DNA Fragmentation Reagent 酶切法建库试剂 DNA裂解试剂
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FAQ
COA
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Hieff NGS® DNA Fragmentation Reagent是针对二代测序高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。可应用于50 ng-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本，在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化，即可使用Hieff NGS® Rapid DNA Ligation Module for Kit（Cat#13580）进行文库构建中接头连接反应。
- 适用50 ng-1 μg的基因组DNA
- 高质量片段化酶，可随机切割双链DNA，酶切片段无偏好性
- 片段化、末端修复/加A一步完成
- 严格的批次性能与稳定性质控
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
24 T |
96 T |
10000 T |
|
13507-A |
Smearase® Buffer |
240 μL |
960 μL |
100 mL |
|
13507-B |
Smearase® Enzyme |
120 μL |
480 μL |
50 mL |
运输与保存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。
注意事项
1. 本试剂盒兼容范围为50 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。
2. 若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将DNA稀释在TE（10 mM Tris-HCl ,1 mM EDTA，pH 8.0）中进行片段化。
3. 对于常规的高质量基因组DNA，酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种GC含量的模板。
表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表
|
插入片段主峰大小 |
片段化时间 |
优化范围 |
|
900 bp |
8 min |
8-9 min |
|
750 bp |
10 min |
9-11 min |
|
300 bp |
15 min |
11-16 min |
|
250 bp |
20 min |
16-22 min |
|
200 bp |
25 min |
22-30 min |
【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。
4. 参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
DNA片段化/末端修复/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）
该步骤将基因组DNA片段化，同时进行末端修复及dA尾添加。
1. 将表2中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于冰上配制表2反应体系。
表2 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系
|
名称 |
体积（μL） |
|
Input DNA |
x |
|
Smearase® Buffer |
10 |
|
Smearase® Enzyme |
5 |
|
1×TE |
Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表3所示反应程序，进行DNA片段化，末端修复及dA尾添加反应。
表3 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序
|
温度 |
时间 |
|
热盖105°C |
On |
|
4 °C |
1 min* |
|
30 °C |
8-25 min** |
|
65 °C |
20 min |
|
4 °C |
Hold |
【注】：*DNA片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置4℃，待模块温度降至4℃时，将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA，酶切时间参考表1。
5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® Rapid DNA Ligation Module for Kit（Cat#13580）试剂盒，进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。
参考实例
使用本试剂盒对200 ng Human gDNA (NA12878) 样本进行酶切检测，片段化结果见下图。
HB221228
Hieff NGS® DNA Fragmentation Reagent是针对二代测序高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。可应用于50 ng-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本，在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化，即可使用Hieff NGS® Rapid DNA Ligation Module for Kit（Cat#13580）进行文库构建中接头连接反应。
- 适用50 ng-1 μg的基因组DNA
- 高质量片段化酶，可随机切割双链DNA，酶切片段无偏好性
- 片段化、末端修复/加A一步完成
- 严格的批次性能与稳定性质控
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
24 T |
96 T |
10000 T |
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13507-A |
Smearase® Buffer |
240 μL |
960 μL |
100 mL |
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13507-B |
Smearase® Enzyme |
120 μL |
480 μL |
50 mL |
运输与保存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。
注意事项
1. 本试剂盒兼容范围为50 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。
2. 若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将DNA稀释在TE（10 mM Tris-HCl ,1 mM EDTA，pH 8.0）中进行片段化。
3. 对于常规的高质量基因组DNA，酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种GC含量的模板。
表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表
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插入片段主峰大小 |
片段化时间 |
优化范围 |
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900 bp |
8 min |
8-9 min |
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750 bp |
10 min |
9-11 min |
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300 bp |
15 min |
11-16 min |
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250 bp |
20 min |
16-22 min |
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200 bp |
25 min |
22-30 min |
【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。
4. 参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
DNA片段化/末端修复/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）
该步骤将基因组DNA片段化，同时进行末端修复及dA尾添加。
1. 将表2中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于冰上配制表2反应体系。
表2 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系
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名称 |
体积（μL） |
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Input DNA |
x |
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Smearase® Buffer |
10 |
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Smearase® Enzyme |
5 |
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1×TE |
Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表3所示反应程序，进行DNA片段化，末端修复及dA尾添加反应。
表3 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序
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温度 |
时间 |
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热盖105°C |
On |
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4 °C |
1 min* |
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30 °C |
8-25 min** |
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65 °C |
20 min |
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4 °C |
Hold |
【注】：*DNA片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置4℃，待模块温度降至4℃时，将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA，酶切时间参考表1。
5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® Rapid DNA Ligation Module for Kit（Cat#13580）试剂盒，进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。
参考实例
使用本试剂盒对200 ng Human gDNA (NA12878) 样本进行酶切检测，片段化结果见下图。
HB221228
暂无内容
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