FLAG Tag Rabbit Polyclonal Antibody
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FLAG Tag Rabbit pAb(FLAG Tag兔多抗)(AF0036)
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| AF0036 | FLAG Tag Rabbit Polyclonal Antibody | 100μl | 482.00元 |
| 来源 | 用途 | 交叉反应性 | 分子量 |
| Rabbit | WB, IP, IF, ICC | – | – |
WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence; IHC, Immunohistochemistry; ICC,Immunocytochemistry; FC, Flow Cytometry; ELISA, Enzyme-linked Immunosorbent Assay; ChIP, Chromatin Immunoprecipitation Assay.
H, Human; M, Mouse; R, Rat; C, Chicken; Cw, Cow; Dg, Dog; Gp, Guinea pig; Hm, Hamster; Hr, Horse; Mk,Monkey; Pg, Pig;Rb, Rabbit; S, Sheep; Z, Zebrafish; All, all species expected.
配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测或其它适当用途时的一抗稀释。
建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：
| WB | IP | IF | IHC | ICC | FC | ELISA | ChIP |
| 1:1000 | 1:40 | 1:100 | – | 1:50 | – | – | – |
抗体详细信息如下:
|
About this Antibody |
|
|
Name |
FLAG Tag Rabbit Polyclonal Antibody |
|
Category |
Polyclonal antibody (pAb); Primary antibody |
|
Isotype |
IgG |
|
Purification |
Affinity purification |
|
About the Immunogen |
|
|
Immunogen |
This antibody is produced by immunizing rabbits with a synthetic peptide DYKDDDDK (KLH-coupled). |
|
Gene ID |
– |
|
SwissProt |
– |
|
Synonyms |
N/A |
|
Category |
Related Products |
|
Background |
The DYKDDDDK peptide has been used extensively as a general epitope tag in expression vectors. Due to its small size, it is unlikely to affect the tagged protein’s biochemical properties. This antibody recognizes the DYKDDDDK peptide fused to either the amino- or carboxy-terminus of targeted proteins. |
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| AF0036 | FLAG Tag Rabbit Polyclonal Antibody | 100μl |
| AZ100 | Western一抗稀释液 | 100ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
FLAG Tag Rabbit Polyclonal Antibody -20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：
如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. Western检测：
请根据抗体的实际用途选择相应的使用方法。
A. 按照推荐的稀释比例用碧云天提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
B. 把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋
白膜。
C. 回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
D. 按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/western.htm
2. 免疫染色：
可以使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页： http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm
3. 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
4. 代表性图片:
Fig. 1. Western blot analysis on a FLAG Tag recombinant protein (80kDa) with FLAG Tag rabbit polyclonal antibody (AF0036).
相关产品：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P0006 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒 | 1000次 |
| P0010 | BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) | 500次 |
| P0012 | BCA蛋白浓度测定试剂盒 | 500次 |
| P0012A | SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 | 1盒 |
| P0012AC | SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒 | 1盒 |
| P0013 | Western及IP细胞裂解液 | 100ml |
| P0013B | RIPA裂解液(强) | 100ml |
| P0014B | SDS-PAGE电泳液 | 10×1L |
| P0015 | SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) | 2ml |
| P0018 | BeyoECL Plus(超敏ECL化学发光试剂盒) | 共100ml |
| P0018A | BeyoECL Star(特超敏ECL化学发光试剂盒) | 共100ml |
| P0020 | 显影定影试剂盒 | 各1升 |
| P0021B | Western转膜液 | 10×1L |
| P0023A | Western一抗稀释液 | 100ml |
| P0023B | Western封闭液 | 100ml |
| P0023C6 | Western洗涤液(10X) | 10×100ml |
| P0023D | Western二抗稀释液 | 100ml |
| P0025 | Western一抗二抗去除液 | 250ml |
| P0252 | QuickBlock™ Western封闭液 | 100ml |
| P0256 | QuickBlock™ Western一抗稀释液 | 100ml |
| P0258 | QuickBlock™ Western二抗稀释液 | 100ml |
| P0066 | 预染蛋白质分子量标准 | 200μl |
| P0068 | 彩色预染蛋白质分子量标准 | 200μl |
| P0071 | BeyoColor™彩色预染蛋白质分子量标准 | 200μl |
| P0098 | 免疫染色固定液 | 100ml |
| P0102 | 免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0103 | 免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0106L | 免疫染色洗涤液(10X) | 10×100ml |
| P0108 | 免疫荧光染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0110 | 免疫染色(非荧光)二抗稀释液 | 100ml |
| P0260 | QuickBlock™免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0262 | QuickBlock™免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0265 | QuickBlock™免疫荧光染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0267 | QuickBlock™免疫组化染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0126 | 抗荧光淬灭封片液 | 5ml |
| FFP24 | PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.2μm) | 20张/包装 |
| FFP32 | PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.45μm) | 20张/包装 |
| FFP51 | 转印滤纸(7.5×10cm) | 100片/包装 |
| FF057 | X-OMAT BT胶片(原柯达, 5×7英寸) | 100张/盒 |
| FFC58 | 压片暗盒(5×7英寸) | 1个 |
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A nanomaterial targeting the spike protein captures SARS-CoV-2 variants and promotes viral elimination
Nat Nanotechnol. 2022 Sep;17(9):993-1003.;doi: 10.1038/s41565-022-01177-2. (IF 31.538)
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Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody(Flag Tag 小鼠单抗)(AF5051)
Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody
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价格: ¥ 456.00
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| AF5051 | Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody | 50μl | 456.00元 |
| 来源 | 用途 | 交叉反应性 | 理论分子量 | 实际分子量 |
| Mouse | WB, IP, IF, IHC | – | – | – |
WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence; IHC, Immunohistochemistry; ICC, Immunocytochemistry; FC, Flow Cytometry; ChIP, Chromatin Immunoprecipitation Assay; ChIP-seq, ChIP-sequencing.
H, Human; M, Mouse; R, Rat; C, Chicken; Cw, Cow; Dg, Dog; Gp, Guinea pig; Hm, Hamster; Hr, Horse; Mk, Monkey; Pg, Pig; Rb, Rabbit; S, Sheep; Z, Zebrafish; All, all species expected.
配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测或其它适当用途时的一抗稀释。
建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：
| WB | IP | IF | IHC | ICC | FC | ChIP | ChIP-seq |
| 1:1000-1:2000 | 1:50-1:100 | 1:50-1:200 | 1:50-1:200 | 1:50-1:200 | – | – | – |
抗体详细信息如下:
| About this Antibody | |
| Name | Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody |
| Category | Mouse Monoclonal Antibody(mAb); Primary antibody |
| Isotype | IgG |
| Purification method | Affinity purification |
| Positive samples | 293T |
| Cellular location | – |
| Customer validation | WB (Human , Pig , Mouse , Plant , Arabidopsis thaliana); IP (Mouse); IF (Human); CoIP (Oryza Sativa); ChIP (Mouse) |
| About the Immunogen | |
| Immunogen | A synthetic Peptide of DDDDK-Tag |
| Sequence | – |
| Gene ID | – |
| SwissProt | – |
| Synonyms | – |
| Category | polypeptide protein tag |
| Background | – |
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| AF5051 | Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody | 50μl |
| AZ050 | Western一抗稀释液 | 50ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody -20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：
如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
请根据抗体的实际用途选择相应的使用方法。
1.Western检测：
a.按照推荐的稀释比例用碧云天提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
b.把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
c.回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
d.按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/western.htm
2.免疫染色：
可以使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页：http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm
3.其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
4.代表性图片：
Fig1. Western blot analysis of over-expressed DDDDK-tagged protein in 293T cells using Flag Tag (DDDDK-Tag) Mouse Monoclonal Antibody at different dilution. Each lane was loaded with 2µg cell lysate. Secondary antibody: HRP-labeled Goat Anti-Mouse IgG(H+L) (A0216) at 1:1000 dilution. Blocking buffer: QuickBlock™ Blocking Buffer (P0231). Detection: BeyoECL Star (P0018A). Exposure time: 3s.
Fig2. Immunofluorescence analysis of 293T cells using Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody. Blue: DAPI for nuclear staining.
Fig3. Immunoprecipitation of over-expressed DDDDK-tagged protein in 293T cells using Flag Tag (DDDDK-Tag) Mouse Monoclonal Antibody. A mock served as negative control and over-expressed 293T cell lysate served as positive control.
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| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| E6001 | MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(4胶) | 1套 |
| E6005 | MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(2胶) | 1套 |
| E6050 | MiniBlot™蛋白转膜系统 | 1套 |
| E6150 | MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(2胶/2膜) | 1套 |
| E6155 | MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(4胶/2膜) | 1套 |
| E6159 | MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(4胶/4膜) | 1套 |
| E6080 | BeyoPower™中电流电源(300V/600mA/100W) | 1套 |
| E6085 | BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) | 1套 |
| E6600 | TissueMaster™手持式组织研磨仪 | 1套 |
| EI600 | BeyoImager™ 600化学发光成像系统 | 1套 |
| FFP24 | PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.2μm) | 20张/包装 |
| FFP32 | PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.45μm) | 20张/包装 |
| FFP51 | 转印滤纸(7.5×10cm) | 100张/包装 |
| FFX050-FFX055 | Western洗膜盒 | 1个/包装 |
| P0006 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒 | 1000次 |
| P0012 | BCA蛋白浓度测定试剂盒 | 500次 |
| P0012A | SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
| P0012AC | SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
| P0013 | Western及IP细胞裂解液 | 100ml |
| P0013B-P0013D | RIPA裂解液(强、中、弱) | 100ml |
| P0014A/P0014B | SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly, Powder) | 1L/10L |
| P0014C/P0014D | SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly, 10X) | 100ml/500ml |
| P0015/P0015L | SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) | 2ml/15ml |
| P0015F | SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) | 2ml |
| P0017F | BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液 | 250ml |
| P0018A | BeyoECL Star(特超敏ECL化学发光试剂盒) | 100ml/500ml |
| P0018F | BeyoECL Moon (极超敏ECL化学发光试剂盒) | 100ml/500ml |
| P0018S/P0018M | BeyoECL Plus (超敏ECL化学发光试剂盒) | 100ml/500ml |
| P0021A | Western转膜液 | 1L |
| P0021S | PVDF膜浸润活化液 | 250ml |
| P0022 | 丽春红染色液 | 120ml |
| P0023A | Western一抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0023B | Western封闭液 | 100ml/500ml |
| P0023C | Western洗涤液 | 250ml |
| P0023D | Western二抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0025 | Western一抗二抗去除液 | 250ml |
| P0059 | Recombinant 16-Tag Protein | 200μl/1ml |
| P0066 | 预染蛋白质分子量标准(19-117kD) | 200μl |
| P0068 | 彩色预染蛋白质分子量标准(10-180kD) | 200μl |
| P0071 | BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) | 200μl |
| P0075 | BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(10-170kD) | 200μl |
| P0078 | BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(15-120kD) | 200μl |
| P0095 | 免疫染色通透液(Saponin) | 100ml/500ml |
| P0096 | 免疫染色通透液(Triton X-100) | 100ml/500ml |
| P0097 | 免疫染色强力通透液 | 100ml/500ml |
| P0098 | 免疫染色固定液 | 100ml/500ml |
| P0099 | 4%多聚甲醛固定液 | 100ml/500ml |
| P0102 | 免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0103 | 免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0106 | 免疫染色洗涤液 | 250ml |
| P0108 | 免疫荧光染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0220-P0235 | QuickBlock™封闭液 | 100ml |
| P0252 | QuickBlock™ Western封闭液 | 100ml/500ml |
| P0256 | QuickBlock™ Western一抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0258 | QuickBlock™ Western二抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0260 | QuickBlock™免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0262 | QuickBlock™免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0265 | QuickBlock™免疫荧光染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0267 | QuickBlock™免疫组化染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0280 | InstantView™ SDS-PAGE蛋白染色及上样缓冲液(5X) | 1ml |
| P0050-P0058 | BeyoGel™ SDS-PAGE预制胶(Tris-Gly, 12孔) | 10块/50块 |
| P0448-P0472 | BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 10孔/15孔) | 10块/50块 |
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| R0121 | AllProtect™动物组织核酸、蛋白稳定保存液 | 25ml/100ml |
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Anti-Flag免疫磁珠(Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads)
Anti-Flag免疫磁珠(Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads)
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FAQ
COA
已发表文献
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）是一种聚合物磁性微球，由高质量的鼠源IgG单克隆抗体与carboxyl magnetic beads通过供价偶联制备，本产品具有快速的磁响应性，超顺磁性、良好的分散性、粒径均一、极低的非特异结合和丰富的结合位点等特点，可用于带有Flag标签的蛋白免疫沉淀（IP）。
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。
产品性质
|
配体 |
Anti-Flag Antibody |
|
粒径 |
200 nm |
|
结合能力 |
>0.6 mg蛋白/mL 磁珠 |
|
磁珠浓度 |
10 mg/mL |
|
储存缓冲液 |
ddH2O |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃储存。避免冻存！有效期1年。
注意事项
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
使用方法
以免疫沉淀（IP）为例，步骤如下：
1样品准备
样品可以是细菌发酵液或者细胞裂解液， 样品中不能含有颗粒不溶物，可以用0.22 μm滤膜过滤或10,000×g离心15 min。
2 磁珠预处理
2.1 用移液器轻柔吹打Anti-Flag免疫磁珠，使其充分混悬，取 25~50 µL 磁珠悬液置于1.5 mL离心管中。
2.2 加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer并轻轻移液器混合，用移液器轻柔吹打重悬Anti-Flag免疫磁珠，接着在磁力架上静置1 min后，吸弃上清。
2.3 重复步骤 2.2 两次。
3样品的结合
3.1 在预处理后的磁珠中加入蛋白样品，置于翻转混合仪上孵育(常温2 h，4 ℃过夜)；
3.2 将上述混合液置于磁力架上静置1 min，然后把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测Flag标签蛋白是否存在残留)，原离心管中剩余的即为 蛋白-磁珠复合物；
注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
4洗涤
4.1 向步骤3.2所得的蛋白-磁珠复合物中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer ，用移液器轻柔吹打重悬，接着在磁力架上静置 1 min 后, 吸弃上清；
4.2 重复步骤4.1两次，直至洗涤后的上清液OD280小于0.05为止；
注意：如上清液的OD280仍大于0.05，则适当增加洗涤次数。
5蛋白洗脱
根据下游用途选择洗脱方法。
5.1 Flag融合蛋白洗脱
1） 配制Flag多肽洗脱液：TBS中溶解Flag多肽，终浓度为0.2-1 mg/mL。
2） 分别加入100 μL Flag多肽洗脱液，4 ℃孵育 2 h-6 h（慢慢摇晃）
3） 分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
4） 重复洗脱步骤一次以获得更高的回收率
5.2 酸性洗脱（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）
1）加入100 μL 0.1 M Gly-HCl，pH 3.0，室温孵育5-10 min（慢慢摇晃）。
2）分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
3）中和低pH，每100 μL洗脱液加入20 μL中和缓冲液(1M Tris pH8.5)。最后的溶液可以用作样品用于变性 SDS-PAGE。
5.3 用SDS-PAGE上样缓冲液洗脱
如需直接检测目的蛋白，则在上述洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入100 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸 5 min，冷却至室温并在磁力架上静置 1 min 后，取上清进行 SDS-PAGE 检测。
HB230116
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）是一种聚合物磁性微球，由高质量的鼠源IgG单克隆抗体与carboxyl magnetic beads通过供价偶联制备，本产品具有快速的磁响应性，超顺磁性、良好的分散性、粒径均一、极低的非特异结合和丰富的结合位点等特点，可用于带有Flag标签的蛋白免疫沉淀（IP）。
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。
产品性质
|
配体 |
Anti-Flag Antibody |
|
粒径 |
200 nm |
|
结合能力 |
>0.6 mg蛋白/mL 磁珠 |
|
磁珠浓度 |
10 mg/mL |
|
储存缓冲液 |
ddH2O |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃储存。避免冻存！有效期1年。
注意事项
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
使用方法
以免疫沉淀（IP）为例，步骤如下：
1样品准备
样品可以是细菌发酵液或者细胞裂解液， 样品中不能含有颗粒不溶物，可以用0.22 μm滤膜过滤或10,000×g离心15 min。
2 磁珠预处理
2.1 用移液器轻柔吹打Anti-Flag免疫磁珠，使其充分混悬，取 25~50 µL 磁珠悬液置于1.5 mL离心管中。
2.2 加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer并轻轻移液器混合，用移液器轻柔吹打重悬Anti-Flag免疫磁珠，接着在磁力架上静置1 min后，吸弃上清。
2.3 重复步骤 2.2 两次。
3样品的结合
3.1 在预处理后的磁珠中加入蛋白样品，置于翻转混合仪上孵育(常温2 h，4 ℃过夜)；
3.2 将上述混合液置于磁力架上静置1 min，然后把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测Flag标签蛋白是否存在残留)，原离心管中剩余的即为 蛋白-磁珠复合物；
注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
4洗涤
4.1 向步骤3.2所得的蛋白-磁珠复合物中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer ，用移液器轻柔吹打重悬，接着在磁力架上静置 1 min 后, 吸弃上清；
4.2 重复步骤4.1两次，直至洗涤后的上清液OD280小于0.05为止；
注意：如上清液的OD280仍大于0.05，则适当增加洗涤次数。
5蛋白洗脱
根据下游用途选择洗脱方法。
5.1 Flag融合蛋白洗脱
1） 配制Flag多肽洗脱液：TBS中溶解Flag多肽，终浓度为0.2-1 mg/mL。
2） 分别加入100 μL Flag多肽洗脱液，4 ℃孵育 2 h-6 h（慢慢摇晃）
3） 分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
4） 重复洗脱步骤一次以获得更高的回收率
5.2 酸性洗脱（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）
1）加入100 μL 0.1 M Gly-HCl，pH 3.0，室温孵育5-10 min（慢慢摇晃）。
2）分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
3）中和低pH，每100 μL洗脱液加入20 μL中和缓冲液(1M Tris pH8.5)。最后的溶液可以用作样品用于变性 SDS-PAGE。
5.3 用SDS-PAGE上样缓冲液洗脱
如需直接检测目的蛋白，则在上述洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入100 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸 5 min，冷却至室温并在磁力架上静置 1 min 后，取上清进行 SDS-PAGE 检测。
HB230116
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标记兔单克隆抗体 重组兔单抗|Flag Tag Rabbit mAb
标记兔单克隆抗体 重组兔单抗|Flag Tag Rabbit mAb
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
标签抗原由于其分子量小，对融合蛋白的活性没有影响等特点，已被广泛应用于重组蛋白在后续免疫印迹、免疫沉淀和免疫技术的检测中。Flag标签是重组蛋白研究中应用较为广泛的一种，该标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目标蛋白的N-端或者C-端，且该标签可被后续肠激酶去除。Flag抗体可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。
产品性质
|
别名 |
DYKDDDDK Tag; Flag; FLAG |
|
免疫原 |
A synthetic peptide of DDDDK tag |
|
缓冲液 |
50mM Tris-Glycine(pH 7.4), 0.15M NaCl, 40% Glycerol, 0.01% Sodium azide and 0.05% BSA |
|
分子量 |
– |
|
克隆类型 |
Monoclonal Antibody |
|
亚型 |
Rabbit IgG |
|
宿主 |
Rabbit |
|
物种反应 |
Transfected |
|
推荐应用 |
WB,IHC-F,IHC-P,ICC/IF,IP |
|
纯化方式 |
Affinity Chromatography |
应用
稀释比 WB: 1/1000-1/10000 IHC: 1/50-1/200 IF: 1/100-1/500 IP: 1/20
运输与保存方法
冰袋运输，-20℃保存。
注意事项
1. 避免反复冻融。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
产品数据
|
Western blot |
|
|
|
Western blot analysis of Flag Tag in CHO-K1 or CHO-K1 transfected with different Flagfusion proteins (4flag, flag4), lysates using Flag Tag antibody. |
HB220902
标签抗原由于其分子量小，对融合蛋白的活性没有影响等特点，已被广泛应用于重组蛋白在后续免疫印迹、免疫沉淀和免疫技术的检测中。Flag标签是重组蛋白研究中应用较为广泛的一种，该标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目标蛋白的N-端或者C-端，且该标签可被后续肠激酶去除。Flag抗体可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。
产品性质
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别名 |
DYKDDDDK Tag; Flag; FLAG |
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免疫原 |
A synthetic peptide of DDDDK tag |
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缓冲液 |
50mM Tris-Glycine(pH 7.4), 0.15M NaCl, 40% Glycerol, 0.01% Sodium azide and 0.05% BSA |
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分子量 |
– |
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克隆类型 |
Monoclonal Antibody |
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亚型 |
Rabbit IgG |
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宿主 |
Rabbit |
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物种反应 |
Transfected |
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推荐应用 |
WB,IHC-F,IHC-P,ICC/IF,IP |
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纯化方式 |
Affinity Chromatography |
应用
稀释比 WB: 1/1000-1/10000 IHC: 1/50-1/200 IF: 1/100-1/500 IP: 1/20
运输与保存方法
冰袋运输，-20℃保存。
注意事项
1. 避免反复冻融。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
产品数据
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Western blot |
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Western blot analysis of Flag Tag in CHO-K1 or CHO-K1 transfected with different Flagfusion proteins (4flag, flag4), lysates using Flag Tag antibody. |
HB220902
暂无内容
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