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LacSwith II哺乳动物诱导表达系统 （pOPRSVI，pOPI3CAT，pCMVLacI）说明书

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Stratagene LacSwith II哺乳动物诱导表达系统

Stratagene LacSwitch II Inducible Mammalian Expression System

Stratagene

Vectors：pOPRSVI，pOPI3CAT，pCMVLacI

产品参数: 

Mammalian Selection：G418, neo

载体抗性: 
氨苄青霉素（Ampicillin）
载体描述: 

Improved System

The improved LacSwitch? II inducible mammalian expression system consists of 3 vectors: pOPI3CAT vector from the original LacSwitch system and two new vectors, pCMVLacI and pOPRSVI/MCS, that dramatically improve the system’s performance and versatility. Lac repressor protein, produced from the pCMVLacI vector, blocks transcription by binding the Lac repressor protein to a specific DNA sequence （the operator） in the pOPI3CAT and pOPRSVI/MCS vectors. IPTG, which has no adverse effect in eukaryotic cells, decreases the binding affinity of the Lac repressor protein to the operator sequences, triggering transcription and expression of the inserted gene. The LacSwitch II system allows induction of the gene of interest within 4-8 hours.

Tight Repression

The new pCMVLacI vector replaces the p3’SS vector from the original system. The pCMVLacI vector provides greater repression of the gene of interest due to the increased strength of the CMV promoter. High expression of the lacI gene provides 2- to 10-fold tighter repression of the gene of interest than the original p3’SS vector. A nuclear localization sequence （NLS） directs expression of Lac repressor to the nucleus.

Directional Insertion of the Gene of Interest

To facilitate directional cloning, the multiple cloning site from pBluescript? II SK was inserted into pOPRSVI. The resulting pOPRSVI/MCS vector permits directional insertion of the gene of interest, decreasing the time required for screening. The presence of T3 and T7 promoters on either end of the MCS in the pOPRSVI/MCS vector allows easy sequencing and verification of positive inserts using T3 and T7 primers.

Removal of the RSV Promoter

The pOPI3CAT operator vector is included in the LacSwitch II system for replacing the RSV-LTR promoter with a promoter of interest. This vector contains three operators in the intron and unique restriction sites for removal of the RSV promoter.

 

 

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010S)

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萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)

产品编号: RG010S

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RG010S 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 100次 478.00元

碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (Enhanced Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit II)，是一种以萤光素(luciferin)为底物高灵敏度检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。

本产品是萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG009)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，即RG009为即用型液体，其优点是无需配制即可直接使用，但需要-80℃保存，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品，即RG010，为RG009的冻干粉版本，优点是在-20℃保存非常稳定，缺点是使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。

本产品的性能达到国外主要同类产品同等水平。本产品的性能和用途与Promega公司的Luciferase Assay System基本相同。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1，本产品的发光强度与国外同类产品(Competitor P)相近或略优(图1A)，发光信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致(图1B)。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010S)

图1. 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)的检测效果对比图。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)与碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)的检测效果完全一致。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为化学发光强度的检测效果对比图，图B为化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品，本产品的发光强度可以达到甚至略优于国外同类产品(图1A)，特别适用于Firefly luciferase表达水平低的样品检测。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平较高，或者样品数量较多、对发光信号的稳定性要求较高，也可以使用发光强度和灵敏度稍低，但发光信号更稳定的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006/RG007)。

本产品操作简单，检测速度快，从样品制备到完成检测仅需约20分钟。只需用试剂盒提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II，再取100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且发光信号比较稳定，信号半衰期约10分钟。

本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存，配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性非常好，反复冻融5次对检测效果无明显影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%。萤火虫萤光素酶检测试剂II在4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果，室温保存3天可保留60%以上的检测效果，37 ℃保存1天可保留50%以上的检测效果。萤火虫萤光素酶检测试剂II即使仅保留约50%的检测效果，仍可以满足各种常规检测的要求。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[1]。本试剂盒的检测原理参考图2。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010S)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用[2]。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择，请参考碧云天的相关网页：
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm)。

本试剂盒RG010S和RG010M分别可以测定100个和1000个样品。

包装清单：
产品编号 产品名称 包装
RG010S-1 报告基因细胞裂解液 60ml
RG010S-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG010S-3 萤火虫萤光素酶底物 1瓶
— 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
RG010M-1 报告基因细胞裂解液 RG010S-1×10
RG010M-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 RG010S-2×10
RG010M-3 萤火虫萤光素酶底物 RG010S-3×10
— 说明书 1份
保存条件：

-20℃避光保存，至少一年有效。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II -80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3-6个月内使用。

注意事项：

对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)。

为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂II。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成萤火虫萤光素酶检测试剂II使用。

尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响，为保证萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。

检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。。

样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。

为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG027/RG028)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注：如果萤光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后，10,000-15,000×g离心3-5分钟，取上清用于测定。
注：细胞裂解后可立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。
2. 准备检测试剂：融解冻存的萤火虫萤光素酶检测缓冲液，将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中，旋紧瓶盖后适当颠倒混匀，当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II，并平衡至室温。注：冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口，旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面，使粉末尽量掉落至瓶底，然后再轻轻旋开瓶盖，并注意不要损失冻干粉。
3. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
4. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)，取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
5. 各孔加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果以及与同类竞争产品的检测效果比较可以参考图1。

常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。

参考文献：
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.

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产品编号 产品名称 包装
RG005/RG006 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
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RG009S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) 100/1000次
RG010S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 100/1000次
RG016/RG017 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG027/RG028 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
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RG051S/M Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
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RG088S/M Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG089S/M Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG126S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG127S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液(增强型) 10/100ml
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RG132S/M 双萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010S)
萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010S)

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萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG007M)

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萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II

产品编号: RG007M

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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG007S 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100次 427.00元
RG007M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II 1000次 2399.00元

碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit II)，是一种以萤光素(luciferin)为底物高信号稳定性检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。

本产品是萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG005/RG006)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，即RG005/RG006为即用型液体，其优点是无需配制即可直接使用，但需要-80℃保存，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品，即RG007，为RG005/RG006的冻干粉版本，优点是在-20℃保存非常稳定，缺点是使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。

本产品的性能基本达到甚至在某些方面优于国外主要同类产品。本产品的用途与碧云天的同类产品萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (Enhanced Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit)及Promega公司的Luciferase Assay System基本相同。本产品(RG005/RG006)的化学发光信号稳定性显著优于萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)及国外同类产品(Competitor P) (图1B)，发光强度也可以达到萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)及国外同类产品(Competitor P)的约40% (图1A)。本产品与RG009及国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG007M)

图1. 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG007)的检测效果对比图。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG007)与碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)的检测效果完全一致。图中所示为本产品，相当于RG005/RG006，和碧云天的同类产品萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)及国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为化学发光强度的检测效果对比图，图B为化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品发光信号稳定。本产品的发光信号稳定性相对比较好，1分钟内信号基本保持稳定，信号变动不超过2%，3分钟内的信号变动不超过5%，5分钟内信号波动不超过10%，信号半衰期约40分钟，在发光稳定性方面显著优于RG009和国外同类产品Competitor P (图1B)，特别适用于待测样品数量较多的96孔板中进行萤火虫萤光素酶活性的多孔测定。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品，本产品的发光效果可以达到RG009和国外同类产品的约40%，虽然低于RG009和国外同类产品(Competitor P)，但是发光强度相对已经非常高，可以满足各种常规检测。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平非常低时，推荐使用发光强度和灵敏度更高的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009/RG010)。

本产品操作简单，读数稳定，检测速度快，从样品制备到完成检测仅需约20分钟。只需用试剂盒中提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II，再取100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且发光信号比较稳定，通常5分钟内信号下降不超过10%。

本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存，配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性也非常好，反复冻融5次对检测效果无明显影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%。萤火虫萤光素酶检测试剂II在4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果，室温保存3天可保留60%以上的检测效果，37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。萤火虫萤光素酶检测试剂II即使仅保留约50%的检测效果，仍可以满足各种常规检测的要求。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[1]。本试剂盒的检测原理参考图2。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG007M)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用[2]。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择，请参考碧云天的相关网页：
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm)。

本试剂盒RG007S和RG007M分别可以测定100个和1000个样品。

包装清单：
产品编号 产品名称 包装
RG007S-1 报告基因细胞裂解液 60ml
RG007S-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG007S-3 萤火虫萤光素酶检测底物 1瓶
— 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
RG007M-1 报告基因细胞裂解液 RG007S-1×10
RG007M-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 RG007S-2×10
RG007M-3 萤火虫萤光素酶检测底物 RG007S-3×10
— 说明书 1份
保存条件：

-20℃避光保存，至少一年有效。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II，-80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3-6个月内使用。

注意事项：

对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG007)；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)。

为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂II。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测试剂使用。

尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响，为保证萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。

检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。

样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。

为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG027/RG028)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注：如果萤光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后，10,000-15,000×g离心3-5分钟，取上清用于测定。
注：细胞裂解后可立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。
2. 准备检测试剂：融解冻存的萤火虫萤光素酶检测缓冲液，将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中，旋紧瓶盖后适当颠倒混匀，当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II。按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量，取适量萤火虫萤光素酶检测试剂II，平衡至室温。注：冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口，旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面，使粉末尽量掉落至瓶底，然后再轻轻旋开瓶盖，并注意不要损失冻干粉。
3. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
4. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)，取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
5. 各孔加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果以及与同类竞争产品的检测效果比较可以参考图1。

常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。

参考文献：
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.

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RG009S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) 100/1000次
RG010S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 100/1000次
RG016/RG017 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG027/RG028 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG029S/M 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100/1000次
RG051S/M Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG052S/M Bright-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG055S/M One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG056S/M One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG058S/M Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG059S/M Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG088S/M Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG089S/M Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG126S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG127S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液(增强型) 10/100ml
RG129S/M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG132S/M 双萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG007M)
萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG007M)

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advancedbiomatrix II型胶原蛋白简介

发表于由

advancedbiomatrix II型胶原蛋白简介

 

II型胶原蛋白

溶液，0.5 mg/ml（牛）

目录 #5196

II 型牛胶原蛋白是一种蛋白质家族，特别是在哺乳动物的肉和结缔组织中发现。该产品以无菌溶液形式提供，每瓶约 0.5 mg，约 0.5 mg/ml，溶于 500 mM 乙酸。

产品描述

 

牛胶原蛋白 II 是一种蛋白质家族，特别是在哺乳动物的肉和结缔组织中发现（约占身体总蛋白质的三分之一）。已经描述了超过两打类型的胶原蛋白；II 型主要存在于透明软骨中（透明软骨中 50% 的蛋白质是 II 型胶原蛋白），也存在于眼睛的玻璃体液中。

该产品以无菌溶液形式提供，每瓶约 0.5 mg，约 0.50 mg/ml，溶于 500 mM 乙酸。II 型胶原蛋白以用户友好的包装形式提供，以供使用和储存。II 型胶原蛋白可用于培养多种细胞类型。II 型胶原蛋白通常用作细胞培养研究的涂层材料、3D 胶原蛋白凝胶的形成或抗体生产的抗原。

 

参数、测试和方法 II 型胶原蛋白 #5196
灭菌方法 过滤
形式 解决方案
包装尺寸 0.5 毫克 (1 毫升)
贮存温度 2-10°C

胶原蛋白浓度 – 双缩脲

 ~0.5 毫克/毫升

保质期

 自收到之日起至少 6 个月
酸碱度 ~2.5

电泳图案 – 考马斯蓝

 特征
内毒素 (LAL) < 5.0 欧/毫升
细胞附着试验 经过
来源 牛软骨

涂装程序

注意： 使用这些建议作为指导来确定适合您的培养系统的最佳包被条件。

  1. 从瓶子中取出所需数量的胶原蛋白并分配到稀释容器中。

  2. 用 500 mM 乙酸溶液将产品稀释至所需浓度。

  3. 轻轻摇晃内容物，直至*混合。

  4. 向培养表面添加大约量的稀释 II 型胶原蛋白，确保整个表面都被涂层。

  5. 室温孵育，加盖 1-2 小时。

  6. 孵化后，吸出任何多余的剩余材料。

  7. 用无菌培养基或平衡盐溶液仔细冲洗涂层表面。避免刮伤表面。

  8. 从涂层表面吸出剩余的材料。

  9. 涂层培养容器现在可以使用了。包被的培养容器可以储存在 2 到 10°C

 

 

胶原酶 I II III IV四个型之间区别及用法

发表于由

消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶，透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用； 胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，以胶原I为主。

胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等. 胰蛋白酶作用较强，容易造成平滑肌细胞损坏；
胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,zui终浓度200u/mL  此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本,所以选择价廉物美的胶原酶是关键，所以不光要看重量还要看每MG的活性单位.

 

胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质，因此，这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感，极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。

胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为zui终浓度200U/ml。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

中文名称： I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、V型胶原酶

英文名称：Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V

CAS号: 9001-12-1

规格：100mg, 1g ,5

产地：Worthington sigma  invitrogen

外观: 棕色或棕褐色结晶状冻干粉；

保存：-20°C

胶原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意标签中的活性单位,zui终配制 成为200u/mL就可以了.,

胰蛋白酶的配制、过滤除菌与分装过程

准备样品：干粉，PBS缓冲液，离心管两个、冻存管20个、盒子一个、枪头1盒、灭菌器、注射器。

准备工作：将离心管、冻存管装载盒子中高温高压灭菌。

配制：

1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度0.25％用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS（PH到7.2左右）液中。搅拌混匀，置于4℃内12小时。

2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。

3.分装：将除菌之后的胰蛋白酶用移液枪分装至

 

 

 

 

A: Collagenase I（胶原酶I型） :  主要用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。

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品名

包装

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品牌

LS004194

Collagenase I（胶原酶I型）

100 mg

476

Worthington

LS004196

Collagenase I（胶原酶I型）

1 gm

2464

Worthington

LS004197

Collagenase I（胶原酶I型）

5 gm

10360

Worthington

17100-017

Collagenase I（胶原酶I型）

1g

3025

invitrogen

C0130-100MG

Collagenase I（胶原酶I型）

100mg

526.5

sigma

C0130-500MG

Collagenase I（胶原酶I型）

500MG

1473.03

sigma

C0130-1G

Collagenase I（胶原酶I型）

1G

2208.96

sigma

C0130-5G

Collagenase I（胶原酶I型）

5G

6113.25

sigma

 

 

B: Collagenase II（胶原酶II型） : 适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织细胞的分离。

 

订货信息

 

货号

品名

包装

价格

品牌

LS004177

Collagenase II（胶原酶II型）

5 gm

10360

Worthington

LS004176

Collagenase II（胶原酶II型）

1 gm

2464

Worthington

LS004174

Collagenase II（胶原酶II型）

100 mg

476

Worthington

17101-015

Collagenase II（胶原酶II型）

1g

3025

invitrogen

C6885-25MG

Collagenase II（胶原酶II型）

25MG

508.95

sigma

C6885-100MG

Collagenase II（胶原酶II型）

100mg

778.05

sigma

C6885-500MG

Collagenase II（胶原酶II型）

500MG

1,980.81

sigma

C6885-1G

Collagenase II（胶原酶II型）

1G

2,971.80

sigma

C6885-5G

Collagenase II（胶原酶II型）

5G

7,926.75

sigma

 

 

C: Collagenase III（胶原酶 III型） 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用

 

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货号

品名

包装

价格

品牌

LS004182

Collagenase III（胶原酶 III型）

1 gm

2464

Worthington

LS004183

Collagenase III（胶原酶III型）

5 gm

10360

Worthington

LS004180

Collagenase III（胶原酶III型）

100 mg

476

Worthington

 

 

D: Collagenase IV（胶原酶IV型）:胶原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织, 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用。

订货信息

 

货号

品名

包装

价格

品牌

17104-019

Collagenase IV（胶原酶IV型）

1g

3025

invitrogen

C5138-25MG

Collagenase IV（胶原酶IV型）

25MG

452.79

sigma

C5138-100MG

Collagenase IV（胶原酶IV型）

100mg

772.20

sigma

C5138-500MG

Collagenase IV（胶原酶IV型）

500MG

2,530.71

sigma

C5138-1G

Collagenase IV（胶原酶IV型）

1G

4,095.00

sigma

C5138-5G

Collagenase IV（胶原酶IV型）

5G

15,420.60

sigma

LS004189

Collagenase IV（胶原酶V型）

5 gm

10360

Worthington

LS004188

Collagenase IV（胶原酶V型）

1 gm

2464

Worthington

LS004186

Collagenase IV（胶原酶V型）

100 mg

476

Worthington

 

E: Collagenase V（胶原酶V型）: 胶原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，结缔组织分离。

 

货号

品名

包装

价格

品牌

LS005283

Collagenase V（胶原酶V型）

5 gm

12460

Worthington

LS005282

Collagenase V（胶原酶V型）

1 gm

2968

Worthington

LS005280

Collagenase V（胶原酶V型）

100 mg

588

Worthington

C9263-25MG

Collagenase V（胶原酶V型）

25MG

469.17

sigma

C9263-100MG

Collagenase V（胶原酶V型）

100mg

625.95

sigma

C9263-500MG

Collagenase V（胶原酶V型）

500MG

1,814.67

sigma

C9263-1G

Collagenase V（胶原酶V型）

1G

2,845.44

sigma

C9263-5G

Collagenase V（胶原酶V型）

5G

5,686.20

sigma

 

我们公司zui大优势是强大的采购，

1：基本什么都能进口，血清，抗体，耗材，还有部分限制进口的，

2： 货品全，现经营过700多个品牌，基本所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷偏的产品那就更有优势，

3：提供加急服务，一般1-2周到货，超过时限加急费全免

4：价格公道，绝大部分价格有优势，当然不能保证100%产品都有价格优势，

5：良好的信誉，大部分客户我们提供货到付款服务，客户包括清华，北大 交大 复旦，中山等100多所大学，ROCHE，阿斯利康，国药 ，fisher等500多家公司

6：我们还是santa,Advanced Biotechnologies Inc;Athens Research & Technology, bangs, BBInternational, crystalchem, dianova, FD Neurotechnologies, Inc. FormuMax Scientific, Inc; Genebridege; Glycotope Biotechnology GmbH; iduron; Innovative Research of America； Ludger ； neuroprobe; omicronbio; Polysciences; prospecbi; QA-BIO；quickzyme；RESEARCH DIETS, INC；sterlitech；sysy；TriLink BioTechnologies, Inc；worthington-biochem;zyagen;……几十家国外公司代理
7：我们还从事invitrogen，qiagen; abcam ;sigma;neb; roche;merck; rnd; BD; GE; pierce; BioLegend….等*批发

 

Mediagnost IGF-II 说明书

发表于由

世界*实验材料供应商 Mediagnost  上海金畔生物为其中国代理， Mediagnost  在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， Mediagnost  就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

 Mediagnost  中国代理, Mediagnost  上海代理， Mediagnost  北京代理，Mediagnost  广东代理，Mediagnost  江苏代理Mediagnost  湖北代理,Mediagnost  天津,Mediagnost  黑龙江代理,Mediagnost  内蒙古代理,Mediagnost  吉林代理,Mediagnost  福建代理, Mediagnost  江苏代理, Mediagnost  浙江代理,Mediagnost  四川代理,

Mediagnost作为研究和诊断的制造公司，始建于1985年在Tübingen并迅速发展成为一个现代化和创新的生物技术公司。今天，我们是一个性诊断公司。

在研究和生产的科技园蒂宾根大学，罗伊特林根现代化和装备精良的设施，我们是在*条件下。我们的实验室被批准用于S2的作品。

我们的诊断产品的制造是须遵守德国法律对医疗器械和欧盟指令98/79拥有/ EC对医疗产品的质量要求。Mediagnost具有相应已由认证机构认证的ISO 13485质量管理体系。

胰岛素样生长因子-II（IGF-II）由67个氨基酸组成，分子量为7,5kDa。IGF-II在胚胎发育期间在几种不同组织中表达。该生长因子与甘露糖-6-磷酸受体高亲和力结合，但也可以结合IGF-I和胰岛素受体。IGF-II调节胎儿生长通常由肿瘤细胞形成。此外，IGF-II可能与心血管疾病有关。

Mediagnost提供两种用于测量人IGF-II的非提取测试系统，这两种测试系统均按照标准NIBSC96 / 53进行校准。

主要测定特征的概述如下表所示。更多详细信息可在包装插页中获得，有关特殊要求或问题，请通过电子邮件或直接与我们。

 

IGF-II

ELISA

RIA
产品编号

E30

R30
监管状况（欧盟）

IVD

RUO
参考资料 NIBSC 96/538 NIBSC 96/538
孵化时间 3H 2天和1.5小时
抗体 老鼠/山羊 兔子
标准 重组IGF-II 重组IGF-II
测定范围
[μg/ L]		 0,016 – 3609 0,039 – 5050
样本矩阵

血清
EDTA- /肝素血浆

血清
EDTA- /肝素血浆
样品稀释 1：401 1：101
分析型 灵敏度
[μg/ L]		 0,02 0039
内部/间隔方差[％] <10 <10
参考值 Blum W，Schweizer R：胰岛素样生长因子及其结合蛋白; 在Ranke MB（ed）：Diagnostics of endocrine function in children and teenly。Basel，Karger，2003。在酸 – 乙醇萃取后进行测量，并且将值作为回收率（因子1.2）。

 

MHC II Dextramer – 识别抗原特异性CD4+ T 细胞

发表于由

immudex MHC II Dextramer® – 识别抗原特异性 CD4+ T 细胞

提高灵敏度以获得可靠结果

通常在抗原呈递细胞表面表达，MHC II 分子对接并启动 CD4+ T 细胞。

鉴于抗原特异性 CD4+ T 细胞在招募和协调其他免疫细胞方面的作用，它们对许多疾病的免疫反应至关重要。使用标准试剂检测和分层通常具有挑战性，通过 Dextramer® 技术的高亲和力和增强的灵敏度揭示抗原特异性 CD4+ T 细胞。

MHC II Dextramer® 试剂在灵活的葡聚糖骨架上具有多种 MHC 肽复合物和荧光团，专为 CD4+ T 细胞反应的高分辨率表征而设计，即使在低丰度细胞和血液等复杂基质中也是如此。

 

MHC II Dextramer® 通过流式细胞术检测血液样本中的 DRB1*0101/EBV 特异性 T 细胞（内部数据）。

细致而精确的研究工具

使用 MHC II Dextramer® 试剂突破流式细胞仪检测的界限。MHC II Dextramer® 试剂专为高亲和力和出色的信噪比而设计，使您能够自信地检测抗原特异性 CD4+ T 细胞。

  • 全面了解 CD4+ T 细胞反应，甚至是低亲和力的反应。

  • 确保一致、可重复和可比较的结果。

  • 扩大您的研究范围。

  • 确保实验的灵活性。

  • 目录号或所需的 MHC 等位基因-肽组合。
         – 查阅我们的可用MHC 等位基因列表 – 使用我们的预测工具
         计算预测的 MHC 肽亲和力

  • 荧光团（PE、APC、FITC 或无）

  • 测试规模（50,150、500、1000 次测试）。一项测试是 10 µl 试剂，足以染色 1–3 x 10^6 淋巴细胞或 1–3 x 10^5 克隆抗原特异性 T 细胞。

Cat. No.

 Allele Peptide Antigen Disease/Organism
FA10001 DRB1*0101 PKYVKQNTLKLAT HA Influenza
FA10002  DRB1*0101  PVSKMRMATPLLMQA CLIP Endogenous Ag
FA10003  DRB1*0101  TSLYNLRRGTALA  EBNA1 EBV 
FA10004 DRB1*0101  PEQWMFQGAPPSQGT EBNA3A EBV 
FA10005  DRB1*0101  QEIYMQHTYPISA Tetanus Toxin Tetanus 
FA10006  DRB1*0101  LPLKMLNIPSINVH pp65 CMV 
FB10001  DRB1*0401  PKYVKQNTLKLAT HA Influenza
FB10002 DRB1*0401  PVSKMRMATPLLMQA CLIP Endogenous Ag
FB10012 DRB1*0401  GAGSLQPLALEGSLQKRG Proinsulin Diabetes 
FB10013 DRB1*0401  IAFTSEHSHFSLK  GAD65  Diabetes 
FB10014 DRB1*0401 NFIRMVISNPAAT GAD65  Diabetes 
FD10001 DRB1*1101 PKYVKQNTLKLAT HA Influenza
FD10002  DRB1*1101 PVSKMRMATPLLMQA CLIP Endogenous Ag
FD10020  DRB1*1101 EHPTFTSQYRIQGKL pp65 CMV
FH10002 DPB1*0401  PVSKMRMATPLLMQA CLIP Endogenous Ag
FH10035 DPB1*0401  SLLMWITQCFLPVF  NY-ESO Cancer 
FH10036  DPB1*0401   TQHFVQENYLEY  MAGE-A3  Cancer 
FH10037  DPB1*0401  KKYFAATQFEPLA Oxytocinase  Cancer
FI10187 HLA-DQ2.5 QLQPFPQPELPY α-I, Gliadin Celiac disease
FI10188 HLA-DQ2.5 GMATPLLMQALPMGAL CLIP2 Endogenous Ag

 

Test Size  Price (EUR) Price (USD)
50 tests 1.349* 1,549*
150 tests 2.599* 2,999*
500 tests 6.199* 7,099*
1000 tests 10.799* 12,349*

 

Collagenase II 胶原酶II型说明书

发表于由

Collagenase II 胶原酶II型说明书

 


产品详情

货号

规格

价格

LS004174-100mg

100mg

520

LS004176-1g

1g

3000

LS004177-5g

5g

13500

LS004177-15g

15g

询价

 

 

产品描述

胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。

本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型，在应用上有所偏向：

1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；

2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；

3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；

4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

本品为II型胶原酶，≥125 U/mg solid，可用于心、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。

酶活力单位定义

在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。

运输及保存条件

室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。

使用方法

1. 胶原酶储存液的配制

向每管100 mg的胶原酶中加入100 µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成1g/mL（即1000×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20 °C避光冻存。

使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。

2．组织的分离

1. 使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；

2. 利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；

3. 加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；

4. 于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。

5. 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未全部解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；

6. 利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

7. 细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

8. 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3． 器官灌注

1. 向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率；

2. 按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；

3. 将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；

4. 利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

5. 细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

6. 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

注意事项

        1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)

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萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)

产品编号: RG010M

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RG010S 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 100次 478.00元
RG010M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 1000次 2268.00元

碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (Enhanced Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit II)，是一种以萤光素(luciferin)为底物高灵敏度检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。

本产品是萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG009)的不同包装版本，两者的检测效果完全一致。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒，即RG009为即用型液体，其优点是无需配制即可直接使用，但需要-80℃保存，如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品，即RG010，为RG009的冻干粉版本，优点是在-20℃保存非常稳定，缺点是使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。

本产品的性能达到国外主要同类产品同等水平。本产品的性能和用途与Promega公司的Luciferase Assay System基本相同。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1，本产品的发光强度与国外同类产品(Competitor P)相近或略优(图1A)，发光信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致(图1B)。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)

图1. 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)的检测效果对比图。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)与碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)的检测效果完全一致。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为化学发光强度的检测效果对比图，图B为化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品，本产品的发光强度可以达到甚至略优于国外同类产品(图1A)，特别适用于Firefly luciferase表达水平低的样品检测。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平较高，或者样品数量较多、对发光信号的稳定性要求较高，也可以使用发光强度和灵敏度稍低，但发光信号更稳定的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006/RG007)。

本产品操作简单，检测速度快，从样品制备到完成检测仅需约20分钟。只需用试剂盒提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II，再取100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且发光信号比较稳定，信号半衰期约10分钟。

本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存，配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性非常好，反复冻融5次对检测效果无明显影响，反复冻融10次检测效果下降不超过10%。萤火虫萤光素酶检测试剂II在4℃条件下，保存3天检测效果下降不超过20%，保存5天检测效果下降不超过30%，保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果，室温保存3天可保留60%以上的检测效果，37 ℃保存1天可保留50%以上的检测效果。萤火虫萤光素酶检测试剂II即使仅保留约50%的检测效果，仍可以满足各种常规检测的要求。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[1]。本试剂盒的检测原理参考图2。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用[2]。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择，请参考碧云天的相关网页：
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm)。

本试剂盒RG010S和RG010M分别可以测定100个和1000个样品。

包装清单：
产品编号 产品名称 包装
RG010S-1 报告基因细胞裂解液 60ml
RG010S-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG010S-3 萤火虫萤光素酶底物 1瓶
— 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
RG010M-1 报告基因细胞裂解液 RG010S-1×10
RG010M-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 RG010S-2×10
RG010M-3 萤火虫萤光素酶底物 RG010S-3×10
— 说明书 1份
保存条件：

-20℃避光保存，至少一年有效。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II -80℃避光保存，至少一年有效；-20℃避光保存，推荐3-6个月内使用。

注意事项：

对于订购后可能放置较长时间后再使用的，或者对于检测结果的精度要求特别高的，推荐订购萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)；对于订购后短期内使用完毕的，推荐订购使用更加便捷的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)。

为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂II。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成萤火虫萤光素酶检测试剂II使用。

尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响，为保证萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果，建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。

检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。。

样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。

为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参，采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG027/RG028)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参，然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注：如果萤光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后，10,000-15,000×g离心3-5分钟，取上清用于测定。
注：细胞裂解后可立即测定萤光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。
2. 准备检测试剂：融解冻存的萤火虫萤光素酶检测缓冲液，将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中，旋紧瓶盖后适当颠倒混匀，当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II，并平衡至室温。注：冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口，旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面，使粉末尽量掉落至瓶底，然后再轻轻旋开瓶盖，并注意不要损失冻干粉。
3. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
4. 每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)，取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
5. 各孔加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果以及与同类竞争产品的检测效果比较可以参考图1。

常见问题：
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同？
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光，样品需要由特定波长的激发光激发，然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光，不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能，即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测？
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同，可以用相同的仪器测定。

参考文献：
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.

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萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)
萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)

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现货chondrex免疫级牛II型胶原蛋白说明书

发表于由

现货chondrex免疫级牛II型胶原蛋白说明书

免疫级牛II型胶原蛋白

产品名称 免疫级牛II型胶原蛋白
目录编号 20021
数量 10 毫克，冻干

chondrex 20021说明：高纯度II型胶原蛋白（用3M胍、DEAE纤维素和Na2HPO4处理）
chondrex 20021用途：可用于各种用途，如SDS凝胶胶原分析标准、MMP-1、MMP-8和MMP-13基质，以及作为免疫动物的抗原，用于在某些物种和实验动物品系中诱导胶原诱导的关节炎（CIA）。
chondrex 20021数量：10 mg
形态：冻干粉
资料来源：牛关节软骨
分子量：300 kDa
纯度：通过SDS-PAGE分析，纯度大于99%，不含胃蛋白酶和蛋白聚糖
储存：4°C，避光保存
稳定性：2年
注：溶于酸性缓冲液（最大4毫克/毫升），但难溶于中性缓冲液。为了将本产品溶解在中性缓冲液中，首先将胶原蛋白溶解在0.01M或0.05M醋酸中，浓度为1-4 mg/ml，然后将胶原蛋白溶液添加到所需的中性缓冲液中，如2-10X TrisNaCl（NaCl最终浓度：0.15-0.2M），或在4°C下对1X中性缓冲液进行透析。
注1：为了避免在中性条件下形成纤维，请将溶液放在冰上。
注2：II型胶原的物理化学性质不同于I型胶原，溶解在中性缓冲液中的II型胶原在37°C下不会形成稳定的凝胶。为了制备II型胶原凝胶，可能需要I型胶原或其他物质等其他成分。