dld-diagnostika EA602/96说明书
EA602/96
酶免疫测定法
，用于快速定量测定
尿液、血浆和血清中的血清素
12×8 测定
简单的样品制备（20 µl 血清或尿液；40 µl 血浆）
ELISA 微量滴定板（12 x 8 个单孔）
用于灵活的分析运行
6 个标准品，2 个对照品
总孵育时间：1.5 小时
内分泌学、神经b学、肿瘤学、精神病学
类癌、高血压、精神疾病
血清：80 – 450 ng/ml（女性）；40 – 400 ng/ml（男性）
尿液：50 – 250 µg/天；血浆 < 10 ng/ml
见使用说明
血清，尿液：4.7 ng/ml
血浆：2.6 ng/ml
Verý 快速检测，样品制备
简单 1.5 小时
无药物干扰
分离孔以进行灵活的测定运行
标准范围宽，无需预稀释即可方便地测量病理样品
世界*实验材料供应商 Advanced BioMatrix上海金畔生物为其中国代理， Advanced BioMatrix在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， Advanced BioMatrix就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获
Advanced BioMatrix中国代理, Advanced BioMatrix上海代理， Advanced BioMatrix北京代理， Advanced BioMatrix广东代理， Advanced BioMatrix江苏代理 Advanced BioMatrix湖北代理, Advanced BioMatrix天津,Advanced BioMatrix黑龙江代理, Advanced BioMatrix内蒙古代理, Advanced BioMatrix吉林代理, Advanced BioMatrix福建代理, Advanced BioMatrix江苏代理, Advanced BioMatrix浙江代理, Advanced BioMatrix四川代理,
美国Advanced BioMatrix（简称ABM） 是美国一家的生物公司，获得了Allergan Inc的(Allergan用25年时间不断完善胶原蛋白相关的产品的生产工艺)，将Allergan的专业和技术用于蛋白生产与检测，致力于为组织工程、细胞分析及细胞增殖等研究领域提供稳定的产品。 Advanced BioMatrix不断丰富已有产品线，目前可为三维细胞培养提供各种胶原蛋白、纤连蛋白
CytoSoft® 6-well Plate
CytoSoft ® 6孔板
目录号5144-5EA（以前的＃5144）
产品描述：
细胞粘附的底物的刚性可以对细胞形态和基因表达产生深远的影响。CytoSoft ® 产品与各刚性基板覆盖宽生理范围提供一个工具，来培养细胞。在每个孔的底部，有一层特殊配方的生物相容性硅胶，其弹性模量（刚度）经过仔细测量和认证。在凝胶的表面CytoSoft ® 产品是官能化，以形成具有在蛋白质上的胺共价键。该化学官能化是稳定的，并且反应不需要催化剂，有利于用基质蛋白和电镀细胞涂覆凝胶表面。
的硅衬底CytoSoft ® 产品是光学透明的，并具有低自动荧光。每个孔中的硅树脂层牢固地粘合到孔的底部。与水凝胶（例如聚丙烯酰胺凝胶）不同，硅胶不易水解，不干燥或溶胀，具有弹性并且耐撕裂或开裂，并且它们的弹性模量（刚性）在延长的储存期间几乎保持不变。
CytoSoft ® 产品容纳细胞使用酶例如胰蛋白酶和胶原酶收获。有过程中或酶处理后的基板没有生化击穿，并且没有从检索到的样品中的基底的残差CytoSoft ® 板。
此CytoSoft ® 产品，目录号5144，具有约32千帕的在标准平底6孔板的弹性模量。硅胶凝胶的厚度是均匀的，每个孔中约0.5毫米厚的硅氧烷层与哺乳动物细胞培养物*相容。板单独包装，使用照射灭菌，每包装5个板。
|
产品信息 |
CytoSoft ® ， 6孔板 |
|
板尺寸 |
6多孔板，平底 |
|
每包装数量 |
每包5板 |
|
刚度（弹性模量） |
〜32 kPa |
|
存储 |
室内温度 |
|
保质期 |
至少6个月 |
|
板材表面材料 |
官能化硅胶 |
|
无菌 |
是 |
|
每口增长面积 |
9.5厘米2 |
|
每个井的典型工作量 |
2.0〜3.5ml |
准备和使用
涂层程序
注意：使用这些建议作为指导，以确定您的文化系统的*涂层条件。
取出CytoSoft ®在无菌罩从保护套产品。
注意：使用 前，将涂层溶液预热至约室温。
注意：推荐稀释PureCol ® I型胶原蛋白是〜100微克/毫升（〜1：30）。
注意：与常规塑料盘相比，疏水表面需要更大的体积才能覆盖表面
注意：表面润湿后， 请勿让CytoSoft®表面变干。
涂层表面可以使用。
用于从培养器皿中除去细胞的标准程序收获可以用于从获取细胞CytoSoft ®产品，包括使用胰蛋白酶，Accutase®和非酶细胞剥离溶液。
SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒|SV40LTA&E1A Residue DNA Detection Kit
SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒是用于定量分析检测生物制品中宿主细胞，如HEK293T细胞系中的SV40LTA和E1A残留DNA含量的试剂盒。
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR原理，可专一快速的检测样品中SV40LTA和E1A残留DNA，其最低检测限可以达到101 copies/μL水平。该试剂盒可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
|
|
41310ES50 (50T) |
41310ES60 (100T) |
||
|
41310-A |
SV40LTA&E1A qPCR Mix |
0.75 mL |
1.5 mL |
|
41310-B |
SV40LTA&E1A Primer&Probe Mix |
200 μL |
400 μL |
|
41310-C |
DNA Dilution Buffer |
2×1.8 mL |
4×1.8 mL |
|
41310-D |
SV40LTA&E1A DNA Control (nonliner) |
25 μL |
50 μL |
|
41310-E |
SV40LTA&E1A DNA Control (linear) |
25 μL |
50 μL |
|
41310-F |
IC |
50 μL |
100 μL |
【注】：1. IC：Internal control，内部对照。
运输和保存方法
1. 所有组分均干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。且41310-A和41310-B均需避光保存。
2. 收到货后，请检查共6个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
注意事项
1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
2. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途。
适用机型
包含但不限于以下仪器：
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5，ABI Step OnePlus；
上海宏石医疗科技：SLAN-96S。
使用方法
一、SV40LTA&E1A DNA定量参考品的稀释和标准曲线的制备
已知，线性化和非线性化的SV40LTA&E1A DNA Control浓度都是一样的，且各自内含有的SV40LTA浓度均为1.8×107 copies/μL，E1A浓度均为1.8×107 copies/μL。建议根据实际样品结构特性，选择线性化或非线性化SV40LTA&E1A DNA Control配制标曲。具体操作如下：
1.将SV40LTA&E1A DNA Control和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。
2. 取6支干净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0，Std1，Std2，Std3，Std4，Std5。
3. 在标记为Std0的1.5 mL离心管中加90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL SV40LTA&E1A DNA Control，将SV40LTA&E1A定量参考品稀释10倍，得到Std0（SV40LTA浓度1.8×106 copies/μL，E1A浓度1.8×106 copies/μL），振荡混匀后短时间快速离心10 sec，该浓度可分装置于-20℃短期保存（不超过3个月），使用时避免反复冻融。
4. 在Std1，Std2，Std3，Std4，Std5管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer，再进行梯度稀释，稀释方法如下：
|
稀释管 |
稀释比例 |
终浓度(copies/μL) |
|
|
SV40LTA (liner/nonliner) |
E1A (liner/nonliner) |
||
|
Std1 |
10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×105 |
1.8×105 |
|
Std2 |
10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×104 |
1.8×104 |
|
Std3 |
10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×103 |
1.8×103 |
|
Std4 |
10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×102 |
1.8×102 |
|
Std5 |
10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×101 |
1.8×101 |
【注】：
1. 每个浓度做3个复孔，该试剂可测试1.8×101–1.8×105 copies/μL线性范围的SV40LTA和对应的1.8×101–1.8×105 copies/μL线性范围的E1A。
2. 为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-20℃。
3. 已融化未使用的DNA Dilution Buffer可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-20℃。
4. 为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约1 min。
二、样本加标回收质控ERC的制备
根据需要设置ERC中的SV40LTA&E1A DNA标准品浓度（以制备加1.8×103 copies SV40LTA对应1.8×103copies E1A DNA量的ERC为例），具体操作如下：
1. 取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL Std4，混匀，标记为ERC。
2. 加标回收ERC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收ERC纯化液。
三、阴性抽提质控NCS的制备
根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：
1. 取100 μL样本基质溶液（或DNA Dilution Buffer）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。
2. 阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。
四、无模板对照NTC的制备
根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：
1. 无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。
2. 每管或孔中的NTC反应体系为20 μL Mix混合液（即15 μL SV40LTA&E1A qPCR Mix + 4μL SV40LTA&E1A Primer&Probe Mix+ 1μL IC）+ 10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。
五、反应体系
|
组分 |
体积(μL) |
|
SV40LTA&E1A qPCR Mix |
15 |
|
SV40LTA&E1A Primer&Probe Mix |
4 |
|
IC |
1 |
|
DNA template |
10 |
|
总体积 |
30 |
【注】：
1.根据反应孔数计算本次所需Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+4+1) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。
2. 反应孔数=（5个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+待测样本TS个数+待测样本对应加标回收ERC个数）× 3。
NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer
NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS
TS (Test Sample)：待测样本
ERC (Extraction Recovery Control)：待测样本中加入如1.8×103 copies SV40LTA对应1.8×103copies E1A标准品DNA后进行样本前处理，所得纯化液为加标回收ERC
3. 加样完成密封好管子后，请低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。
下图为参考板位：
该示例是对SV40LTA&E1A残留DNA qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：5个浓度梯度SV40LTA&E1A DNA标准曲线、1个无模板对照NTC、1个阴性质控NCS、3个待测样本TS、3个样本加标回收ERC。建议每个样本做3个重复孔。
六、扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.4为例）
1.创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
2.创建2个检测探针，第一个命名为“SV40LTA-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“none”；第二个命名为“E1A-DNA”，选择报告荧光基团为“VIC”，猝灭荧光基团为“none”；再创建1个检测探针，命名为“IC”，选择报告荧光基团为“CY5”，猝灭荧光基团为“none”。参比荧光为“ROX”（参比荧光可根据仪器型号等情况，选择是否需要添加）。
3.在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity”一栏分别赋值FAM通道“180000”，“18000”，“1800”，“180”，“18”，VIC通道“180000”，“18000”，“1800”，“180”，“18”（含义为每孔的DNA浓度，单位为copies/μL），并且在相应的“sample name”一栏中命名为“Std1”，“Std2”，“Std3”，“Std4”，“Std5”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本TS孔、样本加标回收ERC孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并且在相应的“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”，“TS”，“ERC”；之后点击“Run Method”设置扩增程序（程序设置如4.所示），程序设置好后点击“Start Run”，开始仪器运行。
4. 扩增程序设置：设置反应体积30 μL。
|
循环步骤 |
温度(℃) |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
40 |
|
退火/延伸（收集荧光） |
60℃ |
30 sec |
七、qPCR结果分析
1.在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出“Threshold”，有时系统给出的“Threshold”离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节“Threshold”至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。
2. 在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率(Eff%)、斜率(Slope)、截距(Intercept)等。正常的标曲：R²>0.99，扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内，Slope在-3.6~-3.1。
3. 在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS、样本加标回收ERC的检测值，单位为copies/μL，后续可在检测报告中进行单位换算。
4. 结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。
5. 根据待测样本TS和样本加标回收ERC检测结果计算加标回收率，加标回收率要求在50%~150%之间。加标回收率计算公式：回收率(%) = {样本加标测定值(eg.copies/µL)-样本测定值(eg.copies/µL)} x洗脱体积(µL) / DNA加入量理论值(eg.copies) x 100%。
6. 阴性质控NCS的Ct值应大于标曲最低浓度Ct的均值。
7. 无模板对照NTC的检测结果应为Undetermined或Ct值≥35。
HB230217
SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒是用于定量分析检测生物制品中宿主细胞，如HEK293T细胞系中的SV40LTA和E1A残留DNA含量的试剂盒。
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR原理，可专一快速的检测样品中SV40LTA和E1A残留DNA，其最低检测限可以达到101 copies/μL水平。该试剂盒可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
|
|
41310ES50 (50T) |
41310ES60 (100T) |
||
|
41310-A |
SV40LTA&E1A qPCR Mix |
0.75 mL |
1.5 mL |
|
41310-B |
SV40LTA&E1A Primer&Probe Mix |
200 μL |
400 μL |
|
41310-C |
DNA Dilution Buffer |
2×1.8 mL |
4×1.8 mL |
|
41310-D |
SV40LTA&E1A DNA Control (nonliner) |
25 μL |
50 μL |
|
41310-E |
SV40LTA&E1A DNA Control (linear) |
25 μL |
50 μL |
|
41310-F |
IC |
50 μL |
100 μL |
【注】：1. IC：Internal control，内部对照。
运输和保存方法
1. 所有组分均干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。且41310-A和41310-B均需避光保存。
2. 收到货后，请检查共6个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
注意事项
1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
2. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途。
适用机型
包含但不限于以下仪器：
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5，ABI Step OnePlus；
上海宏石医疗科技：SLAN-96S。
使用方法
一、SV40LTA&E1A DNA定量参考品的稀释和标准曲线的制备
已知，线性化和非线性化的SV40LTA&E1A DNA Control浓度都是一样的，且各自内含有的SV40LTA浓度均为1.8×107 copies/μL，E1A浓度均为1.8×107 copies/μL。建议根据实际样品结构特性，选择线性化或非线性化SV40LTA&E1A DNA Control配制标曲。具体操作如下：
1.将SV40LTA&E1A DNA Control和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。
2. 取6支干净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0，Std1，Std2，Std3，Std4，Std5。
3. 在标记为Std0的1.5 mL离心管中加90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL SV40LTA&E1A DNA Control，将SV40LTA&E1A定量参考品稀释10倍，得到Std0（SV40LTA浓度1.8×106 copies/μL，E1A浓度1.8×106 copies/μL），振荡混匀后短时间快速离心10 sec，该浓度可分装置于-20℃短期保存（不超过3个月），使用时避免反复冻融。
4. 在Std1，Std2，Std3，Std4，Std5管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer，再进行梯度稀释，稀释方法如下：
|
稀释管 |
稀释比例 |
终浓度(copies/μL) |
|
|
SV40LTA (liner/nonliner) |
E1A (liner/nonliner) |
||
|
Std1 |
10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×105 |
1.8×105 |
|
Std2 |
10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×104 |
1.8×104 |
|
Std3 |
10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×103 |
1.8×103 |
|
Std4 |
10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×102 |
1.8×102 |
|
Std5 |
10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.8×101 |
1.8×101 |
【注】：
1. 每个浓度做3个复孔，该试剂可测试1.8×101–1.8×105 copies/μL线性范围的SV40LTA和对应的1.8×101–1.8×105 copies/μL线性范围的E1A。
2. 为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-20℃。
3. 已融化未使用的DNA Dilution Buffer可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-20℃。
4. 为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约1 min。
二、样本加标回收质控ERC的制备
根据需要设置ERC中的SV40LTA&E1A DNA标准品浓度（以制备加1.8×103 copies SV40LTA对应1.8×103copies E1A DNA量的ERC为例），具体操作如下：
1. 取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL Std4，混匀，标记为ERC。
2. 加标回收ERC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收ERC纯化液。
三、阴性抽提质控NCS的制备
根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：
1. 取100 μL样本基质溶液（或DNA Dilution Buffer）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。
2. 阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。
四、无模板对照NTC的制备
根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：
1. 无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。
2. 每管或孔中的NTC反应体系为20 μL Mix混合液（即15 μL SV40LTA&E1A qPCR Mix + 4μL SV40LTA&E1A Primer&Probe Mix+ 1μL IC）+ 10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。
五、反应体系
|
组分 |
体积(μL) |
|
SV40LTA&E1A qPCR Mix |
15 |
|
SV40LTA&E1A Primer&Probe Mix |
4 |
|
IC |
1 |
|
DNA template |
10 |
|
总体积 |
30 |
【注】：
1.根据反应孔数计算本次所需Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+4+1) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。
2. 反应孔数=（5个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+待测样本TS个数+待测样本对应加标回收ERC个数）× 3。
NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer
NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS
TS (Test Sample)：待测样本
ERC (Extraction Recovery Control)：待测样本中加入如1.8×103 copies SV40LTA对应1.8×103copies E1A标准品DNA后进行样本前处理，所得纯化液为加标回收ERC
3. 加样完成密封好管子后，请低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。
下图为参考板位：
该示例是对SV40LTA&E1A残留DNA qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：5个浓度梯度SV40LTA&E1A DNA标准曲线、1个无模板对照NTC、1个阴性质控NCS、3个待测样本TS、3个样本加标回收ERC。建议每个样本做3个重复孔。
六、扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.4为例）
1.创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
2.创建2个检测探针，第一个命名为“SV40LTA-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“none”；第二个命名为“E1A-DNA”，选择报告荧光基团为“VIC”，猝灭荧光基团为“none”；再创建1个检测探针，命名为“IC”，选择报告荧光基团为“CY5”，猝灭荧光基团为“none”。参比荧光为“ROX”（参比荧光可根据仪器型号等情况，选择是否需要添加）。
3.在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity”一栏分别赋值FAM通道“180000”，“18000”，“1800”，“180”，“18”，VIC通道“180000”，“18000”，“1800”，“180”，“18”（含义为每孔的DNA浓度，单位为copies/μL），并且在相应的“sample name”一栏中命名为“Std1”，“Std2”，“Std3”，“Std4”，“Std5”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本TS孔、样本加标回收ERC孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并且在相应的“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”，“TS”，“ERC”；之后点击“Run Method”设置扩增程序（程序设置如4.所示），程序设置好后点击“Start Run”，开始仪器运行。
4. 扩增程序设置：设置反应体积30 μL。
|
循环步骤 |
温度(℃) |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
40 |
|
退火/延伸（收集荧光） |
60℃ |
30 sec |
七、qPCR结果分析
1.在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出“Threshold”，有时系统给出的“Threshold”离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节“Threshold”至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。
2. 在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率(Eff%)、斜率(Slope)、截距(Intercept)等。正常的标曲：R²>0.99，扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内，Slope在-3.6~-3.1。
3. 在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS、样本加标回收ERC的检测值，单位为copies/μL，后续可在检测报告中进行单位换算。
4. 结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。
5. 根据待测样本TS和样本加标回收ERC检测结果计算加标回收率，加标回收率要求在50%~150%之间。加标回收率计算公式：回收率(%) = {样本加标测定值(eg.copies/µL)-样本测定值(eg.copies/µL)} x洗脱体积(µL) / DNA加入量理论值(eg.copies) x 100%。
6. 阴性质控NCS的Ct值应大于标曲最低浓度Ct的均值。
7. 无模板对照NTC的检测结果应为Undetermined或Ct值≥35。
HB230217
暂无内容
暂无内容
dld-diagnostika EA213/96说明书
EA213/96
酶免疫测定法
，用于定量测定
血浆、尿液和细胞培养基中的组胺
12×8 测定
单个分离孔；标准范围 0.2 – 25 ng/ml；准备使用的标准和控制
1 小时样品制备（酰化），ELISA 孵育仅 2 小时
过敏学、药理学
过敏，组胺不耐受
< 1 ng/ml 血浆
< 45 µg/天 尿液
见使用说明
0.06 ng/ml 血浆
0.9 ng/ml 尿液
测试的介绍和原理
组胺（β-咪唑乙胺）是一种生物胺，是组氨酸代谢的产物。它是由组氨酸脱羧产生的。组胺广泛分布于哺乳动物组织中。它与肝素结合（以非活性形式），储存在嗜碱性白细胞和肥大细胞的颗粒中，并根据需要主动释放。这些细胞如果被附着在细胞膜上的IgE抗体致敏，在暴露于适当的抗原时会脱颗粒。组胺在过敏反应的初始阶段起主要作用
反应过敏原给药后血浆中组胺的定量具有临床意义。组胺是对外来病原体的免疫反应的一部分，它增加了毛细血管对白细胞和其他蛋白质的通透性，以使它们能够与受影响组织中的外来入侵者接触。组织中组胺的生物效应是由不同表面受体的激活引起的，例如H1、H2和H3。
组胺参与调节肠道的生理功能，并作为神经递质发挥作用。组胺ELISA包含用于定量测定人EDTA血浆、肝素血浆、肝素全血（总组胺）和细胞培养样本中衍生组胺的所有试剂。在样品制备过程中，通过将组胺定量转化为N-酰基司他胺来进行衍生化。竞争性组胺ELISA试剂盒采用微量滴定板格式。组胺与微量滴定板的固相结合。酰化组胺和固相结合组胺竞争固定数量的抗血清结合位点。当系统处于平衡状态时，通过清洗去除游离抗原和游离抗原抗血清。
通过抗Rabbit/过氧化物酶检测与固相组胺结合的抗体。底物TMB/过氧化物酶反应在nm处监测。与固相组胺结合的抗体量与样品的组胺浓度成反比。
RCA(E1A)基因(腺病毒E1A基因)拷贝数检测试剂盒 RCA(E1A) Copynumber Detection Kit
RCA (E1A)基因拷贝数检测试剂盒可用于定量分析检测各种使用腺病毒载体相关的细胞治疗产品和基因治疗产品中可能发生的复制型腺病毒(Replication-competent Adenoviruses, RCA)的潜在风险；还可用于定量分析检测生物制品中宿主细胞，如HEK293和HEK293T细胞来源的风险基因E1A残留DNA的含量。
本试剂盒针对腺病毒上E1A基因序列设计特异性引物，采用探针法荧光定量PCR原理，快速特异的检测复制型腺病毒RCA风险情况以及宿主细胞来源的E1A残留DNA，其定量限可低至4.1 copies/μL水平，且配套有RCA (E1A) DNA Control（DNA定量参考品）。该试剂可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
41321ES50 |
41321ES60 |
|
41321-A |
RCA (E1A) qPCR Mix |
0.75 mL |
1.5 mL |
|
41321-B |
RCA (E1A)Primer&Probe Mix |
200 μL |
400 μL |
|
41321-C |
DNA Dilution Buffer |
1.8 mL×2管 |
1.8 mL×4管 |
|
41321-D |
RCA (E1A) DNA Control (1.64×107 copies/μL) |
25 μL |
50 μL |
|
41321-E |
IC* |
50 μL |
100 μL |
*IC：Internal control，内部对照
储存条件
1. 所有组分均干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。其中，41321-A和41321-B均需避光保存。
2. 收到货后，请检查共5个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 使用本试剂前请仔细阅读说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
4. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。
适用机型
包含但不限于以下仪器：
Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5；
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
上海宏石医疗科技：SLAN-96S。
使用说明
1. RCA (E1A) DNA Control定量参考品的稀释和标准曲线的制备
用试剂盒中提供的DNA Dilution Buffer（DNA稀释液）将RCA (E1A) DNA Control定量参考品进行梯度稀释*，稀释浓度依次为1.64×106 copies/μL、1.64×105 copies/μL、1.64×104 copies/μL、1.64×103 copies/μL、1.64×102 copies/μL、1.64×101 copies/μL。具体操作如下：
1）将试剂盒中的RCA (E1A) DNA Control定量参考品和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。
2）取6支洁净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0、Std1、Std2、Std3、Std4、Std5。
3）在标记为Std0的1.5 mL离心管中加入90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL RCA DNA Control定量参考品，Std0即稀释为1.64×106 copies/μL的浓度，振荡混匀后低速离心10 sec，该浓度可分装置于-25~-15℃短期保存（不超过3个月）**，使用时避免反复冻融。
4）在Std1、Std2、Std3、Std4、Std5离心管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer***，再进行梯度稀释****，具体稀释方法如下：
|
稀释管 |
稀释比例 |
终浓度 |
|
Std1 |
10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×105 copies/μL |
|
Std2 |
10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×104 copies/μL |
|
Std3 |
10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×103 copies/μL |
|
Std4 |
10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×102 copies/μL |
|
Std5 |
10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×101 copies/μL |
表1 标准品梯度稀释
*每个浓度做3个复孔，该试剂可测试1.64×105 copies/μL~1.64×101 copies/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。
**为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-25~-15℃。
***已融化未使用的DNA稀释液可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-25~-15℃。
****为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约15 sec。
2.待测样本TS的制备
根据实验设置待测样本TS，具体操作如下：
取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为TS，进行样本前处理，制备待测样本TS纯化液。
3. 样本加标回收质控ERC的制备
根据需要设置ERC中的RCA (E1A) DNA标准品浓度，以制备加1.64×104copies RCA (E1A) DNA量的ERC为例*，具体操作如下：
1）取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL Std3，混匀，标记为ERC。
2）加标回收ERC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收ERC纯化液。
*一般建议样本加标量设置在样本中目的基因RCA (E1A)实际含量的0.8~1.5倍，如果样品中目的基因含量低于定量限，加标量应设置到定量限之内，以保证检测结果的可靠性。
4. 阴性抽提质控NCS的制备
根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：
1）取100 μL样本基质溶液（或DNA稀释液）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。
2）阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。
5. 无模板对照NTC的制备
根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：
1）无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。
2）每管或孔中NTC样本为20 μL Mix混合液即15 μL RCA (E1A) qPCR Mix + 4 μL RCA Primer&Probe Mix + 1 μL IC，再加10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。
6. 反应体系
|
组分 |
体积(μL) |
|
RCA (E1A) qPCR Mix* |
15 |
|
RCA (E1A) Primer&Probe Mix |
4 |
|
IC |
1 |
|
DNA Template** |
10 |
|
总体积*** |
30 |
表2 标准品反应体系
*根据反应孔数计算本次所需Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+4+1) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。
**反应孔数=（5个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+待测样TS个数+待测样本对应加标回收ERC个数）× 3。
NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer
NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS
TS (Test Sample)：待测样本
ERC (Extraction Recovery Control)：待测样本中加入如10 μL的1.64×103 copies/μL标准品后进行样本前处理，所得纯化液为加标回收ERC
***加样完成密封好管子后，请低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。
下表为参考板位：
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
A |
NTC |
|
待测样本TS1 |
待测样本TS1 |
待测样本TS1 |
|
标准曲线Std1 |
标准曲线Std1 |
标准曲线Std1 |
|
|
|
|
B |
NTC |
|
待测样本TS2 |
待测样本TS2 |
待测样本TS2 |
|
标准曲线Std2 |
标准曲线Std2 |
标准曲线Std2 |
|
|
|
|
C |
NTC |
|
待测样本TS3 |
待测样本TS3 |
待测样本TS3 |
|
标准曲线Std3 |
标准曲线Std3 |
标准曲线Std3 |
|
|
|
|
D |
|
|
|
|
|
|
标准曲线Std4 |
标准曲线Std4 |
标准曲线Std4 |
|
|
|
|
E |
NCS |
|
样本加标ERC1 |
样本加标ERC1 |
样本加标ERC1 |
|
标准曲线Std5 |
标准曲线Std5 |
标准曲线Std5 |
|
|
|
|
F |
NCS |
|
样本加标ERC2 |
样本加标ERC2 |
样本加标ERC2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
G |
NCS |
|
样本加标ERC3 |
样本加标ERC3 |
样本加标ERC3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
表3 上机参考板位
该示例是对RCA (E1A)基因拷贝数的qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：5个浓度梯度的RCA (E1A) DNA标准曲线、1个无模板对照NTC、1个阴性质控NCS、3个待测样本TS、3个加样回收ERC。建议每个样本做3个重复孔。
7. 扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）
1）创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
2）创建2个检测探针，Target 1命名为“RCA (E1A)-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“None”；Target 2命名为“IC”，选择报告荧光基团为“CY5”，猝灭荧光基团为“None”。参比荧光为“ROX”（参比荧光可根据仪器型号等情况，选择是否需要添加）。
3）在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔的“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity”一栏分别赋值为“164000”、“16400”、“1640”、“164”、“16.4”（含义为每孔DNA浓度，单位为copies/μL），并且在相应的“Sample Name”一栏命名为“164000copies/μL”、“16400copies/μL”、“1640copies/μL”、“164copies/μL”、“16.4copies/μL”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本TS孔、样本加标回收ERC孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并且在相应的“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”、“TS”、“ERC”，参比荧光勾选“ROX”，之后点击“Start Run”，开始仪器运行。
4）扩增程序设置：设置两步法扩增程序，反应体积30 μL。
|
循环步骤 |
温度（℃） |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
40 |
|
退火/延伸（收集荧光） |
60℃ |
30 sec |
表4 扩增程序
8. qPCR结果分析
1）在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出“Threshold”，有时系统给出的“Threshold”离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节“Threshold”至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。
2）在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率（Eff%）、斜率（Slope）、截距（Intercept）等。正常的标曲：R²＞0.99，扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内，Slope在-3.6~-3.1。
3）在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS、样本加标回收ERC的检测值，单位为copies/μL。
4）结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。
5）根据待测样本TS和样本加标回收ERC的检测结果计算加标回收率，加标回收率要求在50%～150%之间。加标回收率计算公式：回收率(%) = {样本加标测定值(eg.copies/µL)-样本测定值(eg.copies/µL)}×洗脱体积(eg.µL) / DNA加入量理论值(eg.copies)×100%。
6）阴性质控NCS的Ct值应大于标曲最低浓度Ct的均值。
7）无模板对照NTC的检测结果应为Undetermined或Ct值≥35。
8）待测样本的Ct-IC值应该与NTC的Ct-IC值一致或±1，如果待测样本的Ct-IC值与NTC的Ct-IC值相比明显增大，则表明样本可能存在明显抑制。如果同时测试加标样本，则优先考虑样本加标回收率结果，IC结果作为参考。
Ver.CN20230731
RCA (E1A)基因拷贝数检测试剂盒可用于定量分析检测各种使用腺病毒载体相关的细胞治疗产品和基因治疗产品中可能发生的复制型腺病毒(Replication-competent Adenoviruses, RCA)的潜在风险；还可用于定量分析检测生物制品中宿主细胞，如HEK293和HEK293T细胞来源的风险基因E1A残留DNA的含量。
本试剂盒针对腺病毒上E1A基因序列设计特异性引物，采用探针法荧光定量PCR原理，快速特异的检测复制型腺病毒RCA风险情况以及宿主细胞来源的E1A残留DNA，其定量限可低至4.1 copies/μL水平，且配套有RCA (E1A) DNA Control（DNA定量参考品）。该试剂可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
41321ES50 |
41321ES60 |
|
41321-A |
RCA (E1A) qPCR Mix |
0.75 mL |
1.5 mL |
|
41321-B |
RCA (E1A)Primer&Probe Mix |
200 μL |
400 μL |
|
41321-C |
DNA Dilution Buffer |
1.8 mL×2管 |
1.8 mL×4管 |
|
41321-D |
RCA (E1A) DNA Control (1.64×107 copies/μL) |
25 μL |
50 μL |
|
41321-E |
IC* |
50 μL |
100 μL |
*IC：Internal control，内部对照
储存条件
1. 所有组分均干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。其中，41321-A和41321-B均需避光保存。
2. 收到货后，请检查共5个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 使用本试剂前请仔细阅读说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
4. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。
适用机型
包含但不限于以下仪器：
Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5；
Bio-Rad：CFX96 Optic Module；
上海宏石医疗科技：SLAN-96S。
使用说明
1. RCA (E1A) DNA Control定量参考品的稀释和标准曲线的制备
用试剂盒中提供的DNA Dilution Buffer（DNA稀释液）将RCA (E1A) DNA Control定量参考品进行梯度稀释*，稀释浓度依次为1.64×106 copies/μL、1.64×105 copies/μL、1.64×104 copies/μL、1.64×103 copies/μL、1.64×102 copies/μL、1.64×101 copies/μL。具体操作如下：
1）将试剂盒中的RCA (E1A) DNA Control定量参考品和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。
2）取6支洁净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0、Std1、Std2、Std3、Std4、Std5。
3）在标记为Std0的1.5 mL离心管中加入90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL RCA DNA Control定量参考品，Std0即稀释为1.64×106 copies/μL的浓度，振荡混匀后低速离心10 sec，该浓度可分装置于-25~-15℃短期保存（不超过3个月）**，使用时避免反复冻融。
4）在Std1、Std2、Std3、Std4、Std5离心管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer***，再进行梯度稀释****，具体稀释方法如下：
|
稀释管 |
稀释比例 |
终浓度 |
|
Std1 |
10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×105 copies/μL |
|
Std2 |
10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×104 copies/μL |
|
Std3 |
10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×103 copies/μL |
|
Std4 |
10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×102 copies/μL |
|
Std5 |
10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer |
1.64×101 copies/μL |
表1 标准品梯度稀释
*每个浓度做3个复孔，该试剂可测试1.64×105 copies/μL~1.64×101 copies/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。
**为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-25~-15℃。
***已融化未使用的DNA稀释液可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-25~-15℃。
****为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约15 sec。
2.待测样本TS的制备
根据实验设置待测样本TS，具体操作如下：
取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为TS，进行样本前处理，制备待测样本TS纯化液。
3. 样本加标回收质控ERC的制备
根据需要设置ERC中的RCA (E1A) DNA标准品浓度，以制备加1.64×104copies RCA (E1A) DNA量的ERC为例*，具体操作如下：
1）取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL Std3，混匀，标记为ERC。
2）加标回收ERC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收ERC纯化液。
*一般建议样本加标量设置在样本中目的基因RCA (E1A)实际含量的0.8~1.5倍，如果样品中目的基因含量低于定量限，加标量应设置到定量限之内，以保证检测结果的可靠性。
4. 阴性抽提质控NCS的制备
根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：
1）取100 μL样本基质溶液（或DNA稀释液）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。
2）阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。
5. 无模板对照NTC的制备
根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：
1）无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。
2）每管或孔中NTC样本为20 μL Mix混合液即15 μL RCA (E1A) qPCR Mix + 4 μL RCA Primer&Probe Mix + 1 μL IC，再加10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。
6. 反应体系
|
组分 |
体积(μL) |
|
RCA (E1A) qPCR Mix* |
15 |
|
RCA (E1A) Primer&Probe Mix |
4 |
|
IC |
1 |
|
DNA Template** |
10 |
|
总体积*** |
30 |
表2 标准品反应体系
*根据反应孔数计算本次所需Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+4+1) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。
**反应孔数=（5个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+待测样TS个数+待测样本对应加标回收ERC个数）× 3。
NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer
NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS
TS (Test Sample)：待测样本
ERC (Extraction Recovery Control)：待测样本中加入如10 μL的1.64×103 copies/μL标准品后进行样本前处理，所得纯化液为加标回收ERC
***加样完成密封好管子后，请低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。
下表为参考板位：
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
A |
NTC |
|
待测样本TS1 |
待测样本TS1 |
待测样本TS1 |
|
标准曲线Std1 |
标准曲线Std1 |
标准曲线Std1 |
|
|
|
|
B |
NTC |
|
待测样本TS2 |
待测样本TS2 |
待测样本TS2 |
|
标准曲线Std2 |
标准曲线Std2 |
标准曲线Std2 |
|
|
|
|
C |
NTC |
|
待测样本TS3 |
待测样本TS3 |
待测样本TS3 |
|
标准曲线Std3 |
标准曲线Std3 |
标准曲线Std3 |
|
|
|
|
D |
|
|
|
|
|
|
标准曲线Std4 |
标准曲线Std4 |
标准曲线Std4 |
|
|
|
|
E |
NCS |
|
样本加标ERC1 |
样本加标ERC1 |
样本加标ERC1 |
|
标准曲线Std5 |
标准曲线Std5 |
标准曲线Std5 |
|
|
|
|
F |
NCS |
|
样本加标ERC2 |
样本加标ERC2 |
样本加标ERC2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
G |
NCS |
|
样本加标ERC3 |
样本加标ERC3 |
样本加标ERC3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
表3 上机参考板位
该示例是对RCA (E1A)基因拷贝数的qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：5个浓度梯度的RCA (E1A) DNA标准曲线、1个无模板对照NTC、1个阴性质控NCS、3个待测样本TS、3个加样回收ERC。建议每个样本做3个重复孔。
7. 扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）
1）创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
2）创建2个检测探针，Target 1命名为“RCA (E1A)-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“None”；Target 2命名为“IC”，选择报告荧光基团为“CY5”，猝灭荧光基团为“None”。参比荧光为“ROX”（参比荧光可根据仪器型号等情况，选择是否需要添加）。
3）在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔的“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity”一栏分别赋值为“164000”、“16400”、“1640”、“164”、“16.4”（含义为每孔DNA浓度，单位为copies/μL），并且在相应的“Sample Name”一栏命名为“164000copies/μL”、“16400copies/μL”、“1640copies/μL”、“164copies/μL”、“16.4copies/μL”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本TS孔、样本加标回收ERC孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并且在相应的“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”、“TS”、“ERC”，参比荧光勾选“ROX”，之后点击“Start Run”，开始仪器运行。
4）扩增程序设置：设置两步法扩增程序，反应体积30 μL。
|
循环步骤 |
温度（℃） |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
40 |
|
退火/延伸（收集荧光） |
60℃ |
30 sec |
表4 扩增程序
8. qPCR结果分析
1）在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出“Threshold”，有时系统给出的“Threshold”离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节“Threshold”至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。
2）在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率（Eff%）、斜率（Slope）、截距（Intercept）等。正常的标曲：R²＞0.99，扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内，Slope在-3.6~-3.1。
3）在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS、样本加标回收ERC的检测值，单位为copies/μL。
4）结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。
5）根据待测样本TS和样本加标回收ERC的检测结果计算加标回收率，加标回收率要求在50%～150%之间。加标回收率计算公式：回收率(%) = {样本加标测定值(eg.copies/µL)-样本测定值(eg.copies/µL)}×洗脱体积(eg.µL) / DNA加入量理论值(eg.copies)×100%。
6）阴性质控NCS的Ct值应大于标曲最低浓度Ct的均值。
7）无模板对照NTC的检测结果应为Undetermined或Ct值≥35。
8）待测样本的Ct-IC值应该与NTC的Ct-IC值一致或±1，如果待测样本的Ct-IC值与NTC的Ct-IC值相比明显增大，则表明样本可能存在明显抑制。如果同时测试加标样本，则优先考虑样本加标回收率结果，IC结果作为参考。
Ver.CN20230731
暂无内容
暂无内容
dld-diagnostika EA603/288说明书
EA603/288
酶免疫测定法
，用于定量测定
血浆和尿液中的肾上腺素/去甲肾上腺素/多巴胺
3×96 测定
检测试剂盒提供定量测定血浆和尿液中的肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺的材料；3 x 96 次测定。
使用顺式二醇特异性亲和凝胶提取去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺并酰化为 N-酰基去甲肾上腺素、N-酰基肾上腺素和 N-酰基-多巴胺，然后酶促转化为 N-酰基去甲肾上腺素、N-酰基变肾上腺素和 N-酰基-3-甲氧基酪胺。
竞争性 CAT ELISA 试剂盒使用微量滴定板格式。肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺分别与微量滴定板的固相结合。来自样品的酰化儿茶酚胺和固相结合的儿茶酚胺竞争固定数量的抗血清结合位点。
内分泌学、肿瘤学、精神病学
嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤、神经节神经瘤、退行性心脏病、高血压和低血压、精神分裂症、躁狂抑郁症、压力、倦怠综合征
下面给出的参考范围应仅作为指导。建议每个实验室建立自己的正常值。
肾上腺素 去甲肾上腺素 多巴胺
尿液 < 20 µg/天 < 90 µg/天 < 600 µg/天
血浆 < 100 pg/ml < 600 pg/ml < 100 pg/ml
见使用说明
检测下限通过取零参考吸光度的 2 倍标准偏差并从标准曲线中读取相应值来确定。
肾上腺素 去甲肾上腺素 多巴胺
敏感性（尿液）：0.08 ng/ml 0.24 ng/ml 0.44 ng/ml
敏感性（血浆）：5 pg/ml 16 pg/ml 29 pg/ml
上海金畔生物为Oxford国内一级经销商，Oxford Biomedical研究致力于为生物医学研究人员提供先进，高质量的试剂，可用于研究氧化应激和炎症及其在异体代谢和慢性疾病发展中的作用。
Oxford Biomedical研究公司是开发高质量免疫测定产品的*先进者，特别是竞争性ELISA试剂盒，用于量化生物活性脂质。
品牌：Oxford
货号: EA68
品名：ANDROSTENEDIONE EIA KIT 雄烯二酮EIA试剂盒
雄烯二酮在肾上腺合成。它是女性睾丸激素的主要前体。因此，在女性中，雄烯二酮对雄激素活性水平有显着贡献，而在男性中这一贡献为零。定量雄烯二酮可能表明女性的雄激素活性。
这是用于定量分析生物体液中雄烯二酮水平的ELISA。该试剂盒基于激素缀合物与样品中雄甾烯二酮之间的竞争作用，用于抗体包被平板上有限数量的结合位点。
首先将样品或标准溶液添加到微板中。接下来，加入稀释的激素缀合物并摇动混合物并在室温下孵育1小时。在孵化过程中，结合位点的竞争正在发生。然后清洗板去除所有未结合的材料。结合的激素缀合物通过添加30分钟后产生zui宜颜色的底物来检测。定量测试结果可以通过在450nm或650nm下用酶标仪测量并比较样品孔的吸光度读数与标准物来获得。显色程度与样品或标准品中雄甾烯二酮的含量成反比。例如，样品中雄甾烯二酮的不存在会导致明亮的蓝色，
如果使用尿液作为样本，建议运行我们的
与您的样品一起使用，因为尿肌酸酐水平可能用于正常化其他分析物的排泄速率。
雄烯二酮100.00％
雌酮1.50％
孕烯醇酮0.20％
脱氧皮质酮0.16％
雌酮-3-硫酸盐0.16％
17β-雌二醇0.08％
Hydrocortisone0.08％
泼尼松龙0.08％
雌三醇0.01％
上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商
1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。
2：产品种类齐全，经营超过700多个品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。
3：提供加急服务，货品一般1-2周到货。
4：富有竞争力的价格优势，绝大部分价格有优势。
5：多年积累良好的信誉，大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、国药、fisher等药企。
6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。
7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发，欢迎合作。
dld-diagnostika EA212/96说明书
ADMA Fast ELISA
酶免疫法定量测定血清或血浆中内源性不对称二甲基精氨酸（ADMA）
货号：EA212/96
测试的介绍和原理
血管内皮在血管结构和功能的调节中起着核心作用，主要是由于内皮源性一氧化氮（NO）的形成。NO因其在血管内稳态中的多种调节功能而被称为“内源性抗动脉粥样硬化分子”。
NO由氨基酸前体L-精氨酸的NO合成酶（NOS）形成。NOS活性可被内源性NOS抑制剂不对称二甲基精氨酸（ADMA）下调。
ADMA对NO合成和NO介导的病理生理过程的影响已在许多实验研究中得到描述。此外，在包括高胆固醇血症、高血压、慢性心力衰竭、慢性肾衰竭和其他内科疾病患者在内的临床研究中发现，血浆中ADMA水平升高。
最近的前瞻性和横断面研究表明，ADMA水平升高是未来心血管事件和总死亡率的风险因素。ADMA可能作为一种新的心血管风险标志物具有诊断相关性。
竞争性ADMA-ELISA使用微量滴定板格式。ADMA与微量滴定板的固相结合。样品中的ADMA是酰化的，并与固相结合的ADMA竞争固定数量的兔抗ADMA抗血清结合位点。当系统处于平衡状态时，通过洗涤去除游离抗原和游离抗原抗血清复合物。通过抗兔/过氧化物酶检测与固相ADMA结合的抗体。在450 nm处监测底物TMB/过氧化物酶反应。与固相ADMA结合的抗体量与样品的ADMA浓度成反比。
dld-diagnostik EA102 / 96说明书
货号：EA102 / 96
酶免疫分析
用于定量测定血清中
锌转运蛋白8（ZnT8）的自身抗体
格式
12×8测定
微量滴定条，单次分离
程序
25微升校准器，对照和样品进入井中，
18小时 孵育，3次洗涤
加入ZnT8生物素，孵育1小时
3次洗涤，加入SAPOD，孵育20分钟
3次洗涤，加入底物。孵育20分钟
停止反应+阅读
临床领域
内科，免疫学，内分泌学
疾病
1型糖尿病（DM）
正常值
负<15 U / ml; 阳性> 15 U / ml
特异性
97％; 健康献血者n = 90（DASP 2015）
灵敏度
76％; 1型DM患者n = 50（DASP 2015）
特点
测量特异性ZnT8抗体的可靠方便的方法，所述ZnT8抗体是1型DM中ICA的主要成分，并且可用于诊断和预测1型DM。非同位素组合适用于自动或手动形式的常规临床实验室。
文献：
JM Wenzlau等。
阳离子外排转运蛋白ZnT8（Slc30A8）是人I型糖尿病中的主要自身抗原。
PNAS 2007 104：17040-17045
P. Achenbach等。
锌转运蛋白8和SLc30A8基因型的自身抗体分层1型糖尿病风险。
Diabetologia 2009 52：1881-1888
JM Wenzlau等。
1型糖尿病人受试者中锌转运蛋白8自身抗体发病后下降的动力学。
J Clin Endocrinol Metab 2010 95：4712 – 4719
G. Dunseath等
用于锌转运蛋白的桥接型酶联免疫测定法8成人糖尿病患者的自身抗体测定。
临床。詹。ACTA。2015 447：90 – 95
dld-diagnostika EA214/96说明书
EA214/96
酶免疫测定法
用于快速定量测定血清或血浆中的
内源性对称二甲基精氨酸 (SDMA)
12×8 测定
样品体积：20 µl 患者血清或血浆
1. 酰化：室温下 20 分钟
2. ELISA：室温下 2.5 小时
标准范围：0.2 µmol/l – 3.0 µmol/l (4 – 60.6 µg/dl)
套件对照 2 个对照，即用型
肾内科、内科、心脏病科、重症医学
心血管疾病、高胆固醇血症、高血压、慢性心力衰竭、慢性肾功能衰竭、勃起功能障碍患者以及随后发展为先兆子痫的孕妇
0.3 – 0.7 µmol/l (6 – 15 µg/dl)
交叉反应性：
SDMA 100%；精氨酸 0.01%；高精氨酸 0,04%; NMMA 0.76%；ADMA 0.74%
0.03 µmol/l (0.6 µg/dl)