大肠杆菌表达重组肠激酶rEK(不带标签) 牛肠激酶|Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli
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产品简介
重组肠激酶（rEK）是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段，氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致，有着和天然提取的肠激酶同样特异的酶切位点，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，同时重组肠激酶（rEK）具有比天然酶更高的切割活性。
翌圣重组肠激酶为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，不含其他蛋白酶，可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，可不考虑除去。
产品信息
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货号 |
20401JP60 / 20401JP70 / 20401JP76 / 20401JP80 / 20401JP90 |
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规格 |
100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U |
产品性质
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来源（Source） |
大肠杆菌表达 |
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分子量（Molecular Weight） |
理论值25.85 kDa |
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外观（Appearance） |
澄清、无色至淡黄色液体 |
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酶浓度（Enzyme Concentration） |
≥5 U/uL |
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活性定义（Activity Definition） |
一个活性单位定义为25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0缓冲体系下，将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量 |
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内毒素检测（Endotoxin） |
用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg |
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质量保证（Quality assurance） |
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；不含其他蛋白酶，无非特异性切割 |
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缓冲体系（Buffer） |
50 mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50%甘油 |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期2年。尽量避免反复冻融（5次以内，无活性损失）
使用方法（应用举例）
【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。
1）反应体系
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融合蛋白 |
0.05-0.1 mg（蛋白浓度：0.1-1 mg/mL） |
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Enterokinase |
0.1-0.2 U |
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缓冲体系 |
25 mM Tris-HCL 8.0 |
2）反应条件：25°C过夜酶切（注：完全酶切需要16-24 h）。
【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1 U的溶液使用。
4°C低温酶切条件：4°C能对底物进行有效酶切，但需要延长酶切时间至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。
注意事项
- 本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
- 不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。
- 在＞200 mM咪唑，或＞200 mM NaCl，或＞5%甘油，酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释到咪唑含量在100 mM以下，NaCl浓度在50 mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。
- 磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
- 本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（如DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：
平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
6. 蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。
7. 本产品仅作科研用途。
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20231101
产品简介
重组肠激酶（rEK）是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段，氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致，有着和天然提取的肠激酶同样特异的酶切位点，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，同时重组肠激酶（rEK）具有比天然酶更高的切割活性。
翌圣重组肠激酶为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，不含其他蛋白酶，可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，可不考虑除去。
产品信息
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货号 |
20401JP60 / 20401JP70 / 20401JP76 / 20401JP80 / 20401JP90 |
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规格 |
100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U |
产品性质
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来源（Source） |
大肠杆菌表达 |
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分子量（Molecular Weight） |
理论值25.85 kDa |
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外观（Appearance） |
澄清、无色至淡黄色液体 |
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酶浓度（Enzyme Concentration） |
≥5 U/uL |
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活性定义（Activity Definition） |
一个活性单位定义为25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0缓冲体系下，将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量 |
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内毒素检测（Endotoxin） |
用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg |
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质量保证（Quality assurance） |
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；不含其他蛋白酶，无非特异性切割 |
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缓冲体系（Buffer） |
50 mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50%甘油 |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期2年。尽量避免反复冻融（5次以内，无活性损失）
使用方法（应用举例）
【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。
1）反应体系
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融合蛋白 |
0.05-0.1 mg（蛋白浓度：0.1-1 mg/mL） |
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Enterokinase |
0.1-0.2 U |
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缓冲体系 |
25 mM Tris-HCL 8.0 |
2）反应条件：25°C过夜酶切（注：完全酶切需要16-24 h）。
【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1 U的溶液使用。
4°C低温酶切条件：4°C能对底物进行有效酶切，但需要延长酶切时间至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。
注意事项
- 本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
- 不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。
- 在＞200 mM咪唑，或＞200 mM NaCl，或＞5%甘油，酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释到咪唑含量在100 mM以下，NaCl浓度在50 mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。
- 磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
- 本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（如DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：
平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
6. 蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。
7. 本产品仅作科研用途。
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20231101
Q：该酶使用浓度是多少？
A：该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。
Q：如果需要去除重组肠激酶，该如何去除？
A：本品不含标签，后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（eg.DEAE-FF） 对其进行洗脱。
Q：本品一定要去除吗？
A：本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。
Q：本品酶切效果不好怎么办？
A：蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。
[1] Deng Z, Zeng Q, Tang J, et al. Anti-inflammatory effects of FS48, the first potassium channel inhibitor from the salivary glands of the flea Xenopsylla cheopis. J Biol Chem. 2021;296:100670. doi:10.1016/j.jbc.2021.100670(IF:5.157)
[2] Hong B, Chang Q, Zhai Y, Ren B, Zhang F. Functional Characterization of Odorant Binding Protein PyasOBP2 From the Jujube Bud Weevil, Pachyrhinus yasumatsui (Coleoptera: Curculionidae). Front Physiol. 2022;13:900752. Published 2022 Apr 27. doi:10.3389/fphys.2022.900752(IF:4.566)