nanohelix Premier 2x qPCR Mix说明书

 

nanohelix Premier 2x qPCR Mix说明书

Premier 2x qPCR Mix [绿色]

  • 方便的 2x 浓缩预混液

  • 尽量减少引物二聚体的形成

  • 快速、特异、灵敏、可靠

  • *的缓冲系统和抗体介导的热启动酶

  • 可选包含 ROX 参考染料和 UDG 系统

  • 方便并降低污染风险

产品

货号 产品 特征
nanohelix BPQ Premier 2x qPCR Mix [绿色]
nanohelix BPQU Premier 2x qPCR Mix [绿色] w/ UDG + UDG 系统*

 

 

Premier 2x qPCR Mix [绿色]旨在对目标 DNA 进行快速、高度特异性和灵敏的实时定量。专门设计的缓冲液和抗体介导的热启动酶可显着减少引物二聚体的形成并确保数据可靠。方便的 2x 浓缩预混物包含Ab+Taq聚合酶、dNTP、缓冲液、Mg 2+、绿色荧光染料和稳定剂。使用UDG /dUTP 预混液 (BPQU)可以去除残留污染的 PCR 产物。


应用
  • 目标 DNA 的实时定量

  • 自动高通量实时 PCR

  • cDNA的基因表达分析

  • SNP分析和基因分型

  • 微生物和病毒病原体检测

  • 分子诊断

 

 

 

 


图 1. 使用 Premier 2X qPCR Mix [绿色](= RealHelix Premier qPCR Mix [绿色])进行灵敏检测。使用 Premier 2X qPCR Mix [Green] 分析 10 倍系列稀释的基因组 DNA 作为标准样品,用于人葡萄糖 6-磷酸脱氢酶基因特异性引物组。使用 Premier 2X qPCR Mix [绿色] 进行实时 PCR 的准确性由 R² 值=0.99887 证明。NTC:阴性对照。

 

 

 

 

 

 

图 2. 使用 Premier 2X qPCR Mix [Green] (= RealHelix™ Premier qPCR Mix [Green])iTaq Universal SYBR green supermix(公司 B)和 TOPreal qPCR 2x premix(公司 E)的实时 PCR 比较。使用人 HPRT-1 基因特异性引物组分析来自全血的 10 倍系列稀释的人基因组 DNA(红色:50 ng/rxn,绿色:5 ng/rxn,蓝色:0.5 ng/rxn)。R² 证明了实时 PCR 的准确性 value=0.99482 (Premier qPCR Mix), R²值=0.98909(iTaq Universal SYBR green supermix)和 R²值 = 0.99233(TOPreal qPCR 2x 预混物)。反应在实时 PCR 仪器 Rotor-GENE Q (QIAGEN, Germany) 上进行。

 

 

 

 

图 3. 使用 Premier 2X qPCR Mix [Green] (= RealHelix™ Premier qPCR Mix [Green]) iTaq Universal SYBR green supermix(公司 B)和 TOPreal qPCR 2x premix(公司 E)的实时 PCR 比较。使用人 HPRT-1 基因特异性引物组分析来自全血的 10 倍系列稀释的人基因组 DNA(红色:50 ng/rxn,绿色:5 ng/rxn,蓝色:0.5 ng/rxn)。R² 证明了实时 PCR 的准确性值=0.999(RealHelix™ Premier qPCR Mix [绿色]),R²值=0.999(iTaq Universal SYBR green supermix)和 R²值 = 1.000(TOPreal qPCR 2x 预混物)。熔解曲线分析显示 Premier qPCR Mix 的高特异性。反应在实时 PCR 仪器 CFX-96 (Bio-Rad, USA) 上进行。NTC:阴性对照。

 

 

 

 

图 4. 使用Premier 2X qPCR Mix [Green] (= RealHelix™ Premier qPCR Mix [Green])扩增具有不同 G+C 含量的靶 DNA Premier 2X qPCR Mix [绿色] 使用 10 倍连续稀释的人类基因组 DNA(红色:50 ng/rxn,绿色:5 ng/rxn,蓝色:0.5 ng/rxn)和 Rotor-Gene Q 进行实时 PCR 评估仪器(QIAGEN,德国)、CFX-96 仪器(Bio-Rad,美国)和 ABI7500 实时荧光定量 PCR 系统(Applied Biosystems,美国)。NTC:阴性对照。

 

属性:实时荧光定量 PCR,嵌入剂类型,热启动

热活化: +95°C 2 分钟

活性测试:使用 Bio-Rad CFX-96(人类基因组 DNA,G6PDH 片段)进行 PCR 性能测试:符合规范

稳定性: -20°C 下 12 个月

 

 

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。独特的Buffer设计,在体系中不包含影响冻干工艺的化学试剂,可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。

本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer,Enzymes Mix等,缓冲液中已含有Mg2+dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多重荧光定量扩增反应。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13117ES60

(100 T)

13117ES80

(1000 T)

13117ES92

(10000 T)

13117-A

4×Hifair® V Lyo-Buffer

600 μL

6 mL

60 mL

13117-B

Hifair® V Lyo-Enzyme Mix

100 μL

1 mL

10 mL

13117-C

DEPC-treated Water (DNase、RNase free)

1.5 mL

15 mL

150 mL

【注】1) 4×Hifair® V Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

 2) Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus™,ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex,Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™,Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™,Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000,Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96,Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

运输与保存方式

冰袋运输。

4×Hifair® V Lyo-Buffer -20保存,有效期1年,Hifair® V Lyo-Enzyme Mix 4℃保存。有效期6个月。

本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途!

 

反应体系(以25 μL为例)

组分

体积(μL)

终浓度

4×Hifair® V Lyo-Buffer

6

Hifair® V Lyo-Enzyme Mix

1

Primer Mix (10 μM)

各0.4

0.2 μM

Probe Mix (10 μM)

各0.2

0.1 μM

模板 RNA

1-5 μL

RNase Free H2O

to 25 μL

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系:推荐使用25 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序
 

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50℃a

10 min

1

2

预变性

95℃

5 min

1

3

扩增反应

95℃

15 sec

45

60℃b

30 secc

【注】                                                                                             

a) 逆转录:42℃或者50℃均可,时间 10-15 min。

b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1abN引物,退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

相关产品
 

产品名称

货号

规格

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit

11213ES60

100 T

11213ES80

1000 T

11213ES92

10000 T

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)

11214ES60

100 T

11214ES80

1000 T

11214ES92

10000 T

Hieff UNICON® HotStart Direct Taq DNA Polymerase,热启动直扩用抗体修饰突变体Taq酶

10717ES72

250 U

Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶单克隆抗体

31303ES60

100 μg

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

11300ES92

10000 U

11300ES93

5×10000 U

Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)

10703ES10

10 KU

10703ES60

100 KU

10703ES70

200 KU

Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制剂

10603ES05

2 KU

10603ES10

10 KU

10603ES20

100 KU

10603ES60

200 KU

Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG

10303ES60

100 U

10303ES76

500 U

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

10128ES72

250 μL

10128ES80

1 mL

COVID-19-pseudovirus(2019-nCOV假病毒)

11900ES03

1 mL

SARS-pseudovirus(SARS假病毒)

11903ES70

1 mL

MERS-pseudovirus(MERS假病毒)

11904ES70

1 mL

 

HB201130

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。独特的Buffer设计,在体系中不包含影响冻干工艺的化学试剂,可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。

本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer,Enzymes Mix等,缓冲液中已含有Mg2+dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多重荧光定量扩增反应。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13117ES60

(100 T)

13117ES80

(1000 T)

13117ES92

(10000 T)

13117-A

4×Hifair® V Lyo-Buffer

600 μL

6 mL

60 mL

13117-B

Hifair® V Lyo-Enzyme Mix

100 μL

1 mL

10 mL

13117-C

DEPC-treated Water (DNase、RNase free)

1.5 mL

15 mL

150 mL

【注】1) 4×Hifair® V Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

 2) Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus™,ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex,Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™,Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™,Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000,Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96,Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

运输与保存方式

冰袋运输。

4×Hifair® V Lyo-Buffer -20保存,有效期1年,Hifair® V Lyo-Enzyme Mix 4℃保存。有效期6个月。

本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途!

 

反应体系(以25 μL为例)

组分

体积(μL)

终浓度

4×Hifair® V Lyo-Buffer

6

Hifair® V Lyo-Enzyme Mix

1

Primer Mix (10 μM)

各0.4

0.2 μM

Probe Mix (10 μM)

各0.2

0.1 μM

模板 RNA

1-5 μL

RNase Free H2O

to 25 μL

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系:推荐使用25 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序
 

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50℃a

10 min

1

2

预变性

95℃

5 min

1

3

扩增反应

95℃

15 sec

45

60℃b

30 secc

【注】                                                                                             

a) 逆转录:42℃或者50℃均可,时间 10-15 min。

b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1abN引物,退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

相关产品
 

产品名称

货号

规格

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit

11213ES60

100 T

11213ES80

1000 T

11213ES92

10000 T

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)

11214ES60

100 T

11214ES80

1000 T

11214ES92

10000 T

Hieff UNICON® HotStart Direct Taq DNA Polymerase,热启动直扩用抗体修饰突变体Taq酶

10717ES72

250 U

Hieff® Double-Block anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶单克隆抗体

31303ES60

100 μg

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

11300ES92

10000 U

11300ES93

5×10000 U

Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)

10703ES10

10 KU

10703ES60

100 KU

10703ES70

200 KU

Murine RNase inhibitor (40 U/μL) 鼠源RNase抑制剂

10603ES05

2 KU

10603ES10

10 KU

10603ES20

100 KU

10603ES60

200 KU

Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG

10303ES60

100 U

10303ES76

500 U

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

10128ES72

250 μL

10128ES80

1 mL

COVID-19-pseudovirus(2019-nCOV假病毒)

11900ES03

1 mL

SARS-pseudovirus(SARS假病毒)

11903ES70

1 mL

MERS-pseudovirus(MERS假病毒)

11904ES70

1 mL

 

HB201130

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

一步法多重定量RT-qPCR试剂盒|Hifair® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

抗体法热启动Taq酶多重荧光定量qPCR试剂盒|C49P1 Lyo-TaqMan Multiplex qPCR Probe Kit

抗体法热启动Taq酶多重荧光定量qPCR试剂盒|C49P1 Lyo-TaqMan Multiplex qPCR Probe Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Unicon® C49P1 Lyo-TaqMan Multiplex qPCR Probe Kit是一款采用公司新一代抗体法热启动Taq酶的荧光定量qPCR试剂2 × TaqMan qPCR buffer反应缓冲液已包含Mg2+dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够保证引物效率的同时,进行多达四重的反应。

本产品的热启动Taq酶酶活高达50 U/μL,适用于冻干试剂应用需求。

 

产品组分

组分编号

组分名称

13150ES60

100T

13150ES80

1000T

13150ES9210000T

13150-A

2×TaqMan qPCR buffer

1.25 mL

12.5 mL

125 mL

13150-B

HS D-Taq (50 U/μL)

6 μL

60 μL

600 μL

 

运输与保存方式

冰袋运输。-20保存,有效期1年。

 

反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2×TaqMan qPCR buffer

12.5

HS D-Taq (50 U/μL)

0.06

0.12 U/μL

Primer mix(10 μM)

x

0.1 μM-0.5 μM

Probe mix(10 μM)

x

50 nM-250 nM

模板

1-10

ddH2O

up to 25

【注】  引物浓度和DNA量可根据实验要求适当调整。

 

参考扩增程序

循环步骤

温度(

时间

循环数

预变性

95℃

5 min

1

变性

95℃

15sec

45

退火/延伸

60℃

30 sec

【注】退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

 

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴实验手套进行操作。
2)本产品仅作科研用途!

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Hieff   Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

11211ES03

1 mL

11211ES08

5 mL

11211ES60

100 mL

Hieff   Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)

11212ES03*

1ml

11212ES08*

5ml 

11212ES60*

100 mL

Hieff® anti-Taq DNA Polymerase   Antibody Taq酶单克隆抗体

31301ES60

100μg

31301ES80

1mg

Uracil DNA Glycosylase (UDG),   heat-labile 热敏UDG

10303ES60

100U

10303ES76

500U

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM

10128ES72

250μL

10128ES80

1mL

 

HB200724

 

抗体法热启动Taq酶多重荧光定量qPCR试剂盒|C49P1 Lyo-TaqMan Multiplex qPCR Probe Kit

暂无内容

[1] Mohsin M, Li Y, Zhang X, et al. Development of CRISPR-CAS9 based RNA drugs against Eimeria tenella infection. Genomics. 2021;113(6):4126-4135. doi:10.1016/j.ygeno.2021.10.019(IF:5.736)

Hieff Unicon® C49P1 Lyo-TaqMan Multiplex qPCR Probe Kit是一款采用公司新一代抗体法热启动Taq酶的荧光定量qPCR试剂2 × TaqMan qPCR buffer反应缓冲液已包含Mg2+dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够保证引物效率的同时,进行多达四重的反应。

本产品的热启动Taq酶酶活高达50 U/μL,适用于冻干试剂应用需求。

 

产品组分

组分编号

组分名称

13150ES60

100T

13150ES80

1000T

13150ES9210000T

13150-A

2×TaqMan qPCR buffer

1.25 mL

12.5 mL

125 mL

13150-B

HS D-Taq (50 U/μL)

6 μL

60 μL

600 μL

 

运输与保存方式

冰袋运输。-20保存,有效期1年。

 

反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2×TaqMan qPCR buffer

12.5

HS D-Taq (50 U/μL)

0.06

0.12 U/μL

Primer mix(10 μM)

x

0.1 μM-0.5 μM

Probe mix(10 μM)

x

50 nM-250 nM

模板

1-10

ddH2O

up to 25

【注】  引物浓度和DNA量可根据实验要求适当调整。

 

参考扩增程序

循环步骤

温度(

时间

循环数

预变性

95℃

5 min

1

变性

95℃

15sec

45

退火/延伸

60℃

30 sec

【注】退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

 

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴实验手套进行操作。
2)本产品仅作科研用途!

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Hieff   Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

11211ES03

1 mL

11211ES08

5 mL

11211ES60

100 mL

Hieff   Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)

11212ES03*

1ml

11212ES08*

5ml 

11212ES60*

100 mL

Hieff® anti-Taq DNA Polymerase   Antibody Taq酶单克隆抗体

31301ES60

100μg

31301ES80

1mg

Uracil DNA Glycosylase (UDG),   heat-labile 热敏UDG

10303ES60

100U

10303ES76

500U

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM

10128ES72

250μL

10128ES80

1mL

 

HB200724

 

抗体法热启动Taq酶多重荧光定量qPCR试剂盒|C49P1 Lyo-TaqMan Multiplex qPCR Probe Kit

暂无内容

[1] Mohsin M, Li Y, Zhang X, et al. Development of CRISPR-CAS9 based RNA drugs against Eimeria tenella infection. Genomics. 2021;113(6):4126-4135. doi:10.1016/j.ygeno.2021.10.019(IF:5.736)

Exiqon公司推出的血清血浆microRNA qPCR检测panels

Exiqon公司推出的血清血浆microRNA qPCR检测panels
 
Exiqon公司推出的血清血浆microRNA qPCR检测panels
 
 

     ——将LNA技术应用于microRNA检测的*

New serum/plasma miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR panels

 

 

All microRNAs found in serum/plasma in 96 and 384 well plates

 

 

Excellent sensitivity – Profile all microRNAs on the panels using just 20 µl serum/plasma

 

 

Proven track record – Experimentally validated on thousands of clinical samples

 

 

Learn more about our serum/plasma focus panels

 

 

 

 

Cancer miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR panel

 

 

Assays for all relevant oncogenes and/or tumor suppressor microRNAs in one PCR Panel

 

 

Profile all microRNAs using less than 20 ng total RNA. Focus on the microRNAs you need

 

 

Sensitivity & specificity for accurate microRNA profiling from FFPE, biopsies & LCM samples

 

 

Read about our cancer focus panel

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,本产品含有 UDG 酶,可有效防止气溶胶污染的风险。

本试剂盒利用耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA,并利用 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer,Enzymes Mix 等,缓冲液中已含有 Mg2+ dNTP 等,并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子,能够保证引物扩增效率的同时,进行多达四重的反应。

 

产品信息

货号

11214ES60 / 11214ES80 / 11214ES92

规格

100 T / 1000 T / 10000 T

 

组分信息

组分编号

组分名称

11214ES60

(100 T)

11214ES80

(1000 T)

11214ES92

(10000 T)

11214-A

2×Hifair® VN MP Buffer

1.25 mL

12.5 mL

125 mL

11214-B

Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus)

150 μL

750 μL×2 

15 mL

11214C

RNase Free H2O

1.2 mL

12 mL

120 mL

【注】1. 2×Hifair® VN MP Buffer 为 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。本组分含有 dNTP 和 dUTP。

  1. Hifair® VN Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON® Hot Start Taq DNA Polymerase 和 UDG 酶。

 

储存条件

-25~-15℃保存,有效期18个月。

 

使用说明

  1. 反应体系(以25 μL为例

组分

体积(μL

终浓度

2×Hifair® VN MP Buffer

12.5

Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus)

1.5

Primer/Probe Mix (10 μM)

1-4

0.4 μM

模板RNA

1-5

RNase Free H2O

to 25

【注】使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

1. 引物浓度Primer Mix 中包含多对引物,也可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。

2. 探针浓度Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

3. 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

4. 反应体系:推荐使用 25-50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

5. 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头避免交叉污染和气溶胶污染。

  1. 参考扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

逆转录

50℃a

10 min

1

预变性

95℃

5 min

1

扩增反应

95℃

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)15 sec

45

60b

30 secc

a. 逆转录42℃或者50℃均可时间 10-15 min。

b. 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

  1. 适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

 

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20230731

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)

暂无内容

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)

暂无内容

Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,本产品含有 UDG 酶,可有效防止气溶胶污染的风险。

本试剂盒利用耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA,并利用 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer,Enzymes Mix 等,缓冲液中已含有 Mg2+ dNTP 等,并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子,能够保证引物扩增效率的同时,进行多达四重的反应。

 

产品信息

货号

11214ES60 / 11214ES80 / 11214ES92

规格

100 T / 1000 T / 10000 T

 

组分信息

组分编号

组分名称

11214ES60

(100 T)

11214ES80

(1000 T)

11214ES92

(10000 T)

11214-A

2×Hifair® VN MP Buffer

1.25 mL

12.5 mL

125 mL

11214-B

Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus)

150 μL

750 μL×2 

15 mL

11214C

RNase Free H2O

1.2 mL

12 mL

120 mL

【注】1. 2×Hifair® VN MP Buffer 为 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。本组分含有 dNTP 和 dUTP。

  1. Hifair® VN Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON® Hot Start Taq DNA Polymerase 和 UDG 酶。

 

储存条件

-25~-15℃保存,有效期18个月。

 

使用说明

  1. 反应体系(以25 μL为例

组分

体积(μL

终浓度

2×Hifair® VN MP Buffer

12.5

Hifair® VN Enzyme Mix (UDG plus)

1.5

Primer/Probe Mix (10 μM)

1-4

0.4 μM

模板RNA

1-5

RNase Free H2O

to 25

【注】使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

1. 引物浓度Primer Mix 中包含多对引物,也可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。

2. 探针浓度Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

3. 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

4. 反应体系:推荐使用 25-50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

5. 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头避免交叉污染和气溶胶污染。

  1. 参考扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

逆转录

50℃a

10 min

1

预变性

95℃

5 min

1

扩增反应

95℃

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)15 sec

45

60b

30 secc

a. 逆转录42℃或者50℃均可时间 10-15 min。

b. 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

  1. 适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

 

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20230731

RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)

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RT-qPCR探针试剂盒(一步法多重荧光定量PCR)(含UDG酶)|Hieff Unicon® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(UDG plus)

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SG qPCR Master Mix 说明书

 

Roboklon 在分子生物学方面,提供大量高质量,可靠但廉价的消耗品。 

SG qPCR Master Mix

灵敏的高精度(2x)主混合物,用于定量实时PCR和两步RT-qPCR。非常低的背景。与所有广泛使用的不需要ROX的实时PCR循环仪兼容。使用单独的尿嘧啶-N-糖基化酶和PCR水完成整套。

详细的产品说明    

货号

品名

规格

品牌

E0401-01

SG qPCR Master Mix

100 x 25μl

roboklon

E0401-02

SG qPCR Master Mix

200 x25μl

roboklon

E0401-03

SG qPCR Master Mix

1.000×25μl

roboklon

 

应用实例

 

图: SG qPCR主混合物:来自一系列七个模板DNA稀释步骤和一个阴性对照的灵敏实时PCR。标准:分别为2500,250和25ng细菌基因组DNA。连续稀释的模板拷贝数(=基因组数目)分别在每次测定1000个模板拷贝至少1.2个模板拷贝的范围内。

 

SG qPCR Master Mix(2x) – 包装内容

2x Master Mix含有

Perpetual Taq DNA聚合酶(热启动),

优化反应缓冲液,

dNTPs(dTTP部分替换为dUTP),

SYBR Green I染料。

尿嘧啶-N-糖基化酶,

H 2 O,PCR级。

如果需要,可选择提供:

25mM MgCl 2溶液。如有需要,请在订单的同时申请此组件。

 

相关产品

SG qPCR Master Mix(2x)plus(10x)ROX Solution

dART cDNA合成试剂盒,其中包含所有必需和专门调整的逆转录组分

逆转录酶

核糖核酸酶抑制剂

RNA提取和纯化试剂盒

 

 

我们公司优势是强大的采购,

1:基本什么都能进口,血清,抗体,耗材,还有部分限制进口的,

2:货品全,现经营过700多个品牌,基本所有生物试剂耗材都可以进口,特别是冷偏的产品那就更有优势,

3:提供加急服务,一般1-2周到货,超过时限加急费全免

4:价格公道,绝大部分价格有优势,当然不能保证100%产品都是价格低廉,因为价格低廉意味着没有服务.

5:良好的信誉,大部分客户我们提供货到付款服务,客户包括清华,北大 交大 复旦,中山等100多所大学,ROCHE,阿斯利康,国药 ,fisher等500多家公司

6:我们代理的品牌有:Antibody Research Corporation,arcticzymes,Biorelevant,AmberGen, Inc. ,clemente-associates,clodronaiposomes,Columbia Biosciences,enzyme research,Gene Bridges GmbH,Genovis,AmberGen, Inc.  Biotechnology GmbH,Haematologic Technologies HTI Haemtech,hookelabs,Immudex,Innovative Research of America,inspiralis ,List Biological Laboratories, Inc.,lumafluor,Microsurfaces,multiplicom,nanotools,Pel-Freez Biologicals,pentapharm,progen,Protein Ark,QA-Bio,Inc,QA-Bio,IncQuickZyme Biosciences,Teknova,TriLink BioTechnologies, Inc.,Zyagen Laboratories 等

7:我们还是invitrogen,qiagen,Midland BioProducts Corporationam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知名*批发,欢迎合作。

 

探针法支原体qPCR检测试剂盒|MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit

探针法支原体qPCR检测试剂盒|MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

MycAway 支原体 qPCR 检测试剂盒(探针法)是基于 NAT(nucleic acid amplification techniques)的一种快速定性检测生 产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治疗用细胞中潜在支原体污染的产品。该试剂盒基于定量 PCR 技术  用多重 PCR 的方法 ,使用 2 种荧光探针 ,  FAM  VIC ,分别检测目标序列和内参。  可覆盖 100 多种支原体 DNA 序列;   且严格按照 EP 2.6.7 进行专属性、检测限、耐用性验证 ,检测限满足≤10 CFU/mL 的要求 ,具备灵敏度高、特异性好、安全 好等特点。

本产品能够与利用手动提取方法的 MolPure® 磁珠法残留 DNA 样本前处理试剂盒  (Cat#18461)  搭配使用。样本中的核酸 同样也可以使用 AutoPure 32A 全自动核酸提取仪  (Cat#80501)  和 MolPure® 磁珠法残留 DNA 样本前处理试剂盒 FA( 封装)  (Cat#18462)  自动提取样本核酸  (请注意 ,试剂盒货号 Cat#18461 和 Cat#40618 都已经过完全验证 ,如需详细验证 信息 ,可以联系我司技术支持)  。样本经过前处理去除干扰杂质获得纯化的支原体 DNA  ,使用 qPCR 仪进行 qPCR  后收集探针的荧光信号 ,从而对检测结果进行分析

 

产品信息

货号

40618ES25 / 40618ES60

规格

25T / 100 T

检测

10 CFU/mL

测方法

qPCR(Taqman探针)

测时长

4小时

荧光探

FAM(目的通道)   ;VIC(内参通道)

覆盖支原体范

100 多种

能验证

根据EP 2.6.7 和 JP G3 进行了性能验

 

储存条件

-25~-15℃保存 ,有效期 1 年。

*收到 ,请检查各组分是否齐全 ,如不立即开封各组分做实验 ,需立即放入-20℃中保存。注意 40618-B 需要避光保存。

 

使用说明详见产品说明书

 

Q:翌圣3种支原体检测产品怎么选择?

A:40601是PCR法,40612是LAMP法,40618是qPCR法。

40612最快1个小时左右出结果,通过颜色变化判断支原体是否污染,覆盖药典要求的6种支原体(药典要求10种),可用于没有qPCR仪的客户使用

40601是通过巢式PCR后跑胶看条带大小判断支原体是否污染,覆盖药典要求的6种支原体(药典要求10种),可用于没有qPCR仪的客户使用

40618是基于Taqman探针的qPCR方法,覆盖药典要求的10种支原体(药典要求10种),根据欧洲日本药典要求进行了试剂盒性能验证,有完整的试剂盒性能报告。所以如果用于放行检测,推荐使用40618试剂盒

3款试剂盒都是定性检测试剂盒,目前市面上还没有定量试剂盒出来。

Q:试剂盒中的内部质控对照(IC)是什么?为啥pcr的时候需要稀释?

A:IC采用的是外源性内标,不是内参基因,主要用于监控提取和检测过程。他有两个用处,一是作为提取的一个内部质控,一个是作为pcr的内部质控,提取加入进去因为会损失一部分所以浓度需要高些,但是pcr的话浓度过高会竞争性的去目的核酸,ct值会变小。所以是需要稀释的。

Q:我可以不经过提取,直接使用培养基做检测吗?

A:可以不经过提取直接使用培养基来做,但是我们还是建议使用提取过程,因为有些样本里面抑制物会影响扩增结果。

Q:你们的支原体检测试剂盒能检测出拷贝数吗?你们检测下限是多少?

A:我们支原体检测试剂盒是一个定性实验,不能检测出拷贝数,也没有必要检测出拷贝数。我们的检测下限是最低定量限可做到0.5CFU/mL,对应Ct也小于40。

Q:10CFU/ml=10copies/ul是什么意思呢?

A:我们用10CFU/ml的标准菌株,和10copies/ul的试剂盒里的PC进行PCR对标,Ct值是一致的。

[1] Zhao F, Wang X, Li Y, Chen X, Geng Z, Zhang C. Effects of Dietary Supplementation with Epigallocatechin Gallate on Meat Quality and Muscle Antioxidant Capacity of Broilers Subjected to Acute Heat Stress. Animals (Basel). 2021;11(11):3296. Published 2021 Nov 18. doi:10.3390/ani11113296(IF:2.752)

MycAway 支原体 qPCR 检测试剂盒(探针法)是基于 NAT(nucleic acid amplification techniques)的一种快速定性检测生 产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治疗用细胞中潜在支原体污染的产品。该试剂盒基于定量 PCR 技术  用多重 PCR 的方法 ,使用 2 种荧光探针 ,  FAM  VIC ,分别检测目标序列和内参。  可覆盖 100 多种支原体 DNA 序列;   且严格按照 EP 2.6.7 进行专属性、检测限、耐用性验证 ,检测限满足≤10 CFU/mL 的要求 ,具备灵敏度高、特异性好、安全 好等特点。

本产品能够与利用手动提取方法的 MolPure® 磁珠法残留 DNA 样本前处理试剂盒  (Cat#18461)  搭配使用。样本中的核酸 同样也可以使用 AutoPure 32A 全自动核酸提取仪  (Cat#80501)  和 MolPure® 磁珠法残留 DNA 样本前处理试剂盒 FA( 封装)  (Cat#18462)  自动提取样本核酸  (请注意 ,试剂盒货号 Cat#18461 和 Cat#40618 都已经过完全验证 ,如需详细验证 信息 ,可以联系我司技术支持)  。样本经过前处理去除干扰杂质获得纯化的支原体 DNA  ,使用 qPCR 仪进行 qPCR  后收集探针的荧光信号 ,从而对检测结果进行分析

 

产品信息

货号

40618ES25 / 40618ES60

规格

25T / 100 T

检测

10 CFU/mL

测方法

qPCR(Taqman探针)

测时长

4小时

荧光探

FAM(目的通道)   ;VIC(内参通道)

覆盖支原体范

100 多种

能验证

根据EP 2.6.7 和 JP G3 进行了性能验

 

储存条件

-25~-15℃保存 ,有效期 1 年。

*收到 ,请检查各组分是否齐全 ,如不立即开封各组分做实验 ,需立即放入-20℃中保存。注意 40618-B 需要避光保存。

 

使用说明详见产品说明书

 

Q:翌圣3种支原体检测产品怎么选择?

A:40601是PCR法,40612是LAMP法,40618是qPCR法。

40612最快1个小时左右出结果,通过颜色变化判断支原体是否污染,覆盖药典要求的6种支原体(药典要求10种),可用于没有qPCR仪的客户使用

40601是通过巢式PCR后跑胶看条带大小判断支原体是否污染,覆盖药典要求的6种支原体(药典要求10种),可用于没有qPCR仪的客户使用

40618是基于Taqman探针的qPCR方法,覆盖药典要求的10种支原体(药典要求10种),根据欧洲日本药典要求进行了试剂盒性能验证,有完整的试剂盒性能报告。所以如果用于放行检测,推荐使用40618试剂盒

3款试剂盒都是定性检测试剂盒,目前市面上还没有定量试剂盒出来。

Q:试剂盒中的内部质控对照(IC)是什么?为啥pcr的时候需要稀释?

A:IC采用的是外源性内标,不是内参基因,主要用于监控提取和检测过程。他有两个用处,一是作为提取的一个内部质控,一个是作为pcr的内部质控,提取加入进去因为会损失一部分所以浓度需要高些,但是pcr的话浓度过高会竞争性的去目的核酸,ct值会变小。所以是需要稀释的。

Q:我可以不经过提取,直接使用培养基做检测吗?

A:可以不经过提取直接使用培养基来做,但是我们还是建议使用提取过程,因为有些样本里面抑制物会影响扩增结果。

Q:你们的支原体检测试剂盒能检测出拷贝数吗?你们检测下限是多少?

A:我们支原体检测试剂盒是一个定性实验,不能检测出拷贝数,也没有必要检测出拷贝数。我们的检测下限是最低定量限可做到0.5CFU/mL,对应Ct也小于40。

Q:10CFU/ml=10copies/ul是什么意思呢?

A:我们用10CFU/ml的标准菌株,和10copies/ul的试剂盒里的PC进行PCR对标,Ct值是一致的。

[1] Zhao F, Wang X, Li Y, Chen X, Geng Z, Zhang C. Effects of Dietary Supplementation with Epigallocatechin Gallate on Meat Quality and Muscle Antioxidant Capacity of Broilers Subjected to Acute Heat Stress. Animals (Basel). 2021;11(11):3296. Published 2021 Nov 18. doi:10.3390/ani11113296(IF:2.752)

一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Unicon® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒,已经添加了冻干保护剂,可用于冻干。

 

产品组分

组分编号

组分名称

13667ES60

(100 T)

13667ES80

(1000 T)

13667ES92

(10000 T)

13667-A

4×Hifair® V Lyo-Buffer

600 μL

6 mL

60 mL

13667-B

 MgCl2(25 mM)

500 μL

5 mL

50 mL

13667-C

10×Hifair® V Lyo-Enzyme   Mix

10 μL

100 μL

1 mL

13667-D

冻干保护剂

700 μL

7 mL

70 mL

【注】10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。

 

运输与保存方式

1.运输方式:冰袋运输。

2.保存方式:Part 1:13667-A【4×Hifair® V Lyo-Buffer-20保存,有效期1年。

13667-D【冻干保护剂】-20保存,有效期1年。

Part 2:13667-B【MgCl2(25 mM)】 4℃保存,有效期3年。

13667-C【10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix】4℃保存,有效期6个月。

3.本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

反应体系

组分

体积(μL)

终浓度

4×Hifair® V Lyo-Buffer

6

Hifair® V Lyo-Enzyme   Mix

0.1

 MgCl2 (25 mM)

2.5

 

冻干保护剂

7 μL

 

Primer Mix (10 μM)

各0.4

0.2 μM

Probe Mix (10 μM)

各0.2

0.1 μM

模板 RNA

1-5 μL

RNase Free H2O

to 25 μL

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度:Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系:推荐使用25 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

参考扩增程序

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50℃a

10 min

1

2

预变性

95℃

5 min

1

3

扩增反应

95℃

15 sec

45

60℃b

30 secc

【注】                                                          
a) 逆转录:42℃或者50℃均可,时间 10-15 min。
b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1abN引物,退火温度建议≥60℃。
c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

 

注意事项

1.辅料配方发生微量的变化,需重新测定冻干参数,并做相应调整。

2.冻干设备要求:

冷阱盘管表面温度≤-60℃

板层温度≤-45℃,温度均一性±1℃(性能详细说明及验证方案咨询金畔生物技术人员)

可做压升测试(冻干生产前,做泄漏率测试)

3.环境要求:

溶液分装及配置尽量在万级层流保护下进行,环境空间尘埃掉落进溶液中成为冻干过程的晶核,影响溶液的结晶的过冷度,导致产品质量不一致性。

4.真空控制

掺气方式:建议掺入气体为高纯氮气

5.冻干试剂 MIX 工艺参数设定参考(冻干设备升华效率≥1mm/小时)

   

温度

斜率时间

时间

真空 Pa

备注

预冻

1

-45℃

——

2 h

——

常温最快速率降温

2

-45℃

——

 

——

保持,根据包材验证保持时间

真空

3

-45℃

——

 

15

 

升华阶段

4

-40℃

 

10 h

15

无斜率控制型冻干机,可分6个阶段升温

5

0℃

2 h

0 h

15

6

25℃

2 h

4 h

15

无斜率控制型冻干机,可分6个阶段升温

解析干燥

7

30℃

 

2 h

0

 

含水量控制

8

压升测试重试时间:30 min

压升测试:2 min<5 Pa

6.实验过程中请使用RNase free耗材。

7.为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

8.本产品仅作科研用途!

 

相关产品

产品名称

货号

规格

10×Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2)

13168ES60

100 T

13168ES80

1000 T

13168ES92

10000 T

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶(无甘油版)

11301ES12

12 KU

11301ES75

300 KU

Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 50 U/μL

10724ES01

100 μL

10724ES94

1 mL

10724ES95

25 mL

10724ES96

100 mL

Murine RNase Inhibitor (40 U/µL, Glycerol-free)

10701ES05

2 KU

10701ES10

10 KU

10701ES20

20 KU

10701ES60

100 KU

 

HB210715

 

一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

Hieff Unicon® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒,已经添加了冻干保护剂,可用于冻干。

 

产品组分

组分编号

组分名称

13667ES60

(100 T)

13667ES80

(1000 T)

13667ES92

(10000 T)

13667-A

4×Hifair® V Lyo-Buffer

600 μL

6 mL

60 mL

13667-B

 MgCl2(25 mM)

500 μL

5 mL

50 mL

13667-C

10×Hifair® V Lyo-Enzyme   Mix

10 μL

100 μL

1 mL

13667-D

冻干保护剂

700 μL

7 mL

70 mL

【注】10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。

 

运输与保存方式

1.运输方式:冰袋运输。

2.保存方式:Part 1:13667-A【4×Hifair® V Lyo-Buffer-20保存,有效期1年。

13667-D【冻干保护剂】-20保存,有效期1年。

Part 2:13667-B【MgCl2(25 mM)】 4℃保存,有效期3年。

13667-C【10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix】4℃保存,有效期6个月。

3.本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

反应体系

组分

体积(μL)

终浓度

4×Hifair® V Lyo-Buffer

6

Hifair® V Lyo-Enzyme   Mix

0.1

 MgCl2 (25 mM)

2.5

 

冻干保护剂

7 μL

 

Primer Mix (10 μM)

各0.4

0.2 μM

Probe Mix (10 μM)

各0.2

0.1 μM

模板 RNA

1-5 μL

RNase Free H2O

to 25 μL

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度:Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系:推荐使用25 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

参考扩增程序

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50℃a

10 min

1

2

预变性

95℃

5 min

1

3

扩增反应

95℃

15 sec

45

60℃b

30 secc

【注】                                                          
a) 逆转录:42℃或者50℃均可,时间 10-15 min。
b) 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1abN引物,退火温度建议≥60℃。
c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

 

注意事项

1.辅料配方发生微量的变化,需重新测定冻干参数,并做相应调整。

2.冻干设备要求:

冷阱盘管表面温度≤-60℃

板层温度≤-45℃,温度均一性±1℃(性能详细说明及验证方案咨询金畔生物技术人员)

可做压升测试(冻干生产前,做泄漏率测试)

3.环境要求:

溶液分装及配置尽量在万级层流保护下进行,环境空间尘埃掉落进溶液中成为冻干过程的晶核,影响溶液的结晶的过冷度,导致产品质量不一致性。

4.真空控制

掺气方式:建议掺入气体为高纯氮气

5.冻干试剂 MIX 工艺参数设定参考(冻干设备升华效率≥1mm/小时)

   

温度

斜率时间

时间

真空 Pa

备注

预冻

1

-45℃

——

2 h

——

常温最快速率降温

2

-45℃

——

 

——

保持,根据包材验证保持时间

真空

3

-45℃

——

 

15

 

升华阶段

4

-40℃

 

10 h

15

无斜率控制型冻干机,可分6个阶段升温

5

0℃

2 h

0 h

15

6

25℃

2 h

4 h

15

无斜率控制型冻干机,可分6个阶段升温

解析干燥

7

30℃

 

2 h

0

 

含水量控制

8

压升测试重试时间:30 min

压升测试:2 min<5 Pa

6.实验过程中请使用RNase free耗材。

7.为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

8.本产品仅作科研用途!

 

相关产品

产品名称

货号

规格

10×Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2)

13168ES60

100 T

13168ES80

1000 T

13168ES92

10000 T

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶(无甘油版)

11301ES12

12 KU

11301ES75

300 KU

Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 50 U/μL

10724ES01

100 μL

10724ES94

1 mL

10724ES95

25 mL

10724ES96

100 mL

Murine RNase Inhibitor (40 U/µL, Glycerol-free)

10701ES05

2 KU

10701ES10

10 KU

10701ES20

20 KU

10701ES60

100 KU

 

HB210715

 

一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

一步法RT-qPCR可冻干试剂(含冻干保护剂)|Multiplex One Step RT-qPCR Kit

暂无内容

qPCR第一链cDNA合成即用型预混液(含有gDNA去除)|1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus)

qPCR第一链cDNA合成即用型预混液(含有gDNA去除)|1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

 

Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair®  Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。该酶的热稳定性大幅度提高,可耐受高达50的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

该预混液包含gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分(Buffer,dNTP,Hifair® Ⅱ Reverse TranscriptaseRNase inhibitor,Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix),只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应,并同时终止gDNA digester的作用,保证cDNA的完整性。

该产品适用于两步法RT-qPCR检测,针对qPCR进行Random primers/ Oligo (dT)18 primer的比例优化,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,并具有相同的逆转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR® Green和探针法qPCR,可以根据实验目的,选择UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix,Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。

 

产品组分

 

编号

组分

产品编号/规格

11123ES10 (10 T)

11123ES60 (100 T)

11123-A

RNase-free ddH2O

1 mL

2×1 mL

11123-B

5×gDNA digester Buffer

20 μL

200 μL

11123-C

gDNA digester

10 μL

100 μL

11123-D

2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

100 μL

1 mL

】:2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。

 

运输保存方法

干冰运输。-20保存。有效期18个月。

 

注意事项

1)gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心,吹打混匀。

2)建议RNA是溶于水而不是TE Buffer中,因为TE Buffe会干扰gDNA去除以及逆转录反应。

3)可以不经过基因组去除步骤,直接进行逆转录,这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix  (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用,因其不含终止gDNA digester反应的成分,会影响反转录和后续的qPCR实验。

4)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染

5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6) 本产品仅作科研用途!

 

第一链cDNA合成操作步骤

 

1. 残留基因组DNA去除

RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42 孵育2 min。

组分

使用量

RNase free ddH2O

To 10 μL

5×gDNA digester Buffer

2 μL

gDNA digester

1 μL

Total RNA

1 ng -5 μg*

or mRNA

1 ng-500 ng*

【注】* 20 μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1 μg。如果目的基因的表达丰度低,最多投入5 μg Total RNA,否则RNA投入量过高,可能会超过后续定量PCR的线性范围。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus,用移液器轻轻吹打混匀。

组分

使用量

第1步的反应液

10 μL

2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

10 μL

3. 逆转录程序设置

标准程序(适用于微量和常规量的模板量)

温度

时间

25

5 min

42

30 min

85

5 min

】:逆转录温度:推荐使用42。对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50

4. 逆转录产物可立即用于qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

 

相关产品

 

产品名称

货号

规格

Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit 

11119ES60

100 T

Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix

11120ES60

100 T

Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

11121ES60

100 T

Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

11141ES60

100 T

Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox )

11201ES08

5 mL

Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus) 

11202ES08

5 mL

Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) 

11203ES08

5 mL

Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,No Rox)

11195ES08

5 mL

Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,Low Rox)

11196ES08

5 mL

Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,High Rox)

11197ES08

5 mL

Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,No Rox)

11198ES08

5 mL

Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,Low Rox)

11199ES08

5 mL

Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,High Rox)

11200ES08

5 mL

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

11184ES08

5 mL

                                                                                              HB210628

 

 

 

Q:逆转录产品如何选择?

 

 

A:参考下表。

产品名称/货号

品形式

引物

适用实验类型

产品特点/适用范围(A/B)

Hifair™ II Reverse Transcriptase

第二代耐热逆转录酶  11110ES

单酶

☑cDNA产物后续用于PCR

☑cDNA产物后续用于qPCR

A.常规表达丰度RNA逆转录(总RNA   1ng-5μg)

Hifair™ III Reverse Transcriptase

第三代耐热逆转录酶  11111ES

B.低表达丰度RNA逆转录

(总RNA 10pg-5μg);复杂RNA

Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit   11119ES/11121ES

酶和Buffer分开

单独成管的Oligo dT 、Random primer

同A

Hifair III 1st Strand cDNA Synthesis Kit 11135ES/11139ES

同B

Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR  11120ES/11123ES

酶和Buffer预混

按比例预混的Oligo dT 、Random primer

☑cDNA产物后续用于qPCR

同A

Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR  11137ES/11141ES

同B

Q:逆转录引物如何选择?
 

A:11123ES中使用的是Random Primers和oligo dT按照一定优化的比例预混引物。
 

Q:反转录产物可以做普通PCR吗?
 

A:不推荐。11123ES以预混液形式提供,预混液中包含Oligo (dT)与Random Primers混合引物,逆转录产物反转均一,但长度较短,可以做短片段,过长的不适合。若反转录产物后续进行PCR,建议用翌圣11121ES,引物选oligo dT。
 

Q:逆转录产物后续进行qPCR,需要稀释吗?

A:建议稀释5-10倍。目的有二:一、提高稀释倍数,降低移液误差,提高实验重复性;二、降低逆转录体系中高浓度某些成分对下游qPCR反应的抑制作用。
 

Q:该产品可以搭配其他品牌的定量试剂使用吗?
 

A:可以。逆转录产物进行稀释后,反转录相关组分对后续不同品牌的qPCR试剂影响非常小。

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[2] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. Micropeptide PACMP inhibition elicits synthetic lethal effects by decreasing CtIP and poly(ADP-ribosyl)ation. Mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020(IF:17.970)
[3] Qiao J, Jiang H, Lin Y, et al. A novel miR167a-OsARF6-OsAUX3 module regulates grain length and weight in rice. Mol Plant. 2021;14(10):1683-1698. doi:10.1016/j.molp.2021.06.023(IF:13.164)
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[5] Ma D, Zhao Y, Huang L, et al. A novel hydrogel-based treatment for complete transection spinal cord injury repair is driven by microglia/macrophages repopulation. Biomaterials. 2020;237:119830. doi:10.1016/j.biomaterials.2020.119830(IF:10.317)
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产品描述

 

Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair®  Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。该酶的热稳定性大幅度提高,可耐受高达50的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

该预混液包含gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分(Buffer,dNTP,Hifair® Ⅱ Reverse TranscriptaseRNase inhibitor,Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix),只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应,并同时终止gDNA digester的作用,保证cDNA的完整性。

该产品适用于两步法RT-qPCR检测,针对qPCR进行Random primers/ Oligo (dT)18 primer的比例优化,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,并具有相同的逆转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR® Green和探针法qPCR,可以根据实验目的,选择UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix,Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。

 

产品组分

 

编号

组分

产品编号/规格

11123ES10 (10 T)

11123ES60 (100 T)

11123-A

RNase-free ddH2O

1 mL

2×1 mL

11123-B

5×gDNA digester Buffer

20 μL

200 μL

11123-C

gDNA digester

10 μL

100 μL

11123-D

2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

100 μL

1 mL

】:2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。

 

运输保存方法

干冰运输。-20保存。有效期18个月。

 

注意事项

1)gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心,吹打混匀。

2)建议RNA是溶于水而不是TE Buffer中,因为TE Buffe会干扰gDNA去除以及逆转录反应。

3)可以不经过基因组去除步骤,直接进行逆转录,这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix  (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用,因其不含终止gDNA digester反应的成分,会影响反转录和后续的qPCR实验。

4)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染

5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6) 本产品仅作科研用途!

 

第一链cDNA合成操作步骤

 

1. 残留基因组DNA去除

RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42 孵育2 min。

组分

使用量

RNase free ddH2O

To 10 μL

5×gDNA digester Buffer

2 μL

gDNA digester

1 μL

Total RNA

1 ng -5 μg*

or mRNA

1 ng-500 ng*

【注】* 20 μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1 μg。如果目的基因的表达丰度低,最多投入5 μg Total RNA,否则RNA投入量过高,可能会超过后续定量PCR的线性范围。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus,用移液器轻轻吹打混匀。

组分

使用量

第1步的反应液

10 μL

2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

10 μL

3. 逆转录程序设置

标准程序(适用于微量和常规量的模板量)

温度

时间

25

5 min

42

30 min

85

5 min

】:逆转录温度:推荐使用42。对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50

4. 逆转录产物可立即用于qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

 

相关产品

 

产品名称

货号

规格

Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit 

11119ES60

100 T

Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix

11120ES60

100 T

Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

11121ES60

100 T

Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

11141ES60

100 T

Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox )

11201ES08

5 mL

Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus) 

11202ES08

5 mL

Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) 

11203ES08

5 mL

Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,No Rox)

11195ES08

5 mL

Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,Low Rox)

11196ES08

5 mL

Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,High Rox)

11197ES08

5 mL

Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,No Rox)

11198ES08

5 mL

Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,Low Rox)

11199ES08

5 mL

Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法,High Rox)

11200ES08

5 mL

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

11184ES08

5 mL

                                                                                              HB210628

 

 

 

Q:逆转录产品如何选择?

 

 

A:参考下表。

产品名称/货号

品形式

引物

适用实验类型

产品特点/适用范围(A/B)

Hifair™ II Reverse Transcriptase

第二代耐热逆转录酶  11110ES

单酶

☑cDNA产物后续用于PCR

☑cDNA产物后续用于qPCR

A.常规表达丰度RNA逆转录(总RNA   1ng-5μg)

Hifair™ III Reverse Transcriptase

第三代耐热逆转录酶  11111ES

B.低表达丰度RNA逆转录

(总RNA 10pg-5μg);复杂RNA

Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis Kit   11119ES/11121ES

酶和Buffer分开

单独成管的Oligo dT 、Random primer

同A

Hifair III 1st Strand cDNA Synthesis Kit 11135ES/11139ES

同B

Hifair™ II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR  11120ES/11123ES

酶和Buffer预混

按比例预混的Oligo dT 、Random primer

☑cDNA产物后续用于qPCR

同A

Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR  11137ES/11141ES

同B

Q:逆转录引物如何选择?
 

A:11123ES中使用的是Random Primers和oligo dT按照一定优化的比例预混引物。
 

Q:反转录产物可以做普通PCR吗?
 

A:不推荐。11123ES以预混液形式提供,预混液中包含Oligo (dT)与Random Primers混合引物,逆转录产物反转均一,但长度较短,可以做短片段,过长的不适合。若反转录产物后续进行PCR,建议用翌圣11121ES,引物选oligo dT。
 

Q:逆转录产物后续进行qPCR,需要稀释吗?

A:建议稀释5-10倍。目的有二:一、提高稀释倍数,降低移液误差,提高实验重复性;二、降低逆转录体系中高浓度某些成分对下游qPCR反应的抑制作用。
 

Q:该产品可以搭配其他品牌的定量试剂使用吗?
 

A:可以。逆转录产物进行稀释后,反转录相关组分对后续不同品牌的qPCR试剂影响非常小。

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TaqMan多重qPCR预混液(含UDG酶)|Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix(UDG plus)

TaqMan多重qPCR预混液(含UDG酶)|Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix(UDG plus)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)2×Mix预混合试剂,能够实现在单个反应孔中进行多达四重的荧光定量PCR反应。本产品含有基因改造的抗体法热启动Taq酶,极大地提高了扩增灵敏度和特异性。同时,本产品对多重反应缓冲体系进行了深度优化,能够提高反应的扩增效率,促进低浓度模板的有效扩增。本产品可用于基因分型和基因多重定量分析。本产品含有UDG酶,可有效防止气溶胶污染的风险。

 

产品信息

货号

11212ES03/ 11212ES08 / 11212ES10/ 11212ES12 / 11212ES13/ 11212ES60/ 11212ES62

规格

1 mL /5×1 mL /10 mL /12.5 mL /1×12.5 mL /20×5 mL /125 mL

 

组分信息

组分编号

组分名称

11212ES03

(1 mL)

11212ES08

(5×1 mL)

11212ES10

(10 mL)

11212ES12

(12.5 mL)

11212ES13

(1×12.5 mL)

11212ES60

(20×5 mL)

11212ES62

(125 mL)

11212

2×TaqMan qPCR Mix

1 mL

5×1 mL

10 mL

12.5 mL

1×12.5 mL

20×5 mL

125 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存,有效期18个月

 

使用说明

  1. 反应体系******

组分

体积(μL)

终浓度

2×TaqMan qPCR Mix

12.5

Primer Mix (10 μM)

x

0.1-0.5 μM*

Probe Mix (10 μM)

x

50-250 nM**

Rox reference dye***

0.5

模板****

1-10

ddH2O

up to 25*****

*引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-0.5 μM间进行调整。

**探针浓度:Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-250 nM间调整。

***Rox reference dye:使用在Applied Biosystems 等Real Time PCR 扩增仪上,用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差;本产品不含Rox reference dye。如需,推荐使用货号10200ES产品。

****模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用。若模板为cDNA原液,则模板体积不超过总体积的1/10。

*****反应体系:推荐使用25 μL、30 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

******体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

  1. 参考扩增程序

步骤

温度

时间

循环数

污染消化

25

10 min

1

预变性

95

5 min

1

变性

95

TaqMan多重qPCR预混液(含UDG酶)|Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix(UDG plus)15 sec

45

退火/延伸*

60℃

30 sec**

*退火/延伸:温度和时间可根据实验要求适当调整。

**荧光信号采集:请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:

20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec:Applied Biosystems 7300

32 sec:Applied Biosystems 7500

  1. 适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.  

 

注意事项

  1. 关于操作

1)请于使用前确保产品完全解冻并彻底混匀,短暂离心收集至管底后,置于冰上备用。

2)为避免样品间交叉污染和气溶胶污染,推荐在超净台中进行反应体系的配制。

3)使用过程中避免产品的反复冻融。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 实验方法

1)引物设计

a. 引物必须具有特异性。

b. 引物的Tm值必须在58-60°C,而且各组引物的Tm差异应控制在1-2°C

c. 引物的长度一般控制在15-30 bp之间。

2)探针设计

a. TaqMan探针的Tm值要比对应的引物高约10°C68-70°C)。

b. TaqMan探针和引物间不能形成二聚体。

 

Ver.CN20240226

 

 

TaqMan多重qPCR预混液(含UDG酶)|Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix(UDG plus)

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TaqMan多重qPCR预混液(含UDG酶)|Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix(UDG plus)

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产品简介

 

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)2×Mix预混合试剂,能够实现在单个反应孔中进行多达四重的荧光定量PCR反应。本产品含有基因改造的抗体法热启动Taq酶,极大地提高了扩增灵敏度和特异性。同时,本产品对多重反应缓冲体系进行了深度优化,能够提高反应的扩增效率,促进低浓度模板的有效扩增。本产品可用于基因分型和基因多重定量分析。本产品含有UDG酶,可有效防止气溶胶污染的风险。

 

产品信息

货号

11212ES03/ 11212ES08 / 11212ES10/ 11212ES12 / 11212ES13/ 11212ES60/ 11212ES62

规格

1 mL /5×1 mL /10 mL /12.5 mL /1×12.5 mL /20×5 mL /125 mL

 

组分信息

组分编号

组分名称

11212ES03

(1 mL)

11212ES08

(5×1 mL)

11212ES10

(10 mL)

11212ES12

(12.5 mL)

11212ES13

(1×12.5 mL)

11212ES60

(20×5 mL)

11212ES62

(125 mL)

11212

2×TaqMan qPCR Mix

1 mL

5×1 mL

10 mL

12.5 mL

1×12.5 mL

20×5 mL

125 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存,有效期18个月

 

使用说明

  1. 反应体系******

组分

体积(μL)

终浓度

2×TaqMan qPCR Mix

12.5

Primer Mix (10 μM)

x

0.1-0.5 μM*

Probe Mix (10 μM)

x

50-250 nM**

Rox reference dye***

0.5

模板****

1-10

ddH2O

up to 25*****

*引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-0.5 μM间进行调整。

**探针浓度:Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针,每条探针的浓度可根据具体情况在50-250 nM间调整。

***Rox reference dye:使用在Applied Biosystems 等Real Time PCR 扩增仪上,用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差;本产品不含Rox reference dye。如需,推荐使用货号10200ES产品。

****模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用。若模板为cDNA原液,则模板体积不超过总体积的1/10。

*****反应体系:推荐使用25 μL、30 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

******体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

  1. 参考扩增程序

步骤

温度

时间

循环数

污染消化

25

10 min

1

预变性

95

5 min

1

变性

95

TaqMan多重qPCR预混液(含UDG酶)|Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix(UDG plus)15 sec

45

退火/延伸*

60℃

30 sec**

*退火/延伸:温度和时间可根据实验要求适当调整。

**荧光信号采集:请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:

20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec:Applied Biosystems 7300

32 sec:Applied Biosystems 7500

  1. 适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.  

 

注意事项

  1. 关于操作

1)请于使用前确保产品完全解冻并彻底混匀,短暂离心收集至管底后,置于冰上备用。

2)为避免样品间交叉污染和气溶胶污染,推荐在超净台中进行反应体系的配制。

3)使用过程中避免产品的反复冻融。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 实验方法

1)引物设计

a. 引物必须具有特异性。

b. 引物的Tm值必须在58-60°C,而且各组引物的Tm差异应控制在1-2°C

c. 引物的长度一般控制在15-30 bp之间。

2)探针设计

a. TaqMan探针的Tm值要比对应的引物高约10°C68-70°C)。

b. TaqMan探针和引物间不能形成二聚体。

 

Ver.CN20240226

 

 

TaqMan多重qPCR预混液(含UDG酶)|Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix(UDG plus)

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TaqMan多重qPCR预混液(含UDG酶)|Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix(UDG plus)

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