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工程DNA聚合酶-mypols

发表于由

 

工程DNA聚合酶-mypols

mypols是一家生物技术公司，起源于康斯坦茨大学（University of Konstanz），Andreas Marx教授的研究小组。
自2014年成立以来，我们就提供DNA聚合酶方面的专业知识：我们为您的biotec应用设计，定制，生产和冻干酶。我们专注于开发新一代的DNA聚合酶，用于先进且可靠的应用，例如个性化医学，病原体检测，DNA和RNA诊断，法医等等。

mypols Isotherm2G说明书

Isotherm2G DNA polymerase

Isotherm2G DNA聚合酶

€349,00

Isotherm2G是一种嗜温性DNA聚合酶，非常适合等温扩增。它可以从具有高链置换活性的DNA和RNA模板合成DNA。Isotherm2G已被突变，以提高反转录活性。在55-70°C之间活跃。Isotherm2G DNA聚合酶是等温扩增反应的优先选择，如环介导的等温扩增（LAMP），链置换扩增（SDA），滚环扩增（RCA），分枝扩增（RAM），基因组扩增等。

 

Isotherm2G DNA聚合酶以8 U / µl含甘油溶液的形式提供。它与足够量的10x反应缓冲液一起使用，该缓冲液已针对等温扩增进行了优化。缓冲液中含3.25 mM镁离子，终浓度为1x。镁，引物和dNTPs的宜浓度在很大程度上取决于所应用的应用，应该对其进行优化。

该产品以冰袋包装出售。建议在到达-20°C时存放产品。

 

 

mypols Volcano2G说明书

 

Volcano2G DNA聚合酶

€95,00

火山2G DNA聚合酶

Volcano 2G是原始Volcano DNA聚合酶的高级版本，具有进一步改善的逆转录活性。该酶是一种经过工程改造的，极耐热的逆转录酶和组合的DNA聚合酶，可通过定向的人工进化获得。Volcano2G DNA聚合酶可直接从RNA模板（无需等温逆转录步骤）直接促进“零步骤” RT-PCR，因为逆转录与循环PCR延伸步骤中的DNA扩增同时进行。这也允许在高温下进行逆转录反应，从而将在高温下融化的RNA中强大的二级结构所遇到的问题降至低。

 

Volcano2G DNA聚合酶包含热启动剂配制的，具有逆转录酶活性的工程稳定的热稳定DNA聚合酶和稳健的Taq DNA聚合酶的酶混合物。基于适体的热启动剂设计用于在低温下（例如，在移取反应混合物时）阻断非特异性DNA聚合酶活性，但会在高于50-55°C的温度下分解，从而释放出现已*活化的DNA聚合酶。

Volcano2G DNA聚酶作为5 U / µl甘油库存与适当的5x Volcano反应缓冲液一起运输，该缓冲液针对60-300 bp的扩增子进行了优化。

Volcano2G逆转录酶可以可靠地从≥1 ng的总RNA输入中检测RNA靶标。它不需要Mn 2+即可  获得宜活性。但是，可以通过向反应中添加Mn 2+来进一步优化某些检测方法（建议范围是0.5-1 mM，未提供Mn 2+）。

 

该产品以凉爽包装出售。建议在到达-20°C时存放产品。

 

RT-PCR活性：已对 Volcano3G RT-PCR Mix进行了成功的RT-PCR性能测试。在实时PCR循环仪中从人总RNA提取物中扩增出151 bp片段（HPRT1 mRNA），并可视化为单个扩增产物。

DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物监控Volcano3G DNA聚合酶活性并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
酶浓度由蛋白质特异性染色确定。

 

 

带有“ 0步”方案的便捷RT-PCR

零步协议节省时间

跳过逆转录步骤。不需要等温逆转录步骤。 

Volcano2G是一种具有PCR活性的逆转录酶，非常稳定，在95°C下的半衰期> 40分钟。

灵敏的RNA检测

当添加实时PCR染料时，Volcano2G DNA聚合酶也可用于实时PCR。Volcano2G具有Taq DNA聚合酶样核酸酶结构域，使其也适用于基于水解探针的分析。如此处所示，通过使用基于探针的qPCR分析和零步RT-PCR方案，使用总RNA的10倍稀释系列检测了NONO mRNA。

来自细胞的直接RT-PCR

对于细胞RNA的可靠RT-PCR，样品制备步骤*。然而，这些步骤费力，费时并且需要额外的消耗品。使用我们的VolcanoCell2G RT-PCR 2x预混液，您可以用快速便捷的“零步长”方案代替费力的RNA制备。

节省时间和金钱

VolcanoCell2G RT-PCR 2x预混液具有简化的“零步骤”工作流程，使您可以规避费力的纯化和提取步骤，从而节省了时间和金钱。

出色的灵敏度

VolcanoCell2G RT-PCR 2x实现了低至单个细胞的检测灵敏度。在此示例中，按照VolcanoCell2G协议从单个隆德人中脑（LUHMES）细胞中检测到GAPDH mRNA。

 

Isotherm2G DNA polymerase

Isotherm2G DNA聚合酶

（目前缺货直至另行通知，请提出要求）

 

是一种嗜温DNA聚合酶，它从DNA和RNA模板合成DNA，具有高链置换活性。Isotherm2G是原始Isotherm DNA聚合酶的下一代，具有进一步改善的逆转录活性。宜温度（55-70°C）使Isotherm2G DNA聚合酶成为等温扩增反应的优先选择，如环介导等温扩增（LAMP），链置换扩增（SDA），滚环扩增（RCA），衍生物扩增（RAM），基因组扩增等。

＃8801S

Isotherm2G DNA聚合酶

1600 U，8U /μl，200μl

＃8801M

Isotherm2G DNA聚合酶

8000 U，8U /μl，1000μl

 

等温扩增  

 

就是这么简单：只需在59°C温育30分钟，就可以使用LAMP方法扩增DNA目标（红色曲线）和RNA目标（蓝色曲线）。Isotherm可用于RCA，SDA，RAM，LAMP和许多其他放大技术。

 

 

 

 

 

Isotherm DNA聚合酶也具有非常好的逆转录活性。扩增后，可以进行熔解曲线测量以确认特定产物的产生。因此可以进行DNA和RNA检测，从而实现简单的反应设置，快速的反应时间和闭管系统。

 

 

 

应用

  • 快速，等温检测和鉴定DNA和RNA靶标
  • 逆转录
  • 实时等温检测
  • LAMP，SDA，RCA，RAMP
  • 入门扩展

反应设置

零件

卷

终浓度

底漆混合物（各种浓度）

各种μl

各个

dNTPs（10 mM）

1μl

400μM

10 x Isotherm2G反应缓冲液

2.5μl

1X

等温线DNA聚合酶8 U /μl

1μl

8 U /反应

模板/样品提取物

各种μl

 各个

不含核酸酶的水

总反应体积高达25μl

 

将所有组件保存在冰上。
在使用前仔细旋转并混合所有溶液。 

引物混合物和浓度很大程度上取决于所采用的等温反应方法。

Isotherm2G和Isotherm2G反应缓冲液不含荧光染料。对于实时测量，请添加适量的合适染料。

详细的产品说明

 

内容

Isotherm DNA聚合酶以含有甘油的8U /μl溶液形式提供。它配有针对等温扩增优化的10倍反应缓冲液。

 

质量控制

DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物监测等温线活性并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
通过蛋白质特异性染色确定酶浓度。有关批次特定浓度，请通过info@mypols.de查询更多信息。

 

法律信息

某些等温扩增方法可能受到保护。购买此产品不会向购买者传达使用所购产品进行任何商业目的的任何等温扩增方法的合法权利。

 

存储

本产品采用冷藏包装。请在抵达-20°C时存放产品。

 

货号

品名

规格

品牌

8100S

Volcano2G DNA聚合酶

 250 U，5U /μl，50μl

mypols

8100M

Volcano2G DNA聚合酶

1000U，5U /μl，200μl

mypols

6101S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6101M

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix

500 reactions á 25 µl

mypols

5 x 1.25 ml

mypols

6201S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6301S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6401S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

7101S

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer)

100 reactions à 25 µl, 1 x 1.25 ml

mypols

7101M 

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer)

500 reactions à 25 µl, 5 x 1.25 ml

mypols

8801S

Isotherm2G DNA polymerase

1600 U, 8U/µl, 200 µl

mypols

8801M

Isotherm2G DNA polymerase

8000 U, 8U/µl, 1000 µl

mypols

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

如何在RT-PCR过程中避免DNA污染?

发表于由

如何在RT-PCR过程中避免DNA污染？ 用arcticzymes公司Heat＆Run gDNA去除试剂盒

 

PCR主混合物的去污

PCR是在研究和诊断中检测DNA存在的灵敏方法。PCR中使用的聚合酶经常被大肠杆菌  DNA 污染  。当靶向少量细菌DNA时，污染的DNA可能会导致灵敏度降低和假阳性。其他污染源可能是dNTP，缓冲液成分和引物/探针，以及在处理过程中引入的DNA。细菌的检测和分型可以通过使用针对保守区域（即16S或23S rDNA基因）的宽范围引物进行。该方法对细菌DNA污染非常敏感，在大多数预混液和聚合酶中都可以发现细菌DNA的痕迹。当使用qPCR检测或定量少量细菌DNA时，会污染  大肠杆菌 DNA可能导致假阳性结果。

 

Master mix AMaster mix BMaster mix CMaster mix DMaster mix EMaster mix F5101520253035404501,0002,0003,0004,0005,0006,000CyclesFluorescence (dR)

周期数 预混料A 预混料B 预混料C 预混料D 预混料E 预混料F
1个 445.82 188.53 262.32 24.54 119.24 19.88
2 280.95 98.89 146.05 16.96 74.5 17.48
3 138.57 38.05 67.71 9.91 41.73 13.14
4 45.34 8.98 39.43 6.54 24.71 8.17
5 18.42 5.01 30.5 4.27 13.97 3.47
6 17.27 10.14 3.86 2.53 3.71 1.59
7 18.37 19.65 -13.69 1.3 -0.5 1.9
8 6.23 8.45 -14.54 -3.12 1.07 1.33
9 16.91 -10.83 1.59 -5.19 0.84 -1.22
10 27.13 -3.87 13.88 -6 -1.59 -5.54
11 15.27 2.74 17.72 -6.45 -4.11 -7.13
12 -9.27 11.16 7.09 -7.32 -4.19 -6.29
13 -23.72 15.34 -11.46 -7.05 -4.52 -6.29
14 -10.8 12.94 -18.65 -6.1 -4.63 -5.85
15 -11.42 -3.06 -18.21 -7.25 -4.49 -5.47
16 -9.14 -2.26 -14.4 -6.37 -6.29 -5.86
17 -11.23 2.29 -4.63 -6.29 -8.56 -7.84
18岁 -22.43 -2.06 11.46 -7.32 -10.91 -9.5
19 -37.18 2.12 1.48 -7.2 -12.59 -7.35
20 -42.19 3.56 -7.84 -6.83 -12.98 -7.59
21 -25.13 13.75 -6.62 -6.92 -12.16 -10.05
22 -10.7 8.27 -4.96 -6.11 -9.45 -9.58
23 -9.07 -1.34 12.42 0.75 -5.03 -9.3
24 -6.71 16.25 7.88 14.34 -2.95 -8.86
25 3.73 26.74 -12.22 38.92 -0.3 -4.95
26 21.95 16.12 -1.17 92.59 11.75 4.8
27 44.51 10.79 0.93 197.62 38.32 25.43
28 65.1 2.72 15.04 391.52 90.41 64.57
29 120.95 5.33 39.24 740.71 190.44 139.16
30 241.81 35.16 84.47 1,314.08 373.74 282.38
31 475.25 79.48 221.05 2,117.01 692.8 548.3
32 848.63 172.21 438.41 3,012.37 1,210.32 1,003.21
33 1,381.49 309.17 777.19 3,775.06 1,900.63 1,694.92
34 2,049.27 480.45 1,272.03 4,315.72 2,748.62 2,537.76
35 2,738.02 719.59 1,815.39 4,682.25 3,707.58 3,344.92
36 3,348.5 986.26 2,392.68 4,928.08 4,495.48 3,977.28
37 3,871.24 1,266.95 2,996.86 5,092.26 4,951.86 4,429.49
38 4,310.55 1,593.89 3,511.08 5,205.38 5,185.25 4,767.34
39 4,643.89 1,889.91 3,973.82 5,294.18 5,319.67 5,021.63
40 4,918.33 2,125.13 4,400.73 5,362.6 5,409.15 5,215.4
41 5,130.29 2,332.17 4,715.53 5,408.24 5,468.26 5,367.39
42 5,273.35 2,475.56 4,963.13 5,441.55 5,511.18 5,483.24
43 5,407.78 2,588.48 5,143.08 5,469.56 5,548.48 5,569.71
44 5,539.07 2,710.59 5,254.89 5,484.62 5,577.68 5,636.28
45 5,662.91 2,832.27 5,377 5,495.64 5,602.42 5,699.93

图1：通过使用水代替模板（NTC）并按照制造商的说明对来自不同供应商的2x探针预混合物中大肠杆菌23S DNA的存在进行了定量。该图显示了来自几个单独实验的图。在所有测试的预混物中都发现了痕量的大肠杆菌23S DNA，Cq值通常在30-35之间。

为了解决这个问题，我们开发了一种简单而又准确的  PCR去污试剂盒  ，该试剂盒可去除主混合物中的污染DNA，而不会降低PCR灵敏度

 

 

 

 

 

PCR Decontamination Kit

PCR去污试剂盒

PCR去污试剂盒可去除PCR预混液中的污染DNA，而不会降低PCR灵敏度。

  • dsDNase的双链特异特性允许使用引物和探针进行去污染。
  • 高效用于终点PCR和基于探针的qPCR。
  • 污染的细菌DNA降至检测极限以下的水平。
  • 快速简便的协议。

在不降低灵敏度的情况下对母料进行去污一直是一个挑战。尤其是当靶向少量DNA时，污染DNA是一个主要问题。由去污方案在qPCR分析中造成的任何灵敏度损失都是不可接受的。

 

协议

  1. 将引物和探针与主要混合物和试剂盒内容混合
  2. 在37°C下孵育20分钟
  3. 在60°C下失活20分钟
  4. 添加模板并运行qPCR

在存在DTT的情况下，dsDNase在60°C时不可逆地失活，从而确保失活后添加的任何模板都对消化没有影响。

用于从20 µl反应中去除污染性DNA的方案，但可以通过调整试剂盒内容物的体积来按比例放大或缩小。

图1： PCR去污试剂盒方案

 

500 pg untreated50 pg untreated5 pg untreated500 fg untreated50 fg untreatedNTC untreated500 pg decontaminated50 pg decontaminated5 pg decontaminated500 fg decontaminated50 fg decontaminatedNTC decontaminated5101520253035404502,5005,0007,50010,00012,50015,000Cycles

周期数 500 pg未经处理 50 pg未经处理 5 pg未经处理 500 fg未经处理 50 fg未经处理 未经处理的NTC 500 pg消毒 50 pg消毒 5 pg消毒 500 fg消毒 50 fg消毒 NTC净化
1个 -217 -38 -13 -63 -12 -7 -133 13 -10 13 17 21
2 -107 -22 2 -36 -9 -22 -55 14 -11 -3 8 -10
3 -69 -10 -1 -23 -20 -26 -27 10 -1 -12 12 -39
4 -46 -1 2 -12 -20 -14 -13   6 -6 8 -44
5 -29 7 4 3 -7 -4 -4 -2 5 5 4 -63
6 -11 9 6 8 11 1个 5 1个 -6 9 4 -63
7 6 5 11   12 9 15 2 -4 11 -7 -44
8 12 -3 12 6 -7 13 6 8 11 12 1个 -29
9 3 -17 3 14 -4 12 -13 9 14 -5 8 -12
10 -15 -16 -7 14 6 6 -8 -5 9 -4 1个 5
11 -22 2 -9 5 2 4 -1 -9 9 7 6 20
12 -21 3 -5 -2 -3 13 -10 3 8 14 5 14
13 -2 -11 -4 2 2 2 -5 -2 -3 14 -2 11
14 34 -4 -5 -13 12 1个 16 -12 -7   -9 22
15 89   -3 -16 8 7 60 -3 2 -9 -5 19
16 204 1个 -20 -9 -1 3 162 2 -15 -22 -10 25
17 416 20 -31 -9 -10 4 371 11 -33 -24 -17 35
18岁 764 70 -16 -12 -5 -1 746 57 -26 -14 -17 29
19 1,297 173 1个 -22 -7 -6 1,310 154 -16 -1 -22 21
20 2,015 347 15 -21 -25 -10 2,049 344 8 2 -15 13
21 2,886 644 46 -20 -27 -16 2,915 657 51 -8 -1 5
22 3,865 1,115 122 -7 -27 -28 3,879 1,122 127 -7 5 8
23 4,879 1,774 261 10 -33 -32 4,908 1,764 270 4 -2 20
24 5,919 2,597 508 35 -24 -21 5,927 2,576 527 34 -20 26
25 6,951 3,525 921 101 -2 -22 6,892 3,514 960 94 -22 25
26 7,930 4,526 1,520 221 14 -13 7,855 4,505 1,587 209 3 10
27 8,818 5,526 2,301 426 37 -5 8,771 5,495 2,406 434 36 8
28 9,628 6,511 3,242 778 99 2 9,570 6,473 3,357 808 93 11
29 10,380 7,472 4,278 1,337 192 9 10,291 7,422 4,384 1,375 199 5
30 11,037 8,371 5,346 2,101 382 43 10,940 8,306 5,445 2,146 393 6
31 11,646 9,210 6,400 3,047 721 101 11,524 9,096 6,489 3,097 727 4
32 12,184 9,985 7,417 4,132 1,229 182 12,042 9,814 7,496 4,149 1,261 -15
33 12,627 10,694 8,402 5,274 1,980 344 12,482 10,482 8,465 5,254 2,018 -24
34 13,001 11,317 9,291 6,409 2,945 586 12,836 11,075 9,387 6,393 2,961 -6
35 13,334 11,858 10,101 7,498 4,071 944 13,113 11,616 10,200 7,492 4,066 3
36 13,631 12,329 10,847 8,566 5,276 1,444 13,356 12,072 10,902 8,520 5,231 6
37 13,878 12,740 11,522 9,594 6,482 2,088 13,547 12,442 11,541 9,482 6,415 9
38 14,080 13,064 12,091 10,509 7,694 2,871 13,718 12,785 12,097 10,364 7,582 -11
39 14,235 13,341 12,562 11,364 8,880 3,793 13,876 13,064 12,576 11,178 8,696 -27
40 14,347 13,580 12,977 12,111 9,965 4,817 13,979 13,267 12,988 11,905 9,747 -14
41 14,443 13,785 13,329 12,773 10,940 5,848 14,068 13,462 13,290 12,533 10,676 -16
42 14,511 13,954 13,617 13,355 11,827 6,871 14,159 13,620 13,547 13,053 11,496 -35
43 14,542 14,068 13,844 13,839 12,602 7,895 14,224 13,739 13,803 13,469 12,202 -22
44 14,597 14,195 14,033 14,276 13,309 8,871 14,280 13,851 14,022 13,814 12,798  
45 14,664 14,332 14,217 14,689 14,022 9,824 14,347 13,952 14,234 14,147 13,385 13

 

图2：未经处理和去污的qPCR 2x预混液用于以5步分析10倍的大肠杆菌gDNA连续稀释液。包括NTC样品，连续稀释的所有图均显示三个重复的平均值。

使用PCR Decontamination Kit进行处理不会降低PCR的敏感性。即使稀释DNA，Cq水平也没有明显改变（图2）。

套件内容

  • DTT（灭活援助）
  • dsDNase（100个反应）

储存条件：储存于-20˚C。
样品材料：该试剂盒可用于减少普通PCR和基于探针的qPCR混合物中的污染DNA。对于某些基于SYBR的qPCR混合物也很有效。
质量控制：已  对试剂盒中是否存在RNase进行了测试。

 

双链特异性DNase

双链特异性DNase（dsDNase）是*的双链特异性核酸内切酶。由于它们不消化ssDNA或RNA，因此可用于在其他核酸存在下特异性去除dsDNA。该酶是热不稳定的，因此使其成为必须使DNase失活的应用的理想选择。该酶有两种版本，dsDNase和HL-dsDNase。

不含甘油和Triton FREE的版本

dsDNase和HL-dsDNase现在可用

 

物产

对双链DNA的
特异性已对双链和单链DNA和RNA寡核苷酸测试了核酸特异性。

使用具有5'处FAM和3'（Eurogentec）的FAM的15-mer寡核苷酸测量了dsDNase对底物的特异性。荧光与酶活性成正比。

测定条件：25 mM Tris pH 7.5、5 mM MgCl 2和2μM寡核苷酸。

相对活动

基质 相对活动
双链DNA 100％
单链DNA <0.03％
双链RNA <0.01％
单链RNA <0.01％

从上面的数据可以得出结论，dsDNase是双链特异性的。

dsDNase

热失活
dsDNase可以通过在65°C下15分钟或60°C下20分钟的热处理进行热灭活。该酶需要1 mM DTT和pH≥8才能*灭活。

技术指标

  • 单位定义
    一个单位定义为在100 mM醋酸钠pH 5.0和5 mM MgCl2中使用50 µg / ml高分子量DNA在260 nm处的吸光度每分钟增加0.001。
  • 比
    活Ca。400 000 Kunitz单位/毫克
  • 活性
    dsDNase在20-40°C的温度范围内具有很高的活性。它至少需要2.5 mM Mg的活性，并具有7.5的pH。
  • 储存缓冲液
    20 mM Tris-HCl pH 7.5、2 mM MgCl2、10 mM NaCl，0.01％（v / v）Triton X-100、50％（v / v）甘油。
  • 纯度
    dsDNase被纯化至明显的同质性。
  • 储存
    -20°C时，小储存期限为3年。在4°C下可以保存至少6个月。该酶还耐受多个冻融循环。

HL-dsDNase

热失活
HL-dsDNase可通过在58°C下5分钟的热处理进行热失活。该酶需要1 mM DTT和pH≥8才能*灭活。

技术指标

  • 单位定义
    一个单位定义为在100 mM乙酸钠pH 5.0和5 mM MgCl2中使用50μg/ ml高分子量DNA在260 nm处的吸光度每分钟增加0.001。
  • 比
    活Ca。200 000 Kunitz单位/毫克
  • 活性
    HL-dsDNase在20-40°C的温度范围内具有很高的活性。它至少需要2.5 mM Mg的活性，并具有7.5的pH。
  • 储存缓冲液
    20 mM Tris-HCl pH 7.5、2 mM MgCl2、10 mM NaCl，0.01％（v / v）Triton X-100、50％（v / v）甘油。
  • 纯度
    HL-dsDNase被纯化至明显的同质性。
  • 储存
    -20°C时，小储存期限为2年。该酶还耐受多个冻融循环。

ArcticZymes产品目录

品名 货号 Cons. U/µl ml units
Cod UNG 1-100 70500-201 1 0.1 100
Cod UNG 1-1000 70500-202 1 1 1,000
Cod UNG 1-10k 70500-110 1 1 10,000
Cod UNG 1-50k 70500-151 1 50 50,000
Cod UNG 50-50k 70500-150 50 1 50,000
Cod UNG Glycerol-free 5kU 70510-105 40-60 0.1 5,000
Cod UNG Glycerol-free 50kU 70510-150 40-60 1 50,000
Cod UNG Triton FREE 1-100 70501-201 1 0.1 100
Cod UNG Triton FREE 1-1000 70501-202 1 1 1,000
Cod UNG Triton FREE 50-50k 70501-150 50 1 50,000
Cod UNG Glycerol-free Triton FREE 5kU 70511-105 ~50 0.1 5,000
Cod UNG Glycerol-free Triton FREE 50kU 70511-150 ~50 1 50,000
HL-dsDNase 2-250 70800-201 2 0.125 250
HL-dsDNase 2-1000 70800-202 2 0.5 1,000
HL-dsDNase 5-2500 70800-203 5 0.5 2,500
HL-dsDNase 50-50k 70800-150 50 1 50,000
HL-dsDNase 2-100k 70800-110 2 50 100,000
HL-dsDNase Glycerol-free 5kU 70810-50 80-140 0.05 5,000
HL-dsDNase Triton FREE 2-250 70801-201 2 0.125 250
HL-dsDNase Triton FREE 2-1000 70801-202 2 0.5 1,000
HL-dsDNase Triton FREE 5-2500 70801-203 5 0.5 2,500
HL-dsDNase Glycerol-free Triton FREE 5 kU 70811-50 > 50 N/A 5,000
dsDNase 2-250 70600-201 2 0.125 250
dsDNase 2-1000 70600-202 2 0.5 1,000
dsDNase 5-2500 70600-203 5 0.5 2,500
dsDNase 50-50k 70600-150 50 1 50,000
dsDNase 2-100k 70600-110 2 50 100,000
dsDNase Glycerol-free 5kU 70610-50 80-140 0.05 5,000
dsDNase Glycerol-free Triton FREE 5kU 70611-50 >50 N/A 5,000
SAN 5k 70900-201 25 0.2 5,000
SAN 25k 70900-202 25 1 25,000
SAN 500k 70900-150 >250 2 500,000
HL-SAN 25k 70910-202 25 1 25,000
HL-SAN 500k 70910-150 25 2 500,000
SAN HQ-25 kU 70920-202 25   25,000
SAN HQ>250-500kU 70920-150 >250   500,000
SAN HQ>250-5MU 70920-160 >250   5,000,000
SAN HQ Triton FREE 25 kU 70921-202 25   25,000
SAN HQ Triton FREE >250-500kU 70921-150 >250   500,000
SAN HQ Triton FREE >250-5MU 70921-160 >250   5,000,000
SAN HQ ELISA 70930-001      
M-SAN HQ-25 kU 70950-202 25   25,000
M-SAN HQ>250-500kU 70950-150 >250   500,000
M-SAN HQ>250-5MU 70950-160 >250   5,000,000
SAP 1-1000 70700-201 1 1 1,000
SAP 1-5000 70700-202 1 5 5,000
SAP 1-200k 70700-101 1 200 200,000
SAP 50-10M 70700-110 >20 500 10,000,000
SAP Glycerol-free 70710-201 20 0.25 5,000
IsoPol-5-200 71500-201 5 0.04 200
IsoPol SD+ 5-200 71501-201 5 0.04 200
IsoPol BST+ 5-200 71502-201 5 0.04 200
HL-ExoI 20-2500 70100-201 20 0.125 2,500
HL-ExoI 20-50k 70100-150 20 2.5 50,000
Heat&Run gDNA removal Kit 80200-50 50 rxn    
Heat&Run gDNA removal Kit 80200-250 250 rx    
PCR Decontamination Kit 80400-100 100 rxn   1
PCR Decontamination Kit 80400-500 500 rxn   1
A'SAP 80350-100 100 rxn   1
A'SAP 80350-500 500 rxn   1
A'SAP 80350-2000 2000 rxn   1
EcA'SAP 1-Tube 80310-100 100 rxn 0.2 1
ArcticZymes Proteinase 71600-201 0.2   50
ArcticZymes Proteinase 71600-110 0.2   1,000
T4 DNA Ligase 71800-202 5000 0.05 250,000

 

血浆/血清游离DNA提取试剂盒MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit

发表于由

血浆/血清游离DNA提取试剂盒MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit  适用于从0.3-4 mL的血浆、血清样本中的提取游离DNA。本产品采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的纯化回收游离DNA（每毫升血浆通常为1-100 ng）。提取的核酸产量高，质量稳定可靠，最大限度的去除抑制物，适用于各种下游应用实验，如建库、二代测序、qPCR等。

 

组分信息

类别

编号

组分名称

18382ES20

18382ES50

18382ES70

Part I

18382-A

蛋白酶K溶液（20 mg/mL）

1 mL/支×1

1.25 mL/支×2

10 mL/瓶×1

18382-B

磁珠悬浮液

600 μL/支×1

750 μL/支×2

6 mL/瓶×1

Part II

18382–C

裂解液

1 mL/支×1

2.5 mL/瓶×1

10 mL/瓶×1

18382–D

结合液

25 mL/瓶×1

65 mL/瓶×1

125 mL/瓶×2

18382–E

洗涤液A

32 mL/瓶×1

80 mL/瓶×1

320 mL/瓶×1

18382-F

洗涤液B

8.8 mL/瓶×1

22 mL/瓶×1

88 mL/瓶×1

18382–G

洗脱液

2 mL/瓶×1

5 mL/瓶×1

15 mL/瓶×1

 

储存条件

1）Part I组分室温运输，4 ℃保存，有效期12个月。

2）Part II组分室温运输，室温保存，有效期12个月。

 

实验前准备

1. 自备设备和试剂：磁性分离架（适用于1.5 mL和15 mL离心管），水浴锅或金属浴，涡旋振荡器，旋转混匀仪，1.5 mL和15 mL离心管，无水乙醇等。

2. 首次使用前，在洗涤液B瓶中加入标签注明体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的乙醇含量。

 

使用说明

A:手动法提取操作步骤

步骤一：样本前处理

1.针对不同样本体积请按下表体积添加各组分：

试剂

血浆/血清体积

300 μL

1 mL

2 mL

4 mL

蛋白酶K

15 μL

50 μL

100 μL

200 μL

血浆样本

300 μL

1 mL

2 mL

4 mL

样本裂解液

15 μL

50 μL

100 μL

200 μL

结合液

375 μL

1.25 mL

2.5 mL

5 mL

磁珠悬浮液

9 μL

30 μL

60 μL

120 μL

洗脱体积

10～20ul

30 μL

50 μL

50～80μL

 

2.根据样本体积向离心管中加入蛋白酶K和样本，颠倒混匀后加入裂解液，短暂涡旋混匀后，60 ℃孵育20 min，期间需上下颠倒混匀2-3次。

 

步骤二：游离DNA提取

以15 mL离心管操作为例，从血浆样本中提取游离DNA。

  1. 向冷却至室温的离心管中加入结合液和磁珠，短暂涡旋混匀，室温旋转孵育10 min。
  2. 转移至磁力架中，静置约5 min观察到磁珠完全吸附在管壁上，小心吸除上清液。
  3. 向上述离心管中加入800 μL洗涤液A，涡旋振荡20 s使磁珠彻底分散，将磁珠和洗涤液A全部转移至洁净的1.5 mL离心管中，并保留该15 mL离心管以供步骤4润洗。
  4. 将1.5 mL离心管放入磁力架中，静置约1 min，待溶液澄清后，吸取上清液转移至步骤3保留15 mL离心管中进行润洗，并将其全部转移至包含磁珠的1.5 mL离心管中，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
  5. 向1.5 mL离心管中加入800 μL洗涤液A，涡旋振荡20 s，瞬时离心后将离心管转移至磁力架，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
  6. 向离心管中加入1 mL洗涤液B，涡旋振荡1 min。
  7. 瞬时离心后将离心管转移至磁力架，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
  8. 重复步骤6-7一次。
  9. 短暂离心后将离心管放置在磁力架上，小心吸除残余液体。
  10. 开盖室温放置2～5 min使乙醇充分挥发，观察到磁珠表面无液体或刚出现龟裂即可。

（注：磁珠不能过度干燥，过度干燥会导致洗脱效率下降。若室温过低可适当延长晾干时间。）

  1. 向晾干后的离心管中加入洗脱液，涡旋振荡5 min，短暂离心后将离心管置于磁力架上直至磁珠彻底吸附，收集洗脱液（注意不要吸到磁珠）。
  2. 核酸溶液短期保存于-20 ℃，长期保存需放置于-80 ℃。

该产品可搭配自动化提取仪器，如杭州奥盛Auto-Pure32A 自动化核酸提取仪

 

注意事项

1. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其是裂解液，结合液组分），如有浑浊可40 ℃加热或超声处理使溶液澄清。

2. 磁珠应冷藏保存，避免冻存或反复冻融，以免影响使用效果。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

4. 样本保存时间过长、血浆含有基因组核酸或者样本在室温放置过久均会导致目标核酸得率降低。为了保证提取得率，样本可以是新鲜、冷冻状态下未经冻融或者在cf DNA保存管中有效保存的血浆和血清。血浆的分离与储存建议见附录1。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途。

 

Ver. CN20230705

血浆/血清游离DNA提取试剂盒MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit

暂无内容

血浆/血清游离DNA提取试剂盒MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit

暂无内容

MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit  适用于从0.3-4 mL的血浆、血清样本中的提取游离DNA。本产品采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的纯化回收游离DNA（每毫升血浆通常为1-100 ng）。提取的核酸产量高，质量稳定可靠，最大限度的去除抑制物，适用于各种下游应用实验，如建库、二代测序、qPCR等。

 

组分信息

类别

编号

组分名称

18382ES20

18382ES50

18382ES70

Part I

18382-A

蛋白酶K溶液（20 mg/mL）

1 mL/支×1

1.25 mL/支×2

10 mL/瓶×1

18382-B

磁珠悬浮液

600 μL/支×1

750 μL/支×2

6 mL/瓶×1

Part II

18382–C

裂解液

1 mL/支×1

2.5 mL/瓶×1

10 mL/瓶×1

18382–D

结合液

25 mL/瓶×1

65 mL/瓶×1

125 mL/瓶×2

18382–E

洗涤液A

32 mL/瓶×1

80 mL/瓶×1

320 mL/瓶×1

18382-F

洗涤液B

8.8 mL/瓶×1

22 mL/瓶×1

88 mL/瓶×1

18382–G

洗脱液

2 mL/瓶×1

5 mL/瓶×1

15 mL/瓶×1

 

储存条件

1）Part I组分室温运输，4 ℃保存，有效期12个月。

2）Part II组分室温运输，室温保存，有效期12个月。

 

实验前准备

1. 自备设备和试剂：磁性分离架（适用于1.5 mL和15 mL离心管），水浴锅或金属浴，涡旋振荡器，旋转混匀仪，1.5 mL和15 mL离心管，无水乙醇等。

2. 首次使用前，在洗涤液B瓶中加入标签注明体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的乙醇含量。

 

使用说明

A:手动法提取操作步骤

步骤一：样本前处理

1.针对不同样本体积请按下表体积添加各组分：

试剂

血浆/血清体积

300 μL

1 mL

2 mL

4 mL

蛋白酶K

15 μL

50 μL

100 μL

200 μL

血浆样本

300 μL

1 mL

2 mL

4 mL

样本裂解液

15 μL

50 μL

100 μL

200 μL

结合液

375 μL

1.25 mL

2.5 mL

5 mL

磁珠悬浮液

9 μL

30 μL

60 μL

120 μL

洗脱体积

10～20ul

30 μL

50 μL

50～80μL

 

2.根据样本体积向离心管中加入蛋白酶K和样本，颠倒混匀后加入裂解液，短暂涡旋混匀后，60 ℃孵育20 min，期间需上下颠倒混匀2-3次。

 

步骤二：游离DNA提取

以15 mL离心管操作为例，从血浆样本中提取游离DNA。

  1. 向冷却至室温的离心管中加入结合液和磁珠，短暂涡旋混匀，室温旋转孵育10 min。
  2. 转移至磁力架中，静置约5 min观察到磁珠完全吸附在管壁上，小心吸除上清液。
  3. 向上述离心管中加入800 μL洗涤液A，涡旋振荡20 s使磁珠彻底分散，将磁珠和洗涤液A全部转移至洁净的1.5 mL离心管中，并保留该15 mL离心管以供步骤4润洗。
  4. 将1.5 mL离心管放入磁力架中，静置约1 min，待溶液澄清后，吸取上清液转移至步骤3保留15 mL离心管中进行润洗，并将其全部转移至包含磁珠的1.5 mL离心管中，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
  5. 向1.5 mL离心管中加入800 μL洗涤液A，涡旋振荡20 s，瞬时离心后将离心管转移至磁力架，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
  6. 向离心管中加入1 mL洗涤液B，涡旋振荡1 min。
  7. 瞬时离心后将离心管转移至磁力架，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
  8. 重复步骤6-7一次。
  9. 短暂离心后将离心管放置在磁力架上，小心吸除残余液体。
  10. 开盖室温放置2～5 min使乙醇充分挥发，观察到磁珠表面无液体或刚出现龟裂即可。

（注：磁珠不能过度干燥，过度干燥会导致洗脱效率下降。若室温过低可适当延长晾干时间。）

  1. 向晾干后的离心管中加入洗脱液，涡旋振荡5 min，短暂离心后将离心管置于磁力架上直至磁珠彻底吸附，收集洗脱液（注意不要吸到磁珠）。
  2. 核酸溶液短期保存于-20 ℃，长期保存需放置于-80 ℃。

该产品可搭配自动化提取仪器，如杭州奥盛Auto-Pure32A 自动化核酸提取仪

 

注意事项

1. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其是裂解液，结合液组分），如有浑浊可40 ℃加热或超声处理使溶液澄清。

2. 磁珠应冷藏保存，避免冻存或反复冻融，以免影响使用效果。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

4. 样本保存时间过长、血浆含有基因组核酸或者样本在室温放置过久均会导致目标核酸得率降低。为了保证提取得率，样本可以是新鲜、冷冻状态下未经冻融或者在cf DNA保存管中有效保存的血浆和血清。血浆的分离与储存建议见附录1。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途。

 

Ver. CN20230705

血浆/血清游离DNA提取试剂盒MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit

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血浆/血清游离DNA提取试剂盒MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit

暂无内容

jembio KlenTaq1 DNA 聚合酶说明书

发表于由

jembio KlenTaq1说明书


jembio中国代理

jembio KlenTaq1是一种热稳定性 DNA 聚合酶，从该基因的 5' 缺失表达，编码水生栖热菌 DNA 聚合酶，留下高活性和更热稳定的 DNA 聚合酶活性。在反应缓冲液 PC2 中反复暴露于 980°C 似乎不会降低酶活性。即使在暴露于 990 C 后仍保持显着活性。全长酶不能耐受这些处理。               



jembio KlenTaq1    ™ 酶缺少野生型全长 Taq DNA 聚合酶的 N 端部分。这部分蛋白质与大肠杆菌 DNA 聚合酶 1 的 5' – 外切核酸酶区域同源。  因此， KlenTaq1 ™ 与 Hoffman LaRoche 的 Stoffel 片段相似但又不同。               


对于不含甘油的KlenTaq1 （Cat# 1001 NGKT）：将酶和缓冲液储存在 4°C。储存缓冲液为 50 mM 硫酸铵、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巯基乙醇、无明胶和 0.5% Thesit。               


对于50% 甘油中的KlenTaq1 （货号 1001）：将酶储存在 -200 C，缓冲液在 40 C。储存缓冲液中的甘油可防止在 -20°C 下冻结，但 Thesit 在此温度下会导致一些增稠。它是可选的，但建议在分配前在冰上加热至 0°C。对于长期储存，可以使用 -70°C 或 -80°C，但我们建议不要将酶冷冻一次以上。重新冷冻和解冻会导致酶的活性降解。储存缓冲液为 50% 甘油（v/v；63% w/v）、50 mM 硫酸铵、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巯基乙醇、无明胶和 0.5% Thesit。                

 浓度：5   KlenTaq1™单位（在 72°C 下 30 分钟内掺入 60 nmole）。活化的鲑鱼精子DNA是模板；PC2（见下文）是缓冲区。NB 这些单位比标准单位大 6 倍。在标准单位（10 nmole/30 分钟）中，这里的酶浓度约为 30 单位/ml。                   

尽管该酶在各种条件下都能很好地发挥作用，但推荐的反应缓冲液 PC2 为：50 mM Tris-HCl pH 9.1、16 mM 硫酸铵、3.5 mM MgCl2 和 150 mg/ml BSA（按订单提供） . 请注意，与热稳定 DNA 聚合酶的其他缓冲液相比，不含 KC1 和明胶。dNTP 浓度可以从每个 50 µM 到每个 1.2 mM 不等，但通常使用 200 µM。如果 DNA 掺入量超过 500 bp，您将需要比 Taq 蛋白更多的KlenTaq1™蛋白。KlenTaq1™ 以 25-30 u/µl 的浓度运输，因此如果使用与全长 Taq DNA 聚合酶相同的数量（罗氏推荐），它可以很容易地掺入 2000 bp。

                    1 DNA 掺入单位 = 10 nmoles / 30 min ='标准单位'。罗氏的酶每微升含有 5 个“标准单位”。KlenTaq1™每微升含有 25-30 个“标准单位”。                    


罗氏推荐每 100 微升反应 0.5 微升；也就是说，1微升将催化2个反应。进行反应所需的KlenTaq1™的量取决于掺入的长度。对于KlenTaq1™ ，在 100 微升反应中，1 微升将催化 15-20 个 500 bp 的反应和 8-10 个 1 kb 的反应和 3-5 个 2kb 模板 DNA 的反应。由于过量的 KlenTaq1™ 是无害的，我们保守地建议每次反应 0.50 微升，以确保 2.5 kb 以内的所有内容都能正常工作。这就是我们检查和滴定酶的方式。


货号：1001


NGS新型DNA连接模块|Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module

发表于由

NGS新型DNA连接模块|Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块，采用一款我公司自主研发的新型连接酶Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®与MGI®测序平台适用的DNA接头，具有高效的连接能力，兼容各类样本，同时也适用于自动化平台，对于复杂结构核酸片段的连接更显优势，均可得到优异的测序质量。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序已验证其有效性。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Novel HF Amplification Mix for MGI®（Cat#13344）共同用于DNA文库构建，通过MGI®高通量平台测序已验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

产品编号/规格

12626ES24

12626ES96

12626-A

Novel T4 DNA Ligase

120 μL

480 μL

12626-B

5×Novel Ligation Buffer

480 μL

2×960 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，效期18个月。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅用作科研用途！

 

使用方法

1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

表1  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

1 μg

10:1

50 ng

100:1

500 ng

20:1

25 ng

200:1

250 ng

40:1

1 ng

200:1

100 ng

100:1

500 pg

400:1

【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，涡旋瞬离后置于20℃，反应15分钟即可。

表2  Adapter Ligation体系

名称

体积（μL）

dA-tailed DNA

60

5×Novel Ligation Buffer

20*

Novel T4 DNA Ligase

5

DNA Adapter

X**

ddH2O

To 100

【注】：*对于5×Novel Ligation Buffer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时离心后使用。

**根据自身需求加入适量的接头。

【接头添加计算举例】：

当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？

第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；

Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例；

根据表2，查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

综上，接头可添加3.4 μL，加1.6 μL水补齐至5 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）

HB220829

 

Q：12626 产品连接buffer 比较粘稠，如果不混匀会造成什么影响？

A：连接反应混合不当，可能导致文库产量低。为了保证合适的混合，反应可以上下颠倒 10 次，或者

漩涡 3 秒。

 

NGS新型DNA连接模块|Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module

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Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块，采用一款我公司自主研发的新型连接酶Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®与MGI®测序平台适用的DNA接头，具有高效的连接能力，兼容各类样本，同时也适用于自动化平台，对于复杂结构核酸片段的连接更显优势，均可得到优异的测序质量。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序已验证其有效性。本产品与Hieff NGS® Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Novel HF Amplification Mix for MGI®（Cat#13344）共同用于DNA文库构建，通过MGI®高通量平台测序已验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

 

产品组分

产品编号

组分名称

产品编号/规格

12626ES24

12626ES96

12626-A

Novel T4 DNA Ligase

120 μL

480 μL

12626-B

5×Novel Ligation Buffer

480 μL

2×960 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，效期18个月。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅用作科研用途！

 

使用方法

1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

表1  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

1 μg

10:1

50 ng

100:1

500 ng

20:1

25 ng

200:1

250 ng

40:1

1 ng

200:1

100 ng

100:1

500 pg

400:1

【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，涡旋瞬离后置于20℃，反应15分钟即可。

表2  Adapter Ligation体系

名称

体积（μL）

dA-tailed DNA

60

5×Novel Ligation Buffer

20*

Novel T4 DNA Ligase

5

DNA Adapter

X**

ddH2O

To 100

【注】：*对于5×Novel Ligation Buffer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时离心后使用。

**根据自身需求加入适量的接头。

【接头添加计算举例】：

当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？

第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；

Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例；

根据表2，查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

综上，接头可添加3.4 μL，加1.6 μL水补齐至5 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）

HB220829

 

Q：12626 产品连接buffer 比较粘稠，如果不混匀会造成什么影响？

A：连接反应混合不当，可能导致文库产量低。为了保证合适的混合，反应可以上下颠倒 10 次，或者

漩涡 3 秒。

 

NGS新型DNA连接模块|Hieff NGS® Novel DNA Ligation Module

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GoldBand DL600 DNA Marker 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

发表于由

GoldBand DL600 DNA Marker 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

GoldBand DL600 DNA Marker是由600 bp、500 bp、400 bp、300 bp、200 bp以及100 bp共6条线状双链DNA片段组成，保存于1×DNA Loading Buffer中，可直接用于电泳分析。其中指示带为400 bp，浓度为100 ng/5 μL，其他条带均为40 ng/5 μL。该产品适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析，不建议用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。

 

产品组分

组分编号

组分名称

10502ES60

10502ES80

10502-A

GoldBand DL600 DNA Marker

500 μL

500 μL×10

10502–B

5×DNA Loading buffer

1 mL

1 mL×10

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用方法

1. Marker上样量为5 μL，若为宽胶孔，需适当增加上样量；

2. 建议使用1.0-2.0% Agarose，电压4-10 V/cm，1×TAE（优先选用）或0.5×TBE缓冲液电泳；

3. 通过EB或YeaRed等其他核酸染料进行染色，在紫外灯下观察电泳条带。

 

电泳图示

GoldBand DL600 DNA Marker 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

 

注意事项

1. 使用时产品需充分混匀，及时更换电泳缓冲液并使用新制备的凝胶，以达到理想的电泳结果。

2. 随附5×DNA Loading buffer可用于检测样品时使用。

3. 如使用该产品电泳时出现抹带、条带不清晰或弯曲等不理想情况，建议尝试用水稀释后上样。如常规宽度胶孔可用水稀释5倍后取8-10 μL进行上样。

4. 使用YeaGreen染料进行染色时，如果电泳槽中的缓冲液在用YeaGreen染料之前，使用YeaRed染料胶跑过电泳，要将电泳槽彻底清洗干净，再加入新的电泳缓冲液。建议在蓝光下观察电泳条带。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20230811

GoldBand DL600 DNA Marker 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

暂无内容

GoldBand DL600 DNA Marker 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

暂无内容

 

GoldBand DL600 DNA Marker是由600 bp、500 bp、400 bp、300 bp、200 bp以及100 bp共6条线状双链DNA片段组成，保存于1×DNA Loading Buffer中，可直接用于电泳分析。其中指示带为400 bp，浓度为100 ng/5 μL，其他条带均为40 ng/5 μL。该产品适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析，不建议用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。

 

产品组分

组分编号

组分名称

10502ES60

10502ES80

10502-A

GoldBand DL600 DNA Marker

500 μL

500 μL×10

10502–B

5×DNA Loading buffer

1 mL

1 mL×10

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用方法

1. Marker上样量为5 μL，若为宽胶孔，需适当增加上样量；

2. 建议使用1.0-2.0% Agarose，电压4-10 V/cm，1×TAE（优先选用）或0.5×TBE缓冲液电泳；

3. 通过EB或YeaRed等其他核酸染料进行染色，在紫外灯下观察电泳条带。

 

电泳图示

GoldBand DL600 DNA Marker 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

 

注意事项

1. 使用时产品需充分混匀，及时更换电泳缓冲液并使用新制备的凝胶，以达到理想的电泳结果。

2. 随附5×DNA Loading buffer可用于检测样品时使用。

3. 如使用该产品电泳时出现抹带、条带不清晰或弯曲等不理想情况，建议尝试用水稀释后上样。如常规宽度胶孔可用水稀释5倍后取8-10 μL进行上样。

4. 使用YeaGreen染料进行染色时，如果电泳槽中的缓冲液在用YeaGreen染料之前，使用YeaRed染料胶跑过电泳，要将电泳槽彻底清洗干净，再加入新的电泳缓冲液。建议在蓝光下观察电泳条带。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20230811

GoldBand DL600 DNA Marker 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

暂无内容

GoldBand DL600 DNA Marker 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

暂无内容

Kapabiosystems品牌代理

发表于由

Kapabiosystems

简要描述：

Kapa是世界上著名的生物技术公司，总部位于美国。特色产品：Kapa2G快速PCR、实时荧光定量PCR、Kapa长片段DNA多聚酶、Kapa高保真DNA多聚酶。

Kapa是世界上著名的生物技术公司，总部位于美国。特色产品：Kapa2G快速PCR、实时荧光定量PCR、Kapa长片段DNA多聚酶、Kapa高保真DNA多聚酶。


We are constantly evolving better science by applying the latest advances in genomics and synthetic biology to help reduce costs, simplify workflows and improve results. Our core protein engineering technologies enable us to tailor enzymes to suit specific applications in next-generation DNA and RNA sequencing, DNA amplification and molecular diagnostics. Biomedical research is no longer limited by the constraints of native enzyme structure or function.


产品列表：


No.

品牌

货号

名称

规格

1

kapa

KK4824

Complete kit (Universal)

500 x 20 µL reactions

2

kapa

KK4854

Complete kit (optimized for Roche® LightCycler 480)

500 x 20 µL reactions

3

kapa

KK4873

Complete Kit (ROX Low)

500 x 20 µL reactions

4

kapa

KK4973

qPCR MasterMix (ROX Low ) and Primer Premix only

500 x 20 µL reactions

5

kapa

KK4827

Complete kit (Universal)

500 x 20 µL reactions

6

kapa

KK4847

Complete kit (Bio-Rad®)

500 x 20 µL reactions

7

kapa

KK4924

qPCR MasterMix (Universal) and Primer Premix only

500 x 20 µL reactions

8

kapa

KK4944

qPCR MasterMix (Bio-Rad) and Primer Premix only

500 x 20 µL reactions

9

kapa

KK4813

Library Quantification Primer Premix

500 µL

10

kapa

KK2502

HotStart PCR Kit, with dNTPs

250U

11

kapa

KK2102

With dNTPs

250U

12

kapa

KK2602

HotStart ReadyMix, 500 x 25 µL reactions

6.25 mL

13

kapa

KK4701

100 x 20 µL reactions (Universal)

1 ml

14

kapa

KK4705

100 x 20 µL reactions, ROX (ABI Prism®)

1 ml

15

kapa

KK4709

100 x 20 µL reactions, with fluorescein (Bio-Rad® iCycler™)

1 ml

Molzym病原体DNA分离产品说明书

发表于由

Molzym 生产用于从各种标本中提取微生物核酸的超洁净和高活性扩增试剂和试剂盒。特别是，提供的试剂和耗材不含污染微生物 NA – 逐批保证。我们的客户很欣赏增加扩增循环次数的能力，从而显着降低检测限，而不会因微生物 DNA 污染而产生假阳性结果。

Molzym 的分子研究专用试剂盒和试剂专为复杂临床活检和其他标本中微生物的高质量检测、鉴定和表征而设计。

Molzym病原体DNA分离产品说明书

病原体 DNA 富集和分离

MolYsis™试剂盒是提供富集微生物 DNA 以直接分析人类和动物样本中病原体的理想选择。该试剂盒针对各种体液进行评估，如血液、脑脊液、滑液抽吸物、BAL 和其他标本。

特点及优点：

  • 从体液中去除宿主（人类/动物）DNA

  • 细菌和真菌 DNA 的富集

  • 去除 PCR 抑制剂

  • 革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌和真菌的广泛裂解

  • 缓冲液和试剂无污染

  • 0.2 至 1 ml 或 5 ml 样品体积
  
MolYsis™是一种*的系统，可从复杂的临床样本（如血液、抽吸物和其他体液）中靶向分离微生物 DNA。宿主细胞的选择性裂解和释放的宿主 DNA 的降解避免了非特异性引物结合，从而大大提高了 PCR 或实时 PCR 分析病原体的灵敏度和特异性。该套件系列允许处理 0.2 至 1 ml 或 5 ml 范围内的样品。

 
Molzym 提供用于宿主 DNA去除的预处理MolYsis™ Basic试剂盒，可与实验室中建立的任何微生物 DNA 分离试剂盒结合使用，包括手动和自动系统。  

所述MolYsis™全试剂盒系列提供协议的整个过程，从预治疗宿主DNA耗尽微生物DNA分离。

 

MolYsis™ 技术也适用于组织和拭子样本。使用Ultra-Deep Microbiome Prep试剂盒时，可以使用≤1 ml 的液体和组织样本。Ultra-Deep Microbiome Prep10试剂盒为 1-10 ml 的体积和组织提供了最高的灵活性。

 
所有试剂盒成分，包括缓冲液、试剂和耗材，都经过质量检查，没有微生物 DNA 污染。这确保了精确的分子分析。

 
MolYsis™ 试剂盒可与 Molzym 的无 DNA PCR/实时 PCR 试剂和检测分析、MolTaq 16S/18S、Hot-Moltaq 16S/18S 和 Mastermix 16S/18S 试剂盒结合。
 
 

自动化：微生物 DNA 的富集和分离过程也可以半自动化和全自动进行。

 
 

订单信息：

套件
样本
样本量货号
宿主 DNA 耗竭    
MolYsis™ Basic5
液体活检
0.2-1 毫升或 5 毫升
 D-301-050、D-301-100
宿主 DNA 消耗和微生物 DNA 分离    
MolYsis™ Complete5
液体活检
0.2-1 毫升或 5 毫升
 D-321-050、D-321-100
从液体和组织标本中去除宿主 DNA 和微生物 DNA
超深层微生物组准备 液体活检和组织 ≤1 毫升和组织 G-020-025、G-020-050
超深层微生物组 Prep10 液体活检和组织 1-10 毫升和纸巾 G-030-025、G-030-050

 

磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒(瓶装) MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit

发表于由

磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒(瓶装) MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit 适用于福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取DNA。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的分离纯化高纯度DNA。该试剂盒使用的脱蜡液，较之二甲苯更安全、简单快速；提取的基因组完整性好、纯度高，质量稳定可靠，适用于各种下游应用实验，如PCR和二代测序等。本产品可配合磁珠法自动化提取仪器和移液法自动化仪器使用，实现核酸的高通量提取。

 

试剂盒组分

类别

编号

组分名称

18371ES50（50 人份/盒）

Part Ⅰ

18371-H

蛋白酶K溶液（20mg/mL)

1 mL/支×1支

Part Ⅱ

18371-A

磁珠悬浮液

1 mL/支×1支

18371-B

脱蜡液

20 mL/瓶×1瓶

18371-C

裂解液

10 mL/瓶×1瓶

18371-D

结合液

20 mL/瓶×1瓶

18371-E

洗涤液A

16 mL/瓶×1瓶（需加24mL乙醇）

18371-F

洗涤液B

16 mL/瓶×1瓶（需加64mL乙醇）

18371-G

洗脱液

5 mL/瓶×1瓶

 

运输与保存方法

Part I组分常温运输，4℃保存，有效期12个月。

Part II组分常温运输，常温保存，有效期12个月。

 

注意事项

1. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃水浴至溶液澄清，避免影响使用效果。

2. 磁珠应避免置于低于4℃环境，避免反复冻融，否则会导致DNA的产量下降。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途。

HB210923

磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒(瓶装) MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit

暂无内容

磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒(瓶装) MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit

暂无内容

 

MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit 适用于福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取DNA。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的分离纯化高纯度DNA。该试剂盒使用的脱蜡液，较之二甲苯更安全、简单快速；提取的基因组完整性好、纯度高，质量稳定可靠，适用于各种下游应用实验，如PCR和二代测序等。本产品可配合磁珠法自动化提取仪器和移液法自动化仪器使用，实现核酸的高通量提取。

 

试剂盒组分

类别

编号

组分名称

18371ES50（50 人份/盒）

Part Ⅰ

18371-H

蛋白酶K溶液（20mg/mL)

1 mL/支×1支

Part Ⅱ

18371-A

磁珠悬浮液

1 mL/支×1支

18371-B

脱蜡液

20 mL/瓶×1瓶

18371-C

裂解液

10 mL/瓶×1瓶

18371-D

结合液

20 mL/瓶×1瓶

18371-E

洗涤液A

16 mL/瓶×1瓶（需加24mL乙醇）

18371-F

洗涤液B

16 mL/瓶×1瓶（需加64mL乙醇）

18371-G

洗脱液

5 mL/瓶×1瓶

 

运输与保存方法

Part I组分常温运输，4℃保存，有效期12个月。

Part II组分常温运输，常温保存，有效期12个月。

 

注意事项

1. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃水浴至溶液澄清，避免影响使用效果。

2. 磁珠应避免置于低于4℃环境，避免反复冻融，否则会导致DNA的产量下降。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途。

HB210923

磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒(瓶装) MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit

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磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒(瓶装) MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit

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Vero细胞残留DNA检测试剂盒|Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit

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Vero细胞残留DNA检测试剂盒|Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒是用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中的Vero残留DNA含量的试剂盒。

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR原理，可专一快速的检测Vero细胞的残留DNA，其最低检测限可以达到fg水平。该试剂盒可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（Cat#18461ES/18462ES）配套使用。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

41303ES50（50T）

41303ES60（100T）

41303-A

Vero qPCR mix

0.8 mL

1.6 mL

41303-B

Vero Primer&probe mix

200 μL

400 μL

41303-C

DNA Dilution Buffer

2×2 mL

4×2 mL

41303-D

Vero DNA Control（30 ng/μL）

25 μL

50 μL

【注】：本试剂盒不含ROX 参比染料，若您目前使用的Real Time PCR扩增仪需要添加ROX参比染料，推荐您购买本公司的50× ROX Reference Dye（Cat#10200ES）。

 

运输和保存方法

1. 所有组分均干冰运输，-20℃保存，有效期2年。

2. 收到货后，请检查共4个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

 

注意事项

1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。

2. 加样和配液步骤尽量都在冰上操作。

3. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途。

 

适用机型

包含但不限于以下仪器：

Bio-Rad：CFX96 Optic Module；

Thermo Scientific：ABI 7500；ABI Quant Studio 5；ABI Step OnePlus.

 

使用方法

一、Vero DNA定量参考品的稀释和标准曲线的制备

用试剂盒中提供的DNA稀释液将DNA定量参考品进行梯度稀释，稀释浓度依次为300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL、3 fg/μL。

具体操作如下：

1. 将试剂盒中的DNA定量参考品和DNA稀释液置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。

2. 取7支洁净的1.5 mL离心管，分别标记为3 ng/μL，①，②，③，④，⑤，⑥。

3. 在标记为3 ng/μL的1.5 mL离心管中加90 μL DNA 稀释液和10 μL DNA 定量参考品（30 ng/μL），即稀释为3 ng/μL，振荡混匀后短时间快速离心10 sec，该浓度可分装置于–20℃短期保存（不超过3个月），使用时避免反复冻融。

4. 在①，②，③，④，⑤，⑥ 管中先分别加入90 μL DNA稀释液，再进行梯度稀释，稀释方法如下：

稀释管

稀释比例

终浓度

①

10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer

300 pg/μL

②

10 μL ①+90 μL DNA Dilution Buffer

30 pg/μL

③

10 μL ②+90 μL DNA Dilution Buffer

3 pg/μL

④

10 μL ③+90 μL DNA Dilution Buffer

300 fg/μL

⑤

10 μL ④+90 μL DNA Dilution Buffer

30 fg/μL

⑥

10 μL ⑤+90 μL DNA Dilution Buffer

3 fg/μL

【注】：

1. 每个浓度做3个复孔，该试剂可测试3 fg/μL-300 pg/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。

2. 为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于–20℃。

3. 已融化未使用的 DNA 稀释液可保存于2-8 ℃ 7天，若长时间不用，请放置于–20℃。

4. 为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约1 min。

二、样本加标回收质控QC的制备

根据需要设QC中的Vero DNA标准品浓度（以制备加3 pg/μL DNA量的样本加标回收为例），具体操作如下：

  1. 取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL溶液③，混匀，标记为样本加标回收QC。
  2. 加标回收QC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收QC纯化液。

三、标准品回收质控QC的制备（可选）

根据需要设QC中的Vero DNA标准品浓度（以制备加3 pg/μL DNA量的样本加标回收为例），具体操作如下：

  1. 取100 μL 溶液③加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为标准品回收QC。
  2. 标准品回收QC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备标准品回收QC纯化液。

四、阴性质控NCS的制备

根据实验设置阴性质控，具体操作如下：

  1. 取100 μL样本基质溶液（或DNA 稀释液）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为阴性质控NCS。
  2. 阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。

五、无模板对照NTC的制备

根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：

  1. 无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。
  2. 每管或孔中的NTC样本为20 μL Mix混合液（即16 μL Vero qPCR mix + 4μL Vero Primer&probe mix） + 20 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。

六、反应体系

组分

体积（μL）

Vero qPCR mix

16

Vero Primer&probe mix

4

DNA template

20

总体积

40

 

【注】：

1. 根据反应孔数计算本次所需的Mix混合液总量：Mix混合液 =（反应孔数+2）× (16+4) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。

2. 加样完成密封好管子后，请先低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。

下图为参考板位：

Vero细胞残留DNA检测试剂盒|Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit

该示例是对Vero残留DNA qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：1个无模板对照NTC、6个浓度梯度的DNA标准曲线、3个样本加标回收QC（即加样回收QC）、3个待测样本、3个标准品回收QC（可选）、3个阴性质控NCS（1个即可）。建议每个样本做3个重复孔。

七、扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）

  1. 创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
  2. 创建1个检测探针，命名为“Vero-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“none”。
  3. 在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔的“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity” 一栏分别赋值为“300000”、“30000”、“3000”、“300”、“30”、“3”（含义为每孔的DNA浓度，单位为fg/μL），并且在相应的“sample name”一栏中命名为“300 pg/μL”、“30 pg/μL”、“3 pg/μL”、“300 fg/μL”、“30 fg/μL”、“3 fg/μL”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本孔、样本加标回收QC孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并在相应“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”、“TS”、“QC”，之后点击“Start Run”，开始仪器运行。

     4. 扩增程序设置：设置反应体积40 μL。

循环步骤

温度（℃）

时间

循环数

预变性

95℃

10 min

1

变性

95℃

15 sec

40

退火/延伸（收集荧光）

60℃

30 sec

八、qPCR 结果分析

1.在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出Threshold，有时系统给出的Threshold离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节Threshold 至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。

2. 在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率（Eff%）、斜率（Slope）、截距（Intercept）等。正常的标曲：R²＞0.99；扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内；Slope在–3.4左右。

3. 在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS、样本加标回收QC的检测值，单位为fg/μL，后续可在检测报告中将单位换算成pg/μL或pg/mL。

 

HB221226

 

 

Vero细胞残留DNA检测试剂盒|Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit

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Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒是用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中的Vero残留DNA含量的试剂盒。

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR原理，可专一快速的检测Vero细胞的残留DNA，其最低检测限可以达到fg水平。该试剂盒可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（Cat#18461ES/18462ES）配套使用。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

41303ES50（50T）

41303ES60（100T）

41303-A

Vero qPCR mix

0.8 mL

1.6 mL

41303-B

Vero Primer&probe mix

200 μL

400 μL

41303-C

DNA Dilution Buffer

2×2 mL

4×2 mL

41303-D

Vero DNA Control（30 ng/μL）

25 μL

50 μL

【注】：本试剂盒不含ROX 参比染料，若您目前使用的Real Time PCR扩增仪需要添加ROX参比染料，推荐您购买本公司的50× ROX Reference Dye（Cat#10200ES）。

 

运输和保存方法

1. 所有组分均干冰运输，-20℃保存，有效期2年。

2. 收到货后，请检查共4个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

 

注意事项

1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。

2. 加样和配液步骤尽量都在冰上操作。

3. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途。

 

适用机型

包含但不限于以下仪器：

Bio-Rad：CFX96 Optic Module；

Thermo Scientific：ABI 7500；ABI Quant Studio 5；ABI Step OnePlus.

 

使用方法

一、Vero DNA定量参考品的稀释和标准曲线的制备

用试剂盒中提供的DNA稀释液将DNA定量参考品进行梯度稀释，稀释浓度依次为300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL、3 fg/μL。

具体操作如下：

1. 将试剂盒中的DNA定量参考品和DNA稀释液置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。

2. 取7支洁净的1.5 mL离心管，分别标记为3 ng/μL，①，②，③，④，⑤，⑥。

3. 在标记为3 ng/μL的1.5 mL离心管中加90 μL DNA 稀释液和10 μL DNA 定量参考品（30 ng/μL），即稀释为3 ng/μL，振荡混匀后短时间快速离心10 sec，该浓度可分装置于–20℃短期保存（不超过3个月），使用时避免反复冻融。

4. 在①，②，③，④，⑤，⑥ 管中先分别加入90 μL DNA稀释液，再进行梯度稀释，稀释方法如下：

稀释管

稀释比例

终浓度

①

10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer

300 pg/μL

②

10 μL ①+90 μL DNA Dilution Buffer

30 pg/μL

③

10 μL ②+90 μL DNA Dilution Buffer

3 pg/μL

④

10 μL ③+90 μL DNA Dilution Buffer

300 fg/μL

⑤

10 μL ④+90 μL DNA Dilution Buffer

30 fg/μL

⑥

10 μL ⑤+90 μL DNA Dilution Buffer

3 fg/μL

【注】：

1. 每个浓度做3个复孔，该试剂可测试3 fg/μL-300 pg/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。

2. 为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于–20℃。

3. 已融化未使用的 DNA 稀释液可保存于2-8 ℃ 7天，若长时间不用，请放置于–20℃。

4. 为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约1 min。

二、样本加标回收质控QC的制备

根据需要设QC中的Vero DNA标准品浓度（以制备加3 pg/μL DNA量的样本加标回收为例），具体操作如下：

  1. 取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，再加入10 μL溶液③，混匀，标记为样本加标回收QC。
  2. 加标回收QC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备加标回收QC纯化液。

三、标准品回收质控QC的制备（可选）

根据需要设QC中的Vero DNA标准品浓度（以制备加3 pg/μL DNA量的样本加标回收为例），具体操作如下：

  1. 取100 μL 溶液③加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为标准品回收QC。
  2. 标准品回收QC和同批待测样本一起进行样本前处理，制备标准品回收QC纯化液。

四、阴性质控NCS的制备

根据实验设置阴性质控，具体操作如下：

  1. 取100 μL样本基质溶液（或DNA 稀释液）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为阴性质控NCS。
  2. 阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。

五、无模板对照NTC的制备

根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：

  1. 无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。
  2. 每管或孔中的NTC样本为20 μL Mix混合液（即16 μL Vero qPCR mix + 4μL Vero Primer&probe mix） + 20 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。

六、反应体系

组分

体积（μL）

Vero qPCR mix

16

Vero Primer&probe mix

4

DNA template

20

总体积

40

 

【注】：

1. 根据反应孔数计算本次所需的Mix混合液总量：Mix混合液 =（反应孔数+2）× (16+4) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。

2. 加样完成密封好管子后，请先低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。

下图为参考板位：

Vero细胞残留DNA检测试剂盒|Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit

该示例是对Vero残留DNA qPCR法检测操作的展示，检测样本包括：1个无模板对照NTC、6个浓度梯度的DNA标准曲线、3个样本加标回收QC（即加样回收QC）、3个待测样本、3个标准品回收QC（可选）、3个阴性质控NCS（1个即可）。建议每个样本做3个重复孔。

七、扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）

  1. 创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。
  2. 创建1个检测探针，命名为“Vero-DNA”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“none”。
  3. 在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔的“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity” 一栏分别赋值为“300000”、“30000”、“3000”、“300”、“30”、“3”（含义为每孔的DNA浓度，单位为fg/μL），并且在相应的“sample name”一栏中命名为“300 pg/μL”、“30 pg/μL”、“3 pg/μL”、“300 fg/μL”、“30 fg/μL”、“3 fg/μL”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本孔、样本加标回收QC孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并在相应“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”、“TS”、“QC”，之后点击“Start Run”，开始仪器运行。

     4. 扩增程序设置：设置反应体积40 μL。

循环步骤

温度（℃）

时间

循环数

预变性

95℃

10 min

1

变性

95℃

15 sec

40

退火/延伸（收集荧光）

60℃

30 sec

八、qPCR 结果分析

1.在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出Threshold，有时系统给出的Threshold离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节Threshold 至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。

2. 在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率（Eff%）、斜率（Slope）、截距（Intercept）等。正常的标曲：R²＞0.99；扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内；Slope在–3.4左右。

3. 在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS、样本加标回收QC的检测值，单位为fg/μL，后续可在检测报告中将单位换算成pg/μL或pg/mL。

 

HB221226

 

 

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