orimabs目录
向量
|
VH，VK和VL引物
感受态细胞
|
酵母展示载体
pYDS1（货号：mAb001）
pYDS1是一种酵母展示载体，用于在酵母菌株EBY100表面展示单体scFv。AGA1是酵母细胞表面蛋白，AGA2通过2个二硫键与AGA1偶联。通过铰链与AGA2的C末端融合，scFv显示在酵母表面。设计scFv的N末端的标志标签和C末端的V5标签，以便通过流式细胞术方便地检测scFv的表达和抗原结合。（G4S）3柔性接头被设计为VL和VH之间的内部接头。该载体设计用于VL和VH的逐步克隆，并且VH和VL克隆的所有酶位点均未出现在VH和VL种系基因中，并且翻译的氨基酸有利于形成柔性接头。
引用
pYDS1.1 （Cat＃：mAb002）
pYDS1.1与pYDS1的单体scFv展示相似，只是VL和VH的多个克隆位点缩短至9 bp，这允许使用PCR纯化试剂盒直接纯化线性化载体，而无需通过凝胶去除9 bp插入片段分离。该载体被设计用于VL和VH的一步克隆，既可以组装成scFv，也可以通过三个片段缺口修复。酵母具有的同源重组系统，该系统可通过为三个片段设计的同源末端将共转化的线性化载体VL和VH有效地组装成正确的向量scFv形式。
引用
pYDS2 （货号：mAb003）
如果将分离的scFv的终目标设计为二聚体，例如scFv-Fc或全抗体，则建议使用二聚体-scFv库，因为高亲和力单体scFv可能无法转化为更高亲和力的二聚体。明智的方法是直接隔离具有较暗淡形式的高亲和力的scFv。pYDS2是为此目的而设计的。通过铰链区中的天然3个二硫键，在酵母表面上显示出较暗的scFv。pYDS2设计用于像pYDS1一样逐步克隆VL和VH。所有标签，接头和酶位点均与pYDS1相同，可进行有效的基因克隆，灵活的接头和方便的流式细胞术检测scFv。
引用
酵母分泌表达载体
pYS1 （Cat＃：mAb004） 和pYS2 （Cat＃：mAb005）
通过磁性和流式分选富集抗原特异性酵母展示种群后，可以使用流式细胞仪鉴定高亲和力的单个scFc克隆。然而，这是费时和费力的，并且显示scFv需要稍后为了亲和力和其他表征而转化为可溶形式。如果将展示型scFv转化为可溶性scFv，然后使用高通量ELISA鉴定单个克隆，则效率更高。pYS1和pYS2载体pYDS1，pYDS1.1和pYDS2的对应物被设计用于可溶性scFv表达。只需使用PCR从富集的展示酵母种群中扩增scFv基因，并与线性化载体pYS1，pYS1.1或pYS2共转化为YVH10酵母菌株，挑选单个克隆，在96个深孔板中培养并诱导，含有scFv的上清液可用于ELISA鉴定。可以从96孔储备液中扩增阳性克隆，以进行大规模scFv纯化以进一步表征。载体pYS1与pYDS1和pYDS1.1配对用于单体scFv表达，而pYS2与pYDS2对用于调光scFv表达。
引用
噬菌体展示载体
pDCK1 （Cat＃：mAb006） 和pDCL1 （Cat＃：mAb007）
载体pDCK1和pDCL1分别包含IgG1的CH1恒定区，kappa和λ恒定区，用于Fab展示，只需将VL / VK和VH克隆到载体中即可。所有恒定区均针对大肠杆菌表达进行了密码子优化，并且为有效消化和连接而设计的所有酶位点均未出现在抗体V基因中。已经为VK / VL和VH克隆酶设计了长填充序列，以进行有效的酶消化。这两个载体也可以用于使用Xba I / Not I消化的噬菌体展示scFv库构建。
引用
pDCK1.1 （Cat＃：mAb008） 和pDCL1.1 （Cat＃：mAb009）
pDCK1.1和pDCL1.1载体分别与pDCK1和pDCL1相同，不同之处在于VK / VL和VH克隆酶的填充序列缩短到9bp，从而可以通过PCR纯化试剂盒方便地纯化消化的载体，而无需人工操作消耗凝胶分离。
引用
双顺反子慢病毒载体
pLENI （Cat＃：mAb010） 和pLEN2A （Cat＃：mAb011）
建立抗原阳性细胞系对于基于细胞的抗体文库淘选和随后验证分离的抗体是必需的。慢病毒载体pLENI和pLEN2A设计用于同时双顺反子表达目的蛋白和EGPF。EGFP将在细胞内表达，以方便观察成功的病毒感染和基因表达，以及通过FACS（荧光激活细胞分选）纯化高表达细胞。如果目的蛋白质是细胞膜蛋白质，则翻译的蛋白质将位于细胞表面。载体pLENI使用IRES（内部核糖体进入位点）序列连接目标基因和EGFP基因，以确保两种蛋白质的mRNA表达水平相同；而载体pLEN2A使用2A序列来确保两种蛋白的蛋白表达水平相同，它会被内体2A位点的酶切割所分离。通过将pLENI或pLEN2A与提供VSVG，REV和Gag / pol蛋白表达的载体共转染到HEK293细胞中，可以轻松制得慢病毒。
引用
大肠杆菌 表达载体
pECO （货号：mAb012）
载体pECO设计用于通过大肠杆菌从强噬菌体T7启动子高水平表达目的基因。所有的酶都是为方便和有效的基因克隆而设计的。没有为此向量设计的标签。为了方便纯化，可以根据需要在目的蛋白的N或C端设计His6标签。IPTG诱导蛋白质表达。
引用
哺乳动物细胞表达载体
pMAM1 （货号：mAb013）
载体pMAM1设计用于在哺乳动物细胞（例如CHO或HEK293细胞）中表达分泌蛋白。强大的CMV启动子驱动蛋白质表达，由B淋巴细胞中大多数抗体分泌固有的VH3信号肽引导，然后是His8标签以方便蛋白质纯化。设计了多个克隆位点中的酶以方便，地克隆基因。重组蛋白可以直接从上清液中纯化。如果使用无血清哺乳动物细胞表达系统，则一步纯化镍树脂可产生高纯度的蛋白质。新基因表达盒允许通过G418选择建立稳定的表达细胞系。
引用
pMAM1-nFc （Cat＃：mAb014） 和pMAM1-cFc （Cat＃：mAb015）
如果血清分泌在细胞外，则无血清哺乳动物表达系统可以方便，地纯化高纯度蛋白质。如果蛋白质是天然分泌蛋白，通常很容易在上清液中表达蛋白质。然而，在许多情况下，细胞内蛋白质或部分蛋白质，例如细胞表面蛋白质的细胞外结构域，很难在分泌途径中表达，这很可能是由于其天然易位机制的改变。难于表达的蛋白质与易表达的蛋白质如Fc的融合是一种解决方案，因为易表达的蛋白质可以充当将难于表达的蛋白质带出细胞的载体。为此目的设计了载体pMAM1-nFc和pMAM1-cFc。它们基于通过在目标蛋白质的N或C末端引入人IgG1 Fc片段来构建pMAM1。为了方便纯化，在融合蛋白的N末端设计了His8标签。为避免Fc与目标蛋白之间可能的构象障碍，在Fc与多克隆位点（MCS）之间设计了柔性（G4S）3接头。还可通过在两个蛋白之间设计的位点通过TEV切割从融合蛋白中去除Fc片段。细胞表面抗原的胞外域的制备通常是非常具有挑战性的。这两个融合载体能够高水平表达大多数细胞表面蛋白的胞外域。
引用
人类VH，VL和VK引物 （货号： mAb 016）
基于大的抗体数据库IMGT，我们设计了一组能够扩增所有人类抗体库的简并引物。正向引物退火至V基因的一框架区，而反向引物退火至J基因。总共为VH设计了7个正向和3个反向引物。为VK设计5个正向和4个反向引物，为VL设计9个正向和5个反向引物。IgM的反向引物也可用于天真的文库构建。
引用
大肠杆菌感受态细胞
*0 （Cat＃：mAb017） （20个反应，价格$ 200，化学）
*0具有化学感受态的大肠杆菌在单个试管中的转化效率为1 x 109 cfu / µg质粒DNA。它们是克隆和质粒繁殖的理想选择。它们允许高拷贝数质粒的稳定复制。
BL21 （Cat＃：mAb018） （20个反应，售价200美元，化学）
BL21化学感受态细胞在单个试管中的转化效率为1 x 108 cfu / µg质粒DNA。BL21大肠杆菌细胞是高水平表达无毒重组蛋白的理想选择。
TG1 （Cat＃：mAb019） （20个反应，售价200美元，电穿孔）
TG1是构建噬菌体展示库的标准细胞。TG1电感受态细胞具有1×1010 cfu / µg质粒DNA的率，非常适合噬菌体展示抗体或肽库的构建。
加载缓冲区
DNA上样缓冲液（10 x） （Cat＃：mAb020）（3 x 1 ml，$ 30）
DNA上样缓冲液（10X）是一种液体缓冲液，可轻松装载和跟踪
琼脂糖或天然聚丙烯酰胺凝胶中的DNA样品。
蛋白质上样缓冲液（6x） （Cat＃：mAb021）（10 ml，$ 15）
Laemmli是一种用于蛋白质电泳和蛋白质印迹的样品缓冲液。将每一体积的6X样品缓冲液添加到五体积的蛋白质样品中，煮沸或加热5-10分钟。