4 × Frag/Prime Buffer
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309ES)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309ES中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH2O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
13487ES08 |
13487ES24 |
13487ES96 |
13487ES98 |
|
13487-A |
4 × Frag/Prime Buffer |
32 μL |
96 μL |
384 μL |
4 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
当Input RNA不需要片段化处理时，请选择方案A；当Input RNA需要片段化处理时，请选择方案B。
A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12309ES试剂，按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。
表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系
|
名称 |
体积 (μL) |
|
Input RNA |
13 |
|
4×Frag/Prime Buffer |
4 |
|
Strand Specificity Reagent |
6 |
|
1st Strand Enzyme Mix |
2 |
|
Total |
25 |
A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。
表2 第一链cDNA合成反应程序
|
温度 |
时间 |
|
热盖 105°C |
On |
|
25 °C |
10 min |
|
42°C |
15 min |
|
70°C |
15 min |
|
4°C |
Hold |
B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。
表3 片段化反应体系
|
名称 |
体积 (μL) |
|
Input RNA |
13 |
|
4×Frag/Prime Buffer |
4 |
|
Total |
17 |
B2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，根据Input RNA的完整度和实验目的，参考Cat#12309ES说明书设置合适的片段化条件。
B3. 片段化产物进行一链cDNA合成，按照表4配制一链cDNA合成反应体系。
表4 第一链cDNA合成反应体系
|
名称 |
体积 (μL) |
|
Fragmented RNA |
17 |
|
Strand Specificity Reagent |
6 |
|
1st Strand Enzyme Mix |
2 |
|
Total |
25 |
B4. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
4. Input RNA请溶于Nuclease free ddH2O，避免Mg2+的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为13 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。
本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Yeasen: Cat#12309ES)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12309ES中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH2O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
13487ES08 |
13487ES24 |
13487ES96 |
13487ES98 |
|
13487-A |
4 × Frag/Prime Buffer |
32 μL |
96 μL |
384 μL |
4 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
当Input RNA不需要片段化处理时，请选择方案A；当Input RNA需要片段化处理时，请选择方案B。
A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12309ES试剂，按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。
表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系
|
名称 |
体积 (μL) |
|
Input RNA |
13 |
|
4×Frag/Prime Buffer |
4 |
|
Strand Specificity Reagent |
6 |
|
1st Strand Enzyme Mix |
2 |
|
Total |
25 |
A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。
表2 第一链cDNA合成反应程序
|
温度 |
时间 |
|
热盖 105°C |
On |
|
25 °C |
10 min |
|
42°C |
15 min |
|
70°C |
15 min |
|
4°C |
Hold |
B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。
表3 片段化反应体系
|
名称 |
体积 (μL) |
|
Input RNA |
13 |
|
4×Frag/Prime Buffer |
4 |
|
Total |
17 |
B2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，根据Input RNA的完整度和实验目的，参考Cat#12309ES说明书设置合适的片段化条件。
B3. 片段化产物进行一链cDNA合成，按照表4配制一链cDNA合成反应体系。
表4 第一链cDNA合成反应体系
|
名称 |
体积 (μL) |
|
Fragmented RNA |
17 |
|
Strand Specificity Reagent |
6 |
|
1st Strand Enzyme Mix |
2 |
|
Total |
25 |
B4. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12309ES进行后续反应。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
4. Input RNA请溶于Nuclease free ddH2O，避免Mg2+的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为13 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。
暂无内容
暂无内容