Magnify SP HP高流速高分辨率SP强阳离子交换层析填料
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
本品Magnify SP HP是一种强阳离子交换层析介质,以表面接枝了葡聚糖的高刚性琼脂糖为基架,具有高流速状态下仍具有高的动态结合能力的优点,可以很好的提高工业下游工艺的生产效率。且本品平均粒径在40 μm左右,具有更高的比表面积,更高的载量和分辨率。本品离子交换基团-SO3–。
产品性质
基质 |
高刚性琼脂糖微球 |
平均粒径 |
40 µm |
离子交换类型 |
强阳离子 |
载量 |
0.20-0.24 mmol H+/mL 介质 |
流速 |
≤300 cm/h |
pH范围 |
2-12(长期)/ 2-14(短期) |
储存缓冲液 |
20%乙醇,0.2M醋酸钠 |
运输和保存方法
冰袋运输。4-30℃保存,有效期5年。
使用方法
1 缓冲液的准备
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。下表为常用的阳离子交换缓冲液。
表1:阳离子交换缓冲液
pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度(mM) |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
5.6-6.6 |
MES |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
7.0-8.0 |
HEPES |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl– |
8.33 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1)将介质装入合适的层析柱,层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2)将样品加到平衡好的Magnify SP HP中(保证目的蛋白与填料充分接触,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。
5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
4 填料清洗
离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP(Cleaning In Place)清洗
离子交换树脂可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
1)去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3)去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2)填料使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
3)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5)本产品仅作科研用途!
附表 问题及解决方案
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗。 |
样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22µm或0.45µm滤膜过滤。 |
||
洗脱样品较杂 |
树脂重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗或更换新树脂。 |
平衡不充分 |
增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂。 |
HB220629
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
本品Magnify SP HP是一种强阳离子交换层析介质,以表面接枝了葡聚糖的高刚性琼脂糖为基架,具有高流速状态下仍具有高的动态结合能力的优点,可以很好的提高工业下游工艺的生产效率。且本品平均粒径在40 μm左右,具有更高的比表面积,更高的载量和分辨率。本品离子交换基团-SO3–。
产品性质
基质 |
高刚性琼脂糖微球 |
平均粒径 |
40 µm |
离子交换类型 |
强阳离子 |
载量 |
0.20-0.24 mmol H+/mL 介质 |
流速 |
≤300 cm/h |
pH范围 |
2-12(长期)/ 2-14(短期) |
储存缓冲液 |
20%乙醇,0.2M醋酸钠 |
运输和保存方法
冰袋运输。4-30℃保存,有效期5年。
使用方法
1 缓冲液的准备
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。下表为常用的阳离子交换缓冲液。
表1:阳离子交换缓冲液
pH 范围 |
缓冲盐 |
浓度(mM) |
平衡离子 |
pKa(25℃) |
1.4-2.4 |
Maleic acid |
20 |
Na+ |
1.92 |
2.6-3.6 |
Methyl malonic acid |
20 |
Na+或 Li+ |
3.07 |
2.6-3.6 |
Citric acid |
20 |
Na+ |
3.13 |
3.3-4.3 |
Lactic acid |
50 |
Na+ |
3.86 |
3.3-4.3 |
Formic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
3.75 |
3.7-4.7 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
4.21 |
4.3-5.3 |
Acetic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
4.75 |
5.1-6.1 |
Succinic acid |
50 |
Na+ |
5.64 |
5.2-6.2 |
Methyl malonic acid |
50 |
Na+或 Li+ |
5.76 |
5.6-6.6 |
MES |
50 |
Na+或 Li+ |
6.27 |
6.7-7.7 |
Phosphate |
50 |
Na+ |
7.20 |
7.0-8.0 |
HEPES |
50 |
Na+或 Li+ |
7.56 |
7.8-8.8 |
BICINE |
50 |
Cl– |
8.33 |
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1)将介质装入合适的层析柱,层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2)将样品加到平衡好的Magnify SP HP中(保证目的蛋白与填料充分接触,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。
5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
4 填料清洗
离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP(Cleaning In Place)清洗
离子交换树脂可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
1)去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3)去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2)填料使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
3)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5)本产品仅作科研用途!
附表 问题及解决方案
问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗。 |
样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22µm或0.45µm滤膜过滤。 |
||
洗脱样品较杂 |
树脂重复多次使用 |
按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗或更换新树脂。 |
平衡不充分 |
增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂。 |
HB220629
暂无内容
暂无内容