Hieff® Fast Cell Direct RT set (for sybr)

发表于2024年8月1日由上海金畔生物科技有限公司

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff® Fast Cell Direct SYBR Green RT-qPCR Kit 适用于对各种动物细胞进行RNA提取（如cell line 化的贴壁细胞和悬浮细胞、原代培养细胞、各种干细胞、iPS 细胞等），无需提RNA，可直接进行qPCR表达分析，用时短，操作简单，出错率低，最短只需1.5小时就可高效完成从模板制备到反转录反应及基因表达分析等步骤。该产品为染料法细胞直扩RT-qPCR试剂盒的反转录模块，为补充试剂。

组分信息

组分编号	组分名称	16812ES40	16812ES60
16812-A	4× Hifair^® FCD RT Mix	200 μL	500 μL
16812-B	RNase Free H₂O	2 mL	5 mL

储存条件

长期保存时请于-25~-15℃保存，有效期6个月。

使用说明

一、裂解产物的制备

将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。
将细胞转移至离心管中*，5000 rpm离心2 min收集细胞**，充分吸除培养基。若贴壁细胞在96孔板中培养，可直接吸除培养基。
各个孔内加入FCD Washing Buffer 150 μL，吸打清洗细胞，5000 rpm离心2 min，吸尽FCD Washing Buffer。
各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液，2 μL DNase I溶液，室温吸打混匀后静置5 min，孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution***, 吸打混匀5次左右，即可得到裂解产物****，细胞数量超过1× 10⁵ cells时可能会有裂解残留物属正常现象。

*50 μL裂解体系适配细胞数的基本要求是每孔1× 10⁴，该试剂盒可使用范围是1 × 10³ – 1 × 10⁶ cells，若细胞数量较多，可适当等比例增加FCD Lysis Buffer溶液和DNase Ⅰ溶液的用量。

**不同细胞的离心条件不同，请使用适合于所用细胞的离心速度进行离心。

***50 μL的裂解液需加入2.5 μL的FCD Stop Solution。依实验需要，加入裂解液量增大时需相应增大FCD Stop Solution的量。

****细胞裂解产物溶液长期保存时，请置于-25~-15℃。

二、反转录

室温融化4× Hifair^® FCD RT Mix后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：

组分	体积（μL）	终浓度
4× Hifair^® FCD RT Mix	5	1×
裂解产物*	x	–
RNase-free H₂O	Up to 20	–

表1 反转录反应体系

*避免吸入细胞碎片，推荐使用量为2-5 μl，最大不超过反应体系的45%。

移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行反转录反应**：

反应温度	反应时间
55℃	15 min
85℃	5 min

表2 反转录反应程序

**反转录温度推荐使用55℃，对于高GC含量模板或者复杂模板，可将反转录温度提高到 60℃。反转录产物可直接进行下游RT-qPCR检测。为避免反转录体系对qPCR反应的抑制，得到合适的Ct值（10-35），可将产物稀释10-1000倍后使用。若短时间内不进行下游实验，可放置于-25~-15℃保存。

三、荧光定量PCR

体系配置

使用下列组份比例配制反应液（配制过程请于冰上进行）：

组分	体积（μL）	终浓度
2× Hieff® FCD qPCR SYBR Master Mix	10	1×
Forward Primer (10 μM)	0.4	200 nM
Reverse Primer (10 μM)	0.4	200 nM
反转录产物*	x	–
RNase-free H₂O	Up to 20	–

表3 qPCR反应体系

*反转录产物的加入量不要超过RT-qPCR体积的1/10。高浓度模板易导致非特异扩增，适当稀释5-50倍。模板推荐用量4 μL，尽量不要超过6 μL。反应性能较差时，可以在0.2-1.0 μM范围内调整引物浓度。

荧光定量PCR常规扩增程序（推荐）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 sec	1
变性	95℃	10 sec	35-40
退火/延伸	60℃	30 sec	35-40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

表4 qPCR反应程序（常规）

荧光定量PCR快速扩增程序

实验条件允许时，也可使用快速程序进行扩增。

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 sec	1
变性	95℃	5 sec	40
退火/延伸**	60℃	10 sec	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

表5 qPCR反应程序（快速）

**退火/延伸温度、终延伸时间可根据实验要求适当调整。快速程序适用于绝大多数基因，个别复杂二级结构基因可尝试常规程序。

注意事项

使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。
本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途！

Ver.CN20231207

组分信息

组分编号	组分名称	16812ES40	16812ES60
16812-A	4× Hifair^® FCD RT Mix	200 μL	500 μL
16812-B	RNase Free H₂O	2 mL	5 mL

储存条件

长期保存时请于-25~-15℃保存，有效期6个月。

使用说明

一、裂解产物的制备

将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。
将细胞转移至离心管中*，5000 rpm离心2 min收集细胞**，充分吸除培养基。若贴壁细胞在96孔板中培养，可直接吸除培养基。
各个孔内加入FCD Washing Buffer 150 μL，吸打清洗细胞，5000 rpm离心2 min，吸尽FCD Washing Buffer。
各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液，2 μL DNase I溶液，室温吸打混匀后静置5 min，孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution***, 吸打混匀5次左右，即可得到裂解产物****，细胞数量超过1× 10⁵ cells时可能会有裂解残留物属正常现象。

**不同细胞的离心条件不同，请使用适合于所用细胞的离心速度进行离心。

***50 μL的裂解液需加入2.5 μL的FCD Stop Solution。依实验需要，加入裂解液量增大时需相应增大FCD Stop Solution的量。

****细胞裂解产物溶液长期保存时，请置于-25~-15℃。

二、反转录

室温融化4× Hifair^® FCD RT Mix后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：

组分	体积（μL）	终浓度
4× Hifair^® FCD RT Mix	5	1×
裂解产物*	x	–
RNase-free H₂O	Up to 20	–

表1 反转录反应体系

*避免吸入细胞碎片，推荐使用量为2-5 μl，最大不超过反应体系的45%。

移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行反转录反应**：

反应温度	反应时间
55℃	15 min
85℃	5 min

表2 反转录反应程序

三、荧光定量PCR

体系配置

使用下列组份比例配制反应液（配制过程请于冰上进行）：

组分	体积（μL）	终浓度
2× Hieff® FCD qPCR SYBR Master Mix	10	1×
Forward Primer (10 μM)	0.4	200 nM
Reverse Primer (10 μM)	0.4	200 nM
反转录产物*	x	–
RNase-free H₂O	Up to 20	–

表3 qPCR反应体系

荧光定量PCR常规扩增程序（推荐）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 sec	1
变性	95℃	10 sec	35-40
退火/延伸	60℃	30 sec	35-40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

表4 qPCR反应程序（常规）

荧光定量PCR快速扩增程序

实验条件允许时，也可使用快速程序进行扩增。

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 sec	1
变性	95℃	5 sec	40
退火/延伸**	60℃	10 sec	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

表5 qPCR反应程序（快速）

**退火/延伸温度、终延伸时间可根据实验要求适当调整。快速程序适用于绝大多数基因，个别复杂二级结构基因可尝试常规程序。

注意事项

使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。
本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途！

Ver.CN20231207

Hieff® Fast Cell Direct RT set (for sybr)

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快速末端修复/A尾添加模块|Hieff NGS®Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

发表于2024年7月31日由上海金畔生物科技有限公司

快速末端修复/A尾添加模块|Hieff NGS®Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

产品说明书

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已发表文献

产品描述

Hieff NGS^® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module是针对Illumina^®高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块，具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼容1 ng-1 μg片段化Input DNA，可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5'端磷酸化和3'端加A尾反应，得到5'末端含磷酸基团且3'末端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化，即可使用Hieff NGS^® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）进行文库构建接头连接反应。

本产品已与Hieff NGS^® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607），2×Hieff Canace^®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12620）共同用于DNA文库构建，通过Illumina^®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

产品组分

组分编号	组分名称	24 T	96 T
12608-A	End Repair/dA-Tailing Buffer	144 μL	576 μL
12608-B	End Repair/dA-Tailing Enzyme	96 μL	384 μL

测序验证

本品与Hieff NGS^® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607），2×Hieff Canace^® High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12620）共同用于DNA文库构建，已通过Illumina^®高通量平台测序验证其有效性。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品仅用作科研用途！

使用方法

1. 将表1中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。

表1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系

名称	体积（μL）
Fragmented DNA	x
End Repair/dA-Tailing Buffer	6
End Repair/dA-Tailing Enzyme	4
ddH₂O	Up to 60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表2所示反应程序，进行末端修复/dA尾添加反应。

表2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序

温度	时间
热盖105°C	On
30°C	20 min
72°C	20 min
4°C	Hold

5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS^® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。

HB220728

产品描述

产品组分

组分编号	组分名称	24 T	96 T
12608-A	End Repair/dA-Tailing Buffer	144 μL	576 μL
12608-B	End Repair/dA-Tailing Enzyme	96 μL	384 μL

测序验证

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品仅用作科研用途！

使用方法

1. 将表1中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。

表1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系

名称	体积（μL）
Fragmented DNA	x
End Repair/dA-Tailing Buffer	6
End Repair/dA-Tailing Enzyme	4
ddH₂O	Up to 60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表2所示反应程序，进行末端修复/dA尾添加反应。

表2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序

温度	时间
热盖105°C	On
30°C	20 min
72°C	20 min
4°C	Hold

5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS^® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。

HB220728

快速末端修复/A尾添加模块|Hieff NGS®Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

暂无内容

[1]Ma CJ, Li L, Shao WX, et al. An enzyme-mediated bioorthogonal labeling method for genome-wide mapping of 5-hydroxymethyluracil. Chem Sci. 2021;12(42):14126-14132. Published 2021 Oct 4. doi:10.1039/d1sc03812e(IF:9.969)

[2]Zhou W, Yang B, Zou Y, et al. Screening of Compounds for Anti-tuberculosis Activity, and in vitro and in vivo Evaluation of Potential Candidates. Front Microbiol. 2021;12:658637. Published 2021 Jun 30. doi:10.3389/fmicb.2021.658637(IF:6.064)

Hieff NGS®单细胞/低输入RNA文库制备试剂盒Single Cell/Low Input RNA Library Prep Kit

发表于2024年7月30日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff NGS®单细胞/低输入RNA文库制备试剂盒Single Cell/Low Input RNA Library Prep Kit

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已发表文献

Hieff NGS® Single Cell/Low Input RNA Library Prep Kit是兼容Illumina®和MGI®双平台，可以对1~1000个细胞或者10 pg~10 ng的总RNA进行测序文库构建的试剂盒。本试剂盒可以进行全长cDNA的合成，完成全长cDNA的富集，然后对获得的全长cDNA扩增产物进行酶切法文库构建，与传统的建库方法比较，本品采用高质量的片段化酶，同时简化操作流程，将片段化模块与末端修复模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本，来进行基因表达差异、可变剪接、融合基因等遗传调控信息分析。

输与保存方法

-30 ~ -15°C保存，干冰运输，有效期1年。

注意事项

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

4. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用ThermoFisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

5. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染，进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离；配备文库构建专用移液器等设备；定时对各实验区域进行清洁（推荐使用ThermoFisher公司的DNAZapTM高效核酸去除喷雾），以保证实验环境的洁净度。

6. 本产品仅用作科研用途!

HB221114

输与保存方法

-30 ~ -15°C保存，干冰运输，有效期1年。

注意事项

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

4. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用ThermoFisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

6. 本产品仅用作科研用途!

HB221114

Hieff NGS®单细胞/低输入RNA文库制备试剂盒Single Cell/Low Input RNA Library Prep Kit

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Hieff Trans<sup>®</sup>通用型转染试剂

发表于2024年7月29日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff Trans<sup>®</sup>通用型转染试剂

产品说明书

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已发表文献

Hieff Trans^®通用型转染试剂是基于最新的纳米技术研发的一款多用途、便捷高效的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对难转染细胞也具有较高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸–转染试剂复合物或更换新鲜培养基，也可根据细胞营养状态在4-6小时后更换新鲜培养基。

产品组分

组分编号	组分名称	规格/货号
组分编号	组分名称	40808ES02	40808ES03	40808ES03
40808-A	Universal-A溶液	0.5 mL	1 mL	5×1 mL
40808-B	Universal-B溶液	0.5 mL	1 mL	5×1 mL

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1) 转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳，具体铺板密度根据细胞情况酌情而定。

2) 制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂。

3) 转染的时候培养基中不能添加抗生素。

4) 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。

5) 2-8ºC保存，要注意避免多次反复长时间开盖。

6) 初次使用应优化核酸浓度和试剂量以得到最高的转染效率。

7) 本产品仅作科研用途！

操作流程

1. DNA转染

注：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

1) 细胞铺板，至转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳。

2) 按照下表使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。

3) 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Universal-A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。

4) 将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。

5) 室温孵育5分钟。

6) 将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。

7) 37℃，5% CO₂培养箱培养48-96 h，直至进行基因表达分析。

2. siRNA转染

转染siRNA操作与DNA的转染操作流程一样，但在稀释siRNA时则不需要加入Universal-A溶液(第3步)。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

培养皿		96-well	24-well	6-well
贴壁细胞		1-4×10⁴	0.5-2×10⁵	0.25-1×10⁶
使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。	Opti-MEM培养基	5 μL	25 μL	125 μL
使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。	Universal-B溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Universal-A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。	Opti-MEM培养基	5 μL	25 μL	125 μL
	DNA (0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	Universal-A溶液(2 μL/μg DNA)	0.2 μL	1 μL	5 μL
将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。	稀释的DNA	5 μL	25 μL	125 μL
将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。	稀释的Universal-B溶液	5 μL	25 μL	125 μL
室温孵育5分钟
DNA-脂质体复合物形成	复合物成分（每孔）	96-well	24-well	6-well
	Opti-MEM培养基	10 μL	50 μL	250 μL
	DNA(0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	Universal-B溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
	Universal-A溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。	DNA-脂质体复合物	10 μL	50 μL	250 μL

【注】该表使用量仅供参考，DNA与Universal-B溶液具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。建议使用时比值保持在1:0.5-1:5之间。

相关产品

名称	货号	规格
Hieff Trans® Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂	40802ES02	0.5 mL
	40802ES03	1.0 mL
	40802ES08	5×1mL
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸钙法细胞转染试剂	40803ES70	200 T
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml）	40804ES76	500 μL
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml）	40804ES86	5×500 μL
Hieff Trans^® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂	40805ES02	0.5 mL
	40805ES03	1.0 mL
	40805ES08	5×1 mL
Hieff Trans^® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent siRNA/miRNA体外转染试剂	40806ES02	0.5 mL
	40806ES03	1.0 mL
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000	40815ES03	1 g
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000	40815ES08	5×1 g
Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis）线性PEI转染试剂（速溶型）MW40000	40816ES02	100 mg
	40816ES03	1 g

HB220930

产品组分

组分编号	组分名称	规格/货号
组分编号	组分名称	40808ES02	40808ES03	40808ES03
40808-A	Universal-A溶液	0.5 mL	1 mL	5×1 mL
40808-B	Universal-B溶液	0.5 mL	1 mL	5×1 mL

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1) 转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳，具体铺板密度根据细胞情况酌情而定。

2) 制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂。

3) 转染的时候培养基中不能添加抗生素。

4) 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。

5) 2-8ºC保存，要注意避免多次反复长时间开盖。

6) 初次使用应优化核酸浓度和试剂量以得到最高的转染效率。

7) 本产品仅作科研用途！

操作流程

1. DNA转染

注：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

1) 细胞铺板，至转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳。

2) 按照下表使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。

3) 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Universal-A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。

4) 将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。

5) 室温孵育5分钟。

6) 将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。

7) 37℃，5% CO₂培养箱培养48-96 h，直至进行基因表达分析。

2. siRNA转染

转染siRNA操作与DNA的转染操作流程一样，但在稀释siRNA时则不需要加入Universal-A溶液(第3步)。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

培养皿		96-well	24-well	6-well
贴壁细胞		1-4×10⁴	0.5-2×10⁵	0.25-1×10⁶
使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。	Opti-MEM培养基	5 μL	25 μL	125 μL
使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。	Universal-B溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Universal-A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。	Opti-MEM培养基	5 μL	25 μL	125 μL
	DNA (0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	Universal-A溶液(2 μL/μg DNA)	0.2 μL	1 μL	5 μL
将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。	稀释的DNA	5 μL	25 μL	125 μL
将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。	稀释的Universal-B溶液	5 μL	25 μL	125 μL
室温孵育5分钟
DNA-脂质体复合物形成	复合物成分（每孔）	96-well	24-well	6-well
	Opti-MEM培养基	10 μL	50 μL	250 μL
	DNA(0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	Universal-B溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
	Universal-A溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。	DNA-脂质体复合物	10 μL	50 μL	250 μL

【注】该表使用量仅供参考，DNA与Universal-B溶液具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。建议使用时比值保持在1:0.5-1:5之间。

相关产品

名称	货号	规格
Hieff Trans® Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂	40802ES02	0.5 mL
	40802ES03	1.0 mL
	40802ES08	5×1mL
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸钙法细胞转染试剂	40803ES70	200 T
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml）	40804ES76	500 μL
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml）	40804ES86	5×500 μL
Hieff Trans^® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂	40805ES02	0.5 mL
	40805ES03	1.0 mL
	40805ES08	5×1 mL
Hieff Trans^® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent siRNA/miRNA体外转染试剂	40806ES02	0.5 mL
	40806ES03	1.0 mL
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000	40815ES03	1 g
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000	40815ES08	5×1 g
Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis）线性PEI转染试剂（速溶型）MW40000	40816ES02	100 mg
	40816ES03	1 g

HB220930

暂无内容

[1] Xie F, Su P, Pan T, et al. Engineering Extracellular Vesicles Enriched with Palmitoylated ACE2 as COVID-19 Therapy. Adv Mater. 2021;33(49):e2103471. doi:10.1002/adma.202103471(IF:30.849)
[2] Su WQ, Yu XJ, Zhou CM. SARS-CoV-2 ORF3a Induces Incomplete Autophagy via the Unfolded Protein Response. Viruses. 2021;13(12):2467. Published 2021 Dec 9. doi:10.3390/v13122467(IF:5.048)
[3] Zu S, Xue Q, He Z, et al. Duck PIAS2 Promotes H5N1 Avian Influenza Virus Replication Through Its SUMO E3 Ligase Activity. Front Microbiol. 2020;11:1246. Published 2020 Jun 11. doi:10.3389/fmicb.2020.01246(IF:4.236)

Hieff® Fast Cell Direct Lysis set (for sybr)

发表于2024年7月26日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff® Fast Cell Direct Lysis set (for sybr)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

组分信息

组分编号	组分名称	16811ES40	16811ES60
16811-A	FCD Lysis Buffer	2 mL	5 mL
16811-B	FCD Washing Buffer	8 mL	20 mL
16811-C	FCD Stop Solution	100 μL	250 μL
16811-D	DNase I	80 μL	200 μL

储存条件

16811-A和 16811-B未开封时请置于-25~-15℃保存，融解后置于4℃保存，注意防止污染，其余组分长期保存时请于-25~-15℃保存，有效期6个月。

使用说明

一、裂解产物的制备

将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。
将细胞转移至离心管中*，5000 rpm离心2 min收集细胞**，充分吸除培养基。若贴壁细胞在96孔板中培养，可直接吸除培养基。
各个孔内加入FCD Washing Buffer 150 μL，吸打清洗细胞，5000 rpm离心2 min，吸尽FCD Washing Buffer。
各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液，2 μL DNase I溶液，室温吸打混匀后静置5 min，孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution***, 吸打混匀5次左右，即可得到裂解产物****，细胞数量超过1× 10⁵ cells时可能会有裂解残留物属正常现象。

**不同细胞的离心条件不同，请使用适合于所用细胞的离心速度进行离心。

***50 μL的裂解液需加入2.5 μL的FCD Stop Solution。依实验需要，加入裂解液量增大时需相应增大FCD Stop Solution的量。

****细胞裂解产物溶液长期保存时，请置于-25~-15℃。

二、反转录

室温融化4× Hifair^® FCD RT Mix后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：

组分	体积（μL）	终浓度
4× Hifair^® FCD RT Mix	5	1×
裂解产物*	x	–
RNase-free H₂O	Up to 20	–

表1 反转录反应体系

*避免吸入细胞碎片，推荐使用量为2-5 μl，最大不超过反应体系的45%。

移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行反转录反应**：

反应温度	反应时间
55℃	15 min
85℃	5 min

表2 反转录反应程序

三、荧光定量PCR

体系配置

使用下列组份比例配制反应液（配制过程请于冰上进行）：

组分	体积（μL）	终浓度
2× Hieff® FCD qPCR SYBR Master Mix	10	1×
Forward Primer (10 μM)	0.4	200 nM
Reverse Primer (10 μM)	0.4	200 nM
反转录产物*	x	–
RNase-free H₂O	Up to 20	–

表3 qPCR反应体系

荧光定量PCR常规扩增程序（推荐）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 sec	1
变性	95℃	10 sec	35-40
退火/延伸	60℃	30 sec	35-40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

表4 qPCR反应程序（常规）

荧光定量PCR快速扩增程序

实验条件允许时，也可使用快速程序进行扩增。

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 sec	1
变性	95℃	5 sec	40
退火/延伸**	60℃	10 sec	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

表5 qPCR反应程序（快速）

**退火/延伸温度、终延伸时间可根据实验要求适当调整。快速程序适用于绝大多数基因，个别复杂二级结构基因可尝试常规程序。

注意事项

使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。
本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途！

Ver.CN20231207

组分信息

组分编号	组分名称	16811ES40	16811ES60
16811-A	FCD Lysis Buffer	2 mL	5 mL
16811-B	FCD Washing Buffer	8 mL	20 mL
16811-C	FCD Stop Solution	100 μL	250 μL
16811-D	DNase I	80 μL	200 μL

储存条件

16811-A和 16811-B未开封时请置于-25~-15℃保存，融解后置于4℃保存，注意防止污染，其余组分长期保存时请于-25~-15℃保存，有效期6个月。

使用说明

一、裂解产物的制备

将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。
将细胞转移至离心管中*，5000 rpm离心2 min收集细胞**，充分吸除培养基。若贴壁细胞在96孔板中培养，可直接吸除培养基。
各个孔内加入FCD Washing Buffer 150 μL，吸打清洗细胞，5000 rpm离心2 min，吸尽FCD Washing Buffer。
各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液，2 μL DNase I溶液，室温吸打混匀后静置5 min，孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution***, 吸打混匀5次左右，即可得到裂解产物****，细胞数量超过1× 10⁵ cells时可能会有裂解残留物属正常现象。

**不同细胞的离心条件不同，请使用适合于所用细胞的离心速度进行离心。

***50 μL的裂解液需加入2.5 μL的FCD Stop Solution。依实验需要，加入裂解液量增大时需相应增大FCD Stop Solution的量。

****细胞裂解产物溶液长期保存时，请置于-25~-15℃。

二、反转录

室温融化4× Hifair^® FCD RT Mix后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：

组分	体积（μL）	终浓度
4× Hifair^® FCD RT Mix	5	1×
裂解产物*	x	–
RNase-free H₂O	Up to 20	–

表1 反转录反应体系

*避免吸入细胞碎片，推荐使用量为2-5 μl，最大不超过反应体系的45%。

移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行反转录反应**：

反应温度	反应时间
55℃	15 min
85℃	5 min

表2 反转录反应程序

三、荧光定量PCR

体系配置

使用下列组份比例配制反应液（配制过程请于冰上进行）：

组分	体积（μL）	终浓度
2× Hieff® FCD qPCR SYBR Master Mix	10	1×
Forward Primer (10 μM)	0.4	200 nM
Reverse Primer (10 μM)	0.4	200 nM
反转录产物*	x	–
RNase-free H₂O	Up to 20	–

表3 qPCR反应体系

荧光定量PCR常规扩增程序（推荐）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 sec	1
变性	95℃	10 sec	35-40
退火/延伸	60℃	30 sec	35-40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

表4 qPCR反应程序（常规）

荧光定量PCR快速扩增程序

实验条件允许时，也可使用快速程序进行扩增。

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 sec	1
变性	95℃	5 sec	40
退火/延伸**	60℃	10 sec	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

表5 qPCR反应程序（快速）

**退火/延伸温度、终延伸时间可根据实验要求适当调整。快速程序适用于绝大多数基因，个别复杂二级结构基因可尝试常规程序。

注意事项

使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。
本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途！

Ver.CN20231207

Hieff® Fast Cell Direct Lysis set (for sybr)

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Hieff Trans 线性化聚乙烯亚胺(PEI)转染试剂

发表于2024年7月24日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff Trans 线性化聚乙烯亚胺(PEI)转染试剂

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Trans^® PEI转染试剂是一种经过优化改造后的线性化聚乙烯亚胺（Polyethylenimine Linear, PEI），浓度为1 mg/mL。本产品纯化学合成，不含动物源成分，特别适合多质粒的共同转染，用于重组病毒载体的生产，以及重组蛋白的瞬时表达生产。本产品细胞毒性低、转染效率高、兼容抗生素，在HEK293等细胞中基因表达效率较高。

运输与保存方法

运输方式：冰袋运输。
保存方式：2-8ºC保存，有效期2年。

注意事项

1）为提高转染效率，建议悬浮细胞在无血清培养体系中驯化几天后进行转染操作。

2）转染过程中推荐使用高质量的质粒，如不含内毒素的质粒。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

4）本产品仅用于科研用途。

转染操作流程

一 悬浮细胞（以1 L体系为例）

1 接种细胞

根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞接种密度为1-1.5×10⁶ cells/mL，使第二天转染时细胞密度为2-3×10⁶ cells/mL为宜。

2 转染复合物配置

1）质粒与试剂比例：建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:1 – 1:3。

2）质粒稀释：使用50 mL无血清培养基（Opti-MEM）稀释2 mg质粒，并轻轻混匀。

3）试剂稀释：使用48 mL无血清培养基（Opti-MEM）稀释2 mL Hieff Trans^® PEI转染试剂，并轻轻混匀。

4）配置复合物：将配置好的50 mL试剂稀释液加入到50 mL质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10–20 min，形成质粒–PEI复合物，备用。

3 转染细胞

1）直接将100 mL的质粒-PEI复合物加入1 L培养的细胞中。

2）在合适温度与CO₂等条件下继续培养细胞，并在培养72 h-96 h或摸索的合适条件下进行病毒收获。

Hieff Trans 线性化聚乙烯亚胺(PEI)转染试剂

图1 Hieff Trans^® PEI转染试剂操作步骤示意图

二 贴壁细胞（以10 cm培养皿为例）

1 接种细胞

根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞铺板密度为50–80 %，使第二天转染时细胞密度70–90 %为宜。

2 转染复合物配置

1）质粒与试剂比例：建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:1至1:3。

2）质粒稀释：使用250 μL无血清培养基（Opti-MEM）稀释8 μg质粒，并轻轻混匀。

3）试剂稀释：使用242 μL无血清培养基（Opti-MEM）稀释8 μL Hieff Trans^®PEI转染试剂，并轻轻混匀。

4）配置复合物：将配置好的250 μL试剂稀释液加入到250 μL质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10–20 min，形成质粒–PEI复合物，备用。

3 转染细胞

1）直接将500 μL的质粒-PEI复合物加入10 mL培养的细胞中。

2）在合适温度与CO₂等条件下继续培养细胞，并在培养72 h-96 h或摸索的合适条件下进行病毒收获。

表1 不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）

培养容器	表面积（cm²）	DNA稀释		转染试剂稀释		培养基总量
培养容器	表面积（cm²）	DNA量（μg）	稀释液体积（μL）	转染试剂量（μL）	稀释液体积（μL）	培养基总量
96孔板	0.3	0.1	5	0.1	5	100 μL
48孔板	0.7	0.2	10	0.2	10	200 μL
24孔板	1.9	0.5	25	0.5	25	500 μL
12孔板	3.8	1	25	1	25	1 mL
6孔板	10	2	50	2	50	2 mL
25 cm²培养瓶	21	4	100	4	100	4 mL
75 cm²培养瓶	58	8	250	8	250	10 mL
10 cm培养皿	60	8	250	8	250	10 mL

HB220930

运输与保存方法

运输方式：冰袋运输。
保存方式：2-8ºC保存，有效期2年。

注意事项

1）为提高转染效率，建议悬浮细胞在无血清培养体系中驯化几天后进行转染操作。

2）转染过程中推荐使用高质量的质粒，如不含内毒素的质粒。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。

4）本产品仅用于科研用途。

转染操作流程

一 悬浮细胞（以1 L体系为例）

1 接种细胞

根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞接种密度为1-1.5×10⁶ cells/mL，使第二天转染时细胞密度为2-3×10⁶ cells/mL为宜。

2 转染复合物配置

1）质粒与试剂比例：建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:1 – 1:3。

2）质粒稀释：使用50 mL无血清培养基（Opti-MEM）稀释2 mg质粒，并轻轻混匀。

3）试剂稀释：使用48 mL无血清培养基（Opti-MEM）稀释2 mL Hieff Trans^® PEI转染试剂，并轻轻混匀。

4）配置复合物：将配置好的50 mL试剂稀释液加入到50 mL质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10–20 min，形成质粒–PEI复合物，备用。

3 转染细胞

1）直接将100 mL的质粒-PEI复合物加入1 L培养的细胞中。

2）在合适温度与CO₂等条件下继续培养细胞，并在培养72 h-96 h或摸索的合适条件下进行病毒收获。

Hieff Trans 线性化聚乙烯亚胺(PEI)转染试剂

图1 Hieff Trans^® PEI转染试剂操作步骤示意图

二 贴壁细胞（以10 cm培养皿为例）

1 接种细胞

根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞铺板密度为50–80 %，使第二天转染时细胞密度70–90 %为宜。

2 转染复合物配置

1）质粒与试剂比例：建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:1至1:3。

2）质粒稀释：使用250 μL无血清培养基（Opti-MEM）稀释8 μg质粒，并轻轻混匀。

3）试剂稀释：使用242 μL无血清培养基（Opti-MEM）稀释8 μL Hieff Trans^®PEI转染试剂，并轻轻混匀。

4）配置复合物：将配置好的250 μL试剂稀释液加入到250 μL质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10–20 min，形成质粒–PEI复合物，备用。

3 转染细胞

1）直接将500 μL的质粒-PEI复合物加入10 mL培养的细胞中。

2）在合适温度与CO₂等条件下继续培养细胞，并在培养72 h-96 h或摸索的合适条件下进行病毒收获。

表1 不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）

培养容器	表面积（cm²）	DNA稀释		转染试剂稀释		培养基总量
培养容器	表面积（cm²）	DNA量（μg）	稀释液体积（μL）	转染试剂量（μL）	稀释液体积（μL）	培养基总量
96孔板	0.3	0.1	5	0.1	5	100 μL
48孔板	0.7	0.2	10	0.2	10	200 μL
24孔板	1.9	0.5	25	0.5	25	500 μL
12孔板	3.8	1	25	1	25	1 mL
6孔板	10	2	50	2	50	2 mL
25 cm²培养瓶	21	4	100	4	100	4 mL
75 cm²培养瓶	58	8	250	8	250	10 mL
10 cm培养皿	60	8	250	8	250	10 mL

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2×实时定量PCR扩增预混液|Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

发表于2024年7月24日由上海金畔生物科技有限公司

2×实时定量PCR扩增预混液|Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预溶液，具有高灵敏度和高特异性的特点，颜色为蓝色，具有加样示踪的作用。核心组分Hieff UNICON^® Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动，可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增。同时配方添加了提升PCR反应扩增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因扩增的促进因子，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

本产品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye，适用于所有qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX的浓度，只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。

运输和保存方式

冰袋运输。-20℃避光储存，有效期18个月。

本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。

注意事项

1. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11141ES），以有效去除RNA样品中残留的基因组。

2. 解冻后Master Mix可能出现絮状或白色沉淀，手握缓慢溶解并上下轻柔颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

反应体系

组分	体积（μL）	体积（μL）	终浓度
Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix	25	10	1×
Forward Primer (10 μM)	1	0.4	0.2 μM
Reverse Primer (10 μM)	1	0.4	0.2 μM
模板DNA	X	X	–
无菌超纯水	to 50	to 20	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

b) 模板浓度：如模板为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的Ct值在20-30个循环为好。

d) 反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准程序快速程序

循环步骤	温度	时间	循环数	循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	2 min	1	预变性	95℃	30 sec	1
变性	95℃	10 sec	40	变性	95℃	3 sec	40
退火/延伸	60℃	30 sec^★	40	退火/延伸	60℃	20 sec^★	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1	熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

【注】 快速程序适用于绝大多数基因，个别复杂二级结构基因可尝试标准程序。

a) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。

b) 荧光信号采集（★）：请勿忘记打开荧光信号采集，按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：

20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec：Applied Biosystems 7300

32 sec：Applied Biosystems 7500

c) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。

结果分析

定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。

1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。

Ct值落在20-30之间时，定量分析最准确；

Ct值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验；

Ct值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；

Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。

2) 熔解曲线：

熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。

熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。

如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。

如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。

引物设计指南

1. 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳，可以在100 bp-300 bp内选择。

2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。

3. 引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。

4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。

5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。

6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

适用机型

ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler;

Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

HB221205

Q：建议qPCR 实验用几步法？

A：常用 2 步法。需提高扩增特异性，可选用 2 步法或提高退火温度。在扩增效率低， ct 值过大的时候，可以改用 3 步法或延长延伸时间。

Q：qPCR 实验结果的有效性？为什么建议Ct 值要大于 15？

A：有效性要满足三个条件：（1）标准曲线：扩增效率范围:90-110%，对应斜率为 –3—3.5。 R2＞0.98。 (扩增效率=10-1/斜率–1)，当斜率=-3.32 时，扩增效率=100%。（2）扩增曲线：S 型曲线，且 Ct 值在 15－35 之间，阴性对照 Ct＞35 或无 Ct 值。（3）熔解曲线：为单一峰。

Ct 值大于 15 个循环是因为 3-15 个循环的荧光值标准差的 10 倍是荧光阈值，Ct 值太小了会影响曲线。

Q：11184 的灵敏度极限是?

A：单拷贝

Q：同一基因复孔间熔解曲线 Tm 值有差异？

A：同样的扩增产物也会出现Tm 值有微小差异，一般差异在 1 度以内都可以接受。

Q：为什么稀释了模板CT 值反而变小了？

A：一般 CT 值与模板起始浓度呈负相关，浓度越高，CT 值越小。但也有很多特殊情况，比如体系中存在抑制物或是模板不纯，这时候稀释模板反而能使 CT 值变低。

Q：内参CT 值小于 20，目的基因均大于 30，怎么办？

A:可能是目的基因为低丰度表达基因导致。建议：a）换用内参；b）换引物

Q：为什么扩增曲线杂乱且不连续？

A：可能原因是 ROX 添加不当。确认参比染料ROX 是否添加正确。

Q：模板用量X 是多少？常用的量是多少？

A：(1)X 表示模板 DNA 量需要实验者在首次实验时进行摸索。首先对模板DNA 进行稀释（一般推荐 5-10 倍），然后模板量梯度上样，选择 CT 值落在 20-30 之间的最佳上样量。
(2)常用的量是逆转录 500-1000ng 总RNA，稀释 10 倍取 1μL cDNA 进行qPCR 实验。

Q：qPCR 实验结果的有效性？为什么建议Ct 值要大于 15？

A：a)有效性要满足三个条件：
（1）标准曲线：扩增效率范围:90-110%，对应斜率为 -3–3.5。R2＞0.98。 (扩增效率=10-1/斜率-1)，当斜率=-3.32 时，扩增效率=100%。
（2）扩增曲线：S 型曲线，且 Ct 值在 15－35 之间，阴性对照 Ct＞35 或无Ct 值。
（3）熔解曲线：为单一峰。

b)3-15 个循环的荧光值标准差的 10 倍是荧光阈值，Ct 值太小了会影响曲线。

Q：Rox 的作用？

A:ROX 是一种参比染料，其作用是标准化荧光定量反应中的非PCR 震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。

Q: 为什么扩增产物跑胶会有拖尾的现象？

A: 试剂中本身含有稳定性成分，本身不参与任何反应，所以产物中还是有稳定剂成分的，这个稳定剂成分在电泳胶上面会表现出弥散状，不建议跑完后再电泳。

Q: 试剂比较粘稠，容易产生气泡，如何避免？

A: 可以先混合大体系，再分别加到离心管里面，最后加模板；

枪头加样不要把空气打进去，二档吸样，一档打样品；缓慢推出液体，不要吹打；沿着壁打入到孔内；

另外配置完后，如果还有气泡，离心PCR管去除。如果是96孔板，移液完后轻轻敲96孔板。

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运输和保存方式

冰袋运输。-20℃避光储存，有效期18个月。

本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。

注意事项

1. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11141ES），以有效去除RNA样品中残留的基因组。

2. 解冻后Master Mix可能出现絮状或白色沉淀，手握缓慢溶解并上下轻柔颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

反应体系

组分	体积（μL）	体积（μL）	终浓度
Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix	25	10	1×
Forward Primer (10 μM)	1	0.4	0.2 μM
Reverse Primer (10 μM)	1	0.4	0.2 μM
模板DNA	X	X	–
无菌超纯水	to 50	to 20	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

b) 模板浓度：如模板为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的Ct值在20-30个循环为好。

d) 反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准程序快速程序

循环步骤	温度	时间	循环数	循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	2 min	1	预变性	95℃	30 sec	1
变性	95℃	10 sec	40	变性	95℃	3 sec	40
退火/延伸	60℃	30 sec^★	40	退火/延伸	60℃	20 sec^★	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1	熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

【注】 快速程序适用于绝大多数基因，个别复杂二级结构基因可尝试标准程序。

a) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。

b) 荧光信号采集（★）：请勿忘记打开荧光信号采集，按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：

20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec：Applied Biosystems 7300

32 sec：Applied Biosystems 7500

c) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。

结果分析

定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。

1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。

Ct值落在20-30之间时，定量分析最准确；

Ct值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验；

Ct值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；

Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。

2) 熔解曲线：

熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。

熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。

如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。

如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。

引物设计指南

1. 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳，可以在100 bp-300 bp内选择。

2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。

3. 引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。

4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。

5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。

6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

适用机型

ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler;

Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

HB221205

Q：建议qPCR 实验用几步法？

A：常用 2 步法。需提高扩增特异性，可选用 2 步法或提高退火温度。在扩增效率低， ct 值过大的时候，可以改用 3 步法或延长延伸时间。

Q：qPCR 实验结果的有效性？为什么建议Ct 值要大于 15？

Ct 值大于 15 个循环是因为 3-15 个循环的荧光值标准差的 10 倍是荧光阈值，Ct 值太小了会影响曲线。

Q：11184 的灵敏度极限是?

A：单拷贝

Q：同一基因复孔间熔解曲线 Tm 值有差异？

A：同样的扩增产物也会出现Tm 值有微小差异，一般差异在 1 度以内都可以接受。

Q：为什么稀释了模板CT 值反而变小了？

Q：内参CT 值小于 20，目的基因均大于 30，怎么办？

A:可能是目的基因为低丰度表达基因导致。建议：a）换用内参；b）换引物

Q：为什么扩增曲线杂乱且不连续？

A：可能原因是 ROX 添加不当。确认参比染料ROX 是否添加正确。

Q：模板用量X 是多少？常用的量是多少？

Q：qPCR 实验结果的有效性？为什么建议Ct 值要大于 15？

b)3-15 个循环的荧光值标准差的 10 倍是荧光阈值，Ct 值太小了会影响曲线。

Q：Rox 的作用？

A:ROX 是一种参比染料，其作用是标准化荧光定量反应中的非PCR 震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。

Q: 为什么扩增产物跑胶会有拖尾的现象？

Q: 试剂比较粘稠，容易产生气泡，如何避免？

A: 可以先混合大体系，再分别加到离心管里面，最后加模板；

枪头加样不要把空气打进去，二档吸样，一档打样品；缓慢推出液体，不要吹打；沿着壁打入到孔内；

另外配置完后，如果还有气泡，离心PCR管去除。如果是96孔板，移液完后轻轻敲96孔板。

Hieff®外泌体绿色荧光示踪试剂盒(exosomeTrackerkit)

发表于2024年7月24日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff®外泌体绿色荧光示踪试剂盒(exosomeTrackerkit)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒外泌体绿色荧光示踪染料能将脂质尾巴的绿色荧光染料（PKH67）结合到细胞膜脂质区域上。该试剂盒可以在染色过程中增加染色效率，同时维持细胞活力。可用于外泌体的标记染色实验，监测细胞吞噬作用。

产品组分

编号	组分	规格
40781-A	PKH67	20 μL（1mM）
40781-B	Dilution Buffer	200 μL

产品性质

化学名称（Chemical name）	PKH67
CAS号（CAS NO.）	N/A
分子式（Formula）	N/A
分子量（Molecular weight）	200
外观（Appearance）	liquid
激发波长（Ex）	λex 490 nm
发射波长（Em）	λem 502 nm

运输和保存方法

收到产品后将试剂分开储存，使用前请充分混匀。
冰袋运输，2-8℃避光保存，有效期12个月。

注意事项

PKH67母液易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封保存；
PKH67工作液应现配现用,不能能提前配制，否则将影响染色效果；
PKH67溶解液在较低温度下会凝固而粘在管底内，可以 37℃水浴片刻至全部融解后使用。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途！

操作方法

1.外泌体蛋白定量：取适量外泌体进行BCA蛋白浓度测定以确定外泌体蛋白量；

2.染料工作液制备：用Dilution buffer将PKH67储存液稀释10倍，配制浓度为100 μM的染料工作液（避光操作，工作液应根据实验用量适当配置，现配现用）；

3.外泌体染色：

（1）在外泌体中加入染料工作液，建议加入剂量如下：

外泌体蛋白量	加入染料工作液剂量
10~200 ug	50 μL
200~500 ug	100 μL
500~1000 ug	200 μL

（2）加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再静置孵育10min；

（3）向孵育后的外泌体–染料复合物中加入10 mL的1x PBS混匀；

（4）按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除多余染料；

（5）取200 μL 1×PBS重悬沉淀物，沉淀即为染色后的外泌体。

注意：过度染色会导致外泌体膜完整性丧失，最佳PKH67染料/外泌体用量需根据自身实验而决定。

HB2201104

产品组分

编号	组分	规格
40781-A	PKH67	20 μL（1mM）
40781-B	Dilution Buffer	200 μL

产品性质

化学名称（Chemical name）	PKH67
CAS号（CAS NO.）	N/A
分子式（Formula）	N/A
分子量（Molecular weight）	200
外观（Appearance）	liquid
激发波长（Ex）	λex 490 nm
发射波长（Em）	λem 502 nm

运输和保存方法

收到产品后将试剂分开储存，使用前请充分混匀。
冰袋运输，2-8℃避光保存，有效期12个月。

注意事项

PKH67母液易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封保存；
PKH67工作液应现配现用,不能能提前配制，否则将影响染色效果；
PKH67溶解液在较低温度下会凝固而粘在管底内，可以 37℃水浴片刻至全部融解后使用。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途！

操作方法

1.外泌体蛋白定量：取适量外泌体进行BCA蛋白浓度测定以确定外泌体蛋白量；

2.染料工作液制备：用Dilution buffer将PKH67储存液稀释10倍，配制浓度为100 μM的染料工作液（避光操作，工作液应根据实验用量适当配置，现配现用）；

3.外泌体染色：

（1）在外泌体中加入染料工作液，建议加入剂量如下：

外泌体蛋白量	加入染料工作液剂量
10~200 ug	50 μL
200~500 ug	100 μL
500~1000 ug	200 μL

（2）加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再静置孵育10min；

（3）向孵育后的外泌体–染料复合物中加入10 mL的1x PBS混匀；

（4）按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除多余染料；

（5）取200 μL 1×PBS重悬沉淀物，沉淀即为染色后的外泌体。

注意：过度染色会导致外泌体膜完整性丧失，最佳PKH67染料/外泌体用量需根据自身实验而决定。

HB2201104

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Hieff®外泌体红色荧光示踪试剂盒(exosomeTrackerkit)

发表于2024年7月24日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff®外泌体红色荧光示踪试剂盒(exosomeTrackerkit)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

本试剂盒PKH26外泌体红色荧光示踪染料能将脂质尾巴的红色荧光染料（PKH26）结合到细胞膜脂质区域上。该试剂盒可以在染色过程中增加染色效率，同时维持细胞活力。可用于外泌体的标记染色实验，监测细胞吞噬作用。

产品组分

编号	组分	规格
40780-A	PKH26	20 μL（1mM）
40780-B	Dilution Buffer	200 μL

产品性质

化学名称（Chemical name）	PKH26
CAS号（CAS NO.）	154214-55-8
分子式（Formula）	C₅₉H₉₇IN₂
分子量（Molecular weight）	961.32
外观（Appearance）	liquid
激发波长（Ex）	λex 551 nm
发射波长（Em）	λem 567 nm
结构式

运输和保存方法

1.收到产品后将试剂分开储存，使用前请充分混匀。

2.冰袋运输，2-8℃避光保存，有效期12个月。

注意事项

1.PKH26 母液易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封保存；

2.PKH26 工作液应现配现用,不能能提前配制，否则将影响染色效果；

3.PKH26 溶解液在较低温度下会凝固而粘在管底内，可以 37℃水浴片刻至全部融解后使用。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途！

操作方法

1.外泌体蛋白定量：取适量外泌体进行BCA蛋白浓度测定以确定外泌体蛋白量；

2.染料工作液制备：用“Dilution buffer”将“PKH26”储存液稀释10倍，配制浓度为100 μM的染料工作液（避光操作，工作液应根据实验用量适当配置，现配现用）；

3.外泌体染色：

（1）在外泌体中加入染料工作液，建议加入剂量如下：

外泌体蛋白量	加入染料工作液剂量
10~200 ug	50 μL
200~500 ug	100 μL
500~1000 ug	200 μL

（2）加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再静置孵育10min；

（3）向孵育后的外泌体–染料复合物中加入10 mL的1x PBS混匀；

（4）按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除多余染料；

（5）取200 μL 1×PBS重悬沉淀物，沉淀即为染色后的外泌体。

注意：过度染色会导致外泌体膜完整性丧失，最佳PKH26染料/外泌体用量需根据自身实验而决定。

HB2201104

产品组分

编号	组分	规格
40780-A	PKH26	20 μL（1mM）
40780-B	Dilution Buffer	200 μL

产品性质

化学名称（Chemical name）	PKH26
CAS号（CAS NO.）	154214-55-8
分子式（Formula）	C₅₉H₉₇IN₂
分子量（Molecular weight）	961.32
外观（Appearance）	liquid
激发波长（Ex）	λex 551 nm
发射波长（Em）	λem 567 nm
结构式

运输和保存方法

1.收到产品后将试剂分开储存，使用前请充分混匀。

2.冰袋运输，2-8℃避光保存，有效期12个月。

注意事项

1.PKH26 母液易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封保存；

2.PKH26 工作液应现配现用,不能能提前配制，否则将影响染色效果；

3.PKH26 溶解液在较低温度下会凝固而粘在管底内，可以 37℃水浴片刻至全部融解后使用。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途！

操作方法

1.外泌体蛋白定量：取适量外泌体进行BCA蛋白浓度测定以确定外泌体蛋白量；

3.外泌体染色：

（1）在外泌体中加入染料工作液，建议加入剂量如下：

外泌体蛋白量	加入染料工作液剂量
10~200 ug	50 μL
200~500 ug	100 μL
500~1000 ug	200 μL

（2）加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再静置孵育10min；

（3）向孵育后的外泌体–染料复合物中加入10 mL的1x PBS混匀；

（4）按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除多余染料；

（5）取200 μL 1×PBS重悬沉淀物，沉淀即为染色后的外泌体。

注意：过度染色会导致外泌体膜完整性丧失，最佳PKH26染料/外泌体用量需根据自身实验而决定。

HB2201104

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Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG plus）

发表于2024年7月19日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG plus）

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG plus）是一款采用公司新一代抗体法热启动Taq酶的荧光定量预混液。2× Mix预混合试剂包含反应缓冲液和酶Mix，采用dUTP代替dTTP，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，大大减少了非特异性PCR扩增和污染，能够保证引物效率的同时，进行多达四重的反应。本产品含有UDG酶，可有效防止气溶胶污染的风险。

组分信息

组分编号

组分名称

11827ES60

(100 T)

11827ES76

(500 T)

11827ES80

(1000 T)

11827ES90

(5000 T)

11827ES92

(10000 T)

11827ES96

(40000 T)

11827

2×TaqMan qPCR Mix

1.25 mL

6.25 mL

12.5 mL

62.5 mL

125 mL

500 mL

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

使用说明

反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
2×TaqMan qPCR Mix	12.5	1×
Primer Mix (10 μM)	x	0.1-0.5 μM
Probe Mix (10 μM)	x	50-250 nM
模板	1-10	–
ddH₂O	up to 25	–

参考扩增程序

步骤	温度	时间	循环数
污染消化	37℃	5 min	1
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	45
退火/延伸	60℃	30 sec	45

*扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整；荧光信号采集：不同的qPCR仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230526

组分信息

组分编号

组分名称

11827ES60

(100 T)

11827ES76

(500 T)

11827ES80

(1000 T)

11827ES90

(5000 T)

11827ES92

(10000 T)

11827ES96

(40000 T)

11827

2×TaqMan qPCR Mix

1.25 mL

6.25 mL

12.5 mL

62.5 mL

125 mL

500 mL

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

使用说明

反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
2×TaqMan qPCR Mix	12.5	1×
Primer Mix (10 μM)	x	0.1-0.5 μM
Probe Mix (10 μM)	x	50-250 nM
模板	1-10	–
ddH₂O	up to 25	–

参考扩增程序

步骤	温度	时间	循环数
污染消化	37℃	5 min	1
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	45
退火/延伸	60℃	30 sec	45

*扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整；荧光信号采集：不同的qPCR仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

适用机型

Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230526

Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG plus）

暂无内容