线性化聚乙烯亚胺PEI 25000转染试剂是一种高电荷阳离子聚合物，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成复合物，并使该复合物进入细胞中。该转染试剂是一种瞬时转染试剂，细胞毒性低，转染效率高，在HEK293和CHO等细胞中基因表达效率较高。目前已经验证线性PEI转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等。该试剂与含血清的培养基兼容，能高效的将核酸导入细胞。

产品性质

运输与保存方法

运输方式：室温运输。
保存方式：粉末在室温或4 ºC保存，有效期2年。储存液–20 °C保存，有效期1年；4 °C保存，有效期2周。不可重新冻存。

注意事项

1）配置好的PEI溶液从-20 ºC拿出融化后，可放在4 ºC冰箱保存，绝不可重新冻存。

2）对大多数细胞来而言，每1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1 μg DNA使用1.5~4 μL体积线性PEI转染试剂进行优化。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

4）本产品仅用于科研用途，不可用于人体。

储存液配置（1 mg/mL）

1.材料

PEI 25000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或类似的生物级水、12 mol/L盐酸（HCl）、10 mol/L氢氧化钠（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。

2. 配置储存液（1 mg/mL）

1）于1 L玻璃烧杯，将1g PEI 25000粉末加入900 mL Milli-Q^®超纯水或其他相当级别的生物用水中，在磁子搅拌器上搅拌均匀，产生小涡。

2）边搅拌边滴加入盐酸（12 mol/L）调节pH，直至pH＜2.0。

3）盖上烧杯顶部并搅拌3小时至完全溶解；整个过程要保持pH＜2.0。

【注】：可能会存在一些小纤维状颗粒不能溶解，这是正常现象。

4）边搅拌边滴加入NaOH（10 mol/L）调节pH，直至到6.9 ~7.1。

5）将溶液转入量筒内，并加水定容到1 L。

6）用一次性0.1~0.2 µm PES真空过滤器过滤除菌，即得到1 mg/mL的储存液。

7）根据需要分装并储存在-20 °C，1年稳定。

【注】：储存液再次融化后，可置于4 °C保存，2周稳定，但绝不可重新冻存。

转染操作流程（以6孔板为例）

1.接种细胞：为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，以转染时细胞密度在 70%~80%为宜。

2.准备DNA-PEI复合物：按照以下体系配制DNA-PEI核酸–转染试剂复合物： 

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基稀释2 μg目的DNA ，充分混匀成 DNA稀释液。

【注】：无血清稀释液建议采用 Opti-MEM或ddH₂O

2）立刻向100 μL的DNA稀释液中加入5 μL的PEI 25000转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温下孵育10~25 min，使得形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。

3.转染细胞：

1）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入2 mL新鲜预热的完全培养基。

2）直接将100 μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。

3）37 ℃，5% CO₂培养箱培养，转染后最快7 h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。

4.稳转筛选（可选）

转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），37 ℃，5% CO₂培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

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HB210813

[1] Qin J, Cai Y, Xu Z, et al. Molecular mechanism of agonism and inverse agonism in ghrelin receptor. Nat Commun. 2022;13(1):300. Published 2022 Jan 13. doi:10.1038/s41467-022-27975-9(IF:14.919)
[2] Wang Y, Chen J, Gao WQ, Yang R. METTL14 promotes prostate tumorigenesis by inhibiting THBS1 via an m6A-YTHDF2-dependent mechanism. Cell Death Discov. 2022;8(1):143. Published 2022 Mar 30. doi:10.1038/s41420-022-00939-0(IF:5.241)

PEI 40000是一种分子量为40000的高电荷阳离子聚合物，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成复合物，并使该复合物进入细胞中。PEI 40000是一种瞬时转染试剂，细胞毒性低，转染效率高，在HEK293和CHO等细胞中基因表达效率较高。目前已经验证线性PEI转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等，转染效率高达80%~90%。

PEI 40000与PEI 25000转染试剂相比，具有很多优点。包括：1. PEI 40000较易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000需要先把水调成弱酸性助其溶解，溶解后再用NaOH把pH调至中性；2. PEI 40000操作简便，更易于使用，且比PEI 25000的转染效果好；3. PEI 25000含有4-11%的丙酰基残留，其能阻止聚合物主链与DNA结合。相较于PEI 25000，PEI 40000是完全脱落的结构，因此其性能始终高效如一。

本产品为速溶型，溶解迅速，配制方便。

产品信息

组分信息

储存条件

室温密封保存，有效期2年。储存液2-8 ºC保存，有效期3个月。

使用说明

1.储存液配置

1）材料

PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或类似的生物级水、1 mol/L氢氧化钠（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。

2）配置储存液（1 mg/mL）

a. 于1 L玻璃烧杯，将1 g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q®超纯水或其他相当级别的生物用水中，在磁子搅拌器上搅拌均匀。

b. 待PEI 40000完全溶解（通常不到5 min）。

c. 用1 mol/L氢氧化钠 (NaOH)溶液调节pH为6.80 – 6.90。

d. 将溶液转入量筒内，并加水定容到1 L。

e. 用一次性0.1~0.2 µm PES真空过滤器过滤除菌，即得到1 mg/mL的储存液。

f. 根据需要分装并储存在4 °C，3个月稳定。

2. 转染操作流程（以6孔板为例）

1）接种细胞

为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，以转染时细胞密度在70%~80%为宜。

2）配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物

a. 对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基稀释2 μg目的DNA，充分混匀成DNA稀释液。

*无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH₂O

b. 立刻向100 μL的DNA稀释液中加入4 μL的PEI 40000转染试剂，轻轻混匀。

c. 在室温下孵育10~15 min，使得形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。

3）转染细胞

a. 在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入2 mL新鲜预热的完全培养基。

b. 直接将100 μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。

c. 37 ℃，5% CO₂培养箱培养，转染后最快5 h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。

4）稳转筛选（可选）

转染24 h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），37 ℃，5% CO₂培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

注意事项

1.本品为盐酸盐形式的聚乙烯亚胺，具有易结块倾向。

2.对大多数细胞来而言，每1 μg DNA 使用3.0 μL PEI 40000转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1 μg DNA使用 1.5~4 μL体积线性PEI 40000转染试剂进行优化。

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

4.本产品仅用于科研用途，不可用于人体。

Ver.CN20230828

Q：配置PEI溶液的时候，不调PH是否可以？

A：不可以，PH值对转染效率核细胞状态影响比较大，必须调PH

Q：多配置一点母液冻存起来是否会延长效期？

A：不建议冻存，储存液4℃保存3个月

Q：转染后是否需要换液？

A：若转染前进行了换液，可不进行换液，若需要换液可在转染后6-8h可以进行换液。

Q：转染的时候是否需要无血清培养基培养？

A：制备复合物的时候需要使用无血清培养基，加入细胞中的时候不要求无血清培养

Q:使用氢氧化钠调节之后溶液变浑浊了？怎么办？

A：建议调PH的时候慢慢调节，变浑浊了会引起化合物的变化。若出现浑浊建议先可以用盐酸调到PH2-3左右，溶液变为澄清液体，然后再用氢氧化钠调节PH=6.8左右即可。

Q：转染形成复合物的时候过量加入的DNA和转染试剂的量比较多的时候有沉淀絮状物析出，为什么呢？

A：可能是DNA的纯度不是很纯，有杂质，某种物质引起的PEI析出浑浊，如果把DNA的量降下来会减少这种现象。不建议转染的时候加入过多的质粒和转染试剂，转染试剂效率较高不需要额外提高。

Q：10ml的PEI溶液大概用了多少氢氧化钠溶液呢？

A：客户提供的数据可参考，10ml大概需要400ul的氢氧化钠溶液。建议慢慢调，根据自己的配置情况而定，建议用10ul的墙头调PH，如果PH值过大，溶液浑浊了再调回6.8，可能会影响转染效率。

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[2] Chen Y, Luo R, Li J, et al. Intrinsic Radical Species Scavenging Activities of Tea Polyphenols Nanoparticles Block Pyroptosis in Endotoxin-Induced Sepsis [published correction appears in ACS Nano. 2022 Mar 3;:]. ACS Nano. 2022;16(2):2429-2441. doi:10.1021/acsnano.1c08913(IF:15.881)
[3] Chen ZH, Yan SM, Chen XX, et al. The genomic architecture of EBV and infected gastric tissue from precursor lesions to carcinoma. Genome Med. 2021;13(1):146. Published 2021 Sep 7. doi:10.1186/s13073-021-00963-2(IF:11.117)
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[5] Tian X, Liu L, Jiang W, Zhang H, Liu W, Li J. Potent and Persistent Antibody Response in COVID-19 Recovered Patients. Front Immunol. 2021;12:659041. Published 2021 May 28. doi:10.3389/fimmu.2021.659041(IF:7.561)
[6] Lin J, Chen Z, Yang L, et al. Cas9/AAV9-Mediated Somatic Mutagenesis Uncovered the Cell-Autonomous Role of Sarcoplasmic/Endoplasmic Reticulum Calcium ATPase 2 in Murine Cardiomyocyte Maturation. Front Cell Dev Biol. 2022;10:864516. Published 2022 Apr 1. doi:10.3389/fcell.2022.864516(IF:6.684)
[7] Nian F, Qian Y, Xu F, Yang M, Wang H, Zhang Z. LDHA promotes osteoblast differentiation through histone lactylation. Biochem Biophys Res Commun. 2022;615:31-35. doi:10.1016/j.bbrc.2022.05.028(IF:3.575)