病原体多重PCR预混液(4×Multiplex PCR Master Mix)

病原体多重PCR预混液(4×Multiplex PCR Master Mix)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

本产品适用于多重PCR实验。4×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen以热启动多重Taq酶制剂与4×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可快速便捷地用于多重PCR反应,扩增子GC含量25-75%范围内可以有效扩增。具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点,同时严控背景菌。本试剂可兼容30~100对以内不同大小片段的多重扩增,也可用于进行数千重及以上扩增子的捕获。可应用病原微生物检测、环境微生物鉴定、食品安全检测等多个应用场景。

 

运输与保存方式

冰袋运输。-25 ~ -15储存,有效期2年。

 

实验流程

  1. 推荐反应体系:

一轮反应体系

组分

体积(μL)

终浓度

4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix for Pathogen

7.5

1×

Primer mix

x

0.02 μM-0.5 μM

模板DNA

x

1 ng-400 ng

无菌超纯水

x

总体积

To30

 

【注】

1上表中DNA量和引物浓度均为推荐用量和浓度,可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

2)参考建议:每条引物的浓度可在0.02 μM-0.5 μM范围内进行调整。

3)预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等,无需额外添加。

二轮反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2×Hieff® Multiplex PCR Master Mix for Pathogen(Cat.13581)

15

1×

Primer Index mix

4(~6 pmol)

 

一轮纯化产物

11

 

无菌超纯水

x

总体积

To 30

 

 

  1. 推荐反应程序:

循环步骤

温度(℃)

时间

循环数

预变性

95

3 min

1

变性

95

30 sec

X

退火

60℃

30 sec

延伸

72

30 sec

终延伸

72

3 min

 

暂存

4℃

1

【注】

  1. 退火时间可以根据Panel种类不同,进行适当延长,或者是梯度退火,比如64℃ 1 min,60℃ 1 min;
  2. 延伸时间以最长片段为准。延伸时间太长会导致非特异性扩增增多,可通过缩短延伸时间来提高扩增特异性,延伸时间不少于30 sec。 
  3. 针对模板含量较低的样本,可通过增加循环数提高扩增产出。
  4. Panel引物重数较多时可增加退火时间,调整梯度退火程序,或者根据已有Panel的合适的PCR反应程序进行测试。
  1. 循环数推荐:

单管引物重数

推荐循环数

10 ng gDNA )

退火延伸时间

一轮

二轮

10-50

10~28

18~28

30 s~2 min

50-200

10~28

16~28

30 s~2 min

200-800

10~28

14~28

30 s~2 min

800以上

10~28

12~28

30 s~4 min

【注】

上表是基于10 ng gDNA进行的一轮及二轮循环数的推荐;当投入量大于10 ng,二轮的相应的循环数可以减少;当投入量小于10 ng,一,二轮的相应的循环数要相应的增加

  1. 多重扩增引物纯化

一轮 PCR 产物 0.9×磁珠纯化

1) 准备工作:将 Hieff NGS® DNA Selection Beads 磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少 30 min。 配制 80%乙醇。

2) 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3) 吸取 27 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.9×,Beads:DNA=0.9:1)至一轮 PCR 产物中,室温孵育 5 min。

4) 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约 5 min),小心移除上清。

5) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,加入 200 μL 新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

6) 重复步骤 5,总计漂洗两次。

7) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂(不超过 5min)。

8) 直接加入 11 μL ddH2O,将 PCR 管从磁力架中取出,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。进入下一步反应。

二轮 PCR 产物 0.9×磁珠纯化

1) 准备工作:将 Hieff NGS® DNA Selection Beads 磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少 30 min。 配制 80%乙醇。

2) 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3) 吸取 27 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.9×,Beads:DNA=0.9:1)至一轮 PCR 产物中,室温孵育 5 min。

4) 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约 5 min),小心移除上清。

5) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,加入 200 μL 新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

6) 重复步骤 5,总计漂洗两次。

7) 磁珠晾干后,将PCR管从磁力架上取下,加入30 μL Nuclease-free ddH2O覆盖磁珠,使用移液器吹打混匀。室温孵育2 min。如果磁珠干燥开裂,适当延长孵育时间。

8)将PCR管短暂离心收集后置于磁力架中,分离磁珠和液体直到溶液澄清(约5 min)。 小心吸取25 μL上清转移至新的EP管中,继续进行下一步反应。

 

HB230308

病原体多重PCR预混液(4×Multiplex PCR Master Mix)

暂无内容

病原体多重PCR预混液(4×Multiplex PCR Master Mix)

暂无内容

 

本产品适用于多重PCR实验。4×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen以热启动多重Taq酶制剂与4×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可快速便捷地用于多重PCR反应,扩增子GC含量25-75%范围内可以有效扩增。具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点,同时严控背景菌。本试剂可兼容30~100对以内不同大小片段的多重扩增,也可用于进行数千重及以上扩增子的捕获。可应用病原微生物检测、环境微生物鉴定、食品安全检测等多个应用场景。

 

运输与保存方式

冰袋运输。-25 ~ -15储存,有效期2年。

 

实验流程

  1. 推荐反应体系:

一轮反应体系

组分

体积(μL)

终浓度

4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix for Pathogen

7.5

1×

Primer mix

x

0.02 μM-0.5 μM

模板DNA

x

1 ng-400 ng

无菌超纯水

x

总体积

To30

 

【注】

1上表中DNA量和引物浓度均为推荐用量和浓度,可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

2)参考建议:每条引物的浓度可在0.02 μM-0.5 μM范围内进行调整。

3)预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等,无需额外添加。

二轮反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2×Hieff® Multiplex PCR Master Mix for Pathogen(Cat.13581)

15

1×

Primer Index mix

4(~6 pmol)

 

一轮纯化产物

11

 

无菌超纯水

x

总体积

To 30

 

 

  1. 推荐反应程序:

循环步骤

温度(℃)

时间

循环数

预变性

95

3 min

1

变性

95

30 sec

X

退火

60℃

30 sec

延伸

72

30 sec

终延伸

72

3 min

 

暂存

4℃

1

【注】

  1. 退火时间可以根据Panel种类不同,进行适当延长,或者是梯度退火,比如64℃ 1 min,60℃ 1 min;
  2. 延伸时间以最长片段为准。延伸时间太长会导致非特异性扩增增多,可通过缩短延伸时间来提高扩增特异性,延伸时间不少于30 sec。 
  3. 针对模板含量较低的样本,可通过增加循环数提高扩增产出。
  4. Panel引物重数较多时可增加退火时间,调整梯度退火程序,或者根据已有Panel的合适的PCR反应程序进行测试。
  1. 循环数推荐:

单管引物重数

推荐循环数

10 ng gDNA )

退火延伸时间

一轮

二轮

10-50

10~28

18~28

30 s~2 min

50-200

10~28

16~28

30 s~2 min

200-800

10~28

14~28

30 s~2 min

800以上

10~28

12~28

30 s~4 min

【注】

上表是基于10 ng gDNA进行的一轮及二轮循环数的推荐;当投入量大于10 ng,二轮的相应的循环数可以减少;当投入量小于10 ng,一,二轮的相应的循环数要相应的增加

  1. 多重扩增引物纯化

一轮 PCR 产物 0.9×磁珠纯化

1) 准备工作:将 Hieff NGS® DNA Selection Beads 磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少 30 min。 配制 80%乙醇。

2) 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3) 吸取 27 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.9×,Beads:DNA=0.9:1)至一轮 PCR 产物中,室温孵育 5 min。

4) 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约 5 min),小心移除上清。

5) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,加入 200 μL 新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

6) 重复步骤 5,总计漂洗两次。

7) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂(不超过 5min)。

8) 直接加入 11 μL ddH2O,将 PCR 管从磁力架中取出,涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。进入下一步反应。

二轮 PCR 产物 0.9×磁珠纯化

1) 准备工作:将 Hieff NGS® DNA Selection Beads 磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少 30 min。 配制 80%乙醇。

2) 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3) 吸取 27 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads(0.9×,Beads:DNA=0.9:1)至一轮 PCR 产物中,室温孵育 5 min。

4) 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约 5 min),小心移除上清。

5) 保持 PCR 管始终置于磁力架中,加入 200 μL 新鲜配制的 80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

6) 重复步骤 5,总计漂洗两次。

7) 磁珠晾干后,将PCR管从磁力架上取下,加入30 μL Nuclease-free ddH2O覆盖磁珠,使用移液器吹打混匀。室温孵育2 min。如果磁珠干燥开裂,适当延长孵育时间。

8)将PCR管短暂离心收集后置于磁力架中,分离磁珠和液体直到溶液澄清(约5 min)。 小心吸取25 μL上清转移至新的EP管中,继续进行下一步反应。

 

HB230308

病原体多重PCR预混液(4×Multiplex PCR Master Mix)

暂无内容

病原体多重PCR预混液(4×Multiplex PCR Master Mix)

暂无内容

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。

本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP BufferEnzymes Mix 等,缓冲液中已含有Mg2+ dNTP , 有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多重扩增反应。并添加了dUTP/UDG 系统,可有效防止气溶胶污染的风险。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13894ES60

(100 T)

13894ES80

(1000 T)

13894ES92

(10000 T)

13894-A

5×Hifair® V Universal MP Buffer

 600 μL

 6 mL

 60 mL

13894-B

Hifair® V Universal Enzyme Mix

 120 μL

 1.2 mL

 12 mL

【注】

a. 5×Hifair® V Universal MP Buffer Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写

b. Hifair® V Universal Enzyme Mix 主要包含有耐热Hifair® V Reverse TranscriptaseUNICON® HotStart Taq DNA PolymeraseUDGase

适用机型 

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

 

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C储存,有效期12个月本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

反应体系

组分

体积(μL

终浓度

5×Hifair® V Universal MP Buffer

6

1x

Hifair® V Universal Enzyme Mix

1.2

Primer/Probe Mixa

x

模板RNAb

1-5

RNase Free H2O

to 30

【注】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪

头。避免交叉污染和气溶胶污染。

a. 引物探针混合液浓度:Primer/Probe Mix 中包含多对引物和探针,通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整;探针终浓度也可以根据对荧光曲线和荧光增峰的要求在 0.05-0.5 μM范围内进行调整。

b. 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

逆转录

50℃

10 min

1

预变性

95℃

5 min

1

扩增反应

95℃

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)15 sec

40-45

60a

30 secb

】:退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

a. 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

b. 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

 

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220729

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)

暂无内容

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)

暂无内容

 

Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。

本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP BufferEnzymes Mix 等,缓冲液中已含有Mg2+ dNTP , 有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多重扩增反应。并添加了dUTP/UDG 系统,可有效防止气溶胶污染的风险。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13894ES60

(100 T)

13894ES80

(1000 T)

13894ES92

(10000 T)

13894-A

5×Hifair® V Universal MP Buffer

 600 μL

 6 mL

 60 mL

13894-B

Hifair® V Universal Enzyme Mix

 120 μL

 1.2 mL

 12 mL

【注】

a. 5×Hifair® V Universal MP Buffer Hifair® V Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写

b. Hifair® V Universal Enzyme Mix 主要包含有耐热Hifair® V Reverse TranscriptaseUNICON® HotStart Taq DNA PolymeraseUDGase

适用机型 

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

 

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C储存,有效期12个月本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

反应体系

组分

体积(μL

终浓度

5×Hifair® V Universal MP Buffer

6

1x

Hifair® V Universal Enzyme Mix

1.2

Primer/Probe Mixa

x

模板RNAb

1-5

RNase Free H2O

to 30

【注】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪

头。避免交叉污染和气溶胶污染。

a. 引物探针混合液浓度:Primer/Probe Mix 中包含多对引物和探针,通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整;探针终浓度也可以根据对荧光曲线和荧光增峰的要求在 0.05-0.5 μM范围内进行调整。

b. 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制Ct值在20-35之间适宜。

扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

逆转录

50℃

10 min

1

预变性

95℃

5 min

1

扩增反应

95℃

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)15 sec

40-45

60a

30 secb

】:退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

a. 扩增反应:扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

b. 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

 

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220729

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)

暂无内容

多重定量PCR逆转录试剂盒(RT-qPCR Probe Kit)

暂无内容

PCR金属磁力架 适用于200μL EP管

PCR金属磁力架 适用于200μL EP管

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Yeasen PCR金属磁力架主要适用于200 μL EP管,组成部分如下:本体、磁条、EP管支架;EP管支架分为13×0.2 mL EP管、13×0.5mL EP管、7×1.5 mL EP管。

PCR金属磁力架 适用于200μL EP管

 

使用方法

将结合完毕的装有待分离的磁珠、目的物混合液的EP管放置于磁力架上。静止120秒,直到磁珠都被吸至EP管壁。小心的倒去液体,或者用移液枪吸弃液体。EP管从磁力架上取出,放回普通EP管架,即完成了分离操作。若需更换EP管支架,将支架固定螺丝松开,取下前EP管支架,将需要的支架装上拧紧螺丝,有弧面朝外,调节磁条到合适位置即可。

 

运输与保存方法

常温运输,室温保存。

 

注意事项

1)请勿使用刀片开箱,防止划伤磁力架的外表面。

2)为保证 Yeasen金属磁力架使用效果,请在50℃以下的干燥环境中使用,如将磁力架置于-20℃等低温环境中,恢复至室温后方可使用,但低温可能造成磁力减弱。

3)请勿高压灭菌Yeasen磁力架,磁力架的磁条可用中性清洁剂清洗,禁用有机溶剂。

 

HB220117

PCR金属磁力架 适用于200μL EP管

暂无内容

PCR金属磁力架 适用于200μL EP管

暂无内容

Yeasen PCR金属磁力架主要适用于200 μL EP管,组成部分如下:本体、磁条、EP管支架;EP管支架分为13×0.2 mL EP管、13×0.5mL EP管、7×1.5 mL EP管。

PCR金属磁力架 适用于200μL EP管

 

使用方法

将结合完毕的装有待分离的磁珠、目的物混合液的EP管放置于磁力架上。静止120秒,直到磁珠都被吸至EP管壁。小心的倒去液体,或者用移液枪吸弃液体。EP管从磁力架上取出,放回普通EP管架,即完成了分离操作。若需更换EP管支架,将支架固定螺丝松开,取下前EP管支架,将需要的支架装上拧紧螺丝,有弧面朝外,调节磁条到合适位置即可。

 

运输与保存方法

常温运输,室温保存。

 

注意事项

1)请勿使用刀片开箱,防止划伤磁力架的外表面。

2)为保证 Yeasen金属磁力架使用效果,请在50℃以下的干燥环境中使用,如将磁力架置于-20℃等低温环境中,恢复至室温后方可使用,但低温可能造成磁力减弱。

3)请勿高压灭菌Yeasen磁力架,磁力架的磁条可用中性清洁剂清洗,禁用有机溶剂。

 

HB220117

PCR金属磁力架 适用于200μL EP管

暂无内容

PCR金属磁力架 适用于200μL EP管

暂无内容

猴痘病毒实时定量PCR试剂盒|Monkeypox Virus Real Time qPCR Kit

猴痘病毒实时定量PCR试剂盒|Monkeypox Virus Real Time qPCR Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Monkeypox Virus Real Time qPCR KitUDG plus是一款用于检测猴痘病毒的PCR试剂盒。包含猴痘病毒引物探针,采用公司新一代抗体法热启动Taq酶的2×Mix预混液试剂以及阳性对照,已包含Mg2+dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够提高反应的扩增效率,促进低浓度模板的有效扩增。本产品含有 UDG 酶,可有效防止气溶胶污染的风险。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13863ES25

(25 T)

13863ES60

(100 T)

13863ES80

(1000T)

13863-A

2×TaqMan qPCR Mix

313 μL

1.25 mL

12.5 mL

13863-B

Prime&Probe Mix

25 μL

100 μL

1 mL

13863-C

MPV Negative Control

125 μL

500 μL

5 mL

13863D

MPV Positive Control

125 μL

500 μL

5 mL

a. 2×TaqMan qPCR Mix要包含有耐热UNICON® HotStart Taq DNA PolymeraseUDGasedNTPsdUTP, Mg2+ , stabilizersenhancers等。

b. Prime&Probe Mix主要包含目的基因引物探针和内源性内标引物探针

c. MPV Negative Control为去酶水

d. MPV Positive Control为含目的基因和内源性内标的质粒,目的基因为FAM通道,内标为VIC通道。

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C储存,有效期12个月。

反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2×TaqMan qPCR mix

12.5

Primer&Probe mix

1

模板

5

ddH2O

up to 25

适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

参考扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预消化

37

5 min

1

预变性

95℃

5 min

1

变性

95℃

15sec

45

退火/延伸

60℃

30 sec

】:退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

结果判读

 

FAM

VIC

结果判定

1

Ct38UNDET

Ct≤35

阴性

2

Ct≤35

Ct≤35

阳性

3

35<Ct≤38

Ct≤35

需重新测试,Ct值仍在此区间且曲线呈标准“S”型,则判断为阳性,否则判断为阴性

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴实验手套进行操作。

HB220805

猴痘病毒实时定量PCR试剂盒|Monkeypox Virus Real Time qPCR Kit

暂无内容

猴痘病毒实时定量PCR试剂盒|Monkeypox Virus Real Time qPCR Kit

暂无内容

 

Monkeypox Virus Real Time qPCR KitUDG plus是一款用于检测猴痘病毒的PCR试剂盒。包含猴痘病毒引物探针,采用公司新一代抗体法热启动Taq酶的2×Mix预混液试剂以及阳性对照,已包含Mg2+dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够提高反应的扩增效率,促进低浓度模板的有效扩增。本产品含有 UDG 酶,可有效防止气溶胶污染的风险。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13863ES25

(25 T)

13863ES60

(100 T)

13863ES80

(1000T)

13863-A

2×TaqMan qPCR Mix

313 μL

1.25 mL

12.5 mL

13863-B

Prime&Probe Mix

25 μL

100 μL

1 mL

13863-C

MPV Negative Control

125 μL

500 μL

5 mL

13863D

MPV Positive Control

125 μL

500 μL

5 mL

a. 2×TaqMan qPCR Mix要包含有耐热UNICON® HotStart Taq DNA PolymeraseUDGasedNTPsdUTP, Mg2+ , stabilizersenhancers等。

b. Prime&Probe Mix主要包含目的基因引物探针和内源性内标引物探针

c. MPV Negative Control为去酶水

d. MPV Positive Control为含目的基因和内源性内标的质粒,目的基因为FAM通道,内标为VIC通道。

运输和保存方法

冰袋运输。-20°C储存,有效期12个月。

反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2×TaqMan qPCR mix

12.5

Primer&Probe mix

1

模板

5

ddH2O

up to 25

适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

参考扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预消化

37

5 min

1

预变性

95℃

5 min

1

变性

95℃

15sec

45

退火/延伸

60℃

30 sec

】:退火/延伸温度可根据实验要求适当调整。

结果判读

 

FAM

VIC

结果判定

1

Ct38UNDET

Ct≤35

阴性

2

Ct≤35

Ct≤35

阳性

3

35<Ct≤38

Ct≤35

需重新测试,Ct值仍在此区间且曲线呈标准“S”型,则判断为阳性,否则判断为阴性

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴实验手套进行操作。

HB220805

猴痘病毒实时定量PCR试剂盒|Monkeypox Virus Real Time qPCR Kit

暂无内容

猴痘病毒实时定量PCR试剂盒|Monkeypox Virus Real Time qPCR Kit

暂无内容

FailSafe™ PCR系统


FailSafe™ PCR系统

一个可信赖的持续扩增常规及非常规模板的新系统

Haiying Grunenwald, EPICENTRE Technologies
 

介绍
    成功的PCR依赖于包括模板质量,所选酶,设计的引物以及所采用的扩增条件在内的多重因素。一个理想的PCR系统应当能够:

(1)扩增包括难扩增(如高GC含量或二级结构)及长序列在内的各种类型模板

(2)高保真扩增

(3)简便易行,进行扩增时无需优化条件

    然而目前还没有一个PCR系统能同时满足这些要求。在此,我们介绍FailSafe PCR系统,它可以确保成功及持续地扩增常规及非常规模板,包括长序模板(长至20kb)和高GC含量模板(GC含量>80%)。 由于普通Taq酶的扩增能力很强,但是错配率高,在出现错配时酶会脱离模版而导致Taq酶通常只能扩较小的片段(<3kb);常规的高保真酶如Pfu、Vent带校正功能而扩增能力较弱,本系统综合二者的优点:FailSafe PCR酶混合物是含有一个3’–5’高保真校读酶的Taq酶混合物,可以高保真地扩增长片段的PCR产物,产物可以直接克隆入TA或平端载体;另一个成分是一套FailSafe PCR PreMixes,它由缓冲液,dNTPs,各种含量的MgCl2以及FailSafe PCR增强剂(含甜菜碱)组成。使用者只需简单地将模板,引物,FailSafe PCR酶混合物加入FailSafe PCR PreMixes即可进行扩增。无需繁琐地进行条件优化,PreMixes中的FailSafe PCR增强剂可以增加PCR反应的特异性,敏感性及持续性。

    本文中,我们比较了FailSafe PCR系统与其它商品化的PCR酶及酶混合物的扩增保真度,还证明了利用FailSafe PCR系统可以扩增长序,难扩增序列模板以及进行多重PCR。

材料与方法
1. FailSafe PCR酶混合物的保真度
    克隆,表达,突变分析和长程PCR要求使用低错配率的酶。使用以PCR为基础的正向突变分析,我们比较了FailSafe PCR酶混合物与其它供应商的酶及酶混合物的扩增保真度。该方法类似Cline等人的方法1,通过扩增lacZ基因的a-互补区,使用蓝/白克隆筛选分析评估序列的完整性。扩增反应使用的试剂及方法依相应厂商提供的进行,之后逐次进行高保真度分析。结果表明FailSafe PCR酶混合物的保真度至少是标准Taq聚和酶的三倍,与被测的其它高保真酶混合物相当或更好。尽管有报道认为FailSafe PCR酶混合物的保真度稍逊pfu DNA聚和酶,但FailSafe PCR系统要强健得多,可以从难扩增模板(如高GC含量)和长序模板获得更特异和持续的扩增,而在这方面pfu DNA聚和酶是欠缺的。

2. 使用FailSafe PCR系统扩增长序列
    扩增长链模板经常需要进行繁琐的反应条件优化(包括累加PCR),为了证明FailSafe PCR系统无需优化各反应因素即可扩增长链及标准模板,我们从l嗜菌体,人及大肠杆菌基因组上扩增长度从5kb到21.5kb的片段。

    对于每个模板/引物对结合物,使用FailSafe PCR PreMixes进行PCR反应。每50ml反应体系中含1-500ng的基因组DNA(由模板决定),10-50pmol的各引物(由模板决定),2.5U的FailSafe PCR酶混合物以及25ml的FailSafe PCR 2´PreMix(A-L)。嗜菌体模板扩增反应如下:94°C变性1min,98°C,20sec;56°C,1min(扩增5kb和10kb)/68°C,5min(扩增5kb)/10min(扩增10kb)或20min(扩增20kb),共计20个循环。扩增大肠杆菌基因组按以下程序进行:94°C变性1min后,扩增6kb模板进行30个循环,其它进行20个循环的98°C,20sec;68°C,5min(6kb)或10min(10kb)或20min(18kb)。扩增人基因组DNA程序:94°C,1min,98°C,20sec;68°C,20min共14个循环,zui后是10个延伸时间增加15sec的循环。结果表明扩增出的所有PCR产物产量高,特异性好。

3. 使用FailSafe PCR系统扩增GC富集模板
    如同PCR扩增长序列,扩增那些含大量GC或二级结构的难扩增模板经常需要进行条件优化。为了证明使用FailSafe PCR系统可以不需优化条件而进行GC富集的模板的扩增,我们扩增了人FMR1基因的250-350bp长短的区域(GC含量为80-85%)2。该基因CGG重复区的扩大与脆性X染色体综合症相关。使用Epicentre的MasterPureä DNA纯化试剂盒从血液中纯化出人基因组DNA后,利用FailSafe PCR PreMixes进行PCR反应。每50ml反应体系中含100ng的基因组DNA,50pmol的各引物,1.25U的FailSafe PCR酶混合物和25ml的FailSafe PCR 2´PreMix(A-L)。94°C变性2min后,加入酶混合物,扩增反应按以下程序进行:94°C,4min,30个98°C,30sec;65°C,1min;72°C,1min循环。用一套12个反应,证明FailSafe PCR PreMix J扩增FMR1脆性X基因的富含GC区*。

    对四个独立样本,使用FailSafe PCR PreMix J和FailSafe PCR酶混合物进行脆性X基因该区域的扩增。结果表明FailSafe PCR系统可以持续扩增含80-85%GC的区域。由于各样品的CGG重复数不同,PCR产物的大小稍有不同,长度从250bp到350bp。

4. 使用FailSafe PCR系统进行多重扩增
    FailSafe PCR系统被检测进行多重扩增的能力。使用FailSafe PCR PreMixes扩增囊性纤维化跨膜传导调节蛋白基因的五个外显子3。每50ml多重扩增PCR反应体系中含500ng的基因组DNA,25pmol的各引物2,2.5U的FailSafe PCR酶混合物和25ml的FailSafe PCR 2´PreMix。94°C变性2min后,加入酶混合物,进行扩增反应:30个94°C,10sec;53°C,10sec;74°C,10sec循环,zui后74°C延伸5min。

    CFTR基因的外显子4,10,11,20和21的PCR扩增产物分别为423,340,233,289和396bp2,结果表明使用FailSafe PCR PreMix C获得*扩增。多重分析产生每个外显子正确大小的产物。使用FailSafe PCR系统进行一套反应可成功地获得扩增自CFTR基因的5条PCR产物。

总结
    FailSafe PCR系统确保从各种模板(包括至少20kb长度的长序模板,富含GC的模板及多重PCR)成功地进行PCR。FailSafe PCR酶混合物的高保真性对于PCR产物进行克隆,表达及突变分析重要。该试剂盒方便地确保从任何模板进行简单的一步扩增,而无需进行繁琐的条件优化,也不需对不同模板修改方法。这些优点使得FailSafe PCR系统适于进行常规及非常规的PCR扩增。

参考文献
1. Cline, J. et al. (1996) Nucl. Acids Res. 24(18), 3546.
2. Fu, Y. H. et al. (1991) Cell 67(6), 1047.
3. Richards, B. et al. (1993) Human Molecular Genetics 2(2), 159.

PCR法支原体检测试剂盒说明书

PCR法支原体检测试剂盒说明书

产品详情

货号

规格

价格

78EA10015-50T

50T

240.00

 

 

产品描述

支原体污染会对细胞各个方面都造成不良影响,已经成为细胞培养中高度重视的问题,因此,定期进行支原体污染检测是十分必要的。本支原体检测试剂盒是采用PCR方法,特异性的检测各种培养细胞生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等)中支原体的污染。试剂盒使用的混合引物是针对支原体16s rRNA序列的保守区域设计的特异性引物,可直接使用细胞培养液作为PCR模板,特异性扩增支原体DNA,搭配配套的Mycoplasma PCR Mix(2×)一小时内即可完成,本试剂盒检测灵敏度高,可检测低至20个拷贝的支原体。

产品组分

组成

78EA10015-50T

Mycoplasma PCR Mix(2×)

1 mL

Mycoplasma Primer Mix

100 μL

Positive Control

50 μL

Mycoplasma Free Water

1 mL

使用方法

使用方法

1. 样品准备:取适量待检细胞培养上清于洁净的PCR管中,利用PCR仪95℃热处理5 min后作为模板。血清样本可利用无支原体去离子水水稀释后,取适量样本于洁净的PCR管中,利用PCR仪95℃热处理5 min后作为模板;

2. PCR体系配制:每次实验需设置阴性对照(将1 μL待检样品换成等量的无支原体去离子水)与阳性对照(在1 μL待检样品中加入0.5 μL Positive Control后一起作为Template),实验时戴一次性口罩与手套,谨慎操作,防止操作不当引入外源支原体污染;

3. PCR程序设置

步骤

温度

时间

周期

Initial Denaturation

98℃

2 min

1

Denaturation

98℃

20 s

30

Annealing

56℃

25 s

Extension

72℃

10 s

Final extension

72℃

5 min

1

Hold

4-16℃

Forever

 

4. 凝胶电泳:取10 μL PCR产物,使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测;

 

5. 结果分析:每次实验通过与阴性对照、阳性对照检测结果比较确认样品支原体污染情况,阳性条带大小500 bp左右。如阴性对照检测结果中有条带很有可能是PCR体系中出现污染,建议重新实验确认结果。如有必要,也可对PCR产物进行常规测序,以确定具体的支原体种属。

注意事项

1. 本试剂盒可以检测M.orale,M.arginini,M.bovis,M.fermentans,M.gallisepticum,M.hominis,M.pirum,Ureaplasma spp,M.hyorhinis,M.pneumoniae,A.laidlawii等至少11种以上支原体污染。

2. 所有试剂在使用前于冰上充分解冻、混匀,使用完毕后于-20℃保存。

3. 每次实验必须设置阴性对照、阳性对照,实验组建议设置样品模板梯度。

4. 操作时必须佩戴口罩,严格按照PCR操作标准,防止引入外源污染影响实验结果。

5. 为了确保细胞实验的可靠性及稳定性,建议定期进行支原体污染检测。

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

运输及保存方法

冰袋(wet ice)运输;-20℃保存,有效期12个月。

 

产品用途

    《PCR法支原体检测试剂盒》(PCR Mycoplasma Detection Kit)可用于检测一切可能含支原体的样品,比如:(1)体外细胞培养的上清;(2)血清;(3)各种体液,如唾液、尿液、鼻腔分泌物等;(4)别的液体样品。本产品仅供研究使用。

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

材质

采用进口高品质聚丙烯材料。

 

运输和保存方法

常温运输,室温储存,有效期3年。

 

产品特点

管壁薄,且厚度均匀,保证良好的热传导。

八联管盖和管体关闭时密封性好,防止蒸发和污染,且易于开盖。

光学平盖具有超透明特点,是荧光发光和实时荧光定量qPCR应用的理想选则。

适用于大部分PCR仪。

无菌、无热原。

不含RNA酶、DNA酶。

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并带一次性手套操作!

2. 本产品仅作科研用途!

 

适配仪器(仅供参考)

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

 

 

 

Ver.CN20231127

Q:0.2 mL PCR八联排,83602ES、83604、83606ES 的区别是什么?

A:83602ES可以适配更多的PCR仪器,83606ES质地较硬,更结实,使用过程不易断裂。常规应用推荐83602ES;如果样本需要冷冻储存,推荐83606ES;qPCR反应,可使用83606ES。

Q:从仪器适配表上看,有的仪器标注既可以使用0.1 mL又可以使用0.2 mL的八联排/PCR板,具体怎么选择呢?

A:有的仪器型号有多种模块可选,因此需要区分模块做选择一般标准模块推荐使用0.2 mL,快速模块推荐使用0.1 mL。

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

暂无内容

材质

采用进口高品质聚丙烯材料。

 

运输和保存方法

常温运输,室温储存,有效期3年。

 

产品特点

管壁薄,且厚度均匀,保证良好的热传导。

八联管盖和管体关闭时密封性好,防止蒸发和污染,且易于开盖。

光学平盖具有超透明特点,是荧光发光和实时荧光定量qPCR应用的理想选则。

适用于大部分PCR仪。

无菌、无热原。

不含RNA酶、DNA酶。

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并带一次性手套操作!

2. 本产品仅作科研用途!

 

适配仪器(仅供参考)

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

 

 

 

Ver.CN20231127

Q:0.2 mL PCR八联排,83602ES、83604、83606ES 的区别是什么?

A:83602ES可以适配更多的PCR仪器,83606ES质地较硬,更结实,使用过程不易断裂。常规应用推荐83602ES;如果样本需要冷冻储存,推荐83606ES;qPCR反应,可使用83606ES。

Q:从仪器适配表上看,有的仪器标注既可以使用0.1 mL又可以使用0.2 mL的八联排/PCR板,具体怎么选择呢?

A:有的仪器型号有多种模块可选,因此需要区分模块做选择一般标准模块推荐使用0.2 mL,快速模块推荐使用0.1 mL。

透明PCR八联排管 0.2mL八联排管 PCR八联排

暂无内容

nanohelix 多重 PCR 2x 预混液简介

nanohelix 多重 PCR 2x 预混液简介

 

多重 PCR 2x 预混液

  • 用于多重 PCR 的 2 倍预混液,最多 13 重 

  • *的特异性和高生产力 

  • 自动热启动 PCR 

  • 为复杂的多重 PCR 提供方便和快速的设置 

  • 通过内置 UDG 系统防止残留污染

 

产品

货号 产品 特征
nanohelix BMPR 多重 PCR 2x 预混液
nanohelix BMPU 多重 PCR 2x 预混液,带 UDG + UDG 系统*

 

Multiplex PCR 2x Premix是设置复杂多重 PCR 的不错之选,是一种预混合溶液,包含HelixAmp™ Hot-Taq聚合酶、dNTP和 2x 浓度的优化缓冲液。Multiplex PCR 2x Premix旨在为热启动 PCR 提供高的特异性,并大限度地减少反应混合物中引物之间的中断。使用 UDG 系统可以去除残留污染的 PCR 产物。 

 

   

应用 

  • 多重 PCR(常规)

  • 等位基因特异性PCR

  • SNP分析和基因分型

 

 

特性:传统的多重 PCR 具有防止残留污染的功能。热启动。

 

热活化: +95°C 15 分钟。

 

活性测试:对应于参考(9个目标与人类基因组DNA的常规多重PCR)

 

稳定性: -20°C 下 12 个月

 

 

 

Hieff Unicon®2×实时多重荧光定量 PCR|TaqMan multiplex qPCR master mix

Hieff Unicon®2×实时多重荧光定量 PCR|TaqMan multiplex qPCR master mix

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

本产品是2×Mix预混合试剂,能够实现在单个反应孔中进行多重荧光定量PCR。本产品含有基因改造的热启动Taq极大地提高了扩增灵敏度和特异性,本产品对多重反应缓冲体系进行了深度优化,能够提高反应的扩增效率,促进低浓度模板的有效扩增。本产品可用于基因分型和基因多重定量分析。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11208ES03

(1 mL)

11208ES06

(5 × 1mL)

11208ES08

(5 mL)

11208ES60

(20×5 mL)

11208-A

2×Hieff Unicon® TaqMan Multiplex qPCR Master Mix

1 mL

5 × 1 mL

5 mL

20 × 5 mL

11208-B

50×Low Rox 

40 μL

200 μL

200 μL

20 × 200 μL

11208-C

50×High Rox 

40 μL

200 μL

200 μL

20 × 200 μL

 

运输保存方法

冰袋运输。-20°C储存,有效期18个月

 

反应体系

组分

体积(μL

终浓度

Hieff Unicon® TaqMan Multiplex qPCR Master Mix

10

1×

Primer mix

x

0.1-1 μM

TaqMan Probe mix

y

50300 nM

50×Low or High Rox

0.4

1×

模板DNA/cDNA

1-100 ng

ddH2O

up to 20

a. 上表中模板量和引物浓度以及探针浓度均为推荐量,可根据具体实验情况进行调整,选择最适投入量和浓度

b. 一般情况下,每条引物浓度为 0.2 μM 即可得到较好的扩增效果,引物浓度可在 0.1-1 μM 的范围内进行调节;

c. 反应体系可根据实验需求进行等比例调节,模板体积不超过总体积的 1/10

 

适用机型

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

参考扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95°C

5 min

1

变性

95°C

5 sec

40

退火/延伸

60°C

30 sec

a. 某些情况下,可通过调节退火延伸时间提高多重 qPCR 反应的性能 

b. 反应结束后可通过琼脂糖凝胶电泳确认产物的特异性;

 

注意事项

1. 请于使用前确保产品完全解冻并彻底混匀,短暂离心收集至管底后置于冰上备用。

2. 为避免样品间交叉污染和气溶胶污染,推荐在超净台中进行反应体系的配制。

3. 使用过程中避免产品的反复冻融。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220808

Q:11208 跟 11205 有什么区别?

A:酶不一样,11208 是可以做多重PCR,11205 只能做单重PCR,做qPCR 是没有问题的。

Q:11208 的qPCR 反应体系可以用 5 μL/10 μL 吗?

A:可以,但一般推荐 20ul。大体系减少误差。5μl 体系太小,加样误差会很大,不推荐。

Q:11208 可扩增多长的产物啊?

A:建议在 300bp 以下,过长的产物会导致酶效降低。若一定要用,建议用三步法。

[1] Han S, Cao D, Sha J, Zhu X, Chen D. LncRNA ZFPM2-AS1 promotes lung adenocarcinoma progression by interacting with UPF1 to destabilize ZFPM2. Mol Oncol. 2020;14(5):1074-1088. doi:10.1002/1878-0261.12631(IF:6.574)
[2] Zhang Y, Fang Z, Guo X, et al. lncRNA B4GALT1-AS1 promotes colon cancer cell stemness and migration by recruiting YAP to the nucleus and enhancing YAP transcriptional activity. J Cell Physiol. 2019;234(10):18524-18534. doi:10.1002/jcp.28489(IF:4.522)
[3] Li H, Liu F, Qin W. Circ_0072083 interference enhances growth-inhibiting effects of cisplatin in non-small-cell lung cancer cells via miR-545-3p/CBLL1 axis. Cancer Cell Int. 2020;20:78. Published 2020 Mar 12. doi:10.1186/s12935-020-1162-x(IF:4.175)
[4] Zhao W, Wu M, Cui L, Du W. Limonin attenuates the stemness of cervical carcinoma cells by promoting YAP nuclear-cytoplasmic translocation. Food Chem Toxicol. 2019;125:621-628. doi:10.1016/j.fct.2019.02.011(IF:3.775)
[5] Cao X, Zhang C, Zhang X, Chen Y, Zhang H. MiR-145 negatively regulates TGFBR2 signaling responsible for sepsis-induced acute lung injury. Biomed Pharmacother. 2019;111:852-858. doi:10.1016/j.biopha.2018.12.138(IF:3.743)
[6] Su Z, Wang C, Chang D, Zhu X, Sai C, Pei J. Limonin attenuates the stemness of breast cancer cells via suppressing MIR216A methylation. Biomed Pharmacother. 2019;112:108699. doi:10.1016/j.biopha.2019.108699(IF:3.743)
[7] Zhang C, Li J, Qiu X, Chen Y, Zhang X. SUMO protease SENP1 acts as a ceRNA for TGFBR2 and thus activates TGFBR2/Smad signaling responsible for LPS-induced sepsis. Biomed Pharmacother. 2019;112:108620. doi:10.1016/j.biopha.2019.108620(IF:3.743)
[8] Ma F, Li Z, Cao J, Kong X, Gong G. A TGFBR2/SMAD2/DNMT1/miR-145 negative regulatory loop is responsible for LPS-induced sepsis. Biomed Pharmacother. 2019;112:108626. doi:10.1016/j.biopha.2019.108626(IF:3.743)
[9] Guo J, Zhang L, Lian L, Hao M, Chen S, Hong Y. CircATP2B4 promotes hypoxia-induced proliferation and migration of pulmonary arterial smooth muscle cells via the miR-223/ATR axis. Life Sci. 2020;262:118420. doi:10.1016/j.lfs.2020.118420(IF:3.647)
[10] Song H, Xu Y, Shi L, et al. LncRNA THOR increases the stemness of gastric cancer cells via enhancing SOX9 mRNA stability. Biomed Pharmacother. 2018;108:338-346. doi:10.1016/j.biopha.2018.09.057(IF:3.457)
[11] Lou W, Yan J, Wang W. Downregulation of miR-497-5p Improves Sepsis-Induced Acute Lung Injury by Targeting IL2RB. Biomed Res Int. 2021;2021:6624702. Published 2021 Apr 12. doi:10.1155/2021/6624702(IF:3.411)
[12] Song H, Shi L, Xu Y, et al. BRD4 promotes the stemness of gastric cancer cells via attenuating miR-216a-3p-mediated inhibition of Wnt/β-catenin signaling. Eur J Pharmacol. 2019;852:189-197. doi:10.1016/j.ejphar.2019.03.018(IF:3.170)

产品描述

本产品是2×Mix预混合试剂,能够实现在单个反应孔中进行多重荧光定量PCR。本产品含有基因改造的热启动Taq极大地提高了扩增灵敏度和特异性,本产品对多重反应缓冲体系进行了深度优化,能够提高反应的扩增效率,促进低浓度模板的有效扩增。本产品可用于基因分型和基因多重定量分析。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11208ES03

(1 mL)

11208ES06

(5 × 1mL)

11208ES08

(5 mL)

11208ES60

(20×5 mL)

11208-A

2×Hieff Unicon® TaqMan Multiplex qPCR Master Mix

1 mL

5 × 1 mL

5 mL

20 × 5 mL

11208-B

50×Low Rox 

40 μL

200 μL

200 μL

20 × 200 μL

11208-C

50×High Rox 

40 μL

200 μL

200 μL

20 × 200 μL

 

运输保存方法

冰袋运输。-20°C储存,有效期18个月

 

反应体系

组分

体积(μL

终浓度

Hieff Unicon® TaqMan Multiplex qPCR Master Mix

10

1×

Primer mix

x

0.1-1 μM

TaqMan Probe mix

y

50300 nM

50×Low or High Rox

0.4

1×

模板DNA/cDNA

1-100 ng

ddH2O

up to 20

a. 上表中模板量和引物浓度以及探针浓度均为推荐量,可根据具体实验情况进行调整,选择最适投入量和浓度

b. 一般情况下,每条引物浓度为 0.2 μM 即可得到较好的扩增效果,引物浓度可在 0.1-1 μM 的范围内进行调节;

c. 反应体系可根据实验需求进行等比例调节,模板体积不超过总体积的 1/10

 

适用机型

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

参考扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95°C

5 min

1

变性

95°C

5 sec

40

退火/延伸

60°C

30 sec

a. 某些情况下,可通过调节退火延伸时间提高多重 qPCR 反应的性能 

b. 反应结束后可通过琼脂糖凝胶电泳确认产物的特异性;

 

注意事项

1. 请于使用前确保产品完全解冻并彻底混匀,短暂离心收集至管底后置于冰上备用。

2. 为避免样品间交叉污染和气溶胶污染,推荐在超净台中进行反应体系的配制。

3. 使用过程中避免产品的反复冻融。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

HB220808

Q:11208 跟 11205 有什么区别?

A:酶不一样,11208 是可以做多重PCR,11205 只能做单重PCR,做qPCR 是没有问题的。

Q:11208 的qPCR 反应体系可以用 5 μL/10 μL 吗?

A:可以,但一般推荐 20ul。大体系减少误差。5μl 体系太小,加样误差会很大,不推荐。

Q:11208 可扩增多长的产物啊?

A:建议在 300bp 以下,过长的产物会导致酶效降低。若一定要用,建议用三步法。

[1] Han S, Cao D, Sha J, Zhu X, Chen D. LncRNA ZFPM2-AS1 promotes lung adenocarcinoma progression by interacting with UPF1 to destabilize ZFPM2. Mol Oncol. 2020;14(5):1074-1088. doi:10.1002/1878-0261.12631(IF:6.574)
[2] Zhang Y, Fang Z, Guo X, et al. lncRNA B4GALT1-AS1 promotes colon cancer cell stemness and migration by recruiting YAP to the nucleus and enhancing YAP transcriptional activity. J Cell Physiol. 2019;234(10):18524-18534. doi:10.1002/jcp.28489(IF:4.522)
[3] Li H, Liu F, Qin W. Circ_0072083 interference enhances growth-inhibiting effects of cisplatin in non-small-cell lung cancer cells via miR-545-3p/CBLL1 axis. Cancer Cell Int. 2020;20:78. Published 2020 Mar 12. doi:10.1186/s12935-020-1162-x(IF:4.175)
[4] Zhao W, Wu M, Cui L, Du W. Limonin attenuates the stemness of cervical carcinoma cells by promoting YAP nuclear-cytoplasmic translocation. Food Chem Toxicol. 2019;125:621-628. doi:10.1016/j.fct.2019.02.011(IF:3.775)
[5] Cao X, Zhang C, Zhang X, Chen Y, Zhang H. MiR-145 negatively regulates TGFBR2 signaling responsible for sepsis-induced acute lung injury. Biomed Pharmacother. 2019;111:852-858. doi:10.1016/j.biopha.2018.12.138(IF:3.743)
[6] Su Z, Wang C, Chang D, Zhu X, Sai C, Pei J. Limonin attenuates the stemness of breast cancer cells via suppressing MIR216A methylation. Biomed Pharmacother. 2019;112:108699. doi:10.1016/j.biopha.2019.108699(IF:3.743)
[7] Zhang C, Li J, Qiu X, Chen Y, Zhang X. SUMO protease SENP1 acts as a ceRNA for TGFBR2 and thus activates TGFBR2/Smad signaling responsible for LPS-induced sepsis. Biomed Pharmacother. 2019;112:108620. doi:10.1016/j.biopha.2019.108620(IF:3.743)
[8] Ma F, Li Z, Cao J, Kong X, Gong G. A TGFBR2/SMAD2/DNMT1/miR-145 negative regulatory loop is responsible for LPS-induced sepsis. Biomed Pharmacother. 2019;112:108626. doi:10.1016/j.biopha.2019.108626(IF:3.743)
[9] Guo J, Zhang L, Lian L, Hao M, Chen S, Hong Y. CircATP2B4 promotes hypoxia-induced proliferation and migration of pulmonary arterial smooth muscle cells via the miR-223/ATR axis. Life Sci. 2020;262:118420. doi:10.1016/j.lfs.2020.118420(IF:3.647)
[10] Song H, Xu Y, Shi L, et al. LncRNA THOR increases the stemness of gastric cancer cells via enhancing SOX9 mRNA stability. Biomed Pharmacother. 2018;108:338-346. doi:10.1016/j.biopha.2018.09.057(IF:3.457)
[11] Lou W, Yan J, Wang W. Downregulation of miR-497-5p Improves Sepsis-Induced Acute Lung Injury by Targeting IL2RB. Biomed Res Int. 2021;2021:6624702. Published 2021 Apr 12. doi:10.1155/2021/6624702(IF:3.411)
[12] Song H, Shi L, Xu Y, et al. BRD4 promotes the stemness of gastric cancer cells via attenuating miR-216a-3p-mediated inhibition of Wnt/β-catenin signaling. Eur J Pharmacol. 2019;852:189-197. doi:10.1016/j.ejphar.2019.03.018(IF:3.170)

globescientific pcr管简介

 

globescientific pcr管简介

PCR Tubes, Strips and Plates

 

 

                                                                                                                             

GCM-B Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 120v, 60Hz, US Plug, Blue Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-G Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 120v, 60Hz, US Plug, Green Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-R Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 120v, 60Hz, US Plug, Red Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-B-UK Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 240v, 50Hz, UK Plug, Blue Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-G-UK Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 240v, 50Hz, UK Plug, Green Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-R-UK Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 240v, 50Hz, UK Plug, Red Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-B-EU Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 240v, 50Hz, EU Plug, Blue Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-G-EU Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 240v, 50Hz, EU Plug, Green Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-R-EU Centrifuge, Mini, 8-Place, 7000rpm Fixed Speed, 240v, 50Hz, EU Plug, Red Lid (Includes: 8-Place Rotor for 1.5mL/2.0mL Tubes, 2 x 8 Place Rotor for PCR Tubes/Strips and both Sleeves) EA
GCM-ROT Rotor for use with GCM Series Mini Centrifuges, 7000rpm, 8-Place, for 1.5 and 2.0mL Microcentrifuge Tubes EA
GCM-PCR Rotor for use with GCM Series Mini Centrifuges, 7000rpm, 2 x 8 Position, for 0.2mL PCR Tubes and Strips EA
GCM-AD2 Rotor Cavity Sleeves for use with GCM Series Mini Centrifuges, converts the rotor cavity for use with 0.2mL Microcentrifuge Tubes, 8 each BAG/8
GCM-AD5 Rotor Cavity Sleeves for use with GCM Series Mini Centrifuges, converts the rotor cavity for use with 0.5mL Microcentrifuge Tubes, 8 each BAG/8
GCC-S Centrifuge, Clinical, 12-Place, 120v, 60Hz, US Plug (Includes: 12-Place Rotor for use with: 5mL, 7mL and 10mL Tubes and 8 x 15mL Tubes, Sleeves and Risers) EA
GCC-S-UK Centrifuge, Clinical, 12-Place, 240v, 50Hz, UK Plug (Includes: 12-Place Rotor for use with: 5mL, 7mL and 10mL Tubes and 8 x 15mL Tubes, Sleeves and Risers) EA
GCC-S-EU Centrifuge, Clinical, 12-Place, 240v, 50Hz, EU Plug (Includes: 12-Place Rotor for use with: 5mL, 7mL and 10mL Tubes and 8 x 15mL Tubes, Sleeves and Risers) EA
GCC-E Centrifuge, Clinical, Enhanced Model, 12-Place, 120-240v, 50/60Hz (Includes: 12-Place Rotor for use with: 5mL, 7mL and 10mL Tubes and 8 x 15mL Tubes, Sleeves and Risers) EA
GCC-R1 Rotor for use with GCC Series Clinical Centrifuges, 4500rpm, 8-Place for 15mL Tubes EA
GCC-ADP Rotor Cavity Sleeves and Risers for use with GCC Series Clinical Centrifuges with CC-R1 Rotor, converts the rotor cavity for use with: 5mL, 7mL and 10mL Tubes, 12 Each of Both Sleeves and Risers BAG/24
GCC-AD1 Rotor Cavity Adapters for use with GCC Series Clinical Centrifuges with GCC-R1 Rotor, converts the rotor cavity for use with: 5mL, 7mL and 10mL Tubes, 12 Each BAG/12
GCC-PLUG Rotor Adapter Risers for use with GCC Series Clinical Centrifuges with GCC-R1 Rotor, for: 5mL, 7mL and 10mL Tubes, 12 Each BAG/12