快速DNA连接模块|Hieff NGS®Fast-Pace DNA Ligation Module

发表于2024年7月16日由上海金畔生物科技有限公司

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

Hieff NGS^® Fast-Pace DNA Ligation Module是针对Illumina^®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®测序平台适用的DNA接头，具有连接效率高、简便、可实现自动化等优势。本产品已与Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

产品组分

产品编号	组分名称	规格
产品编号	组分名称	12607ES24	12607ES96
12607-A	Fast-Pace T4 DNA Ligase	120 μL	480 μL
12607-B	5×Fast-Pace Ligation Buffer	480 μL	960×2 μL

测序验证

本品与Hieff NGS^® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，效期一年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途!

使用方法

1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

表1.500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比	Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	10 ng	200:1
100 ng	100:1	1 ng	200:1
50 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，并涡旋混匀几秒钟，瞬离后至于20℃，反应15分钟即可。

表2.Adapter Ligation体系

名称	体积（μL）
dA-tailed DNA	60
5×Fast-Pace Ligation Buffer	20*
Fast-Pace T4 DNA Ligase	5
DNA Adapter	X**
dd2O	To 100

【注】：*对于Ligation Enhancer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。

**根据自身需求加入适量的接头。

【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？

第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；

Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例；

根据表2，查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

综上，接头可添加3.4 μL，加1.6 μL水补齐至5 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）

相关产品

建库试剂盒	产品编号	规格
Hieff NGS^® MaxUp Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina^®	12301ES08/24/96	8/24/96 T
Hieff NGS® MaxUpⅡ DNA Library Prep Kit for Illumina®	12200ES24/96	24/96T
Hieff NGS® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina®	12201ES24/96	24/96T
Hieff NGS® OnePot DNA Library Prep Kit for Illumina®	12203ES24/96	24/96 T
Hieff NGS® Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina®	12206ES08/24/96	8/24/96 T
文库构建磁珠	产品编号	规格
Hieff NGS® cfDNA Clean Beads（100~200 bp）	12599ES08/56	5/60 mL
Hieff NGS® Smarter DNA Clean beads (50 bp以上）	12600ES08/56	5/60 mL
Hieff NGS® DNA Selection Beads（Superior AMPure XP alternative）	12601ES08/56	5/60 mL
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit	12603ES24/96	24/96 T
建库接头	产品编号	规格
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1	12615ES04/16	12×4/12×16 T
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2	12616ES04/16	12×4/12×16 T
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3	12617ES04/16	12×4/12×16 T
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4	12618ES04/16	12×4/12×16 T
Hieff NGS® Tagment Index Kit for Illumina®,(96 Index)	12610ES96	96 T
建库模块	产品编号	规格
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module	12607ES24/96	24/96 T
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module	12608ES24/96	24/96 T
2×Super Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification	12621ES03/08	1/5×1mL
Hieff NGS® Dual-Mode cDNA Synthesis Kit	12250ES24/96	24/96 T
文库定量	产品编号	规格
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix	12302ES05	500 T
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®,DNA Standard (1-6)	12307ES09	6×96 μL
dsDNA HS Assay Kit for Qubit®	12640ES60/76	100/500 T
多重PCR	产品编号	规格
Hieff® Multiplex PCR Kit	12279ES50/76	100/500 T
Hieff® Multiplex PCR Master Mix	12280ES50/76	50 /200 T

HB210810

产品描述

产品组分

产品编号	组分名称	规格
产品编号	组分名称	12607ES24	12607ES96
12607-A	Fast-Pace T4 DNA Ligase	120 μL	480 μL
12607-B	5×Fast-Pace Ligation Buffer	480 μL	960×2 μL

测序验证

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，效期一年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途!

使用方法

表1.500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比	Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	10 ng	200:1
100 ng	100:1	1 ng	200:1
50 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

表2.Adapter Ligation体系

名称	体积（μL）
dA-tailed DNA	60
5×Fast-Pace Ligation Buffer	20*
Fast-Pace T4 DNA Ligase	5
DNA Adapter	X**
dd2O	To 100

【注】：*对于Ligation Enhancer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。

**根据自身需求加入适量的接头。

【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？

第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；

Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例；

根据表2，查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

综上，接头可添加3.4 μL，加1.6 μL水补齐至5 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）

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建库模块	产品编号	规格
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module	12607ES24/96	24/96 T
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module	12608ES24/96	24/96 T
2×Super Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification	12621ES03/08	1/5×1mL
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Hieff® Multiplex PCR Kit	12279ES50/76	100/500 T
Hieff® Multiplex PCR Master Mix	12280ES50/76	50 /200 T

HB210810

Q：这个模块可以搭配哪个试剂盒？

A：OnePot DNA 建库试剂盒（12203）、酶切法建库试剂盒（12205）里接头连接模块跟这个是对应的。

[1] Ma CJ, Li L, Shao WX, et al. An enzyme-mediated bioorthogonal labeling method for genome-wide mapping of 5-hydroxymethyluracil. Chem Sci. 2021;12(42):14126-14132. Published 2021 Oct 4. doi:10.1039/d1sc03812e(IF:9.825)

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Bacteria(G- and G+)) with purification beads

发表于2024年7月14日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Bacteria(G- and G+)) with purification beads

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Plant) with purification beads是利用链霉亲和素标记的磁珠去除被子植物来源总RNA中的核糖体RNA以保留信使RNA（mRNA）和其他非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析的mRNA和非编码RNA，可显著提高测序结果中有效数据比例，也可用于cDNA合成及其它下游应用。

适用范围

适用于被子植物10 ng~1 μg 总RNA样品。

产品组分

组分编号和名称			12262ES04	12262ES24	12262ES96
BOX I	12262-A	PM, Probe Mix	13.5 μL	80 μL	317 μL
BOX II	12262-B	HB, Hybridization buffer	25 μL	150 μL	600 μL
	12262-C	DB, Depletion buffer	800 μL	4.6 mL	18.5 mL
	12262-D	SMB, Streptavidin-coated magnetic beads	176 μL	1056 μL	4.23 mL
	12262-E	PB, Purification beads	795 μL	4.75 mL	19 mL

储存条件

试剂盒BOXI（Probe Mix）-25~-15℃保存，BOXII2~8℃保存，有效期一年。

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染，若样品中有gDNA残留，应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. 使用前，使用的磁珠需提前平衡至室温。

4. 在操作过程种，避免EP管或PCR管管盖开封（孵育过程中）或长时间处于室温状态。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6.本产品仅用作科研用途！

自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率：Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)（Cat#11201）或其他等效产品；

2. 其他材料：无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针、Streptavidin-coated magnetic beads和杂交Buffer从-20°C 取出，解冻后颠倒混匀，探针置于冰上放置，其余试剂平衡至室温备用。

1.2 准备RNA样品：根据投入量和样品浓度，计算RNA取样体积，用Nuclease free H₂O稀释至12 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

表 1 探针杂交反应体系

名称	体积（μL）
Hybridization Buffer	5
Probe Mix	3
Total RNA*	12（10 ng~1 μg）
Total	20

1.4 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中，按照表2所示反应程序，进行探针杂交反应。

表 2 探针杂交反应程序

温度	时间
热盖68°C	On
68℃	10 min
68℃-37℃	0.1℃/s
37℃*	2 min

*注：采用梯度退火之后，需要尽快进入下一操作步骤，严禁PCR程序中出现4℃ hold，否则会影响去除效果。
2. 链酶亲和素磁珠准备

2.1低速涡旋振荡链酶亲和素磁珠使磁珠重悬。

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。

2.3 吸取40 μL Streptavidin-coated magnetic beads于新的PCR管中，将PCR管置于磁力架上，静置2 min；。

2.4待溶液澄清后，去掉所有上清液。

2.5向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后，用移液器吹打10次混匀。

2.6将PCR管置于磁力架上，静置2 min，待溶液澄清后，去上清。

2.7向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后，用移液器吹打10次混匀。

3. rRNA去除

3.1瞬离将步骤1中探针杂交样品离心至管底。

3.2 将步骤2中的链酶亲和素磁珠加入步骤1的样品中，用移液器吹打10次混匀后，置于PCR仪中，按照表3所示反应程序，进行探针捕获。

表3 rRNA去除反应程序

温度	时间
热盖68°C	On
37℃	15 min
50℃	5 min
*立即进入下一步骤

*注：去除反应程序完成后，需要尽快进入下一操作步骤，严禁PCR程序中出现4℃ hold，否则会影响去除效果。
3.3 瞬离将反应液离心至管底。

3.4 将样品管置于磁力架上，静置2 min。

3.5 待溶液澄清后，小心转移上清至新的PCR管中。

3.6 将PCR管置于磁力架上，静置2 min，待溶液澄清后，小心转移上清至新的PCR管中（建议）。

4. RNA纯化

4.1 准备工作：将Purification beads由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。用Nuclease free H₂O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 180 μL Purification beads至上一步产物中，移液器充分吹打混匀，室温孵育 5 min。

4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约3 min），小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中，加入 200 μL Nuclease free H₂O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育 30 sec 后，小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5，总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中，室温下开盖干燥磁珠（5~10 min）。

4.8 RNA洗脱：将PCR 管从磁力架上取下，加入 11 μL Nuclease free H₂O（或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H₂O或洗脱缓冲液），使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置 5 min。

4.9将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约3 min），小心移取 10 μL上清（可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整）至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验，或置于-80℃存放。

Ver.CN20231122

适用范围

适用于被子植物10 ng~1 μg 总RNA样品。

产品组分

组分编号和名称			12262ES04	12262ES24	12262ES96
BOX I	12262-A	PM, Probe Mix	13.5 μL	80 μL	317 μL
BOX II	12262-B	HB, Hybridization buffer	25 μL	150 μL	600 μL
	12262-C	DB, Depletion buffer	800 μL	4.6 mL	18.5 mL
	12262-D	SMB, Streptavidin-coated magnetic beads	176 μL	1056 μL	4.23 mL
	12262-E	PB, Purification beads	795 μL	4.75 mL	19 mL

储存条件

试剂盒BOXI（Probe Mix）-25~-15℃保存，BOXII2~8℃保存，有效期一年。

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染，若样品中有gDNA残留，应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. 使用前，使用的磁珠需提前平衡至室温。

4. 在操作过程种，避免EP管或PCR管管盖开封（孵育过程中）或长时间处于室温状态。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6.本产品仅用作科研用途！

自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率：Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)（Cat#11201）或其他等效产品；

2. 其他材料：无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针、Streptavidin-coated magnetic beads和杂交Buffer从-20°C 取出，解冻后颠倒混匀，探针置于冰上放置，其余试剂平衡至室温备用。

1.2 准备RNA样品：根据投入量和样品浓度，计算RNA取样体积，用Nuclease free H₂O稀释至12 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

表 1 探针杂交反应体系

名称	体积（μL）
Hybridization Buffer	5
Probe Mix	3
Total RNA*	12（10 ng~1 μg）
Total	20

1.4 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中，按照表2所示反应程序，进行探针杂交反应。

表 2 探针杂交反应程序

温度	时间
热盖68°C	On
68℃	10 min
68℃-37℃	0.1℃/s
37℃*	2 min

*注：采用梯度退火之后，需要尽快进入下一操作步骤，严禁PCR程序中出现4℃ hold，否则会影响去除效果。
2. 链酶亲和素磁珠准备

2.1低速涡旋振荡链酶亲和素磁珠使磁珠重悬。

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。

2.3 吸取40 μL Streptavidin-coated magnetic beads于新的PCR管中，将PCR管置于磁力架上，静置2 min；。

2.4待溶液澄清后，去掉所有上清液。

2.5向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后，用移液器吹打10次混匀。

2.6将PCR管置于磁力架上，静置2 min，待溶液澄清后，去上清。

2.7向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后，用移液器吹打10次混匀。

3. rRNA去除

3.1瞬离将步骤1中探针杂交样品离心至管底。

3.2 将步骤2中的链酶亲和素磁珠加入步骤1的样品中，用移液器吹打10次混匀后，置于PCR仪中，按照表3所示反应程序，进行探针捕获。

表3 rRNA去除反应程序

温度	时间
热盖68°C	On
37℃	15 min
50℃	5 min
*立即进入下一步骤

*注：去除反应程序完成后，需要尽快进入下一操作步骤，严禁PCR程序中出现4℃ hold，否则会影响去除效果。
3.3 瞬离将反应液离心至管底。

3.4 将样品管置于磁力架上，静置2 min。

3.5 待溶液澄清后，小心转移上清至新的PCR管中。

3.6 将PCR管置于磁力架上，静置2 min，待溶液澄清后，小心转移上清至新的PCR管中（建议）。

4. RNA纯化

4.1 准备工作：将Purification beads由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。用Nuclease free H₂O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 180 μL Purification beads至上一步产物中，移液器充分吹打混匀，室温孵育 5 min。

4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约3 min），小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中，加入 200 μL Nuclease free H₂O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育 30 sec 后，小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5，总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中，室温下开盖干燥磁珠（5~10 min）。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验，或置于-80℃存放。

Ver.CN20231122

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Bacteria(G- and G+)) with purification beads

暂无内容

cellecta NGS制备试剂盒产品

发表于2024年7月2日由上海金畔生物科技有限公司

Cellecta，Inc.由Clontech Laboratories的科学家之一于2006年4月成立。该公司摆脱了对更高质量，更先进的shRNA和其他慢病毒文库的需求。我们的目标是开发先进的高通量（HT）遗传筛选技术及其在新型治疗靶标和药物的发现和功能表征中的应用。

我们提供各种现成的产品和定制服务，可实现：

（1）使用先进的慢病毒技术进行高度定制的研究，包括定制的和全基因组合并的慢病毒shRNA，CRISPR，CRISPRa / i和条形码库，用于任何慢载体中的任何基因集

（2）汇集慢病毒shRNA和CRISPR sgRNA文库的端到端RNAi和CRISPR遗传筛选服务

（3）用于遗传筛选和其他应用的报道细胞系的开发

（4）自定义稳定的CRISPR敲除，CRISPRa / i敲入/敲除和shRNA敲除以及cDNA表达同基因细胞系

（5）使用靶向PCR和NGS发现生物标记。凭借数十年的高通量功能筛选经验，我们的科学家与意见合作并获得了16种NIH SBIR资助，开发出了一些先进的技术。

Cellecta由一支经验丰富的管理和产品开发团队领导，该团队具有出色的产品开发业绩记录，外部科学合作伙伴网络以及在新公司运营方面的先前经验。该公司位于硅谷中心的加利福尼亚州芒廷维尤（Mountain View），位于生物技术湾地区，靠近一些著名的研究公司和生命科学研究所，包括Genentech（Roche），斯坦福大学和加利福尼亚大学，旧金山。

尽管Cellecta是一家小型私人公司，但它与庞大的协作者，顾问和同事网络相连，在其专业研究领域拥有广泛的知识库。Cellecta已与包括Roswell Park癌症研究所，Fred Hutchinson癌症研究中心（FHCRC），Scripps研究所（TSRI），哈佛大学公共卫生学院，塔夫茨大学和健康研究公司在内的著名科学家和机构合作并发表论文。

cellecta NGS制备试剂盒产品

NGS Prep Kit for sgRNA, shRNA, and DNA Barcode Libraries

一。用于sgRNA、shRNA和DNA条形码库的NGS准备工具包
背景
Cellecta的NGS制备试剂盒提供了PCR扩增和NGS测序的协议和试剂，这些扩增和测序是从用几种Cellecta CRISPR sgRNA、双sgRNA、shRNA和条形码库以及其他来源的一些类似库筛选的细胞群基因组DNA中提取的效应器或条形码插入物。提供足够的试剂，用*的索引引物处理12-48个DNA样本（取决于DNA/样本的数量），在一条车道上可复用多达12个样本。根据用于屏幕的特定库，可以使用多个版本的NGS准备工具包，每个版本都包含目标库的适当引物。为了复用更多的样本，每个测序试剂盒还提供了附加12个索引引物的辅助引物集。

Cat.#	Description
LNGS-101	NGS Prep Kit for shRNA Libraries in pRSI12 (DECIPHER)
LNGS-102	NGS Prep Kit for shRNA Libraries in pRSI16cb/17cb (HGW shRNA) (or pRSI16/17)
LNGS-120	NGS Prep Kit for sgRNA Libraries in pRSG16/17 (CRISPR KOHGW)
LNGS-130	NGS Prep Kit for sgRNA Libraries in pRSGT16/17
LNGS-200	NGS Prep Kit for Barcode Libraries in pRSI16/17 (CloneTracker™ 50M)
LNGS-300	NGS Prep Kit for Barcode Libraries in pScribe (CloneTracker XP™)
LNGS-350	NGS Prep Kit for CRISPR-Barcode Libraries in pRSGScribe (CloneTracker™ XP-CRISPR)
LNGS-400	NGS Prep Kit for Dual-sgRNA Libraries in pRSL10 (KADHGW/KIDHGW)
LNGS-900	NGS Prep Kit for sgRNA Libraries in LentiGuide (GeCKO, Brunello)
LNGS-905	NGS Prep Kit for sgRNA Libraries in LentiCRISPRv2 (GeCKO, Brunello Kinome)

辅助底漆

Cat.#	Description
LNGS-101-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-101 (12 Additional Index Primers)
LNGS-102-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-102 (12 Additional Index Primers)
LNGS-120-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-120 (12 Additional Index Primers)
LNGS-130-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-130 (12 Additional Index Primers)
LNGS-200-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-200 (12 Additional Index Primers)
LNGS-300-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-300 (12 Additional Index Primers)
LNGS-350-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-350 (12 Additional Index Primers)
LNGS-400-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-400 (12 Additional Index Primers)
LNGS-900-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-900 (12 Additional Index Primers)
LNGS-905-SP	Supplementary Primer Set for LNGS-905 (12 Additional Index Primers)

Swift Accel-NGS XL试剂盒

发表于2024年6月25日由上海金畔生物科技有限公司

世界*实验材料供应商 Swift Biosciences上海金畔生物为其中国代理， Swift Biosciences在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， Swift Biosciences就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

Swift Biosciences中国代理, Swift Biosciences上海代理， Swift Biosciences北京代理，Swift Biosciences广东代理， Swift Biosciences江苏代理Swift Biosciences湖北代理,Swift Biosciences天津,Swift Biosciences黑龙江代理,Swift Biosciences内蒙古代理,Swift Biosciences吉林代理,Swift Biosciences福建代理, Swift Biosciences江苏代理, Swift Biosciences浙江代理, Swift Biosciences四川代理,

Swift Biosciences是一家生物技术公司，正在开发新的分子生物学技术，以更好地表征和理解基因组。我们是一个精力充沛，高度创新的公司，专注于创造推动DNA测序科学的工具。我们的产品旨在帮助客户分析经常与翻译工作相关的挑战性样品，包括循环，无细胞DNA和福尔马林固定的石蜡包埋样品。

斯威夫特创新的科学家和高管团队在加入发现方面拥有强大的记录，具有开展新应用和市场功能的功能。我们的产品开发是有目的的，专注于创造客户及其目标行业受到好评的产品。斯威夫特的使命是为世界各地的个人及其社区的健康提供长期的改善，特别是在抗击癌症和了解遗传疾病的复杂性方面。我们努力开发的工具直接适用于农业，生物技术，宏基因组学和制药行业的研究。

该公司成立于2010年，由具有成功业务历史和经验丰富的生命科学投资者支持的科学家团队成立。我们不断发展壮大的科学家团队开发的创新流程为基因组学领域的翻译研究生成了多项经过验证的产品，我们期待着为我们的产品组合添加新的技术和产品。

Accel-NGS® XL Library Kit for Pacific Biosciences®

Reliable Long-Read Sequencing Solutions for Genome Assembly and Genomic Phasing

Get Better Quality Genome Assemblies. Faster.

The Swift Biosciences Accel-NGS XL Library Kit designed for the Pacific Biosciences (PacBio®) platform is the fastest sequencing solution for genome assembly and haplotype sequencing on PacBio platforms. Long-read sequencing technology provides better coverage to sequence difficult genomic regions including low complexity, repetitive elements, or large structural variation. Until now, the standard protocol has had a long workflow that reduces your productivity.

The Accel-NGS XL Library Kit for PacBio is a novel library preparation kit optimized for Pacific Biosciences’ Single Molecule, Real-Time (SMRT®) sequencing. It provides significantly longer read lengths from less sample input along with a simple workflow to accelerate your path to discovery. At the core, this library prep kit leverages Swift’s enhanced repair and ligation chemistry to produce a high library conversion rate, while simultaneously preventing adapter dimer formation and preserving DNA integrity.

This kit replaces the PacBio SMRTbell™ Template Prep Kit and works in conjunction with the PacBio DNA Polymerase Binding and MagBead loading kits. It is compatible with the PacBio RS II and Sequel™ platforms and contains sufficient material for constructing 16 sequencing libraries.

Features:

Generates average read length up to 20 kb
Ready-to-sequence libraries in 1 day
Simple assay for whole genome sequencing
Inputs as low as 2 µg

Benefits:

Improve your genomic assembly with longer read lengths
Double your productivity with libraries generated in a single day
Reduce labor cost and error rates with less sample processing
Compatible with a wider range of sample input amounts

货号	品名	品牌
71016	Accel-NGS XL Library Kit (16 rxns)	Swift Biosciences

NGS一链合成试剂盒 1st Strand Synthesis Kit

发表于2024年6月25日由上海金畔生物科技有限公司

NGS一链合成试剂盒 1st Strand Synthesis Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS^®1st cDNA Synthesis Kit可用于全长一链cDNA的合成。其产物可以经过二链cDNA的合成后，直接进行测序接头的连接，构建测序文库。

产品组分

组分编号和名称		12249ES08	12249ES24	12249ES96
12249-A	Random Primer	16 μL	48 μL	192 μL
12249-B	1st Strand Enzyme Mix	16 μL	48 μL	192 μL
12249–C	10×1st Reaction Buffer	16 μL	48 μL	192 μL

运输与保存方法

干冰运输，-20°C存放。效期1年。

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. 建库需要的其他试剂需自备或另外购买。

3.本产品仅用作科研用途！

使用方法

Step 1 RNA变性

1. 将 Random Primer 室温解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。按照表1配置反应液：

表1 RNA预变性反应体系

名称	体积（μL）
Random Primer	2
RNA	14
Total	16

2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖80℃）70℃，5 min；立即置于冰上3 min。

Step 2 第一链cDNA的合成（1^st Strand Synthesis）

1. 将第一链合成试剂从-20°C取出，室温解冻，颠倒混匀后瞬离。按表2所示，配制第一链cDNA合成的反应液。

表2 第一链cDNA合成反应体系

名称	体积（μL）
变性的RNA	16
10×1st Reaction Buffer	2
1st Strand Enzyme Mix	2
Total	20

2.使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖105℃）25℃，5 min；37℃，45 min；85℃，5 s；4℃，hold。

3. 产物可直接用于二链cDNA的合成或于-80℃暂存。

HB220401

Hieff NGS^®1st cDNA Synthesis Kit可用于全长一链cDNA的合成。其产物可以经过二链cDNA的合成后，直接进行测序接头的连接，构建测序文库。

产品组分

组分编号和名称		12249ES08	12249ES24	12249ES96
12249-A	Random Primer	16 μL	48 μL	192 μL
12249-B	1st Strand Enzyme Mix	16 μL	48 μL	192 μL
12249–C	10×1st Reaction Buffer	16 μL	48 μL	192 μL

运输与保存方法

干冰运输，-20°C存放。效期1年。

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. 建库需要的其他试剂需自备或另外购买。

3.本产品仅用作科研用途！

使用方法

Step 1 RNA变性

1. 将 Random Primer 室温解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。按照表1配置反应液：

表1 RNA预变性反应体系

名称	体积（μL）
Random Primer	2
RNA	14
Total	16

2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖80℃）70℃，5 min；立即置于冰上3 min。

Step 2 第一链cDNA的合成（1^st Strand Synthesis）

1. 将第一链合成试剂从-20°C取出，室温解冻，颠倒混匀后瞬离。按表2所示，配制第一链cDNA合成的反应液。

表2 第一链cDNA合成反应体系

名称	体积（μL）
变性的RNA	16
10×1st Reaction Buffer	2
1st Strand Enzyme Mix	2
Total	20

2.使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖105℃）25℃，5 min；37℃，45 min；85℃，5 s；4℃，hold。

3. 产物可直接用于二链cDNA的合成或于-80℃暂存。

HB220401

暂无内容

[1] Cheng GF, Kong WG, Zhai X, et al. Molecular cloning and expression analysis of CD79a and CD79b in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) after bacterial, parasitic, and viral infection. Fish Shellfish Immunol. 2021;118:385-395. doi:10.1016/j.fsi.2021.09.022(IF:4.581)

Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads 链霉亲和素磁珠

发表于2024年5月24日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads 链霉亲和素磁珠

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS^® Hyper Enrichment Beads是以亲水超顺磁性磁珠与高纯度链霉亲和素共价偶联而成的链霉亲和素磁珠。基于链霉亲和素-生物素系统具有极高亲和力的原理，本产品可快速高效地结合生物素修饰的核酸，适用于核酸杂交捕获。磁珠粒径均一，形态规整，具有良好的重复性和批间稳定性。

组分信息

组分编号	组分名称	12248ES04	12248ES16	12248ES96
12248	Hyper Enrichment Beads	500 μL	1 mL	5 mL

储存条件

2~8℃保存，有效期1年。

使用说明

与Hieff NGS^® Hyb & Wash Kit杂交捕获系列产品(Cat#12245)配套使用。

注意事项

1.请勿将磁珠置于0℃以下存放，使用前应将磁珠平衡至室温。

2. 吸取磁珠前应确保磁珠溶液充分涡旋混匀，避免剧烈振荡。

3. 吸取磁珠时应选择低吸附枪头，防止因磁珠沾附枪头而造成损失。

4. 避免磁珠高转速离心或长时间置于磁力架上，造成磁珠聚集。

5. 干燥时间过长会导致磁珠龟裂，影响捕获效率。

6. 长时间孵育会造成部分磁珠聚集，可轻弹管底重悬磁珠。

7. 加洗涤缓冲液后，建议使用移液器轻轻吹打混匀，避免产生气泡。

8. 本产品仅作科研用途。

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230509

组分信息

组分编号	组分名称	12248ES04	12248ES16	12248ES96
12248	Hyper Enrichment Beads	500 μL	1 mL	5 mL

储存条件

2~8℃保存，有效期1年。

使用说明

与Hieff NGS^® Hyb & Wash Kit杂交捕获系列产品(Cat#12245)配套使用。

注意事项

1.请勿将磁珠置于0℃以下存放，使用前应将磁珠平衡至室温。

2. 吸取磁珠前应确保磁珠溶液充分涡旋混匀，避免剧烈振荡。

3. 吸取磁珠时应选择低吸附枪头，防止因磁珠沾附枪头而造成损失。

4. 避免磁珠高转速离心或长时间置于磁力架上，造成磁珠聚集。

5. 干燥时间过长会导致磁珠龟裂，影响捕获效率。

6. 长时间孵育会造成部分磁珠聚集，可轻弹管底重悬磁珠。

7. 加洗涤缓冲液后，建议使用移液器轻轻吹打混匀，避免产生气泡。

8. 本产品仅作科研用途。

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230509

Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads 链霉亲和素磁珠

暂无内容

biochain CancerSeq™NGS的特征

发表于2024年4月16日由上海金畔生物科技有限公司

biochain CancerSeq™NGS的特征

BioChain的CancerSeq福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织是已经针对单核苷酸多态性（SNP），插入和缺失（indels）和拷贝数变异（CNV）进行了广泛筛选的癌症组织样品。使用癌症基因组进行靶向下一代测序（NGS），以鉴定突变和突变热点。这些组织是验证，基因分型或鉴定新突变热点的理想选择。

CancerSeq™ Paraffin Tissue Tumor Block: Colon$3,823.00

Catalog #
T2235090-SB
Size
1 Block

CancerSeq™ Paraffin Tissue Tumor Block: Lung$3,823.00

Catalog #
T2235152-SB
Size
1 Block

CancerSeq™ Paraffin Tissue Tumor Slides: Breast$545.00

Catalog #
T2235086-ST
Size
5 Slides
Lot #
B811040

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
B906042

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
B906043

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
B906046

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
B911205

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
B911206

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
B911243

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
B911244

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
C101100

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
C101103

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
C101104

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
C101105

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
C101106

CancerSeq™ Plus Paraffin Tissue Tumor Section: Lung$742.00

Catalog #
T2235152-SC
Size
5 Curls
Lot #
C101108

NGS文库转换试剂盒|Universal Library Convert Kit

发表于2024年3月17日由上海金畔生物科技有限公司

NGS文库转换试剂盒|Universal Library Convert Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

该试剂盒可以将Illumina试剂盒构建的双链线性文库转化为兼容华大智造测序平台的环状ssDNA文库。构建的文库可使用BGISEQ-500RS、 MGISEQ-200RS 和 MGISEQ-2000RS 进行测序。

产品组分

组分编号与名称		13342ES16	13342ES96
13342-A	AC-PCR Amplification mix	400 μL	2×1200 μL
13342-B	AC-PCR Primer mix	16 μL	96 μL
13342-C	App-A Splint Buffer	240 μL	2×720 μL
13342-D	Ligase	80 μL	480 μL
13342-E	Digestion Buffer	130 μL	780 μL
13342-F	Digestion Enzyme	32 μL	192 μL

运输与保存方法

干冰运输。

所有组分-20°C保存，有效期1年。

*当运输条件、储存条件及使用方式都正确时，所有组分在有效期内均能保持完整活性。

注意事项

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡，剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染，推荐使用带滤芯的枪头，吸取不同样品时请更换枪头。

5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

6. 定时对各实验区域进行清洁（使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理），以保证实验环境的洁净度。

7. 本产品仅作科研用途！

二、样本要求及处理

2.1样本要求

样本为线性dsDNA文库，接头序列符合下列之一：

单index：

5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-TCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-Insert-AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC-[i7]-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3'

双index：

5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-insert-AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC-[i7]-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3'

线性dsDNA文库插入片段范围为 100 ~ 500 bp，同时主带集中在±100 bp 以内。

2.2 样本量要求

根据文库总量选择合适的线性dsDNA投入量，详见表1：

表1 线性dsDNA总量与浓度要求

线性dsDNA文库投入量(ng)	线性dsDNA文库总量(ng)	线性dsDNA文库浓度要求(ng/μl)
10	≤25	＞0.45
25	25＜文库总量＜50	1＜文库浓度＜2.1
50	＞50	＞2.1

2.3 转换PCR

不同线性 dsDNA 文库投入量，所需 PCR 循环也不相同，详见表2：

表2 不同线性dsDNA投入量PCR循环数推荐表

线性dsDNA文库投入量(ng)	推荐PCR循环数
10	8
25	7
50	6

2.4 转换文库pooling要求

1. 不推荐在转换PCR前对线性dsDNA进行pooling。

2. 需将接头转换 PCR 产物混合测序，则 Sample Barcode Pooling 应遵循碱基平衡的原则：最佳平衡状态 ATGC 4种碱基的占比应分别为 25% ，若不能达到 25%，则要保证每个 cycle 都存在 ATGC 四种碱基序列，并且最少的碱基不应低于 12.5%，最多的碱基不应高于 62.5%。

3. 不同片段长度的文库不建议 pooling 环化。

4. 若样本所需数据量相同且长度相同，则可以等量混合，每个样本所需的质量按照公式1进行计算：

公式1混合样本中单个样本所需质量的计算

单个样本所需的质量 (ng)=1 pmol Input DNA 对应的质量 (ng）/混合的样本个数 N

5. 混合后接头转换 PCR 产物总量为 1 pmol，总体积最多为 40 μL；若文库不足则用 TE buffer补充至 40 μL

三、关于磁珠纯化（Bead-based Clean Up）

1. 磁珠使用前应先平衡至室温，否则会导致纯化得率下降。

2. 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。

3. 磁珠漂洗使用的80%乙醇应现用现配，否则将影响回收效率。

4. 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应；过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下，室温干燥约5 min。

5. 单链环产物纯化保存，可使用TE Buffer洗脱，产物可于-20°C可保存1个月。

四、关于文库质检（Library Quality Analysis）

1. 转换文库推荐使用 Qubit® dsDNA HS Assay Kit 或 Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit 等双链 DNA 进行定量，要求最终接头转换 PCR产物的摩尔产量至少为 1 pmol，可根据公式2计算或参考表2。

公式2 PCR 产物摩尔数与质量间的换算

1 pmol PCR 产物对应的质量 (ng)=DNA 主片段大小 (bp)×0.66

表3 不同片段大小PCR产物1 pmol对应产量

PCR产物主片段大小（bp）	1 pmol对应产量（ng）
300	198
350	231
400	264
450	297
500	330

2. 单链环产物纯化后推荐使用 Qubit® ssDNA Assay Kit 单链 DNA 荧光染料试剂对纯化后产物进行定量。
3. 单链环状 DNA 产物纯化后产量应达到 60 fmol 以上方足够一次上机测序的量，可根据公式3计算或参考表3 。

公式 3 单链环摩尔数与质量间的换算
60 fmol 单链环对应的质量 (ng)=0.06×DNA 主片段大小 (bp)×0.33

表4 不同PCR产物片段大小对应60 fmol单链环产量

PCR产物主片段大小（bp）	60 fmol对应产量（ng）
300	5.94
350	6.93
400	7.92
450	8.91
500	9.90

使用方法

一、自备材料

1. 纯化磁珠：Cat#12601，Hieff NGS® DNA Selection Beads或Cat#A63880，AMPure XP Beads或其他等效产品。

2. 文库质控：Cat#12640，dsDNA HS Assay Kit for Qubit®或Cat#12642，1×dsDNA HS Assay kit for Qubit®或其他等效产品。

3. 单链环质控：Cat # Q10212, Thermo fisher Qubit® ssDNA Assay Kit或其他等效产品。

3. 其他材料：无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer（10 mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5+0.1 mM EDTA）、低吸附EP管、PCR管、磁力架、PCR仪等。
二、操作流程

图1 通用文库转换流程

三、操作步骤

Part A接头转换PCR

1.转换PCR

该步骤对线性dsDNA文库进行转换-转化为可以进行后续环化的线性dsDNA文库。

将表5中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。

于无菌PCR管中配制表5所示反应体系。

表5 转换PCR扩增反应体系

名称	体积（μL）
AC-PCR Amplification Mix	25
AC-PCR Primer Mix	1
线性dsDNA 文库
ddH2O
Total	50

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底。

4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表6所示反应程序，进行PCR扩增。

表6 PCR扩增反应程序

温度	时间	循环数
98°C	1 min	1
98°C	10 sec	参照注意事项中表2
60°C	30 sec
72°C	30 sec
72°C	5 min	1
4°C	Hold	–

2、转换PCR产物纯化

1. 准备工作：将Hieff NGS® DNA Selection Beads磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取45 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads（0.9×，Beads : DNA=0.9:1）至Adapter Ligation产物中，室温孵育5 min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约5 min），小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中，加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec后，小心移除上清。

6. 重复步骤5，总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中，开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂（不超过5 min）。

8. 将PCR管从磁力架中取出，进行洗脱：加入32 μL TE buffer，涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置5 min。

9. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后（约5 min），小心转移30 μL上清至干净的管中。

3、转换PCR产物质检

使用 Qubit® dsDNA HS Assay Kit 等转换PCR产物进行定量，具体请参见注意事项四。

Part B 转换文库环化

1 变性

1. 根据文库长度，取1 pmol 至 0.2 ml PCR 管中，用 TE Buffer 补充至总体积 40 μL。

4. 混匀后，在 PCR 仪上进行 98℃变性 3 min，之后立即置于冰上，冰浴 2 min 后瞬时离心。

2 单链环化

1. 将表7中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表7反应体系。

表7 单链环化体系

名称	体积（μL）
上一步反应物	40
App-A Splint Buffer	15
Ligase	5
Total	60

3.使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将PCR管置于PCR仪上，按照表8所示摄制反应程序，进行单链环化反应。

表8 单链环化反应程序

温度	时间
热盖105°C	OFF
37°C	15 min
4°C	Hold

3 酶切消化

1. 将表9中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表9所示反应体系。

表9 酶切消化体系

名称	体积（μL）
上一步反应物	60
Digestion Buffer	8
Digestion Enzyme	2
Total	70

3. 使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将PCR管置于PCR仪上，按照表10的条件进行反应：

表10 酶切消化反应程序

温度	时间
热盖105°C	OFF
37°C	10 min
4°C	Hold

5. 反应结束后，瞬时离心，立即进行纯化。

4 消化产物纯化

该步骤使用磁珠对3.3步骤的产物进行纯化。

1. 准备工作：将Hieff NGS® DNA Selection Beads或 Beckman AMPure XP Beads由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取120 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads至消化产物中，室温孵育10min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约2 min），小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中，加入500μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec后，小心移除上清。

6. 重复步骤5，总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中，开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂。

8. 将PCR管从磁力架中取出，加入22 μL TE Buffer，涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置10 min。

9. 短暂离心，将 PCR 管始终置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约 2min），将上清小心移至新 PCR 管中， -20℃保存，待制备 DNB。

5 消化产物质控

使用Qubit® ssDNA Assay Kit荧光试剂对酶切消化产物进行定量，具体请参见注意事项四。

HB220117

产品组分

组分编号与名称		13342ES16	13342ES96
13342-A	AC-PCR Amplification mix	400 μL	2×1200 μL
13342-B	AC-PCR Primer mix	16 μL	96 μL
13342-C	App-A Splint Buffer	240 μL	2×720 μL
13342-D	Ligase	80 μL	480 μL
13342-E	Digestion Buffer	130 μL	780 μL
13342-F	Digestion Enzyme	32 μL	192 μL

运输与保存方法

干冰运输。

所有组分-20°C保存，有效期1年。

*当运输条件、储存条件及使用方式都正确时，所有组分在有效期内均能保持完整活性。

注意事项

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡，剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染，推荐使用带滤芯的枪头，吸取不同样品时请更换枪头。

5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

6. 定时对各实验区域进行清洁（使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理），以保证实验环境的洁净度。

7. 本产品仅作科研用途！

二、样本要求及处理

2.1样本要求

样本为线性dsDNA文库，接头序列符合下列之一：

单index：

5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-TCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-Insert-AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC-[i7]-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3'

双index：

5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-insert-AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC-[i7]-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3'

线性dsDNA文库插入片段范围为 100 ~ 500 bp，同时主带集中在±100 bp 以内。

2.2 样本量要求

根据文库总量选择合适的线性dsDNA投入量，详见表1：

表1 线性dsDNA总量与浓度要求

线性dsDNA文库投入量(ng)	线性dsDNA文库总量(ng)	线性dsDNA文库浓度要求(ng/μl)
10	≤25	＞0.45
25	25＜文库总量＜50	1＜文库浓度＜2.1
50	＞50	＞2.1

2.3 转换PCR

不同线性 dsDNA 文库投入量，所需 PCR 循环也不相同，详见表2：

表2 不同线性dsDNA投入量PCR循环数推荐表

线性dsDNA文库投入量(ng)	推荐PCR循环数
10	8
25	7
50	6

2.4 转换文库pooling要求

1. 不推荐在转换PCR前对线性dsDNA进行pooling。

3. 不同片段长度的文库不建议 pooling 环化。

4. 若样本所需数据量相同且长度相同，则可以等量混合，每个样本所需的质量按照公式1进行计算：

公式1混合样本中单个样本所需质量的计算

单个样本所需的质量 (ng)=1 pmol Input DNA 对应的质量 (ng）/混合的样本个数 N

5. 混合后接头转换 PCR 产物总量为 1 pmol，总体积最多为 40 μL；若文库不足则用 TE buffer补充至 40 μL

三、关于磁珠纯化（Bead-based Clean Up）

1. 磁珠使用前应先平衡至室温，否则会导致纯化得率下降。

2. 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。

3. 磁珠漂洗使用的80%乙醇应现用现配，否则将影响回收效率。

5. 单链环产物纯化保存，可使用TE Buffer洗脱，产物可于-20°C可保存1个月。

四、关于文库质检（Library Quality Analysis）

公式2 PCR 产物摩尔数与质量间的换算

1 pmol PCR 产物对应的质量 (ng)=DNA 主片段大小 (bp)×0.66

表3 不同片段大小PCR产物1 pmol对应产量

PCR产物主片段大小（bp）	1 pmol对应产量（ng）
300	198
350	231
400	264
450	297
500	330

公式 3 单链环摩尔数与质量间的换算
60 fmol 单链环对应的质量 (ng)=0.06×DNA 主片段大小 (bp)×0.33

表4 不同PCR产物片段大小对应60 fmol单链环产量

PCR产物主片段大小（bp）	60 fmol对应产量（ng）
300	5.94
350	6.93
400	7.92
450	8.91
500	9.90

使用方法

一、自备材料

1. 纯化磁珠：Cat#12601，Hieff NGS® DNA Selection Beads或Cat#A63880，AMPure XP Beads或其他等效产品。

2. 文库质控：Cat#12640，dsDNA HS Assay Kit for Qubit®或Cat#12642，1×dsDNA HS Assay kit for Qubit®或其他等效产品。

3. 单链环质控：Cat # Q10212, Thermo fisher Qubit® ssDNA Assay Kit或其他等效产品。

3. 其他材料：无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer（10 mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5+0.1 mM EDTA）、低吸附EP管、PCR管、磁力架、PCR仪等。
二、操作流程

图1 通用文库转换流程

三、操作步骤

Part A接头转换PCR

1.转换PCR

该步骤对线性dsDNA文库进行转换-转化为可以进行后续环化的线性dsDNA文库。

将表5中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。

于无菌PCR管中配制表5所示反应体系。

表5 转换PCR扩增反应体系

名称	体积（μL）
AC-PCR Amplification Mix	25
AC-PCR Primer Mix	1
线性dsDNA 文库
ddH2O
Total	50

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底。

4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表6所示反应程序，进行PCR扩增。

表6 PCR扩增反应程序

温度	时间	循环数
98°C	1 min	1
98°C	10 sec	参照注意事项中表2
60°C	30 sec
72°C	30 sec
72°C	5 min	1
4°C	Hold	–

2、转换PCR产物纯化

1. 准备工作：将Hieff NGS® DNA Selection Beads磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取45 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads（0.9×，Beads : DNA=0.9:1）至Adapter Ligation产物中，室温孵育5 min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约5 min），小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中，加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec后，小心移除上清。

6. 重复步骤5，总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中，开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂（不超过5 min）。

8. 将PCR管从磁力架中取出，进行洗脱：加入32 μL TE buffer，涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置5 min。

9. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后（约5 min），小心转移30 μL上清至干净的管中。

3、转换PCR产物质检

使用 Qubit® dsDNA HS Assay Kit 等转换PCR产物进行定量，具体请参见注意事项四。

Part B 转换文库环化

1 变性

1. 根据文库长度，取1 pmol 至 0.2 ml PCR 管中，用 TE Buffer 补充至总体积 40 μL。

4. 混匀后，在 PCR 仪上进行 98℃变性 3 min，之后立即置于冰上，冰浴 2 min 后瞬时离心。

2 单链环化

1. 将表7中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表7反应体系。

表7 单链环化体系

名称	体积（μL）
上一步反应物	40
App-A Splint Buffer	15
Ligase	5
Total	60

3.使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将PCR管置于PCR仪上，按照表8所示摄制反应程序，进行单链环化反应。

表8 单链环化反应程序

温度	时间
热盖105°C	OFF
37°C	15 min
4°C	Hold

3 酶切消化

1. 将表9中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表9所示反应体系。

表9 酶切消化体系

名称	体积（μL）
上一步反应物	60
Digestion Buffer	8
Digestion Enzyme	2
Total	70

3. 使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将PCR管置于PCR仪上，按照表10的条件进行反应：

表10 酶切消化反应程序

温度	时间
热盖105°C	OFF
37°C	10 min
4°C	Hold

5. 反应结束后，瞬时离心，立即进行纯化。

4 消化产物纯化

该步骤使用磁珠对3.3步骤的产物进行纯化。

1. 准备工作：将Hieff NGS® DNA Selection Beads或 Beckman AMPure XP Beads由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3. 吸取120 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads至消化产物中，室温孵育10min。

4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约2 min），小心移除上清。

5. 保持PCR管始终置于磁力架中，加入500μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec后，小心移除上清。

6. 重复步骤5，总计漂洗两次。

7. 保持PCR管始终置于磁力架中，开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂。

8. 将PCR管从磁力架中取出，加入22 μL TE Buffer，涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置10 min。

9. 短暂离心，将 PCR 管始终置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约 2min），将上清小心移至新 PCR 管中， -20℃保存，待制备 DNB。

5 消化产物质控

使用Qubit® ssDNA Assay Kit荧光试剂对酶切消化产物进行定量，具体请参见注意事项四。

HB220117

NGS文库转换试剂盒|Universal Library Convert Kit

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Hieff NGS®高通量文库构建专用配套试剂盒set3|Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®,Set 3

发表于2024年3月16日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff NGS®高通量文库构建专用配套试剂盒set3|Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®,Set 3

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述
Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina®是针对Illumina®高通量文库构建专用配套试剂盒，共分为4个Set，每个Set中包含12种不同的Barcode接头，适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度保证了文库构建的稳定性和可重复性。

产品组分

编号	组分	产品规格
编号	组分	12×4T	12×16 T
12615	DNA Adapter 1-12	12 μL each	48 uL each
12616	DNA Adapter 13-24	12 μL each	48 uL each
12617	DNA Adapter 25-36	12 μL each	48 uL each
12618	DNA Adapter 37-48	12 μL each	48 uL each

运输和保存方法

冰袋运输，-20℃保存，有效期18个月。

注意事项

1）本试剂盒中DNA Adapter的浓度统一为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，可短暂存放于4℃。

3）小规格试剂盒（12×4 T）每种组分的DNA Adapter包装量足够进行4个DNA文库构建，共计足够进行48个DNA文库构建，大规格试剂盒（12×16 T）每种组分的DNA Adapter包装量足够进行16个DNA文库构建，共计足够进行192个DNA文库构建。

4）使用Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下：

5’ – Universal Adapter – Insert DNA Sequence – DNA Barcode Adapter- 3’

5）试剂盒中提供的每种DNA Adapter中都包含Universal Adapter，且提供一种Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

DNA Adapter的序列如下：

Universal Adapter：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’

Barcode Adapter：5’-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXX1ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’

1XXXXXX表示接头的Barcode区域，其在每个接头中的序列见下表。测序前在Sample Sheet中只需输入这个Barcode序列（6 bp）即可。

名称	序列	名称	序列
DNA Adapter 1	CGATGT	DNA Adapter 25	ACTGAT
DNA Adapter 2	TGACCA	DNA Adapter 26	ATGAGC
DNA Adapter 3	ACAGTG	DNA Adapter 27	ATTCCT
DNA Adapter 4	GCCAAT	DNA Adapter 28	CAAAAG
DNA Adapter 5	CAGATC	DNA Adapter 29	CAACTA
DNA Adapter 6	CTTGTA	DNA Adapter 30	CACCGG
DNA Adapter 7	ATCACG	DNA Adapter 31	CACGAT
DNA Adapter 8	TTAGGC	DNA Adapter 32	CACTCA
DNA Adapter 9	ACTTGA	DNA Adapter 33	CAGGCG
DNA Adapter 10	GATCAG	DNA Adapter 34	CATGGC
DNA Adapter 11	TAGCTT	DNA Adapter 35	CATTTT
DNA Adapter 12	GGCTAC	DNA Adapter 36	CCAACA
DNA Adapter 13	AGTCAA	DNA Adapter 37	CGGAAT
DNA Adapter 14	AGTTCC	DNA Adapter 38	CTAGCT
DNA Adapter 15	ATGTCA	DNA Adapter 39	CTATAC
DNA Adapter 16	CCGTCC	DNA Adapter 40	CTCAGA
DNA Adapter 17	GTAGAG	DNA Adapter 41	GCGCTA
DNA Adapter 18	GTCCGC	DNA Adapter 42	TAATCG
DNA Adapter 19	GTGAAA	DNA Adapter 43	TACAGC
DNA Adapter 20	GTGGCC	DNA Adapter 44	TATAAT
DNA Adapter 21	GTTTCG	DNA Adapter 45	TCATTC
DNA Adapter 22	CGTACG	DNA Adapter 46	TCCCGA
DNA Adapter 23	GAGTGG	DNA Adapter 47	TCGAAG
DNA Adapter 24	GGTAGC	DNA Adapter 48	TCGGCA

推荐Barcode组合：

2个样本：可使用（4, 6）、或（3, 19）。

3个样本：可使用（4, 6, 其他任意1个barcode）、或（3, 19, 其他任意1个barcode）、或（1, 5, 19）、或（3, 12, 15）等。

4个样本：可使用（4, 6, 其他任意2个barcode）、或（3, 19, 其他任意2个barcode）、或（3, 4, 6, 19）、或（1, 2, 5, 16）等。

质量控制

Hieff NGS®高通量文库构建专用配套试剂盒set3|Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®,Set 3
图. 接头Agilent 2100检测图。

相关产品

接头类型		货号	名称	规格	价格（元）
短接头	单端 96 Index	12611ES02	Hieff NGS^® 96 Single Index Primer Kit for Illumina^® , Set 1（48种）	48×2 T	1493
	单端 96 Index	12612ES02	Hieff NGS^® 96 Single Index Primer Kit for Illumina^® , Set 2（48种）	48×2 T	1493
	双端 384 Index	12613ES02	Hieff NGS^® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina^® ，Set 1（96 种）	96×2 T	2753
	双端 384 Index	12614ES02	Hieff NGS^® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina^® ，Set 2（96 种）	96×2 T	2753
完整接头		12615ES04/16	Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina^®, Set 1	12×4/ 12×16 T	1256/4526
		12616ES04/16	Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina^®, Set 2	12×4/ 12×16 T	1256/4536
		12617ES04/16	Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina^®, Set 3	12×4/ 12×16 T	1256/4536
		12618ES04/16	Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina^®, Set 4	12×4/ 12×16 T	1256/4536
Tn5接头		12610ES96	Hieff NGS^® Tagment Index Kit for Illumina^®(96 Index)	96 T	1365

HB220530

Q：构建得到的文库产量低的原因？

A：1、DNA 质量低，样本中含抑制物（抑制酶活性等）

Input DNA 制备过程中带入的高浓度金属离子螯合剂或者其他盐，可能会影响末端修复以及 A 尾添加等步骤的反应效率，DNA 在TE 溶液中进行片段化，不要在无菌超纯水中进行。

2、RNA 污染

样本中存在RNA 污染会导致DNA 定量不准确，使文库构建时DNA 上样量不足。

3、PCR free 的时候上样量不足

当使用完整接头且Input DNA 大于 200 ng 时候，不用 PCR 扩增。如果文库拷贝数过低不能进行直接测序，可在接头连接完成后对DNA 文库进行PCR 扩增。

4、接头出现降解：接头存储不当会出现降解，影响连接效率。一般稀释过的接头可在室温放置 48h。

判断接头是否降解的方法：

a.用安捷伦 2100 毛细血管电泳检测，通过电泳条带大小判断；如果未发生降解，则条带大小大概为 62bp（complete adapter），如果发生降解，则无条带或条带很小。

b.用Qubit、酶标仪等检测仪器进行浓度测量，粗略判断接头是否降解。

检测方法：取 1uL，15uM 的complete 接头（12615ES-12618ES）若 Qubit 检测浓度 600ng/ul 左右，则接头正常，反之若小于 600ng/ul，则接头可能降解成单链或小片段。酶标仪检测同理。

Q：最后一步扩增，短接头中Primer 和长接头的Primer 是否一致？

A：不一致。短接头建库：接头连接时候是连接一样的双端接头 PE Adapter,后期进行文库扩增再利用不同的 Index Primer 扩增出完整携带不同的DNA 文库。长接头建库：接头连接时候的连接的是带有不同Index 的完整接头，后期扩增的时候再用两端的通用引物 Primer Mix 扩增完整的文库，使用长接头时，若在PCR 扩增之前文库浓度就达到上机要求，则无需进行PCR 文库扩增。

Q：接头中index/Barcode 组合原则是什么？

Hieff NGS®高通量文库构建专用配套试剂盒set3|Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®,Set 3 A：碱基平衡，荧光平衡（详情可查看翊圣生物公众号微信软文一文全面解析 NGS 接头的奥秘）

产品组分

编号	组分	产品规格
编号	组分	12×4T	12×16 T
12615	DNA Adapter 1-12	12 μL each	48 uL each
12616	DNA Adapter 13-24	12 μL each	48 uL each
12617	DNA Adapter 25-36	12 μL each	48 uL each
12618	DNA Adapter 37-48	12 μL each	48 uL each

运输和保存方法

冰袋运输，-20℃保存，有效期18个月。

注意事项

1）本试剂盒中DNA Adapter的浓度统一为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，可短暂存放于4℃。

4）使用Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下：

5’ – Universal Adapter – Insert DNA Sequence – DNA Barcode Adapter- 3’

5）试剂盒中提供的每种DNA Adapter中都包含Universal Adapter，且提供一种Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

DNA Adapter的序列如下：

Universal Adapter：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’

Barcode Adapter：5’-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXX1ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’

1XXXXXX表示接头的Barcode区域，其在每个接头中的序列见下表。测序前在Sample Sheet中只需输入这个Barcode序列（6 bp）即可。

名称	序列	名称	序列
DNA Adapter 1	CGATGT	DNA Adapter 25	ACTGAT
DNA Adapter 2	TGACCA	DNA Adapter 26	ATGAGC
DNA Adapter 3	ACAGTG	DNA Adapter 27	ATTCCT
DNA Adapter 4	GCCAAT	DNA Adapter 28	CAAAAG
DNA Adapter 5	CAGATC	DNA Adapter 29	CAACTA
DNA Adapter 6	CTTGTA	DNA Adapter 30	CACCGG
DNA Adapter 7	ATCACG	DNA Adapter 31	CACGAT
DNA Adapter 8	TTAGGC	DNA Adapter 32	CACTCA
DNA Adapter 9	ACTTGA	DNA Adapter 33	CAGGCG
DNA Adapter 10	GATCAG	DNA Adapter 34	CATGGC
DNA Adapter 11	TAGCTT	DNA Adapter 35	CATTTT
DNA Adapter 12	GGCTAC	DNA Adapter 36	CCAACA
DNA Adapter 13	AGTCAA	DNA Adapter 37	CGGAAT
DNA Adapter 14	AGTTCC	DNA Adapter 38	CTAGCT
DNA Adapter 15	ATGTCA	DNA Adapter 39	CTATAC
DNA Adapter 16	CCGTCC	DNA Adapter 40	CTCAGA
DNA Adapter 17	GTAGAG	DNA Adapter 41	GCGCTA
DNA Adapter 18	GTCCGC	DNA Adapter 42	TAATCG
DNA Adapter 19	GTGAAA	DNA Adapter 43	TACAGC
DNA Adapter 20	GTGGCC	DNA Adapter 44	TATAAT
DNA Adapter 21	GTTTCG	DNA Adapter 45	TCATTC
DNA Adapter 22	CGTACG	DNA Adapter 46	TCCCGA
DNA Adapter 23	GAGTGG	DNA Adapter 47	TCGAAG
DNA Adapter 24	GGTAGC	DNA Adapter 48	TCGGCA

推荐Barcode组合：

2个样本：可使用（4, 6）、或（3, 19）。

3个样本：可使用（4, 6, 其他任意1个barcode）、或（3, 19, 其他任意1个barcode）、或（1, 5, 19）、或（3, 12, 15）等。

4个样本：可使用（4, 6, 其他任意2个barcode）、或（3, 19, 其他任意2个barcode）、或（3, 4, 6, 19）、或（1, 2, 5, 16）等。

质量控制

Hieff NGS®高通量文库构建专用配套试剂盒set3|Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®,Set 3
图. 接头Agilent 2100检测图。

相关产品

接头类型		货号	名称	规格	价格（元）
短接头	单端 96 Index	12611ES02	Hieff NGS^® 96 Single Index Primer Kit for Illumina^® , Set 1（48种）	48×2 T	1493
	单端 96 Index	12612ES02	Hieff NGS^® 96 Single Index Primer Kit for Illumina^® , Set 2（48种）	48×2 T	1493
	双端 384 Index	12613ES02	Hieff NGS^® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina^® ，Set 1（96 种）	96×2 T	2753
	双端 384 Index	12614ES02	Hieff NGS^® 384 Dual Index Primer Kit for Illumina^® ，Set 2（96 种）	96×2 T	2753
完整接头		12615ES04/16	Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina^®, Set 1	12×4/ 12×16 T	1256/4526
		12616ES04/16	Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina^®, Set 2	12×4/ 12×16 T	1256/4536
		12617ES04/16	Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina^®, Set 3	12×4/ 12×16 T	1256/4536
		12618ES04/16	Hieff NGS^® Complete Adapter Kit for Illumina^®, Set 4	12×4/ 12×16 T	1256/4536
Tn5接头		12610ES96	Hieff NGS^® Tagment Index Kit for Illumina^®(96 Index)	96 T	1365

HB220530

Q：构建得到的文库产量低的原因？

A：1、DNA 质量低，样本中含抑制物（抑制酶活性等）

2、RNA 污染

样本中存在RNA 污染会导致DNA 定量不准确，使文库构建时DNA 上样量不足。

3、PCR free 的时候上样量不足

当使用完整接头且Input DNA 大于 200 ng 时候，不用 PCR 扩增。如果文库拷贝数过低不能进行直接测序，可在接头连接完成后对DNA 文库进行PCR 扩增。

4、接头出现降解：接头存储不当会出现降解，影响连接效率。一般稀释过的接头可在室温放置 48h。

判断接头是否降解的方法：

b.用Qubit、酶标仪等检测仪器进行浓度测量，粗略判断接头是否降解。

Q：最后一步扩增，短接头中Primer 和长接头的Primer 是否一致？

Q：接头中index/Barcode 组合原则是什么？

Hieff NGS®高通量文库构建专用配套试剂盒set3|Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®,Set 3

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2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

发表于2024年2月24日由上海金畔生物科技有限公司

2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

本产品适用于多重PCR实验。2×Hieff NGS^® HG Multiplex PCR Master Mix 以热启动多重PCR酶制剂与 2×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可兼容GC含量在 25%-70%左右的多重基因扩增，快速便捷地用于多重PCR反应，具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点。本试剂适用于不同多重PCR需求，可用于凝胶电泳鉴定20对以内不同大小片段的多重产物，也可用于进行数百重及以上扩增子的富集。

组分信息

产品编号	组分名称
13283	2×Hieff NGS^®HG Multiplex PCR Master Mix

储存条件

2~8℃保存，有效期2年。

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

2.本产品仅用作科研用途！

参考反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix	15	1×
Primer mix	x	0.1 μM-0.5 μM
模板 DNA	1 ng -400 ng	–
无菌超纯水	up to 30	–

【注】:1）上表中 DNA 量和引物浓度均为推荐用量和浓度，可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

2）参考建议：每条引物的浓度可在 0.1 μM-0.5 μM 范围内进行调整。

3）预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等，无需额外添加。

第一轮扩增程序

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	95℃	3 min	1
变性	95℃	20 sec	15-45
退火延伸	60℃	4-10 min	15-45
终延伸	72℃	5 min	1

【注】:在 PCR 仪上设置上表中的反应程序进行多重 PCR 反应（设置热盖温度至 105℃左右）。退火延伸时间：100 重 PCR 推荐 4 min；1000 重推荐 8-10 min 需要自己根据引物情况摸索。

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

第二轮扩增程序

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	95℃	3 min	1
变性	95℃	20 sec	15-45
退火	60℃	1 min
延伸	72℃	30 sec
终延伸	72℃	5 min	1

【注】:退火温度和时间上推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为1 min，可以在30 s-1 min 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

Ver.CN20230816

组分信息

产品编号	组分名称
13283	2×Hieff NGS^®HG Multiplex PCR Master Mix

储存条件

2~8℃保存，有效期2年。

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

2.本产品仅用作科研用途！

参考反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix	15	1×
Primer mix	x	0.1 μM-0.5 μM
模板 DNA	1 ng -400 ng	–
无菌超纯水	up to 30	–

【注】:1）上表中 DNA 量和引物浓度均为推荐用量和浓度，可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

2）参考建议：每条引物的浓度可在 0.1 μM-0.5 μM 范围内进行调整。

3）预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等，无需额外添加。

第一轮扩增程序

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	95℃	3 min	1
变性	95℃	20 sec	15-45
退火延伸	60℃	4-10 min	15-45
终延伸	72℃	5 min	1

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

第二轮扩增程序

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	95℃	3 min	1
变性	95℃	20 sec	15-45
退火	60℃	1 min
延伸	72℃	30 sec
终延伸	72℃	5 min	1

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

Ver.CN20230816

Q：主要有哪些应用？

A：多基因分型、食品病原微生物检测等。

2×Hieff NGS®高GC多重PCR预混液|2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

暂无内容