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Dispase II 分散酶II Dispase细胞培养分散酶II(中性蛋白酶)
Dispase II 分散酶II Dispase细胞培养分散酶II(中性蛋白酶)
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
Dispase II，中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。
本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
产品性质
|
比活性（Specific Activity） |
≥0.8U/mg (+37°C, casein as substrate, pH 7.5) |
|
单位定义（Unit Definition） |
在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。 |
|
最佳pH（pH Optimum） |
6.0-8.5 |
|
抑制剂（Inhibitors） |
EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。 |
|
激活剂（Activator） |
Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+浓度为2 mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其处于最佳活性。 |
运输和保存方法
冰袋运输。
冻干粉4℃保存，保质期2年。储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存，2个月有效。避免反复冻融。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
母液及工作液配制
1）用Hepe缓冲盐溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。
2）使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
【注】：不推荐使用高于2.4 U/mL的工作浓度。
使用方法
1 组织的解离
1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；
2）用无菌PBS清洗组织块；
3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。
4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】：若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。
5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。
6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；
7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。
2 细胞传代
1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5 min；
2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min；
3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min；
4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；
5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。
HB221208
产品描述
Dispase II，中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。
本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
产品性质
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比活性（Specific Activity） |
≥0.8U/mg (+37°C, casein as substrate, pH 7.5) |
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单位定义（Unit Definition） |
在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。 |
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最佳pH（pH Optimum） |
6.0-8.5 |
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抑制剂（Inhibitors） |
EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。 |
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激活剂（Activator） |
Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+浓度为2 mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其处于最佳活性。 |
运输和保存方法
冰袋运输。
冻干粉4℃保存，保质期2年。储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存，2个月有效。避免反复冻融。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
母液及工作液配制
1）用Hepe缓冲盐溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。
2）使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
【注】：不推荐使用高于2.4 U/mL的工作浓度。
使用方法
1 组织的解离
1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；
2）用无菌PBS清洗组织块；
3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。
4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】：若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。
5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。
6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；
7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。
2 细胞传代
1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5 min；
2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min；
3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min；
4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；
5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。
HB221208
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[1] Chen S, Liu H, Li Z, et al. Epithelial PBLD attenuates intestinal inflammatory response and improves intestinal barrier function by inhibiting NF-κB signaling. Cell Death Dis. 2021;12(6):563. Published 2021 May 31. doi:10.1038/s41419-021-03843-0(IF:8.469)
Collagenase II 胶原酶II型 蛋白酶 肽链内切酶
Collagenase II 胶原酶II型 蛋白酶 肽链内切酶
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解
结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型、II型、III型和IV型，在应用上有所偏向：1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为II型胶原酶，≥125 U/mg solid，可用于心、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。
酶活力单位定义
在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
运输和保存方法
室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
使用方法
1. 胶原酶储存液的配制
向每管100 mg的胶原酶中加入1 mL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成100 mg/mL（即100×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。
使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。
2．组织的分离
1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；
2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；
3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；
4）于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。
5） 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；
6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3． 器官灌注
1）向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率；
2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；
3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；
4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
HB221202
产品描述
胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解
结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型、II型、III型和IV型，在应用上有所偏向：1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为II型胶原酶，≥125 U/mg solid，可用于心、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。
酶活力单位定义
在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
运输和保存方法
室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
使用方法
1. 胶原酶储存液的配制
向每管100 mg的胶原酶中加入1 mL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成100 mg/mL（即100×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。
使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。
2．组织的分离
1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；
2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；
3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；
4）于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。
5） 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；
6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3． 器官灌注
1）向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率；
2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；
3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；
4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
HB221202
Q：只用于分离细胞，选哪种胶原酶合适？
A：对于组织解离，常使用粗制胶原酶制剂，例如弹性蛋白酶，胰蛋白酶或木瓜蛋白酶等；对于胶原蛋白结构和生物合成研究，常使用更高纯度的胶原酶制剂，不含其他蛋白水解活性。
Q：要把肿瘤细胞分散成单个细胞做流式检测，选择哪一种胶原酶比较适合？需要区分肿瘤发生的部位吗？后续用来做流式，不同消化强度对细胞表面抗原的影响大吗？
A：会影响细胞表面抗原，可以选择对抗原影响较小的胶原酶Ⅲ、胶原酶Ⅳ。
Q：胶原酶使用会受到血清影响吗？
A：胶原不会受到培养细胞所用的血清影响。
Q：胶原酶的使用会受哪些抑制剂影响？
A：胶原酶的抑制剂有 EDTA 、EGTA 等；二是重金属离子（Hg2+,Pb2+,Cd2+）；还有一些化学试剂如 Cysteine、 histidine、DTT、2-mercaptoethanol、o-phenanthroline 等对胶原酶也有抑制作用。
Q：用 PBS 溶解可以吗？用什么工作液浓度溶解？
A：建议在 Hank’s，Earle’s 或者其他平衡盐溶液中溶解，推荐使用工作浓度 0.05 % ~0.5 % (w/v)。
Q：实验过程中消化作用不佳
A：(1)如果是酶活不强或钙离子不足导致，应在低温干燥条件下储存胶原酶，胶原酶溶液分装后冻存(2)如果是钙离子不足导致，应将胶原酶溶液中钙离子浓度设置为 5mM
Q：使用过程中出现细胞死亡
A：（1）如果是蛋白酶过量，应减少蛋白酶接触时间或是加入白蛋白或灭活血清（2）如果是 pH 改变应使用缓冲液（如 HBSS）；经常检查并重新调节 pH（3）如果氧气太少，应给消化液通无菌空气
Q： 实验中出现细胞受损怎么办？
A： 如果是蛋白酶过多导致，应减少蛋白酶用量或是加入白蛋白或灭活血清
[1] Sun X, He X, Zhang Y, et al. Inflammatory cell-derived CXCL3 promotes pancreatic cancer metastasis through a novel myofibroblast-hijacked cancer escape mechanism. Gut. 2022;71(1):129-147. doi:10.1136/gutjnl-2020-322744(IF:23.059)
[2] Wu B, Qiang L, Zhang Y, et al. The deubiquitinase OTUD1 inhibits colonic inflammation by suppressing RIPK1-mediated NF-κB signaling. Cell Mol Immunol. 2022;19(2):276-289. doi:10.1038/s41423-021-00810-9(IF:11.530)
[3] Yu Q, Han F, Yuan Z, et al. Fucoidan-loaded nanofibrous scaffolds promote annulus fibrosus repair by ameliorating the inflammatory and oxidative microenvironments in degenerative intervertebral discs. Acta Biomater. 2022;148:73-89. doi:10.1016/j.actbio.2022.05.054(IF:8.947)
[4] Feng C, Xiong Z, Wang C, et al. Folic acid-modified Exosome-PH20 enhances the efficiency of therapy via modulation of the tumor microenvironment and directly inhibits tumor cell metastasis. Bioact Mater. 2020;6(4):963-974. Published 2020 Oct 9. doi:10.1016/j.bioactmat.2020.09.014(IF:8.724)
[5] Wang Y, Sun Q, Ye Y, et al. FGF-2 signaling in nasopharyngeal carcinoma modulates pericyte-macrophage crosstalk and metastasis. JCI Insight. 2022;7(10):e157874. Published 2022 May 23. doi:10.1172/jci.insight.157874(IF:8.315)
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[7] Guo H, Yin W, Zou Z, et al. Quercitrin alleviates cartilage extracellular matrix degradation and delays ACLT rat osteoarthritis development: An in vivo and in vitro study. J Adv Res. 2020;28:255-267. Published 2020 Jun 24. doi:10.1016/j.jare.2020.06.020(IF:6.992)
[8] Wang Y, Zhao M, Li W, et al. BMSC-Derived Small Extracellular Vesicles Induce Cartilage Reconstruction of Temporomandibular Joint Osteoarthritis via Autotaxin-YAP Signaling Axis. Front Cell Dev Biol. 2021;9:656153. Published 2021 Apr 1. doi:10.3389/fcell.2021.656153(IF:6.684)
[9] Zhang W, Wang H, Yuan Z, et al. Moderate mechanical stimulation rescues degenerative annulus fibrosus by suppressing caveolin-1 mediated pro-inflammatory signaling pathway. Int J Biol Sci. 2021;17(5):1395-1412. Published 2021 Apr 3. doi:10.7150/ijbs.57774(IF:6.582)
[10] Zhu L, Yang Y, Yan Z, et al. Controlled Release of TGF-β3 for Effective Local Endogenous Repair in IDD Using Rat Model. Int J Nanomedicine. 2022;17:2079-2096. Published 2022 May 9. doi:10.2147/IJN.S358396(IF:6.400)
[11] Zhou T, Xiang DK, Li SN, Yang LH, Gao LF, Feng C. MicroRNA-495 Ameliorates Cardiac Microvascular Endothelial Cell Injury and Inflammatory Reaction by Suppressing the NLRP3 Inflammasome Signaling Pathway. Cell Physiol Biochem. 2018;49(2):798-815. doi:10.1159/000493042(IF:5.500)
[12] Zheng Y, Chen Y, Lu X, et al. Inhibition of Histone Deacetylase 6 by Tubastatin A Attenuates the Progress of Osteoarthritis via Improving Mitochondrial Function. Am J Pathol. 2020;190(12):2376-2386. doi:10.1016/j.ajpath.2020.08.013(IF:4.307)
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Worthington II型胶原酶现货供应
世界*实验材料供应商Worthington 上海金畔生物为其中国代理，Worthington 在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， Worthington 就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获
Worthington 中国代理，Worthington 上海代理，Worthington 北京代理，Worthington 广东代理，Worthington 江苏代理 Worthington 湖北代理, Worthington 天津, Worthington 黑龙江代理, Worthington 内蒙古代理, Worthington 吉林代理, Worthington 福建代理, Worthington 江苏代理, Worthington 浙江代理, Worthington 四川代理,
Worthington Biochemical是一家始于1947年，位于美国新泽西州的生产高纯度酶类及相关生化药剂的世界*公司，公司致力于为客户提供zui的产品及服务。Worthington供应的生物药剂主要纯化于牛胰腺、植物、发酵产物及其他自然资源，公司专长的蛋白提取与纯化技术保证了其所提供酶类拥有与其提取来源物中同等的生物活性，从而保证了研究结果的可靠性和稳定性。目前Worthington提供的产品覆盖细胞分离消化酶、DNA酶、RNA酶等几乎所有生命科学研究领域。
公司主要产品：
一、无动物成分来源的新产品
1、来源于溶组织梭状芽孢杆菌发酵产物的胶原酶：该系列胶原酶*避免了动物来源成分，适用于无动物源成分胶原酶生物研究。主要产品包括：
CLSAFA：主要为胶原酶活性及其次的蛋白酶活性，性能与1/2型胶原酶类似。
CLSAFB：比CLSAFA有更高的胶原酶活性及酪蛋白酶活性
CLSAFC：有较低的胰蛋白酶活性，性能与4型胶原酶类似。
STZ1 & STZ2：为STEMxyme? AOF Collagenase/Neutral Protease (Dispase?) 混合物酶，适用于干细胞分离。
2、肌血球素：肌血球素是一个球形小分子，分子量约17KD，含有一个亚铁血红素分子，负责心肌和骨骼肌细胞哦氧气存储。
二、经典细胞分离试剂
1、细胞分离优化系统
Worthington Biochemical 公司提供一系列经典的组织/细胞分离用酶的解决方案，包括多种酶类及相应的使用说明、参考文献与操作手册，致力于使客户利用酶促消化分离获得zui大产量及活度的细胞。Worthington Biochemical 提供的产品种类繁多，适应于不同类型组织细胞的分离，价格合理。主要产品包括胶原蛋白酶1/2/3/4，胰蛋白酶及其抑制剂，透明质酸酶，弹性蛋白酶，木瓜蛋白酶以及DNA酶，中性蛋白酶等。
2、肝细胞分离系统
通常分离肝细胞的酶都是初制的或部分纯化的酶类，里面除了胶原酶外还含有多种杂蛋白酶，不利于肝细胞的分离纯化，实验可重复率低。Worthington 推出的精制1/4型胶原酶成分明确，特别适宜于肝细胞的分离纯化，性能可靠，实验可重复率高，实验方案及参数固定，所分离的肝细胞纯度与活性均较高。
3、新生鼠心肌细胞分离系统
Worthington供应的新生鼠心肌细胞分离系统使用纯化的分离酶，使心肌细胞分离批次间差异大为减小，而且细胞产量、纯度及活性均得以提高。分离操作方便，方案可靠，实验可重复率高。
4、木瓜蛋白酶分离系统
Worthington供应的木瓜蛋白酶适宜于消化分离形态完整、单个分散的细胞，适用于细胞培养、流式细胞术等多个研究领域。 该产品还可适用于温和消化分离中枢神经系统组织（对胎鼠及新生鼠脑神经元分离尤为适宜），获得的细胞产量与活性优于胰蛋白酶。
三、特色产品:
1、胶原酶
?Type 1含有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶及胰蛋白酶活性。
?Type 2 含有更高水平的蛋白酶活性，特别是梭菌蛋白酶。
?Type 3 含有zui低水平的secondary proteases.
?Type 4在消化分离细胞时能zui大程度的保护细胞膜蛋白及上面的受体活性（胰蛋白酶消化时会损伤膜蛋白及其上受体）。
?Type 5 含有高度的胶原酶和酪蛋白酶活性。
?纯化胶原酶（CLSPA/CLSPANK）：含有高纯度的胶原酶。
2、DNA酶
Worthington提供不同纯化水平的NDA酶以适应于不同的研究目的， 其中DPRF与DPRFS含有zui低水平的RNA酶及蛋白酶活性，
适宜用于在消化清除DNA的同时zui大程度保护RNA及目的蛋白/酶类的研究，如RT-PCR实验中RNA制备时基因组DNA清除、转录后清除DNA模板、northern杂交时清除非目的DNA、DNA缺口平移、DNA 绘图, 核RNA/蛋白的分离，质粒构建，RNA合成等。Worthington不仅提供牛胰腺来源的DNA酶，而且还提供微生物来源的重组DNA酶，*无动物来源成分，客户可根据研究需要进行选择。
3、RNA酶
Worthington提供的RNA酶 A/ B纯化自牛胰腺组织，并有多种纯化级别适宜于不同研究目的，如无DNA酶的RNA适宜于DNA的分离纯化，无蛋白酶RNA酶适宜于需保存蛋白质完整性与活性。
4、弹性蛋白酶
Worthington提供的弹性蛋白酶纯化自猪胰腺，被广泛应用于组织/细胞的消化分离，特别适宜于II型肺细胞的分离。
5、木瓜蛋白酶：
Worthington提供的木瓜蛋白酶纯化自番木瓜汁，相交于胰腺蛋白酶，木瓜蛋白酶能消化更多的蛋白亚基。在组织消化研究中，木瓜蛋白酶比其他蛋白酶有更高的效率及更低的损伤，适宜于神经细胞的分离。
6、胰蛋白酶
Worthington提供的胰蛋白酶纯化自牛胰腺组织，特别适宜于蛋白质测序研究（TRTPCK）和组织/细胞消化分离研究。该系列产品纯度高，保证了产品很好的溶解度、较小的批次差异及细胞毒性。 除了高纯度胰蛋白酶外，Worthington还提供无病毒及支原体的胰蛋白酶以适应不同的研究需要。
| 货号 | 品名 | 活动力 | 规格 |
| LS004174 |
Collagenase, Type 2 Prepared to contain higher clostripain activity. Suggested for bone, heart, liver, thyroid and salivary primary cell isolation. Supplied as a dialyzed, lyophilized powder. Store at 2-8癈. |
≥125 units per mg dry weight | 100 mg |
| LS004176 | 1 gm | ||
| LS004177 | 5 gm | ||
| LS004179 | Bulk |
LS004176 Collagenase, Type 2 (CLS-2)2型胶原酶 大量现货，*
双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029M)
双萤光素酶报告基因检测试剂盒II
产品编号: RG029M
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价格: ¥ 5385.00
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| RG029S | 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II | 100次 | 856.00元 |
| RG029M | 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II | 1000次 | 5385.00元 |
碧云天生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit II)，是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)，后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase)，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质，该物质可以淬灭约99.9%以上的萤火虫萤光素酶信号，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，从而实现双萤光素酶报告基因检测。
本产品是双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。双萤光素酶报告基因检测试剂盒，即RG027/RG028中的萤火虫萤光素酶检测试剂为即用型液体，其优点是无需配制即可直接使用，但需要-80℃保存，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品，即RG029，为RG027/RG028的冻干粉版本，优点是在-20℃保存非常稳定，缺点是使用前需要使用提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。
本产品的性能总体优于国外主要同类产品。本产品的用途与Promega公司的Dual-Luciferase® Reporter Assay System基本相同。本产品的检测灵敏度显著优于国外同类产品(Competitor P)，萤火虫萤光素酶的信号强度比国外同类产品(Competitor P)提高了约40%，海肾萤光素酶的信号强度比同类产品(Competitor P)提高了约25% (图1A、1B)；萤火虫萤光素酶的化学发光的信号稳定性显著优于国外同类产品(Competitor P) (图1C)，海肾萤光素酶的化学发光的信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致或略优(图1D)；本产品的海肾萤光素酶检测工作液对萤火虫萤光素酶的淬灭效果较国外同类产品(Competitor P)更佳(图1A)。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。
图1. 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)的检测效果对比图。本试剂盒与碧云天生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)的检测效果完全一致。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对共转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为整体检测效果对比图，图B为萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶的化学发光强度的检测效果对比图，图C为萤火虫萤光素酶的化学发光稳定性的检测效果对比图，图D为海肾萤光素酶的化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本产品发光强度高。对于相同的样品，萤火虫萤光素酶的检测，本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)高约30-45%，海肾萤光素酶的检测，本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)高约20-30% (图1A、B)。
本产品操作简单，读数稳定，检测速度快，从样品制备到完成整个检测过程仅需约25分钟。只需用试剂盒中提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II，海肾萤光素酶检测底物和海肾萤光素酶检测缓冲液按照1:100的比例混合即可配制成海肾萤光素酶检测工作液，再各取100微升先后与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且化学发光比较稳定，萤火虫萤光素酶的信号半衰期约15分钟，海肾萤光素酶的信号半衰期约200秒。
本产品的海肾萤光素酶检测工作液对萤火虫萤光素酶的淬灭效果好。本试剂盒中的海肾萤光素酶检缓冲液和海肾萤光素酶检测底物配制的海肾萤光素酶检测工作液含有抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质，海肾萤光素酶检测试剂加入后通过简单的混匀，就可以抑制99.9%以上的萤火虫萤光素酶催化的发光信号，大大提高了后续海肾萤光素酶活性检测的精准性。
本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存，配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性及海肾萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测底物(100X)的稳定性均较好。萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对检测效果基本无影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%；4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果；室温保存1天可保留70%以上的检测效果，保存3天可保留60%以上的检测效果；37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。海肾萤光素酶检测缓冲液反复冻融10次、4℃或室温保存3天对检测效果基本无影响，37℃保存1天对检测效果的影响不超过5%。海肾萤光素酶检测底物(100X)在4℃保存1周、室温保存1天检测效果下降不到10%，室温保存3天、37℃保存1天，仍可保留80%以上的活力。
萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence) [1]。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[2]。本试剂盒的检测原理参考图2.
图2. 双萤光素酶的检测原理图。
通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异[3]。
关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择，请参考碧云天的相关网页：
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。
本试剂盒RG029S和RG029M分别可以测定100个和1000个样品。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| RG029S-1 | 报告基因细胞裂解液 | 60ml |
| RG029S-2 | 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 | 10ml |
| RG029S-3 | 萤火虫萤光素酶检测底物 | 1瓶 |
| RG029S-4 | 海肾萤光素酶检测缓冲液 | 10ml |
| RG029S-5 | 海肾萤光素酶检测底物(100X) | 100µl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| RG029M-1 | 报告基因细胞裂解液 | RG029S-1×10 |
| RG029M-2 | 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 | RG029S-2×10 |
| RG029M-3 | 萤火虫萤光素酶检测底物 | RG029S-3×10 |
| RG029M-4 | 海肾萤光素酶检测缓冲液 | RG029S-4×10 |
| RG029M-5 | 海肾萤光素酶检测底物(100X) | RG029S-5×10 |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，一年有效。萤火虫萤光素酶检测底物和海肾萤光素酶检测底物(100X)须-20℃避光保存。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II，-80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3-6个月内使用。
注意事项：
对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
加入海肾萤光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫萤光素酶的抑制可以达到约99.9%以上。但总会残留微量活性，因此，宜在转染时把海肾萤光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫萤光素酶RLU读数的10%。海肾萤光素酶的读数高于萤火虫萤光素酶的读数是完全可以的，通常不会有明显的负面影响。
本试剂盒的海肾萤光素酶检测缓冲液在反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，混匀后直接使用，经测试通常不会影响后续的检测效果。
为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同的时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与对应的检测底物混合成检测试剂使用。
尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响，为保证萤火虫萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的检测效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。
样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。
RG027-4 海肾萤光素酶检测底物(100X)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于100µl的情况，此时用无水乙醇把体积补足至100µl，并混匀后即可使用。
海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降，因此不可配制成工作液后长期保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放II于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。
| 器皿类型 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
| 报告基因细胞裂解液(μl/孔) | 100 | 150 | 200 | 300 | 500 |
注：如果萤光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后，10,000-15,000×g离心3-5分钟，取上清用于测定。
注：细胞裂解后可以立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。
2. 融解萤火虫萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测缓冲液，并达到室温。将萤火虫萤光素酶检测缓冲液全部转移至萤火虫萤光素酶检测底物瓶中，旋紧瓶盖后适当颠倒混匀，当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II。海肾萤光素酶检测底物(100X)置于冰浴或冰盒上备用。注：冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口，旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面，使粉末尽量掉落至瓶底，然后再轻轻旋开瓶盖，并注意不要损失冻干粉。
3. 按照每个样品需100微升的量，取适量海肾萤光素酶检测缓冲液，按照1:100加入海肾萤光素酶检测底物(100X)配制成海肾萤光素酶检测工作液。例如，1毫升海肾萤光素酶检测缓冲液中加入10微升海肾萤光素酶检测底物(100X)充分混匀后即可配制成约1毫升海肾萤光素酶检测工作液。
4. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
5. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)，取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
6. 加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。
7. 在完成上述测定萤火虫萤光素酶步骤后，加入100微升海肾萤光素酶检测工作液，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果可以参考图1。
8. 在以海肾萤光素酶为内参的情况下，用萤火虫萤光素酶测定得到的RLU值除以海肾萤光素酶测定得到的RLU值。根据得到的比值来比较不同样品间目的报告基因的激活程度。如果以萤火虫萤光素酶为内参，也可以进行类似计算。
常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。 有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。
参考文献：
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. Matthews J C, Hori K, Cormier M J. Biochemistry. 1977. 16(1):85-91.
3. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.
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| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| RG005/RG006 | 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG007S/M | 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II | 100/1000次 |
| RG009S/M | 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) | 100/1000次 |
| RG010S/M | 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) | 100/1000次 |
| RG016/RG017 | 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG027/RG028 | 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG029S/M | 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II | 100/1000次 |
| RG051S/M | Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG052S/M | Bright-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG055S/M | One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG056S/M | One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG058S/M | Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG059S/M | Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG062S/M | Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG066S/M | Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG088S/M | Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG089S/M | Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒 | 100/1000次 |
| RG126S/M | 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 | 10/100ml |
| RG127S/M | 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液(增强型) | 10/100ml |
| RG129S/M | 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 | 10/100ml |
| RG132S/M | 双萤光素酶报告基因细胞裂解液 | 10/100ml |
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使用本产品的文献：
萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG007S)
萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II
产品编号: RG007S
产品包装:100次
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价格: ¥ 427.00
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| RG007S | 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II | 100次 | 427.00元 |
碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit II)，是一种以萤光素(luciferin)为底物高信号稳定性检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。
本产品是萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG005/RG006)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，即RG005/RG006为即用型液体，其优点是无需配制即可直接使用，但需要-80℃保存，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品，即RG007，为RG005/RG006的冻干粉版本，优点是在-20℃保存非常稳定，缺点是使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。
本产品的性能基本达到甚至在某些方面优于国外主要同类产品。本产品的用途与碧云天的同类产品萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (Enhanced Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit)及Promega公司的Luciferase Assay System基本相同。本产品(RG005/RG006)的化学发光信号稳定性显著优于萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)及国外同类产品(Competitor P) (图1B)，发光强度也可以达到萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)及国外同类产品(Competitor P)的约40% (图1A)。本产品与RG009及国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。
图1. 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG007)的检测效果对比图。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG007)与碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)的检测效果完全一致。图中所示为本产品，相当于RG005/RG006，和碧云天的同类产品萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)及国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为化学发光强度的检测效果对比图，图B为化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本产品发光信号稳定。本产品的发光信号稳定性相对比较好，1分钟内信号基本保持稳定，信号变动不超过2%，3分钟内的信号变动不超过5%，5分钟内信号波动不超过10%，信号半衰期约40分钟，在发光稳定性方面显著优于RG009和国外同类产品Competitor P (图1B)，特别适用于待测样品数量较多的96孔板中进行萤火虫萤光素酶活性的多孔测定。
本产品发光强度高。对于相同的细胞样品，本产品的发光效果可以达到RG009和国外同类产品的约40%，虽然低于RG009和国外同类产品(Competitor P)，但是发光强度相对已经非常高，可以满足各种常规检测。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平非常低时，推荐使用发光强度和灵敏度更高的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009/RG010)。
本产品操作简单，读数稳定，检测速度快，从样品制备到完成检测仅需约20分钟。只需用试剂盒中提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II，再取100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且发光信号比较稳定，通常5分钟内信号下降不超过10%。
本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存，配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性也非常好，反复冻融5次对检测效果无明显影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%。萤火虫萤光素酶检测试剂II在4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果，室温保存3天可保留60%以上的检测效果，37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。萤火虫萤光素酶检测试剂II即使仅保留约50%的检测效果，仍可以满足各种常规检测的要求。
萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[1]。本试剂盒的检测原理参考图2。
图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。
通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用[2]。
关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择，请参考碧云天的相关网页：
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm)。
本试剂盒RG007S和RG007M分别可以测定100个和1000个样品。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| RG007S-1 | 报告基因细胞裂解液 | 60ml |
| RG007S-2 | 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 | 10ml |
| RG007S-3 | 萤火虫萤光素酶检测底物 | 1瓶 |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| RG007M-1 | 报告基因细胞裂解液 | RG007S-1×10 |
| RG007M-2 | 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 | RG007S-2×10 |
| RG007M-3 | 萤火虫萤光素酶检测底物 | RG007S-3×10 |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃避光保存，至少一年有效。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II，-80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3-6个月内使用。
注意事项：
对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG007)；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)。
为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂II。
由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测试剂使用。
尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响，为保证萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。
检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。
样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG027/RG028)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。
| 器皿类型 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
| 报告基因细胞裂解液(μl/孔) | 100 | 150 | 200 | 300 | 500 |
注：如果萤光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后，10,000-15,000×g离心3-5分钟，取上清用于测定。
注：细胞裂解后可立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。
2. 准备检测试剂：融解冻存的萤火虫萤光素酶检测缓冲液，将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中，旋紧瓶盖后适当颠倒混匀，当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II。按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量，取适量萤火虫萤光素酶检测试剂II，平衡至室温。注：冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口，旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面，使粉末尽量掉落至瓶底，然后再轻轻旋开瓶盖，并注意不要损失冻干粉。
3. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
4. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)，取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
5. 各孔加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果以及与同类竞争产品的检测效果比较可以参考图1。
常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。
参考文献：
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.
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双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029S)
双萤光素酶报告基因检测试剂盒II
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| RG029S | 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II | 100次 | 856.00元 |
碧云天生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit II)，是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)，后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase)，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质，该物质可以淬灭约99.9%以上的萤火虫萤光素酶信号，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，从而实现双萤光素酶报告基因检测。
本产品是双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。双萤光素酶报告基因检测试剂盒，即RG027/RG028中的萤火虫萤光素酶检测试剂为即用型液体，其优点是无需配制即可直接使用，但需要-80℃保存，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品，即RG029，为RG027/RG028的冻干粉版本，优点是在-20℃保存非常稳定，缺点是使用前需要使用提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。
本产品的性能总体优于国外主要同类产品。本产品的用途与Promega公司的Dual-Luciferase® Reporter Assay System基本相同。本产品的检测灵敏度显著优于国外同类产品(Competitor P)，萤火虫萤光素酶的信号强度比国外同类产品(Competitor P)提高了约40%，海肾萤光素酶的信号强度比同类产品(Competitor P)提高了约25% (图1A、1B)；萤火虫萤光素酶的化学发光的信号稳定性显著优于国外同类产品(Competitor P) (图1C)，海肾萤光素酶的化学发光的信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致或略优(图1D)；本产品的海肾萤光素酶检测工作液对萤火虫萤光素酶的淬灭效果较国外同类产品(Competitor P)更佳(图1A)。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。
图1. 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)的检测效果对比图。本试剂盒与碧云天生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)的检测效果完全一致。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对共转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为整体检测效果对比图，图B为萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶的化学发光强度的检测效果对比图，图C为萤火虫萤光素酶的化学发光稳定性的检测效果对比图，图D为海肾萤光素酶的化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本产品发光强度高。对于相同的样品，萤火虫萤光素酶的检测，本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)高约30-45%，海肾萤光素酶的检测，本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)高约20-30% (图1A、B)。
本产品操作简单，读数稳定，检测速度快，从样品制备到完成整个检测过程仅需约25分钟。只需用试剂盒中提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II，海肾萤光素酶检测底物和海肾萤光素酶检测缓冲液按照1:100的比例混合即可配制成海肾萤光素酶检测工作液，再各取100微升先后与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且化学发光比较稳定，萤火虫萤光素酶的信号半衰期约15分钟，海肾萤光素酶的信号半衰期约200秒。
本产品的海肾萤光素酶检测工作液对萤火虫萤光素酶的淬灭效果好。本试剂盒中的海肾萤光素酶检缓冲液和海肾萤光素酶检测底物配制的海肾萤光素酶检测工作液含有抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质，海肾萤光素酶检测试剂加入后通过简单的混匀，就可以抑制99.9%以上的萤火虫萤光素酶催化的发光信号，大大提高了后续海肾萤光素酶活性检测的精准性。
本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存，配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性及海肾萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测底物(100X)的稳定性均较好。萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对检测效果基本无影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%；4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果；室温保存1天可保留70%以上的检测效果，保存3天可保留60%以上的检测效果；37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。海肾萤光素酶检测缓冲液反复冻融10次、4℃或室温保存3天对检测效果基本无影响，37℃保存1天对检测效果的影响不超过5%。海肾萤光素酶检测底物(100X)在4℃保存1周、室温保存1天检测效果下降不到10%，室温保存3天、37℃保存1天，仍可保留80%以上的活力。
萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence) [1]。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[2]。本试剂盒的检测原理参考图2.
图2. 双萤光素酶的检测原理图。
通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异[3]。
关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择，请参考碧云天的相关网页：
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。
本试剂盒RG029S和RG029M分别可以测定100个和1000个样品。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| RG029S-1 | 报告基因细胞裂解液 | 60ml |
| RG029S-2 | 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 | 10ml |
| RG029S-3 | 萤火虫萤光素酶检测底物 | 1瓶 |
| RG029S-4 | 海肾萤光素酶检测缓冲液 | 10ml |
| RG029S-5 | 海肾萤光素酶检测底物(100X) | 100µl |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| RG029M-1 | 报告基因细胞裂解液 | RG029S-1×10 |
| RG029M-2 | 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 | RG029S-2×10 |
| RG029M-3 | 萤火虫萤光素酶检测底物 | RG029S-3×10 |
| RG029M-4 | 海肾萤光素酶检测缓冲液 | RG029S-4×10 |
| RG029M-5 | 海肾萤光素酶检测底物(100X) | RG029S-5×10 |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存，一年有效。萤火虫萤光素酶检测底物和海肾萤光素酶检测底物(100X)须-20℃避光保存。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II，-80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3-6个月内使用。
注意事项：
对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
加入海肾萤光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫萤光素酶的抑制可以达到约99.9%以上。但总会残留微量活性，因此，宜在转染时把海肾萤光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫萤光素酶RLU读数的10%。海肾萤光素酶的读数高于萤火虫萤光素酶的读数是完全可以的，通常不会有明显的负面影响。
本试剂盒的海肾萤光素酶检测缓冲液在反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，混匀后直接使用，经测试通常不会影响后续的检测效果。
为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同的时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与对应的检测底物混合成检测试剂使用。
尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响，为保证萤火虫萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的检测效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。
样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。
RG027-4 海肾萤光素酶检测底物(100X)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于100µl的情况，此时用无水乙醇把体积补足至100µl，并混匀后即可使用。
海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降，因此不可配制成工作液后长期保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放II于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。
| 器皿类型 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
| 报告基因细胞裂解液(μl/孔) | 100 | 150 | 200 | 300 | 500 |
注：如果萤光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后，10,000-15,000×g离心3-5分钟，取上清用于测定。
注：细胞裂解后可以立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。
2. 融解萤火虫萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测缓冲液，并达到室温。将萤火虫萤光素酶检测缓冲液全部转移至萤火虫萤光素酶检测底物瓶中，旋紧瓶盖后适当颠倒混匀，当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II。海肾萤光素酶检测底物(100X)置于冰浴或冰盒上备用。注：冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口，旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面，使粉末尽量掉落至瓶底，然后再轻轻旋开瓶盖，并注意不要损失冻干粉。
3. 按照每个样品需100微升的量，取适量海肾萤光素酶检测缓冲液，按照1:100加入海肾萤光素酶检测底物(100X)配制成海肾萤光素酶检测工作液。例如，1毫升海肾萤光素酶检测缓冲液中加入10微升海肾萤光素酶检测底物(100X)充分混匀后即可配制成约1毫升海肾萤光素酶检测工作液。
4. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
5. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)，取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
6. 加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。
7. 在完成上述测定萤火虫萤光素酶步骤后，加入100微升海肾萤光素酶检测工作液，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果可以参考图1。
8. 在以海肾萤光素酶为内参的情况下，用萤火虫萤光素酶测定得到的RLU值除以海肾萤光素酶测定得到的RLU值。根据得到的比值来比较不同样品间目的报告基因的激活程度。如果以萤火虫萤光素酶为内参，也可以进行类似计算。
常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。 有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。
参考文献：
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. Matthews J C, Hori K, Cormier M J. Biochemistry. 1977. 16(1):85-91.
3. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.
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使用本产品的文献：
生物安全柜BHC-1300II A2/BHC-1300II B2
生物安全柜BHC-1300II A2/BHC-1300II B2
| 品牌 |
|---|
生物安全柜BHC-1300II A2/BHC-1300II B2是医药卫生、生物工程、科学实验等领域用于无菌无尘洁净环境的局部净化单元。
30%外排，70%循环。
现货，！
生物安全柜BHC-1300II A2/BHC-1300II B2
工作原理
空气经侧面的初效空气过滤器和低噪音离心式通风机压入静压箱，经高效空气过滤器在顶部均匀吹出，形成高洁净的空气幕，去除工作区域内的原自然空气，开机后五分钟即达到理想的高洁净度空间。采用可调风量风机系统，旋钮式开关调节电压，保证工作区内的风速始终处于理想状态。
结构特点
箱体壳采用进口中纤板材紧密结合，保证无锈蚀发生，面层电喷涂表面处理，表面光滑无尘，台板敷设不锈钢板，电器开关用轻触型方便开关，方便使用。灯管用电子镇流器。
生物安全柜BHC-1300II A2/BHC-1300II B2
技术参数
|
参数 |
BHC-1300II A/B2 |
BHC-1300II A/B3 |
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洁净度 |
100级@≥0.5μm(美联邦209E） |
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菌落数 |
≤0.5个/皿．时（Φ90㎜培养平皿） |
|||
|
平均 风速 |
门内侧 |
0.38±0.025m/s |
||
|
中 间 |
0.26±0.025m/s |
|||
|
里 侧 |
0.27±0.025m/s |
|||
|
前面吸入风速 |
0.35m±0.025m/s |
0.55m±0.025m/s |
||
|
气密度 |
≤10-6m/s(在500Pa压力下) |
≤10-6m/s(在500Pa压力下) |
||
|
噪 音 |
≤62dB(A) |
≤62dB(A) |
||
|
振动半峰值 |
≤5μm |
≤5μm |
||
|
照 度 |
≥300LX |
≥300LX |
||
|
电 源 |
AC单相220V/50Hz |
AC单相220V/50Hz |
||
|
大功耗 |
600W |
600W |
||
|
重量 |
﹤250㎏ |
﹤350㎏ |
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|
高效过滤器规格及数量 |
1050×60×050×① |
1335×600×50×① |
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|
荧光灯/紫外灯规格及数量 |
20W×①/20W×① |
30W×①/30W×① |
||
|
外形尺寸 |
1300×800×1950mm |
1530×800×1950mm |
||
|
工作区尺寸 |
1000×650×580mm |
1340×650×580mm |
||
|
说明：本公司接受客户特殊规格要求的非标型生物洁净安全柜的定制。 |
||||
安装使用
本工作台就位地点应在环境较为清洁的工作室内（置于十万等级或三十万等级的初级净化间），插上电源，按控制面板上的所示功能开启即可，在开机前应对净化台的工作区面及外壳进行认真清洁处理，去除表面积尘，开机后十分钟即可进行实施正常操作使用。
日常维护
1、根据实际情况，定期将初效过滤器拆下清洗，清洗周期一般为3~6个月。（若不清洗，积尘将导致进风量不足而降低洁净效果）。
2、当正常调换或清洗初效空气过滤器后，仍不能达到理想的截面风速时，则应调节风机的工作电压，从而达到理想的均匀风速。
3、一般在使用十八个月后当风机工作电压调整至高点时，仍不能达到理想风速时，则说明高效空气过滤器积尘过多（滤料上滤孔已基本被堵，要及时更新），一般高效空气过滤器的使用期限为十八个月。
4、更换高效空气过滤器时，应注意型号规格尺寸的正确（原生产厂家配置），按箭头风向装置，并注意过滤器的周边密封，无渗漏现象发生。
一般故障原因及排除方法
|
故障现象 |
原因 |
排除方法 |
|
总电源开关和不上，自动跳闸 |
1、风机卡死导致电动机堵转，或者线路有短路。 |
1、调整风机轴位置，或者更换叶轮和轴承，检查线路是否完好。 2、对照电路图逐点检查线路、元器件对外壳的绝缘电阻，修复绝缘故障部位。 |
|
风速较低 |
1、 初效过滤器积尘过多 2、 高效过滤器失效 |
1、 清洗初效过滤器。 2、 更换高效过滤器。 |
|
风机不转 |
1、 接触器不工作 2、 风机电源熔芯已熔断 |
1、 检查接触器线路是否正确。 2、 更换熔芯。 |
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荧光灯不亮 |
1、 灯管或继电器损坏 2、 灯管电源熔丝已熔断 |
1、 更换灯管或继电器。 2、 更换熔芯。 |
瑞士IBS VIAFLO II轻型电动移液器
瑞士IBS VIAFLO II轻型电动移液器
瑞士IBS VIAFLO II轻型电动移液器采取了人体工程学设计，高效且容易操作，解决了传统手动移液器中的许多问题。有单道、8道、12道和16道 VIAFLO II 移液器可供选择。
进口
现货
瑞士IBS VIAFLO II轻型电动移液器
电动移液器
高效移液
我们的电动移液器利用一系列*的功能使您的日常移液变得更加容易。即使*使用的用户也能快速掌握直观用户界面的使用。
任何移液工作都可以通过宽大彩色显示屏上的控制轮进行编程和执行：从单个转移到复杂的流程及微孔板移液。
我们*的移液器枪头适配器能够*匹配INTEGRA GripTip 移液器枪头。由此，我们实现了非常低的装载和卸载力，从而显著简化了日常移液工作。受益于GripTip 系统*的配合，GripTips 不会脱落，可始终保持相同的高度，且不会泄漏。
多种单通道和多通道电动移液器适用于不同的体积规格。具体如下：
VOYAGER：可调间距多通道移液器，只需按下按钮即可调整枪头间距。
VIAFLO：单通道和多通道电动移液器。
VIAFLO 96/384：手持式96和384通道电动移液器。
*的移液系统
您的枪头时常有松动，漏液或脱落的问题么？这个在实验室中常见的问题是通用枪头的设计造成的。需要“锤击”来使塑料枪头内圈轮缘扩张，以这种方式上完枪头后，轮缘会开始移动回到其原来的形状，远离移液器。这可能会导致漏液，未对齐，甚至枪头完全脱落！
这就是INTEGRA 特别设计移液器与GripTips组成一个*的移液系统的原因。GripTips 枪头轻松装载，卡到入位，提供了可靠的连接。GripTips *脱落并且任何时刻都可以保持*的液面，以达到优异的准确度和重复性。
瑞士IBS VIAFLO II轻型电动移液器
它是如何工作的
VIAFLO II移液器采取了人体工程学设计，高效且容易操作，解决了传统手动移液器中的许多问题。
GRIPTIP锁扣技术
不论发生多少偶然触碰, GRIPTIPS都能确保与移液器的牢固附着和*对接。你再也不需要锤装枪头，或担心枪头脱落！
1) LOBES
2) O-RING SEAL
3) RIM SNAPS OVER THE LOBES
4) SHOULDER
GripTips 的边缘 Rim（3） 将卡住凸起 Lobes（1），将其连接牢固，使 GripTips绝不会意外脱落。
Shoulder（4）可防止枪头安装的时候超出正常安装位置，确保所有枪头都安装在同一高度。这意味着枪头与移液器非连接即分离，而不存在过紧或者松脱的任何中间状态。
简便的操作和导航
触摸式转盘采用人体工学设计，可快速、舒适地调整移液参数。无需反复扭动手指或按动按钮，手指滑过转盘即可轻松完成体积调整。
彩色屏幕提供了全面的菜单式导航（多种语言），并显示移液程序全称，使VIAFLO 移液操作格外直观且清晰易懂。
多样的移液模式
VIAFLO II 预设了10个标准移液程序，只需设定体积、速度等几个参数即可使用。
对于更复杂的移液程序，用户可以创建多达40 个自定义程序，自定义程序的设置以移液步骤为基础，可以设定吸取、分配、混合或更多的液体处理步骤。
连接 VIALINK 移液器管理软件（VIALINK PIPETTE MANAGEMENT SOFTWARE）后， 也可在电脑端快速完成复杂自定义程序的创建，并可保存于电脑中。
1) 当前激活的移液模式
2) 下一个移液步骤
3) 吸液量
4) 其他参数，如速度
产品应用：
重复分液：相同体积的等分移液。
- 重复分液模式可进行相同体积的等分移液，无需更换枪头，快速填充和处理微孔板。
- 为提高分液的准度和精度，用户可以自定义*和末次分液，将其回收或丢弃。
手动移液：移液循环的完全控制。
手动移液模式让使用者能够完全地控制移液循环。只需按下RUN按钮，移液器即可吸取或分液。吸液量和速度可以设定。
该模式可用于：
- 测定离心管或孔板中的液体体积
- 进行滴定实验
- 不扰动沉淀的情况下吸取上清液
样品稀释：利用空气间隙分隔吸取两种不同液体。
该模式可以吸取两种不同液体，两者被空气间隙分开，再将全部液体排出。
这种模式的典型应用是稀释高浓度样品，先吸取稀释液，空气间隙紧随其后，后吸取样品液。这样在液体排出时，稀释液将追随高浓度样品，以确保枪头中无残留样品。
反向移液：保留末次分液。
使用该模式时，将吸取大于实际所需体积的液体，通过保留末次分液达到精确称量。该模式的功能等于使用手动移液器实现反向移液技术。
反向移液技术用于粘性和挥发性液体的移液，也能在所需体积很小时提高移液精度。
变量分液：不同体积的非等分移液。
吸取一次，多次不同体积的非等分移液。变量分液模式无需在每次分液前调整体积。
技术规格
- 移液通道数：1, 8, 12 或 16
- 电源适配器：输入：100-240V, 50/60Hz；输出：5.7-6.4V, 3W
- 电池类型：可充电锂电池，3.7V, 1050mAh，标准充电时间：2.5小时。
订货信息
单道、8道、12道和16道 VIAFLO II移液器
单道VIAFLO II移液器（不包含蓝牙模块和电源）
| 量程 | 货号 |
| 0.5-12.5µl | 4011 |
| 2-50µl | 4016 |
| 5-125µl | 4012 |
| 10-300µl | 4013 |
| 50-1250µl | 4014 |
| 100-5000µl | 4015 |
8道VIAFLO II移液器（不包含蓝牙模块和电源）
| 量程 | 货号 |
| 0.5-12.5µl | 4621 |
| 2-50µl | 4626 |
| 5-125µl | 4622 |
| 10-300µl | 4623 |
| 50-1250µl | 4624 |
12道VIAFLO II移液器（不包含蓝牙模块和电源）
| 量程 | 货号 |
| 0.5-12.5µl | 4631 |
| 2-50µl | 4636 |
| 5-125µl | 4632 |
| 10-300µl | 4633 |
| 50-1250µl | 4634 |
16道VIAFLO II移液器（不包含蓝牙模块和电源）
| 量程 | 货号 |
| 0.5-12.5µl | 4641 |
| 2-50µl | 4646 |
| 5-125µl | 4642 |
人凝血酶原Human Prothrombin （Factor II） HP 1002
Enzyme Research （http://www.enzymeresearch.co.uk/）是一家拥有超过25年的酶研究的实验室，生产和开发多种用于基本凝血研究的多种酶和辅因子。在过去的十年Enzyme Research Laboratories为科学家参与止血和血栓形成的研究提供了宝贵支持。Enzyme Research通过不断追求产品的zui高品质，赢得了世界各地凝血研究实验室的信任。
Enzyme Research Laboratories为生物技术公司,制药行业、医院和大学的研究实验室提供用于的纯化抗凝因子。除了其制造能力，Enzyme Research Laboratories也创新研发领域中的血液凝固技术。
Human Prothrombin
HP 1002 Human Prothrombin （Factor II）
Prepared from fresh frozen human plasma. Human Prothrombin is a glycoprotein of molecular weight 72,000, and consists of a single polypeptide chain. Activation of Prothrombin by Factor Va, Xa and phospholipids yields the serine protease Thrombin. Prothrombin purity is determined by SDS-PAGE and shows no reduction upon incubation with 2-mercaptoethanol.
Buffer composition = 20 mM Tris-HCl/0.1 M NaCl/pH 7.4
*Extinction Coefficient （1%） = 13.6
One unit = 90 µg
Molecular Weight =72,000 daltonsAlso available: des-Gla-Human Prothrombin and Prothrombin Fragment 1 and 2