标签归档：pna

panagene PNA FISH探针

发表于由

panagene PNA FISH探针

 

 

PNA

PNAPNA FISH probe

 

 

PNA FISH探针

电中性主链是PNA的关键特征，在FISH（荧光原位杂交）中也具有优势。电中性主链对PNA的高特异性使得能够与少量PNA探针快速杂交而无明显背景信号，从而导致高信噪比并在温和条件下洗涤。用于端粒长度分析的端粒/着丝粒PNA FISH探针可提供多种荧光。

 

DETAILS

 

PNA FISH probe Cat. No. Product Name Size
C-rich probe
(repeats of CCCTAA)		 F1001 TelC-FAM 5 nmole
F1002 TelC-Cy3 5 nmole
F1003 TelC-Cy5 5 nmole
F1004 TelC-Alexa488 5 nmole
F1009 TelC-FITC 5 nmole
F2003 TelC-Alexa647 5 nmole
F2005 TelC-Biotin 5 nmole
F2001 TelC-TAMRA 5 nmole
G-rich probe
(repeats of TTAGGG)		 F1005 TelG-FAM 5 nmole
F1006 TelG-Cy3 5 nmole
F1007 TelG-Cy5 5 nmole
F1008 TelG-Alexa488 5 nmole
F1010 TelG-FITC 5 nmole
F2002 TelG-TAMRA 5 nmole
F2004 TelG-Alexa647 5 nmole
F2006 TelG-Biotin 5 nmole
Pan-centromere probe F3003 Cent-Cy3 5 nmole
F3006 Cent-FAM 5 nmole
F3011 Cent-Cy5 5 nmole
F3012 Cent-Alexa488 5 nmole
F3013 Cent-FITC 5 nmole
F3014 Cent-TAMRA 5 nmole
F3015 Cent-Alexa647 5 nmole
F3016 Cent-Biotin 5 nmole
CENPB probe F3001 CENPB-FAM 5 nmole
F3002 CENPB-Cy3 5 nmole
F3004 CENPB-Cy5 5 nmole
F3005 CENPB-Alexa488 5 nmole
F3007 CENPB-FITC 5 nmole
F3008 CENPB-TAMRA 5 nmole
F3009 CENPB-Alexa647 5 nmole
F3010 CENPB-Biotin 5 nmole

 

 

*除上述产品外，还可以提供其他类型的荧光团和用于其他靶标的探针作为定制PNA。

 

Panagene品牌代理

发表于由

Panagene

简要描述：

PANAGENE自2006年以来一直在全球范围内供应肽核酸(PNA)，其基础是我们高效合成高纯度PNA的发明，目前我们对PNA拥有知识，拥有最多的PNA及其在世界范围内的应用。

PANAGENE自2006年以来一直在全球范围内供应肽核酸(PNA)，其基础是我们高效合成高纯度PNA的发明，目前我们对PNA拥有知识，拥有最多的PNA及其在世界范围内的应用。


PANAGENE have been supplying Peptide Nucleic Acid (PNA) worldwide and exclusively since 2006 based on our unique invention of efficient synthesis of PNA with high purity, and nowadays we are possessing the best knowledge on PNA and the largest number of patents on the PNA and its applications in the world.


品牌

货号

名称

规格

Panagene

PNAR-3001

Oncology – Liquid biopsy

24 tests

Panagene

PNAR-1001

Oncology – Liquid biopsy

24 test

Panagene

PNAR-6001

PANAMutyper™ Screening Kit

1 kit

Panagene

PNAR-6001

PANAMutyper™ Screening Kit

1 kit

PANAGENE PNA特点

发表于由

韩国PANAGENE自2006年以来一直在范围内提供肽核酸（PNA），基于我们合成高纯度PNA的*发明，现在我们拥有PNA的知识和PNA及其大数量的专有技术。在世界上的应用。

PNA是20世纪90年代早期发明的一种人工遗传物质（DNA模拟物），由于其先进的物理化学性质，如与互补核酸的强结合亲和力，已经引起研究人员的广泛关注，作为特别是诊断和治疗用途的有希望的物质候选物。和优越的生物/化学稳定性。

PANAGENE PNA特点

什么是PNA？

创新的原材料

PNA（Peptide Nucleic Acid）是一种人工产生的DNA类似物，于1991年由丹麦哥本哈根大学的Nielsen，Egholm，Berg和Buchardt教授发明。

PNA具有这样的结构，其中DNA的磷酸核糖骨架被肽样酰胺骨架（N-（2-氨基乙基）甘氨酸）取代。因此，对靶DNA或RNA的结合亲和力和稳定性大大增加。尽管骨架发生了结构变化，但PNA可用于可以使用DNA的各种应用中，因为它可以像DNA那样与靶序列形成互补结合。

特点和优点

高结合亲和力

PNA具有电中性酰胺骨架。PNA链和DNA链之间没有排斥，并且PNA对靶DNA具有更强的结合亲和力。

高特异性和敏感性

匹配与结合亲和力的差异PNA / DNA链的错配比DNA / DNA链大。即使是单核苷酸错配序列也很容易区分。

化学/生物/热稳定性

PNA在高温或高pH条件下非常稳定。此外，PNA骨架与DNA或RNA*不同与肽骨架相似但略有不同。因此，PNA作为核酸酶或蛋白酶对酶具有稳定性。

杂交中独立盐

PNA具有稳定且强烈的结合亲和力独立对抗杂交中的高盐浓度。

PNA VS DNA

特征 PNA 脱氧核糖核酸
结合亲和力 每基础低1°C Tm –
杂交率 100-5000倍的速度 –
杂交中的盐浓度 独立 依赖的
ΔTm用于单核苷酸错配 <10℃ <15℃
化学稳定性 稳定 在酸性或碱性条件下不稳定
生物稳定性 酶抗 可被核酸酶降解
可溶性 中等（但可以通过简单的修改来改进） 好
一般 探针长度 13-18mer 25-30mer

PANAGENE的PNA

PANAGENE开发了其专有的Bts PNA单体（Bts;苯并噻唑-2-磺酰基）和使用Bts单体的PNA oligo合成方法，并提供了高质量的PNA寡核苷酸。

Bts PNA单体的Bts基团不仅保护单体的胺基（NH 2），而且还是自身活化的。因此，使用Bts单体的寡核苷酸合成不需要预活化步骤或许多偶联试剂。与常规合成方法（使用Fmoc PNA单体）不同，在脱保护过程中发生的诸如转酰化的副反应被小化，并且可以以低成本实现高纯度PNA寡聚物的大量生产。此外，它更经济，因为可以回收和再利用偶联反应后剩余的过量Bts单体。

Bts PNA单体的化学结构和低聚反应循环

[参考]

Hyunil Lee等。通过新型酰胺形成合成肽核酸。组织。快报。9（17），3291-3293。

Bts vs. Fmoc

类型 Bts单体 Fmoc单体
偶联试剂 不必要 HATU
大量生产 简单 难
副反应 <1％ 难以控制（5~10％）
纯化 简单 难
产量 > 80％的 <40％
合成成本 低 高

 

Fmoc单体 

 

 

Panagene-高质量PNA生产商

发表于由

Panagene成立于2001年，以其DU家PNA合成ZHUANLI技术在全球范围内提供各种高质量PNA（肽核酸）产品。公司所有的产品都是根据严格的质量控制标准（ISO9001/2000）进行生产和管理。凭借ZHUO越的生产技术和长期经验，Panagene致力于生产满足客户需求的PNA及相关产品。Panagene始终以追求客户满意、透明的管理为目标。

Panagene发展历程

2001年，Panagene公司成立。

2002年，PNA Bts单体和DU特合成PNA低聚物的化学方法ZHUANLI申请。

2004年，与ISIS Pharmaceutical签订PNA供应合同；荣获2004年TIDS最佳论文奖。

2005年，PNA与丹麦DAKO签订的商业诊断试剂盒供应协议；与PPL签订PNA批量生产合同。

2006年，获得PNA量产核心技术，获得全球DU家供应权。

2007年，与美国AdvanDx签订DU家供应合同；获得PNA单体的非DU家许可。

2008年，Panagene股份有限公司与Koram Panagene有限公司（在KOSDAQ上市）并购；总部搬迁至当前地址的新大楼。

2009年，成功实现全球SHOU个PNA芯片的商业化；获得KFDA药品生产许可证：PANArray™HHPV芯片；扩大PNADU家特许经营协议的再融资。

2010年，荣获Frost&Sullivan颁发的全球市场研究和技术创新奖；获得ISO 13485:2003认证（PANArray™HHPV基因分型芯片）；获得ISO 9001:2008认证。

2011年，与Abnova签订供应合同（为全球研究提供诊断产品）；与Merck Serono签订合作伙伴协议。

2013年，荣获“韩国技术奖（银奖）”，入选“2013韩国SHI大新技术”；美国食品药品监督管理局批准（KFDA）：PNAClamp™EEGFR、KRAS、BRAF。

2016年，与ThermoFisher Scientific合作（real-time PCR）。

2017年，新研究大楼竣工。

主要产品线

1、PNA产品

什么是PNA？

PNA（肽核酸）是一种人工创造的DNA类似物，由丹麦哥本哈根大学的Nielsen、Egholm、Berg和Buchardt教授于1991年发明。PNA具有DNA的磷酸核糖骨架被肽样酰胺骨架（N-（2-氨基乙基）甘氨酸）取代的结构。因此，与靶DNA或RNA的结合亲和力和稳定性大大提高。尽管主链的结构发生了变化，但PNA可以用于DNA可以使用的各种应用中，它可以像DNA一样与靶序列形成互补结合。

PNA的特点及优势

Panagene的PNA

Panagene开发了其专有的Bts PNA单体（Bts；苯并噻唑-2-磺酰基）和使用Bts单体的PNA寡聚物合成方法，并提供了高质量的PNA。Bts-PNA单体的Bts基团不仅保护单体的胺基（NH2），而且是自活化的。因此，使用Bts单体的寡聚物合成不需要预活化步骤或许多偶联试剂。与传统的合成方法（使用Fmoc-PNA单体）不同，去保护过程中发生的酰基转移等副反应被最小化，可以以较低成本实现高纯度PNA寡聚体的大规模生产。此外，由于可以回收和重复使用偶联反应后剩余的过量Bts单体，因此更经济。

Bts-PNA单体的化学结构与低聚循环

产品订货信息（部分）

货号

产品名称

规格

F1001

TelC-FAM

5 nmole

F1002

TelC-Cy3

5 nmole

F3003

Cent-Cy3

5 nmole

F3005

CENPB-Alexa488

5 nmole

F3013

Cent-FITC

5 nmole

PN-1001

PNAs™ miRNA inhibitor, Negative Control

25 nmole

PN-1001-FAM

PNAs™ miRNA inhibitor, Negative Control & Fluorescein-labeled

5 nmole

G2001-3

GR PNA-L Lys-TAACGGTATTTGGAG-Lys

3 nmole

G2001-3

GR PNA-L Lys-ATCCAGATGCTCAAG-Lys

3 nmole

FMA-1001

Fmoc-A(Bhoc)-aeg-OH

1 g

FMC-1001

Fmoc-C(Bhoc)-aeg-OH

1 g

2、基于PANAMutyper ™ R的肿瘤液体活检

PANAMutyper™是一种集成了PNAClamp™和PANA RealTyper™的新技术。PNAClamp™是一种PCR技术，使用PNA（肽核酸）探针与野生型DNA互补结合。这些PNA探针限制了野生型DNA的扩增，因此可以选择性地扩增少量的突变型DNA，这使得检测体细胞突变成为可能。PANA RealTyper™是使用荧光标记的PNA探针进行多重熔解曲线分析。PANAMutyper™充分利用了这两种技术的优势。它不仅能够以高灵敏度检测少量的突变，而且能够利用靶基因序列变化的熔解温度（Tm）值同时对多个突变进行基因型分析。

特点和优势：

• 高灵敏度：PNAClamp™选择性地扩增突变型DNA。PANAMutyper™适用于需要高灵敏度的液体活检。

• 多重基因分型：通过PANA-RealTyper对选择性扩增的目标突变型DNA进行基因分型™（熔化曲线分析）。

利用这项技术，只需少量的血液样本就可以检测出肿瘤DNA，而以前癌症的诊断方法是通过手术和侵入性的方法取出肿瘤组织。该产品是分子诊断的突破，可以在3小时内方便地使用和检测ctDNA中的突变基因。

产品订货信息

货号

产品名称

规格

PNAR-3001

PANAMutyper™ R EGFR

24 tests

PNAR-3002

PANAMutyper™ R KRAS

24 tests

PNAR-3003

PANAMutyper™ R NRAS

24 tests

3、基于PNAClamp™的肿瘤组织活检

PNAClamp™技术是基于PNA的钳制PCR技术，它可以选择性地扩增混合物中作为少部分的突变目标DNA序列，而不会扩增主要的野生型DNA序列。PNAClamp™技术充分利用了PNA探针的强结合亲和力，对其互补链具有特异性，并且作为引物时不会被DNA聚合酶wan全识别的特性。

PNAClamp™技术可以轻松应用于通过PCR扩增仅检测混合物中的突变DNA序列。紧密结合的PNA探针无法扩增野生型DNA片段，而只有突变的DNA序列可以通过PCR扩增进行选择性扩增。

特点和优势：

• 50 ng正常细胞中1%突变的准确检测：可以使用PNA钳制技术选择性地扩增和检测突变的DNA，可以以1%的高灵敏度检测少量DNA。

• 可应用于各种标本的突变检测。

产品订货信息（部分）

货号

产品名称

规格

PNAC-1101

PNAClamp™ Mutation Detection Kit NRAS

25 tests

PNAC-1006

PNAClamp™ Mutation Detection Kit KRAS (ver. 4)

25 tests

PNAC-3002

PNAClamp™ Mutation Detection Kit EGFR (ver.2)

25 tests

PNAC-2001

PNAClamp™ Mutation Detection Kit BRAF

25 tests

PNAC-5001

PNAClamp™ Mutation Detection Kit IDH1

25 tests

PNAC-5101

PNAClamp™ Mutation Detection Kit IDH2

25 tests

PNAC-4001

PNAClamp™ Mutation Detection Kit PIK3CA

25 tests

PNAC-7001

PNAClamp™ Mutation Detection Kit BCR-ABL

25 tests

4、基于PANA RealTyper™传染病检测

PANA RealTyper™（PNA探针荧光熔解曲线分析）基于样品热变性时荧光信号的变化（熔解温度偏移）。PANA RealTyper™是一种强大的突变检测工具（筛选和基因分型），只需一个探针。PANA RealTyper™可以区分靠近短目标区域的多个SNP。由于其熔解峰的清晰度，该方法提供了简单易行的数据分析，无需使用分析软件。PANA RealTyper™可应用于个性化医学、起源鉴别和多药耐药微生物的检测。

特点和优势：

• 多重检测：PANA RealTyper™如果使用4个用不同荧光团标记的探针，则可以在一个反应中检测多达12个靶标。

• 突变基因分型：通过熔解曲线分析可以对靶基因进行基因分型。

产品订货信息

货号

产品名称

规格

PNAM-1001

PANA RealTyper™ HPV

48 tests

PNAM-5001

PANA RealTyper™ Screening Kit HPV (screening)

96 tests

PNAM-2001

PANA RealTyper™ Kit STD

48 tests

PNAM-4001

PANA RealTyper™ CRE

48 tests

Panagene热卖产品

货号

产品名称

规格

品牌

F1002

TelC-Cy3（现货）

5 nmole

Panagene

F1004

C-rich telomere probe,Alexa Fluor 488 labeled

5 nmole

Panagene

F1009

TelC-FITC（现货）

5 nmole

Panagene

F1001

TelC-FAM FAM（现货）

5 nmole

Panagene

F1006

TelG-Cy3

5 nmole

Panagene

F1010

TelG-FITC

5 nmole

Panagene

F1003

TelC-Cy5, 5 nmole（现货）

5 nmole

Panagene

F3003

Cent-Cy3

5 nmole

Panagene

F1008

TelG-Alexa488（现货）

5 nmole

Panagene

F3002

CENPB-Cy3

5 nmole

Panagene

F2003

TelC-Alexa647

5 nmole

Panagene

F2001

TelC-TAMRA

5 nmole

Panagene

PNA1

HPLC purified, >90％ Alexa647-OO-TTCCATTCCATTCCATTCCA

10 nmole

Panagene

PNA-123

5’ TCCCCAAACACAAAATC-K 3’ 3‘Add a lysine

20 nmol

Panagene

PNA1-25nmole

HPLC purified, >90% 5' ATGAGACACTCTTTCTG-K(Atto425)

25 nmole

Panagene

PNA1（5nmole）

HPLC purified, >90％ Alexa647-OO-TTCCATTCCATTCCATTCCA

5 nmole

Panagene

PNAC-5001

PNAClamp™ Mutation Detection Kit

25 tests

Panagene

PNAC-6001

PNAClamp™ Mutation Detection Kit

25 tests

Panagene

custom-panagene-1

Minor satellite mouse，HPLC purified, >90%，CACATTCGTTGGAAACGGGATTTGTAGAAC

20 nmole

Panagene

fluorescent dye-labeled PNA

5'-GCT GCC TCC CGT AGG AGT-3'

25 nmol

Panagene

F3013

Cent-FITC

5 nmole

Panagene

F3012

Cent-Alexa488

5 nmole

Panagene

F3006

Cent-FAM, 5 nmole

5 nmole

Panagene

F2005

TelC-Biotin

5 nmole

Panagene

custom-panagene-5

Sat3-647 (PNA1)，HPLC purified, >90%，Alexa647-OO-TTCCATTCCATTCCATTCCA

25 nmole

Panagene

custom-panagene-4

Sat3-647 (PNA1)，HPLC purified, >90%，Alexa647-OO-TTCCATTCCATTCCATTCCA

10 nmol

Panagene

custom-panagene-3

Sat3-Cy3（PNA2） HPLC purified, >90% ，Cy3-OO-TTCCATTCCATTCCATTCCA

10 nmol

Panagene

custom-panagene-2

Major Satellite mouse，HPLC purified, >90%，GATTTCGTCATTTTTCAAGT

20 nmole

Panagene

F2002

TelG-TAMRA（现货）

5 nmole

Panagene

作为Panagene在中国区域的代理，上海金畔生物将为中国客户提供全面的Panagene产品。欢迎大家随时联系我们！！！

Pnabio品牌代理

发表于由

Pnabio

简要描述：

PNA生物提供优质的PNA(肽核酸)产品，包括定制的寡糖，FISH探针，miRNA抑制剂，PNA钳夹探针和FMOC单体。

PNA生物提供优质的PNA(肽核酸)产品，包括定制的寡糖，FISH探针，miRNA抑制剂，PNA钳夹探针和FMOC单体。


PNA BIO INC is devoted to provide quality research products and services to the laboratories of basic research and applied field.


PNA Bio offer quality PNA (Peptide Nucleic Acid) products including custom oligos, FISH probes, miRNA inhibitors, PNA clamp probes and Fmoc monomers. They are provided >95% purity after HPLC purification along with MS/MS data. PNA products are manufactured by Panagene.


PNA Bio also provides engineered nuclease service including CRISPR/Cas9 nucleases (RGEN) synthesis, validation and Cas9 protein in addition to knock-out and knock-in cell line services. RGEN and related products are manufactured by ToolGen Inc.


品牌

货号

名称

规格

Pnabio

F1001

TelC telomere probe

1

Pnabio

CP01

Cas9 protein with NLS (injection ready);reconstitutes to 1 mg/ml (6 uM)

20 ug (120 pmol / 6 uM x 20 ul)
50 ug (300 pmol / 6 uM x 50 ul)
200 ug (50 ug x 4 tubes)

Pnabio

CP02

Cas9 protein with NLS (injection ready); reconstitutes to 5 mg/ml (30 uM);

250 ug (1530 pmol / 30 uM x 50 ul)

Pnabio

CP03

Cas9 protein with NLS (injection ready); reconstitutes to 5 mg/ml (30 uM);

1 mg (250 ug x 4)

Pnabio

CP04-100

Cas9 protein with NLS (injection ready); Liquid form, 1 mg/ml (6 uM);

100 ug (20 ug x 5)

Pnabio

CP04-500

Cas9 protein with NLS (injection ready); Liquid form, 5 mg/ml (30 uM);

500 ug (100 ug x 5)

eurodiagnostica PNA106说明书

发表于由

 

通过提供先进的检测方法，我们促进了安全有效药物的开发和患者的宜治疗。通过为制药，生物技术和CRO客户提供多功能的分析解决方案，我们成为药物开发从探索阶段到临床试验的宜合作伙伴。我们还为临床实验室和医师提供工具，以帮助其诊断，预后，监测和治疗炎症及相关疾病。

ELISA和RIA试剂盒：我们的放射免疫测定和酶联免疫吸附测定产品组合中的 主要产品是ANCA，抗CCP 2，嗜铬粒蛋白和补体测定试剂盒，它们是与我们世界科学家和主要意见合作开发的。我们的大多数ELISA试剂盒在Dynex系统上都实现了自动化。

*的细胞为基础的试验：我们  ILITE ®  平台是基于报告基因技术，可为我们的客户，主要是制药和生物技术行业内，在化验准备冷冻细胞的形式（现成的，货架），并为自定义细胞系发展。同一细胞系可用于评估药物效力和检测针对特定药物靶标的中和抗体（NAb）。

定制解决方案和OEM：凭借20年的经验，我们提供优化的开发和生产流程。由于我们将研发，制造和管理结合在瑞典马尔默的一个屋顶下，因此我们能够为客户提供可靠，经济的解决方案，以满足他们的化验开发和制造需求。

实验室服务：  我们的内部实验室Wieslab为非临床以及制药，生物技术和CRO客户的临床研究提供临床诊断测试以及广泛的生物分析服务。所有服务均在符合ISO 17025，GCP和GLP的环境中执行，以确保满足法规要求。

eurodiagnostica PNA106说明书

ANCA panel kit WIESLAB®

对患者的血管炎或其他炎症性疾病，及时诊断至关重要。对于PR3-ANCA和MPO-ANCA阴性的ANCA阳性样品，有必要进行扩展分析。Wieslab®ANCA面板套件可筛查已提议与相关疾病有关的其他六个因素。  

 

产品代码

PNA106

格式

ELISA法

测验

微量滴定条（12×8）96孔

计算方式

定性的

抗原

纯化的ANCA抗原

孵化时间

30 + 30 + 60分钟

检测系统

405纳米

可用性

CE标记。在美国不出售

 

有可能的使用

所述Wieslab ® ANCA面板检测试剂盒是用于定性检测IgG抗体至azurocidin酶联免疫吸附测定（ELISA），BPI，组织蛋白酶G，弹性蛋白酶，乳铁蛋白，溶菌酶和人血清中。该测定法用于检测单个血清样本中的抗体。该测试可用于帮助筛查PR3-ANCA和MPO-ANCA阴性的ANCA IIF阳性样品的特异性，或用于检测炎症性肠病，肝病等中的ANCA。可以测试一名患者的样品在十二次中检测所有六种抗原。分析应由训练有素的实验室专业人员进行。

供体外诊断使用。

背景

ANCA（抗中性粒细胞胞浆抗体）是与血管炎和炎性疾病相关的自身抗体家族。自1985年以来，当c-ANCA被证明与韦格纳肉芽肿病有关时，人们对ANCA的兴趣稳步增长，如今，这些抗体被认为是研究系统性血管炎的主要诊断工具。

检测ANCA的一种方法是对乙醇固定的粒细胞进行间接免疫荧光（IIF）。该方法产生两种模式，即表示存在c-ANCA的粒细胞的细胞质染色，和表示存在p-ANCA的核周染色。IIF之后是使用纯化蛋白的ELISA。

在系统性血管炎中，两个重要的抗原是蛋白酶3和髓过氧化物酶。然而，在诸如类风湿性关节炎，自身免疫性肝炎或炎性肠病之类的炎性疾病中，已经提出了许多其他抗原参与其中。重要的是天青霉素，BPI（BPI =杀菌通透性增加蛋白），组织蛋白酶G，弹性蛋白酶，乳铁蛋白和溶菌酶。

技术信息

微量滴定条的孔用纯化的ANCA抗原包被。在一次孵育过程中，稀释的血清中的特异性抗体将与抗原涂层结合。

然后洗涤孔以去除未结合的抗体和其他成分。

在第二次孵育中，碱性磷酸酶标记的抗体与人IgG的缀合物与孔中的抗体结合。

在进一步的洗涤步骤之后，通过与底物溶液一起孵育来检测特异性抗体。结合的抗体的量与颜色强度相关，并根据吸光度（光密度（OD））进行测量。

 

 

 

PANAGENE FISH（荧光原位杂交）PNA 端粒探针方案

发表于由

 

PANAGENE FISH（荧光原位杂交）PNA 端粒探针方案

PANAGENE F1001

原则上，荧光原位杂交 (FISH) 应该能够提供单个染色体端粒长度的信息。直接标记的寡核苷酸探针由于其体积小（良好的穿透特性）、单链性质（探针无变性）和受控的合成，是此类分析的有吸引力的探针。然而，端粒重复序列的寡核苷酸杂交的效率还不足以将这种方法扩展到各种物种染色体中 TTAGGG 重复序列的定性研究之外。近研究表明，肽核酸 (PNA) 寡核苷酸探针将与互补的寡核苷酸序列杂交，产生的双链比 DNA/DNA 或 DNA/RNA 双链更稳定。在 PNA 中，传统 DNA 和 RNA 寡核苷酸的带电磷酸-（脱氧）核糖骨架被通过肽键连接的重复 N-（2-氨基乙基）-甘氨酸单元的不带电骨架取代。与 DNA 寡核苷酸相比，PNA 寡聚体表现出更高的序列特异性、改善的稳定性、重现性和更低的背景。由于 PNA/DNA 双链的 Tm 较高，短（18 聚体）端粒 PNA (CCCTAA)3 应用广泛。

 

 

开始前要做的事情二、杂交

1. 将载玻片置于 80 °C 预热培养箱中 5 min。

 

I. 端粒 PNA 探针的制备

1. 打开试管前离心试管，以便在试管底部收集冻干 PNA 探针。

2. 向管中加入甲酰胺，得到 PNA 探针的储备液。

3. 在 PNA 杂交缓冲液中将贮备液稀释至终浓度 200 nM。

ü 注：将 PNA 探针溶液在 4 ℃ 下避光储存。

 

II. 溶液制备

1. 杂交缓冲液

20 mM 钠2HPO4, pH 7.4

20 mM Tris，pH 7.4

60% 甲酰胺 2X SSC

0.1µg/ml 鲑鱼精子 DNA

 

2. RNase A 溶液

100µg/ml RNase A（2X SSC 中）

3. 胃蛋白酶 0.005% 溶液

50µl 5% 胃蛋白酶贮备液溶于 50 mL 0.01 MHCl 中。

ü 注：新鲜！使用前加热至 45 ℃。

4. 洗涤液

2X SSC/0.1% 吐温-20

 

杂交和洗涤

I. 预处理

1. 按照特定细胞系推荐的程序制备载玻片，并风干。

2. 将载玻片在 PBS 中浸泡 15 min。

3. 将载玻片在 4% 甲醛的 PBS 中 37 °C 固定 4 min。

4. 37 °C PBS 洗 5 min (X2)。

5. 向一个干净的平板中加入 500µl RNase A 溶液，并将每个载玻片面朝下置于 RNase A 溶液上，在 37 ℃ 下孵育 1 h。

ü 注：注意不要干燥。

6. 在 2X SSC（X3 重复）中清洗，并在 DW 中清洗。

7. 在 37 °C 下，将载玻片在 0.005% 胃蛋白酶中浸泡 4 min。

8. 37 °C PBS 洗 3 min (X2)。

9. 重复步骤 3-4。

10. 室温下在 PBS 中清洗 5 min。

11. 在冷乙醇系列中脱水载玻片（在 70%、85%、100% 中脱水 1 min）。

12. 晾干载玻片。

2. 向每张载玻片的标记区域加入 20µl PNA 探针的杂交缓冲液。

ü 注：使用前 90 °C 加热杂交缓冲液 5 min。

3. 用 18 x 18 mm 盖玻片覆盖载玻片上的标记区域。

ü 注：注意不要干燥。

4. 将载玻片在 85 °C 下变性 10 min。

ü 注：变性应在低 80 ℃ 和高 90 ℃ 之间进行。

仔细检查培养箱的温度。75 °C 以下的变性温度严重损害结果。

5. 将载玻片在室温下避光放置 1 h。

 

III. 洗涤

1. 在室温下将载玻片浸入洗涤液中，以取出盖玻片。

2. 在 55‐60 °C 下用清洗液清洗载玻片 10 min (X2)。

ü 注：应在 55-60 ℃ 下进行清洗。

3. 将载玻片在清洗液中清洗 1 min

室温。

 

IV. 复染

1. 将载玻片在 DAPI/2X SSC 中染色 10 min。

2. 在 2X SSC 中清洗载玻片 2 min。

3. 在 1X SSC 中清洗载玻片 2 min。

4. 在 DW 中清洗载玻片 2 min。

5. 用离心机干燥载玻片。

6. 在载玻片的目标区域滴一滴封片剂。

7. 盖上盖玻片，使溶液均匀分布在盖玻片下。避免产生气泡。

8. 使用带有适当滤光片的荧光显微镜观察染色载玻片。

 

V. 参考文献

1. Kentaro Taemura等人2005,Developmental Biology 281,196‐207.

2. Won‐Woo Lee等人2002,Immunology 105,458‐465.

3. Heather Perry.等人。2001,Journal of Microbiological Methods 47,281‐292.

4. 陈彩福等人。1999，哺乳动物基因组 10，13‐18。

5. M. Hultdin等人。1998,Nucleic Acids Research 26 (16) ,3651‐3656.

6. Peter M. Landsdorp等人。1996,Human Molecular Genetics 5 (5) ,685‐691.

pna bio2021年书

发表于由

 

‍

 

 

上海金畔生物pna bio2021年书

 

 

 

关于“正牌代理商”栏目的声明

 

“正牌代理商”栏目设立的初衷是为了让读者在购买产品时能更快找到厂家的代理商，不用一张一张地翻名片，也不用担心买到水货和假货。基于这个初衷，我们收录了多个品牌的代理商，并在签订合同时进行了严格的审核。各厂家或代理商以合同的形式对其代理信息的真实性和准确性进行了保证。       然而，由于生物产品市场的复杂性，尽管我们进行了严格的审核，也不能保证信息的*准确和实时更新。基于此，今后我们会尽我们最大的努力去进行更严格的审核，也希望各厂家和代理商配合和谅解。

 

pnabio常卖货号：

                                                               

货号 品名 规格 品牌
ZF01 HPLC purified, >90% Cy3-O-ctcattttcaacgttca 10 nmole pnabio
CP02 Cas9 protein with NLS, high concentration 250ug pnabio
MP01-25 mPNA 25 nmole pnabio
PP01-25 pPNA 25 nmole pnabio
cp01-200ug CAS9 PROTEIN 200ug pnabio
CP01-50 Cas9 protein with NLS 50 ug pnabio
F1007 TelG-Cy5 5 nmole pnabio

 

 

pnabio中国代理,pnabio上海代理，pnabio北京代理，pnabio广东代理，pnabio江苏代理pnabio湖北代理,pnabio天津代理,pnabio黑龙江代理,pnabio湖南代理pnabio内蒙古代理,pnabio吉林代理,pnabio福建代理,pnabio江苏代理,pnabio浙江代理,pnabio四川代理,pnabio代理