第三代耐热逆转录酶Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

第三代耐热逆转录酶Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶,与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比,其cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达19.8 kbcDNA

产品组分
 

组分编号

组分名称

产品编号/规格

14601ES03

14601ES10 

14601ES76 

14601-A

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (800 U/μL)

1 mL

10 mL

500 mL

产品应用

全长cDNA文库构建;终点法PCR;实时定量PCR等。

活性定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板引物,在37℃10 min内,将1 nmoldTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。

注意事项

1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染

2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解

3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5)本产品仅作科研用途!

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNasefree H2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μgmRNA:10 pg-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® Ⅲ Buffer (Cat#15662)

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (800 U/μL)

200 U

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

55

1530 min

85℃

5 min

】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略;

2)逆转录温度:推荐使用55;对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60

3) 可将逆转录时间延长到45-60min,有助于提高产量;

485℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCRqPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

HB220801

 

第三代耐热逆转录酶Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

暂无内容

第三代耐热逆转录酶Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

暂无内容

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶,与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比,其cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达19.8 kbcDNA

产品组分
 

组分编号

组分名称

产品编号/规格

14601ES03

14601ES10 

14601ES76 

14601-A

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (800 U/μL)

1 mL

10 mL

500 mL

产品应用

全长cDNA文库构建;终点法PCR;实时定量PCR等。

活性定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板引物,在37℃10 min内,将1 nmoldTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。

注意事项

1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染

2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解

3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5)本产品仅作科研用途!

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNasefree H2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μgmRNA:10 pg-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® Ⅲ Buffer (Cat#15662)

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (800 U/μL)

200 U

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

55

1530 min

85℃

5 min

】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略;

2)逆转录温度:推荐使用55;对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60

3) 可将逆转录时间延长到45-60min,有助于提高产量;

485℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCRqPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

HB220801

 

第三代耐热逆转录酶Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

暂无内容

第三代耐热逆转录酶Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

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第五代耐热逆转录酶(无甘油版)|Hifair® V Reverse Transcriptase

第五代耐热逆转录酶(无甘油版)|Hifair® V Reverse Transcriptase

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FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。

 

产品信息

 

货号

11301ES06 / 11301ES12 / 11301ES62/ 11301ES75 /11301ES96

规格

3 KU / 12 KU / 120 KU / 300 KU / 3000 KU

单位定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

组分信息

 

组分名称

11301ES06

11301ES12

11301ES62

11301ES75

11301ES96

Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)

5 μL

20 μL

200 μL

500 μL

5 mL

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期6个月。

 

使用说明

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

 

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® V Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)

200 U

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

RNase free ddH2O

To 20 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃*

5 min

42℃**

15-30 min

85℃***

5 min

*当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

**逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃。

***85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR,推荐每25 μL反应体系,添加10-20 U逆转录酶,也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

 

注意事项

 

1. 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。

2. 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解。

3. 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本

4. 本产品仅用作科研用途。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231116

Q:这款产品有什么特点?

A:M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 是通过对野生型 M-MLV 逆转录酶基因改造,在大肠杆菌中表达纯化而成。. RNaseH 活性,具有合成能力高,热稳定性好和半衰期长的特点。

1. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019, 177(4): 865-880. e21.IF31.398

2. Fan H, Hong B, Luo Y, et al. The effect of whey protein on viral infection and replication of SARS-CoV-2 and pangolin coronavirus in vitro[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2020, 5(1): 1-3.(IF13.493)

3. Zhou L, Hou B, Wang D, et al. Engineering Polymeric Prodrug Nanoplatform for Vaccinatio Immunotherapy of Cancer[J]. Nano Letters, 2020.IF12.279

4. Wang J., et al., The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation[J]. Nat Commun. 2017 Aug 15;8(1):244.IF 12.353

5. Tao L, Yi Y, Chen Y, et al. RIP1 kinase activity promotes steatohepatitis through mediating cell death and inflammation in macrophages[J]. bioRxiv, 2020.( IF10.717)

6. Ma D, Zhao Y, Huang L, et al. A novel hydrogel-based treatment for complete transection spinal cord injury repair is driven by microglia/macrophages repopulation[J]. Biomaterials, 2020, 237: 119830.(IF10.317)

7. Lin Z, Xia S, Liang Y, et al. LXR activation potentiates sorafenib sensitivity in HCC by activating microRNA-378a transcription[J]. Theranostics, 2020, 10(19): 8834. (IF8.579) 11120ES

8. Liu D, Nie W, Li D, et al. 3D printed PCL/SrHA scaffold for enhanced bone regeneration[J]. Chemical Engineering Journal, 2019, 362: 269-279.IF8.355

9. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide PtrCLE20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant Biotechnology Journal, 2020, 18(1): 195-206.(IF8.154)

10. Chen L, Lam J C W, Tang L, et al. Probiotic modulation of lipid metabolism disorders caused by perfluorobutanesulfonate pollution in zebrafish[J]. Environmental Science & Technology, 2020.(IF7.864)

11. Zhao P, Zhang J, Wu A, et al. Biomimetic codelivery overcomes osimertinib-resistant NSCLC and brain metastasis via macrophage-mediated innate immunity[J]. Journal of Controlled Release, 2020. ( IF7.727)

12. Xu X, Gao J, Dai W, et al. Gene activation by a CRISPR-assisted trans enhancer[J]. eLife, 2019, 8: e45973.IF7.551

13. Zhao Y, Wang H P, Yu C, et al. Integration of physiological and metabolomic profiles to elucidate the regulatory mechanisms underlying the stimulatory effect of melatonin on astaxanthin and lipids coproduction in Haematococcus pluvialis under inductive stress conditions[J]. Bioresource Technology, 2020, 319: 124150.(IF7.539)

14. Li X, Zhang X, Zhao Y, et al. Cross-talk between gama-aminobutyric acid and calcium ion regulates lipid biosynthesis in Monoraphidium sp. QLY-1 in response to combined treatment of fulvic acid and salinity stress[J]. Bioresource Technology, 2020, 315: 123833.(IF7.539)

15. Nie, W., et al., Three-dimensional porous scaffold by self-assembly of reduced graphene oxide and nano-hydroxyapatite composites for bone tissue engineering[J]. Carbon, 2017.116, 325-337.IF 7.082

16. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide Ptr CLE 20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant biotechnology journal, 2019.IF6.84

17. Peng L, Wang Y, Yang B, et al. Polychlorinated biphenyl quinone regulates MLKL phosphorylation that stimulates exosome biogenesis and secretion via a short negative feedback loop[J]. Environmental Pollution, 2020: 115606.(IF6.793)

18. Li A, Liu Q, Li Q, et al. Berberine reduces pyruvate-driven hepatic glucose production by limiting mitochondrial import of pyruvate through mitochondrial pyruvate carrier 1[J]. EBioMedicine, 2018, 34: 243-255. IF6.68

19. Lou M D, Li J, Cheng Y, et al. CREB mediates glucagon action to upregulate hepatic MPC1: inhibitory effect of ginsenoside Rb1 on hepatic gluconeogenesis[J]. British journal of pharmacology, 2019.IF6.583

20. Fan L, Ye H, Wan Y, et al. Adaptor protein APPL1 coordinates HDAC3 to modulate brown adipose tissue thermogenesis in mice[J]. Metabolism, 2019, 100: 153955.IF6.513

1. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019, 177(4): 865-880. e21.IF31.398

2. Fan H, Hong B, Luo Y, et al. The effect of whey protein on viral infection and replication of SARS-CoV-2 and pangolin coronavirus in vitro[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2020, 5(1): 1-3.(IF13.493)

3. Zhou L, Hou B, Wang D, et al. Engineering Polymeric Prodrug Nanoplatform for Vaccinatio Immunotherapy of Cancer[J]. Nano Letters, 2020.IF12.279

4. Wang J., et al., The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation[J]. Nat Commun. 2017 Aug 15;8(1):244.IF 12.353

5. Tao L, Yi Y, Chen Y, et al. RIP1 kinase activity promotes steatohepatitis through mediating cell death and inflammation in macrophages[J]. bioRxiv, 2020.( IF10.717)

6. Ma D, Zhao Y, Huang L, et al. A novel hydrogel-based treatment for complete transection spinal cord injury repair is driven by microglia/macrophages repopulation[J]. Biomaterials, 2020, 237: 119830.(IF10.317)

7. Lin Z, Xia S, Liang Y, et al. LXR activation potentiates sorafenib sensitivity in HCC by activating microRNA-378a transcription[J]. Theranostics, 2020, 10(19): 8834. (IF8.579) 11120ES

8. Liu D, Nie W, Li D, et al. 3D printed PCL/SrHA scaffold for enhanced bone regeneration[J]. Chemical Engineering Journal, 2019, 362: 269-279.IF8.355

9. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide PtrCLE20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant Biotechnology Journal, 2020, 18(1): 195-206.(IF8.154)

10. Chen L, Lam J C W, Tang L, et al. Probiotic modulation of lipid metabolism disorders caused by perfluorobutanesulfonate pollution in zebrafish[J]. Environmental Science & Technology, 2020.(IF7.864)

11. Zhao P, Zhang J, Wu A, et al. Biomimetic codelivery overcomes osimertinib-resistant NSCLC and brain metastasis via macrophage-mediated innate immunity[J]. Journal of Controlled Release, 2020. ( IF7.727)

12. Xu X, Gao J, Dai W, et al. Gene activation by a CRISPR-assisted trans enhancer[J]. eLife, 2019, 8: e45973.IF7.551

13. Zhao Y, Wang H P, Yu C, et al. Integration of physiological and metabolomic profiles to elucidate the regulatory mechanisms underlying the stimulatory effect of melatonin on astaxanthin and lipids coproduction in Haematococcus pluvialis under inductive stress conditions[J]. Bioresource Technology, 2020, 319: 124150.(IF7.539)

14. Li X, Zhang X, Zhao Y, et al. Cross-talk between gama-aminobutyric acid and calcium ion regulates lipid biosynthesis in Monoraphidium sp. QLY-1 in response to combined treatment of fulvic acid and salinity stress[J]. Bioresource Technology, 2020, 315: 123833.(IF7.539)

15. Nie, W., et al., Three-dimensional porous scaffold by self-assembly of reduced graphene oxide and nano-hydroxyapatite composites for bone tissue engineering[J]. Carbon, 2017.116, 325-337.IF 7.082

16. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide Ptr CLE 20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant biotechnology journal, 2019.IF6.84

17. Peng L, Wang Y, Yang B, et al. Polychlorinated biphenyl quinone regulates MLKL phosphorylation that stimulates exosome biogenesis and secretion via a short negative feedback loop[J]. Environmental Pollution, 2020: 115606.(IF6.793)

18. Li A, Liu Q, Li Q, et al. Berberine reduces pyruvate-driven hepatic glucose production by limiting mitochondrial import of pyruvate through mitochondrial pyruvate carrier 1[J]. EBioMedicine, 2018, 34: 243-255. IF6.68

19. Lou M D, Li J, Cheng Y, et al. CREB mediates glucagon action to upregulate hepatic MPC1: inhibitory effect of ginsenoside Rb1 on hepatic gluconeogenesis[J]. British journal of pharmacology, 2019.IF6.583

20. Fan L, Ye H, Wan Y, et al. Adaptor protein APPL1 coordinates HDAC3 to modulate brown adipose tissue thermogenesis in mice[J]. Metabolism, 2019, 100: 153955.IF6.513

产品简介

 

Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。

 

产品信息

 

货号

11301ES06 / 11301ES12 / 11301ES62/ 11301ES75 /11301ES96

规格

3 KU / 12 KU / 120 KU / 300 KU / 3000 KU

单位定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

组分信息

 

组分名称

11301ES06

11301ES12

11301ES62

11301ES75

11301ES96

Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)

5 μL

20 μL

200 μL

500 μL

5 mL

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期6个月。

 

使用说明

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

 

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® V Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)

200 U

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

RNase free ddH2O

To 20 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃*

5 min

42℃**

15-30 min

85℃***

5 min

*当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

**逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃。

***85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR,推荐每25 μL反应体系,添加10-20 U逆转录酶,也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

 

注意事项

 

1. 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。

2. 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解。

3. 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本

4. 本产品仅用作科研用途。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231116

Q:这款产品有什么特点?

A:M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 是通过对野生型 M-MLV 逆转录酶基因改造,在大肠杆菌中表达纯化而成。. RNaseH 活性,具有合成能力高,热稳定性好和半衰期长的特点。

1. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019, 177(4): 865-880. e21.IF31.398

2. Fan H, Hong B, Luo Y, et al. The effect of whey protein on viral infection and replication of SARS-CoV-2 and pangolin coronavirus in vitro[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2020, 5(1): 1-3.(IF13.493)

3. Zhou L, Hou B, Wang D, et al. Engineering Polymeric Prodrug Nanoplatform for Vaccinatio Immunotherapy of Cancer[J]. Nano Letters, 2020.IF12.279

4. Wang J., et al., The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation[J]. Nat Commun. 2017 Aug 15;8(1):244.IF 12.353

5. Tao L, Yi Y, Chen Y, et al. RIP1 kinase activity promotes steatohepatitis through mediating cell death and inflammation in macrophages[J]. bioRxiv, 2020.( IF10.717)

6. Ma D, Zhao Y, Huang L, et al. A novel hydrogel-based treatment for complete transection spinal cord injury repair is driven by microglia/macrophages repopulation[J]. Biomaterials, 2020, 237: 119830.(IF10.317)

7. Lin Z, Xia S, Liang Y, et al. LXR activation potentiates sorafenib sensitivity in HCC by activating microRNA-378a transcription[J]. Theranostics, 2020, 10(19): 8834. (IF8.579) 11120ES

8. Liu D, Nie W, Li D, et al. 3D printed PCL/SrHA scaffold for enhanced bone regeneration[J]. Chemical Engineering Journal, 2019, 362: 269-279.IF8.355

9. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide PtrCLE20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant Biotechnology Journal, 2020, 18(1): 195-206.(IF8.154)

10. Chen L, Lam J C W, Tang L, et al. Probiotic modulation of lipid metabolism disorders caused by perfluorobutanesulfonate pollution in zebrafish[J]. Environmental Science & Technology, 2020.(IF7.864)

11. Zhao P, Zhang J, Wu A, et al. Biomimetic codelivery overcomes osimertinib-resistant NSCLC and brain metastasis via macrophage-mediated innate immunity[J]. Journal of Controlled Release, 2020. ( IF7.727)

12. Xu X, Gao J, Dai W, et al. Gene activation by a CRISPR-assisted trans enhancer[J]. eLife, 2019, 8: e45973.IF7.551

13. Zhao Y, Wang H P, Yu C, et al. Integration of physiological and metabolomic profiles to elucidate the regulatory mechanisms underlying the stimulatory effect of melatonin on astaxanthin and lipids coproduction in Haematococcus pluvialis under inductive stress conditions[J]. Bioresource Technology, 2020, 319: 124150.(IF7.539)

14. Li X, Zhang X, Zhao Y, et al. Cross-talk between gama-aminobutyric acid and calcium ion regulates lipid biosynthesis in Monoraphidium sp. QLY-1 in response to combined treatment of fulvic acid and salinity stress[J]. Bioresource Technology, 2020, 315: 123833.(IF7.539)

15. Nie, W., et al., Three-dimensional porous scaffold by self-assembly of reduced graphene oxide and nano-hydroxyapatite composites for bone tissue engineering[J]. Carbon, 2017.116, 325-337.IF 7.082

16. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide Ptr CLE 20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant biotechnology journal, 2019.IF6.84

17. Peng L, Wang Y, Yang B, et al. Polychlorinated biphenyl quinone regulates MLKL phosphorylation that stimulates exosome biogenesis and secretion via a short negative feedback loop[J]. Environmental Pollution, 2020: 115606.(IF6.793)

18. Li A, Liu Q, Li Q, et al. Berberine reduces pyruvate-driven hepatic glucose production by limiting mitochondrial import of pyruvate through mitochondrial pyruvate carrier 1[J]. EBioMedicine, 2018, 34: 243-255. IF6.68

19. Lou M D, Li J, Cheng Y, et al. CREB mediates glucagon action to upregulate hepatic MPC1: inhibitory effect of ginsenoside Rb1 on hepatic gluconeogenesis[J]. British journal of pharmacology, 2019.IF6.583

20. Fan L, Ye H, Wan Y, et al. Adaptor protein APPL1 coordinates HDAC3 to modulate brown adipose tissue thermogenesis in mice[J]. Metabolism, 2019, 100: 153955.IF6.513

1. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019, 177(4): 865-880. e21.IF31.398

2. Fan H, Hong B, Luo Y, et al. The effect of whey protein on viral infection and replication of SARS-CoV-2 and pangolin coronavirus in vitro[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2020, 5(1): 1-3.(IF13.493)

3. Zhou L, Hou B, Wang D, et al. Engineering Polymeric Prodrug Nanoplatform for Vaccinatio Immunotherapy of Cancer[J]. Nano Letters, 2020.IF12.279

4. Wang J., et al., The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation[J]. Nat Commun. 2017 Aug 15;8(1):244.IF 12.353

5. Tao L, Yi Y, Chen Y, et al. RIP1 kinase activity promotes steatohepatitis through mediating cell death and inflammation in macrophages[J]. bioRxiv, 2020.( IF10.717)

6. Ma D, Zhao Y, Huang L, et al. A novel hydrogel-based treatment for complete transection spinal cord injury repair is driven by microglia/macrophages repopulation[J]. Biomaterials, 2020, 237: 119830.(IF10.317)

7. Lin Z, Xia S, Liang Y, et al. LXR activation potentiates sorafenib sensitivity in HCC by activating microRNA-378a transcription[J]. Theranostics, 2020, 10(19): 8834. (IF8.579) 11120ES

8. Liu D, Nie W, Li D, et al. 3D printed PCL/SrHA scaffold for enhanced bone regeneration[J]. Chemical Engineering Journal, 2019, 362: 269-279.IF8.355

9. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide PtrCLE20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant Biotechnology Journal, 2020, 18(1): 195-206.(IF8.154)

10. Chen L, Lam J C W, Tang L, et al. Probiotic modulation of lipid metabolism disorders caused by perfluorobutanesulfonate pollution in zebrafish[J]. Environmental Science & Technology, 2020.(IF7.864)

11. Zhao P, Zhang J, Wu A, et al. Biomimetic codelivery overcomes osimertinib-resistant NSCLC and brain metastasis via macrophage-mediated innate immunity[J]. Journal of Controlled Release, 2020. ( IF7.727)

12. Xu X, Gao J, Dai W, et al. Gene activation by a CRISPR-assisted trans enhancer[J]. eLife, 2019, 8: e45973.IF7.551

13. Zhao Y, Wang H P, Yu C, et al. Integration of physiological and metabolomic profiles to elucidate the regulatory mechanisms underlying the stimulatory effect of melatonin on astaxanthin and lipids coproduction in Haematococcus pluvialis under inductive stress conditions[J]. Bioresource Technology, 2020, 319: 124150.(IF7.539)

14. Li X, Zhang X, Zhao Y, et al. Cross-talk between gama-aminobutyric acid and calcium ion regulates lipid biosynthesis in Monoraphidium sp. QLY-1 in response to combined treatment of fulvic acid and salinity stress[J]. Bioresource Technology, 2020, 315: 123833.(IF7.539)

15. Nie, W., et al., Three-dimensional porous scaffold by self-assembly of reduced graphene oxide and nano-hydroxyapatite composites for bone tissue engineering[J]. Carbon, 2017.116, 325-337.IF 7.082

16. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide Ptr CLE 20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant biotechnology journal, 2019.IF6.84

17. Peng L, Wang Y, Yang B, et al. Polychlorinated biphenyl quinone regulates MLKL phosphorylation that stimulates exosome biogenesis and secretion via a short negative feedback loop[J]. Environmental Pollution, 2020: 115606.(IF6.793)

18. Li A, Liu Q, Li Q, et al. Berberine reduces pyruvate-driven hepatic glucose production by limiting mitochondrial import of pyruvate through mitochondrial pyruvate carrier 1[J]. EBioMedicine, 2018, 34: 243-255. IF6.68

19. Lou M D, Li J, Cheng Y, et al. CREB mediates glucagon action to upregulate hepatic MPC1: inhibitory effect of ginsenoside Rb1 on hepatic gluconeogenesis[J]. British journal of pharmacology, 2019.IF6.583

20. Fan L, Ye H, Wan Y, et al. Adaptor protein APPL1 coordinates HDAC3 to modulate brown adipose tissue thermogenesis in mice[J]. Metabolism, 2019, 100: 153955.IF6.513

第五代耐热逆转录酶 新逆转录酶|Hifair V Reverse Transcriptase

第五代耐热逆转录酶 新逆转录酶|Hifair V Reverse Transcriptase

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。

 

产品信息

 

货号

11300ES92 / 11300ES93 / 11300ES98

规格

10,000 U / 5×10,000 U/ 200,000 U

单位定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

组分信息

 

组分编号

组分名称

11300ES92

11300ES93

11300ES98

11300-A

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

5×50 μL

1 mL

11300-B

5×Hifair® V Buffer

250 μL

1.25 mL

5 mL

 

储存条件

 

-25~-15℃保存,有效期2年。

 

使用说明

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μgmRNA: 1-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。短暂离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® V Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃*

5 min

42℃**

15~30 min

85℃***

5 min

*当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略。

**逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50~55℃。

***85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR,推荐每25 μL反应体系,添加10-20 U逆转录酶,也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

 

注意事项

 

1. 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。

2. 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解。

3. 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本

4. 本产品仅用作科研用途。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231102

 

第五代耐热逆转录酶 新逆转录酶|Hifair V Reverse Transcriptase

暂无内容

1. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019, 177(4): 865-880. e21.IF31.398

2. Fan H, Hong B, Luo Y, et al. The effect of whey protein on viral infection and replication of SARS-CoV-2 and pangolin coronavirus in vitro[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2020, 5(1): 1-3.(IF13.493)

3. Zhou L, Hou B, Wang D, et al. Engineering Polymeric Prodrug Nanoplatform for Vaccinatio Immunotherapy of Cancer[J]. Nano Letters, 2020.IF12.279

4. Wang J., et al., The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation[J]. Nat Commun. 2017 Aug 15;8(1):244.IF 12.353

5. Tao L, Yi Y, Chen Y, et al. RIP1 kinase activity promotes steatohepatitis through mediating cell death and inflammation in macrophages[J]. bioRxiv, 2020.( IF10.717)

6. Ma D, Zhao Y, Huang L, et al. A novel hydrogel-based treatment for complete transection spinal cord injury repair is driven by microglia/macrophages repopulation[J]. Biomaterials, 2020, 237: 119830.(IF10.317)

7. Lin Z, Xia S, Liang Y, et al. LXR activation potentiates sorafenib sensitivity in HCC by activating microRNA-378a transcription[J]. Theranostics, 2020, 10(19): 8834. (IF8.579) 11120ES

8. Liu D, Nie W, Li D, et al. 3D printed PCL/SrHA scaffold for enhanced bone regeneration[J]. Chemical Engineering Journal, 2019, 362: 269-279.IF8.355

9. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide PtrCLE20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant Biotechnology Journal, 2020, 18(1): 195-206.(IF8.154)

10. Chen L, Lam J C W, Tang L, et al. Probiotic modulation of lipid metabolism disorders caused by perfluorobutanesulfonate pollution in zebrafish[J]. Environmental Science & Technology, 2020.(IF7.864)

11. Zhao P, Zhang J, Wu A, et al. Biomimetic codelivery overcomes osimertinib-resistant NSCLC and brain metastasis via macrophage-mediated innate immunity[J]. Journal of Controlled Release, 2020. ( IF7.727)

12. Xu X, Gao J, Dai W, et al. Gene activation by a CRISPR-assisted trans enhancer[J]. eLife, 2019, 8: e45973.IF7.551

13. Zhao Y, Wang H P, Yu C, et al. Integration of physiological and metabolomic profiles to elucidate the regulatory mechanisms underlying the stimulatory effect of melatonin on astaxanthin and lipids coproduction in Haematococcus pluvialis under inductive stress conditions[J]. Bioresource Technology, 2020, 319: 124150.(IF7.539)

14. Li X, Zhang X, Zhao Y, et al. Cross-talk between gama-aminobutyric acid and calcium ion regulates lipid biosynthesis in Monoraphidium sp. QLY-1 in response to combined treatment of fulvic acid and salinity stress[J]. Bioresource Technology, 2020, 315: 123833.(IF7.539)

15. Nie, W., et al., Three-dimensional porous scaffold by self-assembly of reduced graphene oxide and nano-hydroxyapatite composites for bone tissue engineering[J]. Carbon, 2017.116, 325-337.IF 7.082

16. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide Ptr CLE 20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant biotechnology journal, 2019.IF6.84

17. Peng L, Wang Y, Yang B, et al. Polychlorinated biphenyl quinone regulates MLKL phosphorylation that stimulates exosome biogenesis and secretion via a short negative feedback loop[J]. Environmental Pollution, 2020: 115606.(IF6.793)

18. Li A, Liu Q, Li Q, et al. Berberine reduces pyruvate-driven hepatic glucose production by limiting mitochondrial import of pyruvate through mitochondrial pyruvate carrier 1[J]. EBioMedicine, 2018, 34: 243-255. IF6.68

19. Lou M D, Li J, Cheng Y, et al. CREB mediates glucagon action to upregulate hepatic MPC1: inhibitory effect of ginsenoside Rb1 on hepatic gluconeogenesis[J]. British journal of pharmacology, 2019.IF6.583

20. Fan L, Ye H, Wan Y, et al. Adaptor protein APPL1 coordinates HDAC3 to modulate brown adipose tissue thermogenesis in mice[J]. Metabolism, 2019, 100: 153955.IF6.513

产品简介

 

Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。

 

产品信息

 

货号

11300ES92 / 11300ES93 / 11300ES98

规格

10,000 U / 5×10,000 U/ 200,000 U

单位定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

组分信息

 

组分编号

组分名称

11300ES92

11300ES93

11300ES98

11300-A

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

5×50 μL

1 mL

11300-B

5×Hifair® V Buffer

250 μL

1.25 mL

5 mL

 

储存条件

 

-25~-15℃保存,有效期2年。

 

使用说明

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μgmRNA: 1-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。短暂离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® V Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃*

5 min

42℃**

15~30 min

85℃***

5 min

*当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略。

**逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50~55℃。

***85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR,推荐每25 μL反应体系,添加10-20 U逆转录酶,也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

 

注意事项

 

1. 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。

2. 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解。

3. 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本

4. 本产品仅用作科研用途。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231102

 

第五代耐热逆转录酶 新逆转录酶|Hifair V Reverse Transcriptase

暂无内容

1. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019, 177(4): 865-880. e21.IF31.398

2. Fan H, Hong B, Luo Y, et al. The effect of whey protein on viral infection and replication of SARS-CoV-2 and pangolin coronavirus in vitro[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2020, 5(1): 1-3.(IF13.493)

3. Zhou L, Hou B, Wang D, et al. Engineering Polymeric Prodrug Nanoplatform for Vaccinatio Immunotherapy of Cancer[J]. Nano Letters, 2020.IF12.279

4. Wang J., et al., The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation[J]. Nat Commun. 2017 Aug 15;8(1):244.IF 12.353

5. Tao L, Yi Y, Chen Y, et al. RIP1 kinase activity promotes steatohepatitis through mediating cell death and inflammation in macrophages[J]. bioRxiv, 2020.( IF10.717)

6. Ma D, Zhao Y, Huang L, et al. A novel hydrogel-based treatment for complete transection spinal cord injury repair is driven by microglia/macrophages repopulation[J]. Biomaterials, 2020, 237: 119830.(IF10.317)

7. Lin Z, Xia S, Liang Y, et al. LXR activation potentiates sorafenib sensitivity in HCC by activating microRNA-378a transcription[J]. Theranostics, 2020, 10(19): 8834. (IF8.579) 11120ES

8. Liu D, Nie W, Li D, et al. 3D printed PCL/SrHA scaffold for enhanced bone regeneration[J]. Chemical Engineering Journal, 2019, 362: 269-279.IF8.355

9. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide PtrCLE20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant Biotechnology Journal, 2020, 18(1): 195-206.(IF8.154)

10. Chen L, Lam J C W, Tang L, et al. Probiotic modulation of lipid metabolism disorders caused by perfluorobutanesulfonate pollution in zebrafish[J]. Environmental Science & Technology, 2020.(IF7.864)

11. Zhao P, Zhang J, Wu A, et al. Biomimetic codelivery overcomes osimertinib-resistant NSCLC and brain metastasis via macrophage-mediated innate immunity[J]. Journal of Controlled Release, 2020. ( IF7.727)

12. Xu X, Gao J, Dai W, et al. Gene activation by a CRISPR-assisted trans enhancer[J]. eLife, 2019, 8: e45973.IF7.551

13. Zhao Y, Wang H P, Yu C, et al. Integration of physiological and metabolomic profiles to elucidate the regulatory mechanisms underlying the stimulatory effect of melatonin on astaxanthin and lipids coproduction in Haematococcus pluvialis under inductive stress conditions[J]. Bioresource Technology, 2020, 319: 124150.(IF7.539)

14. Li X, Zhang X, Zhao Y, et al. Cross-talk between gama-aminobutyric acid and calcium ion regulates lipid biosynthesis in Monoraphidium sp. QLY-1 in response to combined treatment of fulvic acid and salinity stress[J]. Bioresource Technology, 2020, 315: 123833.(IF7.539)

15. Nie, W., et al., Three-dimensional porous scaffold by self-assembly of reduced graphene oxide and nano-hydroxyapatite composites for bone tissue engineering[J]. Carbon, 2017.116, 325-337.IF 7.082

16. Zhu Y, Song D, Zhang R, et al. A xylem‐produced peptide Ptr CLE 20 inhibits vascular cambium activity in Populus[J]. Plant biotechnology journal, 2019.IF6.84

17. Peng L, Wang Y, Yang B, et al. Polychlorinated biphenyl quinone regulates MLKL phosphorylation that stimulates exosome biogenesis and secretion via a short negative feedback loop[J]. Environmental Pollution, 2020: 115606.(IF6.793)

18. Li A, Liu Q, Li Q, et al. Berberine reduces pyruvate-driven hepatic glucose production by limiting mitochondrial import of pyruvate through mitochondrial pyruvate carrier 1[J]. EBioMedicine, 2018, 34: 243-255. IF6.68

19. Lou M D, Li J, Cheng Y, et al. CREB mediates glucagon action to upregulate hepatic MPC1: inhibitory effect of ginsenoside Rb1 on hepatic gluconeogenesis[J]. British journal of pharmacology, 2019.IF6.583

20. Fan L, Ye H, Wan Y, et al. Adaptor protein APPL1 coordinates HDAC3 to modulate brown adipose tissue thermogenesis in mice[J]. Metabolism, 2019, 100: 153955.IF6.513

第五代耐热逆转录酶Hifair® V Reverse Transcriptase(1000 U/μL)

第五代耐热逆转录酶Hifair® V Reverse Transcriptase(1000 U/μL)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair® V Reverse Transcriptase是Hieff® M-MLV (H) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

14603ES03

(1000 kU)

14603ES25

(25000 kU)

14603ES72

(250000 kU)

14603-A

Hifair® V Reverse Transcriptase (1000 U/μL)

1 mL

25 mL

250 mL

 

产品应用

一步法RT-qPCR;基因克隆;荧光定量。

 

活性定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。

 

注意事项

1) 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

2) 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

3) 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

1 μL

or Random Primers (50 μM)

or 1 μL

or Gene Specific Primers (2 μM)

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

10 × Hifair® V Buffer (Cat#15661)

2 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (1000 U/μL)

0.2 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

RNase free ddH2O

to 20 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

15-30 min

85℃

5 min

【注】1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略。

2)逆转录温度:推荐使用42。对于GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃。

3)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR,推荐25 μL反应体系,添加10-20 U逆转录酶可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

 

HB220614

第五代耐热逆转录酶Hifair® V Reverse Transcriptase(1000 U/μL)

暂无内容

第五代耐热逆转录酶Hifair® V Reverse Transcriptase(1000 U/μL)

暂无内容

Hifair® V Reverse Transcriptase是Hieff® M-MLV (H) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

14603ES03

(1000 kU)

14603ES25

(25000 kU)

14603ES72

(250000 kU)

14603-A

Hifair® V Reverse Transcriptase (1000 U/μL)

1 mL

25 mL

250 mL

 

产品应用

一步法RT-qPCR;基因克隆;荧光定量。

 

活性定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。

 

注意事项

1) 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

2) 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

3) 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

1 μL

or Random Primers (50 μM)

or 1 μL

or Gene Specific Primers (2 μM)

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

10 × Hifair® V Buffer (Cat#15661)

2 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (1000 U/μL)

0.2 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

RNase free ddH2O

to 20 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

15-30 min

85℃

5 min

【注】1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略。

2)逆转录温度:推荐使用42。对于GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃。

3)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR,推荐25 μL反应体系,添加10-20 U逆转录酶可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

 

HB220614

第五代耐热逆转录酶Hifair® V Reverse Transcriptase(1000 U/μL)

暂无内容

第五代耐热逆转录酶Hifair® V Reverse Transcriptase(1000 U/μL)

暂无内容

Hifair®第三代耐热逆转录酶 新一代逆转录酶|Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

Hifair®第三代耐热逆转录酶 新一代逆转录酶|Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶,与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比,其cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达19.8 kb的cDNA。

 

产品信息

货号

11111ES92 / 11111ES93 / 11111ES08 

规格

10,000 U / 50,000 U/ 5 mL

单位定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

组分信息

组分编号

组分名称

11111ES92

11111ES93

11111ES08

11111-A

5×Hifair® Ⅲ Buffer

250 μL

1,250 μL

25 mL

11111-B

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

250 μL

5 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存,有效期18个月。

 

使用说明

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg – 5 μg或mRNA: 10 pg  500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair®  Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃*

5 min

55℃**

15-30 min***

85℃****

5 min

*当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

**逆转录温度:推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至60℃。

***可将逆转录时间延长到45-60min,有助于提高产量。

****85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

 

注意事项

1. 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。

2. 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解。

3. 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本

4. 本产品仅用作科研用途。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230426

Hifair®第三代耐热逆转录酶 新一代逆转录酶|Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

暂无内容

[1] Wang J, Song J, Song G, et al. Acetyl-L-carnitine improves erectile function in bilateral cavernous nerve injury rats via promoting cavernous nerve regeneration. Andrology. 2022;10(5):984-996. doi:10.1111/andr.13187(IF:3.842)
[2] Wang J, Jia Z, Dang H, Zou J. Meteorin-like/Meteorin-β upregulates proinflammatory cytokines via NF-κB pathway in grass carp Ctenopharyngodon idella. Dev Comp Immunol. 2022;127:104289. doi:10.1016/j.dci.2021.104289(IF:3.636)

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶,与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比,其cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达19.8 kb的cDNA。

 

产品信息

货号

11111ES92 / 11111ES93 / 11111ES08 

规格

10,000 U / 50,000 U/ 5 mL

单位定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

组分信息

组分编号

组分名称

11111ES92

11111ES93

11111ES08

11111-A

5×Hifair® Ⅲ Buffer

250 μL

1,250 μL

25 mL

11111-B

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

250 μL

5 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存,有效期18个月。

 

使用说明

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg – 5 μg或mRNA: 10 pg  500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair®  Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃*

5 min

55℃**

15-30 min***

85℃****

5 min

*当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

**逆转录温度:推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至60℃。

***可将逆转录时间延长到45-60min,有助于提高产量。

****85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

 

注意事项

1. 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。

2. 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解。

3. 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本

4. 本产品仅用作科研用途。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230426

Hifair®第三代耐热逆转录酶 新一代逆转录酶|Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase

暂无内容

[1] Wang J, Song J, Song G, et al. Acetyl-L-carnitine improves erectile function in bilateral cavernous nerve injury rats via promoting cavernous nerve regeneration. Andrology. 2022;10(5):984-996. doi:10.1111/andr.13187(IF:3.842)
[2] Wang J, Jia Z, Dang H, Zou J. Meteorin-like/Meteorin-β upregulates proinflammatory cytokines via NF-κB pathway in grass carp Ctenopharyngodon idella. Dev Comp Immunol. 2022;127:104289. doi:10.1016/j.dci.2021.104289(IF:3.636)