TGR Jurkat细胞

 

TGR BioSciences Pty Ltd(TGR)是一家位于澳大利亚阿德莱德的私营公司。TGR成立于2001年,致力于为基于细胞的研究应用提供创新解决方案。我们的科学家拥有细胞生物学,生物化学和免疫测定设计方面的专业知识,并开发出高质量的产品和服务,这些产品和服务已成功应用于世界各地的药物发现计划。

TGR在其研发方面投入了大量资金,我们通过不断提供新的细胞检测方法来支持客户的研究工作,以检测疾病所依赖的细胞过程。TGR致力于营造持续学习和改进的氛围,以及高质量的技术支持,为我们的客户提供性能的产品。

为此,TGR凭借其获得专的CaptSure™技术为其核心产品奠定了基础。这种创新的抗体固定系统提供了更快速,更简单的免疫测定,以及显着降低制造成本的好处。此外,我们开发了CaptSure™Multiplex,用于分析单个样品中的多个目标。除了在自己的产品中使用CaptSure™之外,TGR还与其他公司合作,根据许可安排访问该技术。

我们的旗舰免疫检测系列SureFire®是一系列用于分析细胞磷蛋白的检测试剂盒,由我们位于阿德莱德的工厂生产。SureFire和SureFire Ultra试剂盒通过PerkinElmer,Inc。(美国)分销,PerkinElmer,Inc。是实验室试剂的市场领者。SureFire和SureFire Ultra检测器目前提供100多种SureFire试剂盒,可提供的工具箱,用于以均质形式测量内源性信号蛋白。

TGR的ELISAONE™是一种高灵敏度的免疫分析技术,无需标准ELISA应用所需的所有处理步骤即可提供快速结果。ELISAONE还为该平台带来了灵活性,允许用户使用标准读板器在单个96孔板上测量多个靶标。ELISAONE代表ELISA技术的下一代产品,现已通过我们的分销合作伙伴在美国和加拿大销售。

细胞模型

Jurkat细胞

Jurkats是产生IL-2的T淋巴细胞系,通常用于研究T细胞信号传导。Jurkat细胞由患有T细胞白血病的14岁男孩的外周血建立,也可用于研究急性T细胞白血病。Jurkat细胞易于培养,并迅速生长。它们表达易于检测的STAT1,STAT3和STAT5水平,因此可用于分析细胞因子信号传导。Jurkat细胞也可用于观察应激介导的途径,包括p38 MAPK,JNK信号传导和NF-κB信号传导。

 

 

TGR在许多细胞模型中与细胞信号传导途径一起工作,包括癌症模型和原代细胞培养物。

细胞模型包括:

  • A431
  • C2C12
  • CHO
  • HEK 293
  • Hela
  • Jurkat
  • MCF7
  • TF-1
  • THP-1
  • U-2 OS

 

 

A431细胞

 

A431细胞来自85岁的女性表皮。表皮样癌细胞系表达非常高水平的表皮生长因子(EGF)受体,并且表现出MAPK途径的高基础活化。因此,即使血清饥饿,对于诸如MEK和ERK的靶标,MAPK途径组分的进一步活化超过基础活化水平也是困难的。然而,使用EGF受体抑制剂如AG1478可以显着降低MAPK信号传导途径的活化。通过EGF受体的STAT信号传导也可以在A431细胞中诱导,并且STAT1,STAT3和STAT5磷酸化都是容易检测的。

 

 

C2C12细胞

 

C2C12细胞是小鼠成肌细胞系,初是通过在挤压伤后从C3H小鼠的大腿肌肉中培养的成肌细胞的连续传代获得的。C2C12细胞能够分化,可用于研究成肌细胞和成骨细胞的分化。这些细胞表达对TGFβ超家族有反应的受体,可用于检测TGFβ和BMP介导的Smad信号传导。

CHO细胞

中国仓鼠卵巢(CHO)细胞是源自中国仓鼠卵巢的细胞系。它们通常用于生物学和医学研究中作为转染受体和其他蛋白质的细胞背景,并且在商业上用于治疗性蛋白质的生产。它是一种贴壁细胞系,生长迅速,易于培养和处理。携带转染的G蛋白偶联受体(GPCR)的CHO细胞已广泛用于许多功能读数,包括常见的GPCR第二信使,例如环AMP,钙动员和ERK磷酸化。

HEK 293细胞

HEK 293细胞是衍生自人胚肾制剂的转化细胞系。因为它们是通过实验转化的,所以HEK 293细胞对于正常肾细胞来说不是特别好的模型,但是它们易于培养和转染,并且通常用作检查转染受体的模型。它们具有几种可以被利用的完整信号传导途径,特别是ERK,p38 MAPK和JNK途径,其可以用于监测特定转染的受体介导的信号传导事件。这些细胞不太适用于检测PI3-激酶介导的信号传导,因为它们通常显示组成型活性Akt。

 

警告:  这些细胞含有腺病毒,应小心处理。

 

Hela细胞

Hela细胞来源于宫颈腺癌,是研究中古老和广泛使用的细胞系之一。细胞很容易繁殖,并迅速生长。它们表达几种主要的细胞信号传导途径,并且MAPK,p38,JNK,Akt信号传导都可以容易地检测到。还可以检测ATM / ATR信号传导途径成分,例如Chk1,Chk2和p53。

警告: 这些细胞含有乳多空病毒,应小心处理。

Jurkat细胞

Jurkats是产生IL-2的T淋巴细胞系,通常用于研究T细胞信号传导。Jurkat细胞由患有T细胞白血病的14岁男孩的外周血建立,也可用于研究急性T细胞白血病。Jurkat细胞易于培养,并迅速生长。它们表达易于检测的STAT1,STAT3和STAT5水平,因此可用于分析细胞因子信号传导。Jurkat细胞也可用于观察应激介导的途径,包括p38 MAPK,JNK信号传导和NF-κB信号传导。

MCF7细胞

MCF-7是广泛使用的上皮癌细胞系,源自乳腺癌。MCF7细胞保留分化的乳腺上皮的特征,包括通过细胞质雌激素受体处理雌二醇的能力。虽然易于繁殖,但细胞通常生长缓慢。MCF7细胞可用于检测MAPK和PI3K组分,并且在这些细胞中可容易地检测到ERK和Akt磷酸化。MCF7细胞表达特别高水平的p70S6K,因此可以是上游激酶如mTOR和PDK-1的有用标记物。

TF-1细胞

TF-1细胞系由来自患有严重全血细胞减少症的35岁男性的肝素化骨髓抽吸样品建立。细胞*依赖于IL-3或GM-CSF进行培养,但在这些因子存在下迅速生长。TF-1细胞对多种细胞因子起反应,并且是研究细胞因子信号传导机制的有用工具,因为它们携带多种内源性受体。内源性STAT1,STAT3和STAT5的磷酸化在这些细胞中是容易检测的,并且为细胞因子应答提供了方便的标记。

THP-1细胞

THP-1细胞是从患有急性单核细胞白血病的患者的外周血分离的单核细胞。THP-1细胞具有Fc和C3b受体,缺乏表面和细胞质免疫球蛋白。在这些细胞中也检测到IL-6和GM-CSF受体。作为细胞信号传导的模型,THP-1细胞可用于检测ERK,p38 MAPK和JNK信号传导,以及细胞因子受体介导的STAT信号传导。THP-1细胞可从ATCC获得(目录号#TIB-202)。

U-2 OS细胞

U-2 OS是人骨肉瘤细胞系。U-2 OS细胞系由患有骨肉瘤的十五岁人类女性的骨组织建立。成立于1964年,原始细胞取自中度分化的胫骨肉瘤。U-2 OS细胞具有粘附性且易于生长。这些细胞表达易于检测的p53水平,并且可以容易地用DNA损伤性化学物质如阿霉素或依托泊苷上调。

 

 

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

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ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)是抗体发挥作用的方式之一,当IgG抗体通过Fab段与靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)表面抗原决定簇特异性结合后,其Fc段可与有FcγR的杀伤细胞(NK细胞、单核-巨噬细胞、中性粒细胞)等效应细胞结合,触发效应细胞的杀伤活性,直接杀伤靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)。

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays 

图:抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)

ADCC检测用Jurkat效应细胞株为改造后的NFAT-Luc-FcγRIIIa Jurkat稳定细胞株(原始株来源于中科院细胞库),可由CD20抗体,B细胞淋巴瘤细胞(Raji、PBMC、WIL2-S细胞系为靶细胞建立ADCC生物学活性检测方法。YEASEN开发的Jurkat效应细胞株无菌无支原体污染细胞株为单克隆细胞株,可用于ADCC作用机制验证糖基化水平检测、抗体筛选等应用

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

42001JP03

42001

Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

1mL(5E6 Cell/mL)

 

运输与保存方法

干冰运输。收到之后如不立即复苏,请立即转入-80℃保存或液氮储存。

 

产品应用

1. Jurkat效应细胞株运输与保存

【注】:细胞株对温度非常敏感,避免反复冻融。收到产品后,如果暂时不使用,请整瓶直接放到-80℃冻存或液氮内。

2. Jurkat细胞株复苏使用特别注意

打开水浴锅,等待升温达到设置的37 ℃后,放入配制好的种子培养基进行预热30±10 min冻存管立即置于37℃水浴中解冻(控制在3 min内),溶解完全即可拿出,解冻过程中勿使水浴锅水面浸过冻存管管口。此细胞株血清使用要求严格,检测时使用推荐超低 IgG胎牛血清。(推荐:货号:1921005PGGibco

2).抗体检测ADCC

细胞Jurkat效应细胞raji细胞株200 g1000 rpm 离心5 min 后用ADCC缓冲液RPMI 1640培养基+4%IgG FBS)重悬洗涤一次后,计数,调节活细胞密度(raji推荐5E5 Cells/mLJurkat推荐3E6 Cells/mL)可进行调试标靶比, Jurkat效应细胞株密度建议不调整。细胞株活率>95%。方可进行实验。一般活率在98-99%之间。

稀释抗体将抗体调节较高浓度成20 µg/mL后,进行梯度稀释低浓度时如3 µg/mL可按2-3倍进行梯度稀释高浓度可按5倍稀释。先确定细胞的检测抗体浓度范围后,再进行浓度和梯度稀释比例的调整。

1、75 µL ADCC Buffer添加到96孔的最外面的孔中,封液,防止蒸发。

2轻轻吹打raji细胞悬液,加入25 µL细胞悬液每孔

3从抗体稀释板中每孔加入25 µL抗体稀释系列,加入到细胞孔内。空白不加抗体,加入25 µL ADCC缓冲液。建议从低浓度到高浓度进行添加。

4、轻轻吹打Jurkat效应细胞悬液,然后在实验台上添加25 µL Jurkat效应细胞,则每孔抗体浓度稀释三倍。(母液浓度为3 µg/mL,则检测起始起始浓度为1 µg/mL。

5用盖子盖住板,在37°C加湿的CO2中孵育6小时。

637°C的培养箱中取出检测板,并将其平衡到环境温度(22-25°C),一般放置20-30 min即可。

7使用手动多通道移液管,添加75 µL Bio-Glo™荧光素酶分析试剂到所有内部96孔板避免制造任何泡沫。孵育5分钟后用酶标仪在白板中读取相对光单位(relative light units,RLU)数值,并按照以反应-阴性作图。

阴性:Jurkat效应细胞株+靶细胞,不含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

反应:Jurkat效应细胞株+靶细胞,含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

例:TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

SpectraMax M5酶标仪检测使用设置:Luminescence,All  nm,实验检测时间设为500-1000m sec;settle time1 sec

3)实验结果

①抗体检测:

TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

使用3 µg/mL母液抗体浓度,按2.5倍稀释,稀释13倍;抗体为:Rituximab, E:T=6:1

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays 

图:检测值比较明显值在(log 106的区间内)

 

注意事项

1、反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温(20-25℃)再使用。

2Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit应在环境温度不超过27℃使用,使用时解冻后继续在室温下孵育20-30分钟96孔白板温度保持一致

3、检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置检测时间段和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同。

4检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板。

5本产品仅作科研用途,禁止应用于人体

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

HB220330

Q:这个细胞可以传代增值吗?大约可以传多少代?

A:可以增值,可以传几十代左右,收到细胞后建议先扩增冻存,然后在进行培养细胞

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抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)是抗体发挥作用的方式之一,当IgG抗体通过Fab段与靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)表面抗原决定簇特异性结合后,其Fc段可与有FcγR的杀伤细胞(NK细胞、单核-巨噬细胞、中性粒细胞)等效应细胞结合,触发效应细胞的杀伤活性,直接杀伤靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)。

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图:抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)

ADCC检测用Jurkat效应细胞株为改造后的NFAT-Luc-FcγRIIIa Jurkat稳定细胞株(原始株来源于中科院细胞库),可由CD20抗体,B细胞淋巴瘤细胞(Raji、PBMC、WIL2-S细胞系为靶细胞建立ADCC生物学活性检测方法。YEASEN开发的Jurkat效应细胞株无菌无支原体污染细胞株为单克隆细胞株,可用于ADCC作用机制验证糖基化水平检测、抗体筛选等应用

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

42001JP03

42001

Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

1mL(5E6 Cell/mL)

 

运输与保存方法

干冰运输。收到之后如不立即复苏,请立即转入-80℃保存或液氮储存。

 

产品应用

1. Jurkat效应细胞株运输与保存

【注】:细胞株对温度非常敏感,避免反复冻融。收到产品后,如果暂时不使用,请整瓶直接放到-80℃冻存或液氮内。

2. Jurkat细胞株复苏使用特别注意

打开水浴锅,等待升温达到设置的37 ℃后,放入配制好的种子培养基进行预热30±10 min冻存管立即置于37℃水浴中解冻(控制在3 min内),溶解完全即可拿出,解冻过程中勿使水浴锅水面浸过冻存管管口。此细胞株血清使用要求严格,检测时使用推荐超低 IgG胎牛血清。(推荐:货号:1921005PGGibco

2).抗体检测ADCC

细胞Jurkat效应细胞raji细胞株200 g1000 rpm 离心5 min 后用ADCC缓冲液RPMI 1640培养基+4%IgG FBS)重悬洗涤一次后,计数,调节活细胞密度(raji推荐5E5 Cells/mLJurkat推荐3E6 Cells/mL)可进行调试标靶比, Jurkat效应细胞株密度建议不调整。细胞株活率>95%。方可进行实验。一般活率在98-99%之间。

稀释抗体将抗体调节较高浓度成20 µg/mL后,进行梯度稀释低浓度时如3 µg/mL可按2-3倍进行梯度稀释高浓度可按5倍稀释。先确定细胞的检测抗体浓度范围后,再进行浓度和梯度稀释比例的调整。

1、75 µL ADCC Buffer添加到96孔的最外面的孔中,封液,防止蒸发。

2轻轻吹打raji细胞悬液,加入25 µL细胞悬液每孔

3从抗体稀释板中每孔加入25 µL抗体稀释系列,加入到细胞孔内。空白不加抗体,加入25 µL ADCC缓冲液。建议从低浓度到高浓度进行添加。

4、轻轻吹打Jurkat效应细胞悬液,然后在实验台上添加25 µL Jurkat效应细胞,则每孔抗体浓度稀释三倍。(母液浓度为3 µg/mL,则检测起始起始浓度为1 µg/mL。

5用盖子盖住板,在37°C加湿的CO2中孵育6小时。

637°C的培养箱中取出检测板,并将其平衡到环境温度(22-25°C),一般放置20-30 min即可。

7使用手动多通道移液管,添加75 µL Bio-Glo™荧光素酶分析试剂到所有内部96孔板避免制造任何泡沫。孵育5分钟后用酶标仪在白板中读取相对光单位(relative light units,RLU)数值,并按照以反应-阴性作图。

阴性:Jurkat效应细胞株+靶细胞,不含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

反应:Jurkat效应细胞株+靶细胞,含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

例:TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

SpectraMax M5酶标仪检测使用设置:Luminescence,All  nm,实验检测时间设为500-1000m sec;settle time1 sec

3)实验结果

①抗体检测:

TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

使用3 µg/mL母液抗体浓度,按2.5倍稀释,稀释13倍;抗体为:Rituximab, E:T=6:1

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图:检测值比较明显值在(log 106的区间内)

 

注意事项

1、反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温(20-25℃)再使用。

2Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit应在环境温度不超过27℃使用,使用时解冻后继续在室温下孵育20-30分钟96孔白板温度保持一致

3、检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置检测时间段和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同。

4检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板。

5本产品仅作科研用途,禁止应用于人体

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

HB220330

Q:这个细胞可以传代增值吗?大约可以传多少代?

A:可以增值,可以传几十代左右,收到细胞后建议先扩增冻存,然后在进行培养细胞

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