTPs, Buffer)，反应时只需加入gDNA Remover Mix、模板RNA和水即可高效地合成第一链cDNA，同时去除基因组DNA污染。另外，本产品提供了5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置无逆转录酶的对照，判断qPCR模板是否来自cDNA。

本产品中的Hifair^® V Reverse Transcriptase可耐受高达60°C的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。逆转录产物兼容探针法与染料法qPCR，探针法与染料法qPCR Mix分别推荐翌圣Hieff Unicon^® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)和Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184)，进行高性能基因表达分析。

产品组分

组分编号	组分名称	产品规格
组分编号	组分名称	11142ES10 (10 T)	11142ES60 (100 T)
11142-A	5×Hifair^® One Step RT SuperMix	40 μL	400 μL
11142-B	gDNA Remover Mix	10 μL	100 μL
11142-C	5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix	20 μL	40 μL
11142-D	RNase free H₂O	1 mL	2×1 mL

产品应用

后续适用于qPCR实验。

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期12个月。

注意事项

1）所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

第一链cDNA合成操作步骤

1. 反应体系配置：在冰上融化11142-A/B/C组分，将试剂各组分充分震荡混匀，并在RNase-free离心管中配置如下体系：

组分	使用量
RNase-free H₂O	To 20 μL
5×Hifair^® One Step RT SuperMix	4 μL
gDNA Remover Mix	1 μL
Total RNA	10 ng-1μg

No-RT Control反应（可选）

5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置无逆转录酶的对照，判断qPCR模板是否来自cDNA。

组分	使用量
RNase-free H₂O	To 20 μL
5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix	4 μL
gDNA Remover Mix	1 μL
Total RNA	10 ng-1μg

2. 轻轻混匀，按照如下程序进行逆转录

温度	时间
30°C	5 min
55°C	15 min
85°C	5 min

【注】：1. 逆转录温度：推荐使用55°C。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60°C。

逆转录产物可立即用于后续qPCR反应，也可-20°C短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80°C保存，避免反复冻融。

HB221019

产品组分

组分编号	组分名称	产品规格
组分编号	组分名称	11142ES10 (10 T)	11142ES60 (100 T)
11142-A	5×Hifair^® One Step RT SuperMix	40 μL	400 μL
11142-B	gDNA Remover Mix	10 μL	100 μL
11142-C	5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix	20 μL	40 μL
11142-D	RNase free H₂O	1 mL	2×1 mL

产品应用

后续适用于qPCR实验。

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C保存，有效期12个月。

注意事项

1）所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

第一链cDNA合成操作步骤

1. 反应体系配置：在冰上融化11142-A/B/C组分，将试剂各组分充分震荡混匀，并在RNase-free离心管中配置如下体系：

组分	使用量
RNase-free H₂O	To 20 μL
5×Hifair^® One Step RT SuperMix	4 μL
gDNA Remover Mix	1 μL
Total RNA	10 ng-1μg

No-RT Control反应（可选）

5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置无逆转录酶的对照，判断qPCR模板是否来自cDNA。

组分	使用量
RNase-free H₂O	To 20 μL
5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix	4 μL
gDNA Remover Mix	1 μL
Total RNA	10 ng-1μg

2. 轻轻混匀，按照如下程序进行逆转录

温度	时间
30°C	5 min
55°C	15 min
85°C	5 min

【注】：1. 逆转录温度：推荐使用55°C。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60°C。

逆转录产物可立即用于后续qPCR反应，也可-20°C短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80°C保存，避免反复冻融。

HB221019

Q: 反转录后的产物是什么？是双链的DNA吗？

A：反转录后的产物是RNA和cDNA的杂交链，并不是DNA双链，其稳定性相较于后者来说要低一些。

[1] Ji C, Li J, Jiang C, et al. Zinc and nitrogen synergistic act on root-to-shoot translocation and preferential distribution in rice. J Adv Res. 2021;35:187-198. Published 2021 Apr 20. doi:10.1016/j.jare.2021.04.005(IF:10.479)