热敏UDG(无甘油) 尿嘧啶-DNA糖基化酶|Uracil DNA Glycosylase(UDG),Heat-Labile(Glycerol-Free)

发表于2024年11月25日由上海金畔生物科技有限公司

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

热敏UDG（尿嘧啶-DNA 糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。热敏UDG酶与普通UDG酶相比，避免了常规UDG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dU扩增产物的降解作用。本产品在室温下起作用，且对温度敏感、易于灭活。

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

10707ES60

(100 U)

10707ES76

(500 U)

10707ES90

(5 KU)

10707ES92

(10 KU)

10707

Uracil DNA Glycosylase (UDG), Heat-Labile (1 U/μL)

100 μL

500 μL

5 mL

10 mL

产品应用

1. 去除含dU的PCR产物气溶胶污染。

2. 去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。

酶活定义

以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位 (U)。

失活方式

94℃，2-5 min。

运输储存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期1年。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 热敏UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性。

应用实例

1. 按下列组份配制PCR反应液：

试剂	体积
10×PCR Buffer (Mg²⁺ Plus)	5 μL
25 mmol/L MgCl₂	3 μL
dUTP	0.6 mmol/L
dCTP / dGTP/ dATP	0.2 mmol/L each
模板DNA	Optional
引物1 (10 μmol/L)	2 μL
引物2 (10 μmol/L)	2 μL
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5 μL
Heat-Labile UDG (1 U/μL)	1 μL
ddH₂O	To 50 μL

【注】：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mmol/L之间调整。可选择性掺入0.2 mmol/L dTTP。

2. PCR反应：

反应温度	反应时间	循环数	目的
25℃	10 min	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板预变性
95℃	10 sec	30-35	变性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec/kb		延伸
72℃	5 min	1	终延伸

【注】：25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。

相关产品

产品定位	产品名称	产品货号
dUTP	dUTP Solution (100 mM) 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES
鼠源RNase抑制剂	Murine RNase Inhibitor (40 U/µL)	10603ES
鼠源RNase抑制剂	Murine RNase Inhibitor (200 U/µL, Glycerol-free)	10703ES
逆转录酶	Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase, 600 U/μL	13158ES
逆转录酶	Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)	11300ES
热启动Taq酶	Hieff Unicon® Hotstart Direct Taq DNA Polymerase,50 U/μL	10718ES
	Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase, 5 U/μL	10726ES
	Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 6 U/μL, Glycerol-free	13705ES

HB220916

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

10707ES60

(100 U)

10707ES76

(500 U)

10707ES90

(5 KU)

10707ES92

(10 KU)

10707

Uracil DNA Glycosylase (UDG), Heat-Labile (1 U/μL)

100 μL

500 μL

5 mL

10 mL

产品应用

1. 去除含dU的PCR产物气溶胶污染。

2. 去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。

酶活定义

以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位 (U)。

失活方式

94℃，2-5 min。

运输储存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期1年。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 热敏UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性。

应用实例

1. 按下列组份配制PCR反应液：

试剂	体积
10×PCR Buffer (Mg²⁺ Plus)	5 μL
25 mmol/L MgCl₂	3 μL
dUTP	0.6 mmol/L
dCTP / dGTP/ dATP	0.2 mmol/L each
模板DNA	Optional
引物1 (10 μmol/L)	2 μL
引物2 (10 μmol/L)	2 μL
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5 μL
Heat-Labile UDG (1 U/μL)	1 μL
ddH₂O	To 50 μL

【注】：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mmol/L之间调整。可选择性掺入0.2 mmol/L dTTP。

2. PCR反应：

反应温度	反应时间	循环数	目的
25℃	10 min	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板预变性
95℃	10 sec	30-35	变性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec/kb		延伸
72℃	5 min	1	终延伸

【注】：25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。

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产品定位	产品名称	产品货号
dUTP	dUTP Solution (100 mM) 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES
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鼠源RNase抑制剂	Murine RNase Inhibitor (200 U/µL, Glycerol-free)	10703ES
逆转录酶	Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase, 600 U/μL	13158ES
逆转录酶	Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)	11300ES
热启动Taq酶	Hieff Unicon® Hotstart Direct Taq DNA Polymerase,50 U/μL	10718ES
	Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase, 5 U/μL	10726ES
	Hieff Unicon® Hotstart J-Taq DNA Polymerase, 6 U/μL, Glycerol-free	13705ES

HB220916

热敏UDG(无甘油) 尿嘧啶-DNA糖基化酶|Uracil DNA Glycosylase(UDG),Heat-Labile(Glycerol-Free)

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Immunovision DNA-3000 说明书

发表于2024年11月24日由上海金畔生物科技有限公司

世界*实验材料供应商 ImmunoVision上海金畔生物为其中国代理， ImmunoVision在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， ImmunoVision就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

ImmunoVision中国代理, ImmunoVision上海代理， ImmunoVision北京代理，ImmunoVision广东代理，ImmunoVision江苏代理ImmunoVision湖北代理,ImmunoVision天津,ImmunoVision黑龙江代理,ImmunoVision内蒙古代理,ImmunoVision吉林代理,ImmunoVision福建代理, ImmunoVision江苏代理, ImmunoVision浙江代理,ImmunoVision四川代理,

ImmunoVision自豪地成为 Erba Diagnostics 家族的成员，这是 ERBA曼海姆集团的一部分。早期以IVAX Diagnostics的名义，该公司专注于在自身免疫，化学，血液学，糖尿病和传染病领域制造和销售专有诊断试剂，检测试剂盒和仪器。

自1985年以来， ImmunoVision一直为自身免疫领域提供试剂，是自身免疫市场的。我们将继续扩大搜索范围，以满足自身免疫研究者的需求。这些努力可以在我们公司的各个方面看到。我们的供应商必须符合严格的要求才能属于ImmunoVision系列。我们的员工由高素质和经验丰富的免疫化学家组成。

产品名称： DNA (Double Stranded) from Plasmid

DNA（双链）质粒

描述：

dsDNA抗原是通过碱裂解和色谱纯化的2690bp质粒。纯化方法包括使针对单链DNA的抗体的反应性zui小化的操作。ELISA中使用质粒DNA是检测抗双链（ds）DNA抗体的有效方法（1）。对dsDNA的抗体的存在包括在1982年修订的系统性红斑狼疮（SLE）分类标准（2）中。大约60-70％的SLE患者具有dsDNA的抗体，并且有相当多的证据表明在SLE的发病机制中含有抗dsDNA和DNA的免疫复合物（3,4）。此外，抗dsDNA抗体的水平已被证明与许多患者的疾病活动相关（5,6）。低水平的抗dsDNA抗体可能在其他风湿性疾病中发生（7），并且可能在没有风湿性疾病症状的个体中发生频率非常低（<2％）（8）。抗dsDNA抗体可能在发展疾病表现之前出现在风湿患者中（9）。

Code	Amount
DNA-3000	1 mg
DNA-3250	250 microgram

HEK293宿主细胞残留DNA片段定量分析试剂盒

发表于2024年11月24日由上海金畔生物科技有限公司

HEK293宿主细胞残留DNA片段定量分析试剂盒

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

HEK293宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒是用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中不同长度的HEK293残留DNA含量的试剂盒。

本试剂盒采用qPCR荧光探针原理，专一快速检测200 bp以下及以上的HEK293 DNA残留，其定量限可以达到10 fg/μL水平，且配套有HEK293 DNA Control（DNA定量参考品）。该试剂盒可与本公司的磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（Cat#18461ES/18462ES）配套使用。

组分信息

组分编号	组分名称	41316ES70	41316ES74
41316-A	HEK293 qPCR Mix	0.75 mL×4管	1.5 mL×4管
41316-B1	HEK293 Primer&Probe Mix-82	250 μL×1管	500 μL×1管
41316-B2	HEK293 Primer&Probe Mix-133	250 μL×1管	500 μL×1管
41316-B3	HEK293 Primer&Probe Mix-227	250 μL×1管	500 μL×1管
41316-B4	HEK293 Primer&Probe Mix-515	250 μL×1管	500 μL×1管
41316-C	DNA Dilution Buffer	1.8 mL×2管	1.8 mL×4管
41316-D	HEK293 DNA Control（30 ng/μL）	25 μL×1管	50 μL×1管

储存条件

1. 所有组分均干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。其中A组分和B1、B2、B3、B4组分均需避光保存。

2. 收到货后，请检查共7个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。

4. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。

适用机型

包含但不限于以下仪器：

Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5，ABI Step OnePlus；

Bio-Rad：CFX96 Optic Module；

上海宏石医疗科技：SLAN-96S。

使用说明

1. HEK293 DNA Control定量参考品的稀释和标准曲线的制备

HEK293片段分析试剂盒中含有四种不同长度的扩增片段，分别为：82 bp、133 bp、227 bp、515 bp。在建立标曲时，需分别对不同的扩增片段设置标曲，并根据对应扩增片段的标曲来计算其残留量和分布相对量。

用试剂盒中提供的DNA Dilution Buffer（DNA稀释液）将HEK293 DNA Control定量参考品进行梯度稀释^*，稀释浓度依次为3 ng/μL、300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL。

具体操作如下：

1）将试剂盒中HEK293 DNA Control和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。

2）取6支洁净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0、Std1、Std2、Std3、Std4、Std5。

3）在标记为Std0的1.5 mL离心管中加90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL HEK293 DNA Control，即稀释为3 ng/μL，振荡混匀后低速离心10 sec，该浓度可分装置于–20℃短期保存（不超过3个月）^**，使用时避免反复冻融。

4）在Std0、Std1、Std2、Std3、Std4、Std5离心管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer^***，再进行梯度稀释^****，具体稀释方法如下：

稀释管	稀释比例	终浓度
Std1	10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer	300 pg/μL
Std2	10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer	30 pg/μL
Std3	10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer	3 pg/μL
Std4	10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer	300 fg/μL
Std5	10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer	30 fg/μL

表1 标准品梯度稀释

^*每个浓度做3个复孔，该试剂可测试300 pg/μL-30 fg/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。

^**为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-20℃。

^***已融化未使用的DNA稀释液可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-20℃。

^****为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约1 min。

2. 待测样本TS的制备

根据实验设置待测样本TS，具体操作如下：

1）取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为TS，进行样本前处理，制备待测样本TS纯化液。

2）为了满足同步进行四个不同扩增长度的片段分析检测需求，前处理后的待测样品量需≥120 μL，因此建议每个样品同时准备2管进行前处理，提取完成后混匀使用。

3. 阴性抽提质控NCS的制备

根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：

1）取100 μL样本基质溶液（或DNA稀释液）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。

2）阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。

3）为了满足同步进行四个不同扩增长度的片段分析检测需求，前处理后的NCS样品量需≥120 μL，因此建议每个样品同时准备2管进行前处理，提取完成后混匀使用。

4. 无模板对照NTC的制备

根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：

1）无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。

2）每管或孔中NTC样本为20 μL Mix混合液（即15 μL HEK293 qPCR Mix + 5μL对应HEK293 Primer&Probe Mix）+ 10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。

5. 反应体系

82 bp反应体系	体积(μL)
HEK293 qPCR Mix^*	15
HEK293 Primer&Probe Mix-82	5
DNA Template^**	10
总体积^***	30

表2 82 bp扩增片段的反应体系

133 bp反应体系	体积(μL)
HEK293 qPCR Mix^*	15
HEK293 Primer&Probe Mix-133	5
DNA Template^**	10
总体积^***	30

表3 133 bp扩增片段的反应体系

227 bp反应体系	体积(μL)
HEK293 qPCR Mix^*	15
HEK293 Primer&Probe Mix-227	5
DNA Template^**	10
总体积^***	30

表4 227 bp扩增片段的反应体系

515 bp反应体系	体积(μL)
HEK293 qPCR Mix^*	15
HEK293 Primer&Probe Mix-515	5
DNA Template^**	10
总体积^***	30

表5 515 bp扩增片段的反应体系

^*根据反应孔数计算本次所需的Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+5) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。

^**反应孔数=（5个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+N个待测样TS）× 3。

NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer

NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS

TS (Test Sample)：待测样本

^***加样完成密封好管子后，请低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，再震荡混匀5 sec以上，完全混匀反应液，再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底，如有气泡，需将气泡排尽。

下表为参考板位：

82 bp

133 bp

227 bp

515 bp

Std1

Std2

Std3

Std4

Std5

NCS

NTC

表6 上机参考板位

该示例是对HEK293残留DNA各扩增片段分析的qPCR法检测操作的展示，检测样本均包括：5个浓度梯度的HEK293 DNA标准曲线、1个待测样本TS、1个阴性质控NCS、1个无模板对照NTC。建议每个样本做3个重复孔。

6. 扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）

1）创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。

2）针对四种不同长度扩增片段创建新检测探针，分别命名为“HEK293-82”、“HEK293-133”、“HEK293-227”、“HEK293-515”，选择报告荧光基团为“FAM”，猝灭荧光基团为“none”；检测参比荧光为“ROX”（参比荧光可根据仪器型号等情况，选择是否需要添加）。

3）在“Assign target (s) to the selected wells”面板中，将标准曲线孔的“Task”一栏设置为“Standard”，并且在“Quantity”一栏分别赋值为“300000”、“30000”、“3000”、“300”、“30”（含义为每孔的DNA浓度，单位为fg/μL），并且在相应的“Sample Name”一栏中命名为“300 pg/μL”、“30 pg/μL”、“3 pg/μL”、“300 fg/μL”、“30 fg/μL”；将无模板对照NTC孔的“Task”一栏设置为“NTC”；将阴性质控NCS孔、待测样本TS孔的“Task”一栏设置为“Unknown”，并且在相应的“Sample Name”一栏中分别命名为“NCS”、“TS”，之后点击“Start Run”，开始仪器运行。

4）扩增程序设置：设置三步法扩增程序，反应体积30 μL。

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
污染消化	37℃	5 min	1
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	45
退火	60℃	30 sec
延伸（收集荧光）	72℃	30 sec

表7 扩增程序

7. qPCR结果分析

1）在“Analysis”的“Amplification Plot”面板中，系统会自动给出“Threshold”，有时系统给出的“Threshold”离基线太近，导致复孔之间Ct相差甚远，可手动调节“Threshold”至合适位置，点击“Analyze”。此时可在“Multicomponent Plot”初步查看扩增曲线的形态是否正常。

2）在“Analysis”的“Standard Curve”面板中，可读取标准曲线的R²、扩增效率（Eff%）、斜率（Slope）、截距（Intercept）等。正常的标曲：R²＞0.99，扩增效率在90%≤Eff%≤110%范围内，Slope在-3.6~-3.1。

3）在“Analysis”的“View well table”面板中，“Quantity”一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本TS，单位为fg/μL，后续可在检测报告中进行单位换算。

4）结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。

5）阴性质控NCS的Ct值应大于标曲最低浓度Ct的均值。

6）无模板对照NTC的检测结果应为Undetermined或Ct值≥32。

Ver.CN20230515

HEK293宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒是用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中不同长度的HEK293残留DNA含量的试剂盒。

组分信息

组分编号	组分名称	41316ES70	41316ES74
41316-A	HEK293 qPCR Mix	0.75 mL×4管	1.5 mL×4管
41316-B1	HEK293 Primer&Probe Mix-82	250 μL×1管	500 μL×1管
41316-B2	HEK293 Primer&Probe Mix-133	250 μL×1管	500 μL×1管
41316-B3	HEK293 Primer&Probe Mix-227	250 μL×1管	500 μL×1管
41316-B4	HEK293 Primer&Probe Mix-515	250 μL×1管	500 μL×1管
41316-C	DNA Dilution Buffer	1.8 mL×2管	1.8 mL×4管
41316-D	HEK293 DNA Control（30 ng/μL）	25 μL×1管	50 μL×1管

储存条件

1. 所有组分均干冰运输，-25~-15℃保存，有效期2年。其中A组分和B1、B2、B3、B4组分均需避光保存。

2. 收到货后，请检查共7个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。

4. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。

适用机型

包含但不限于以下仪器：

Thermo Scientific：ABI 7500，ABI Quant Studio 5，ABI Step OnePlus；

Bio-Rad：CFX96 Optic Module；

上海宏石医疗科技：SLAN-96S。

使用说明

1. HEK293 DNA Control定量参考品的稀释和标准曲线的制备

具体操作如下：

1）将试剂盒中HEK293 DNA Control和DNA Dilution Buffer置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，低速离心10 sec。

2）取6支洁净的1.5 mL离心管，分别标记为Std0、Std1、Std2、Std3、Std4、Std5。

4）在Std0、Std1、Std2、Std3、Std4、Std5离心管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer^***，再进行梯度稀释^****，具体稀释方法如下：

稀释管	稀释比例	终浓度
Std1	10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer	300 pg/μL
Std2	10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer	30 pg/μL
Std3	10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer	3 pg/μL
Std4	10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer	300 fg/μL
Std5	10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer	30 fg/μL

表1 标准品梯度稀释

^*每个浓度做3个复孔，该试剂可测试300 pg/μL-30 fg/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。

^**为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-20℃。

^***已融化未使用的DNA稀释液可保存于2-8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-20℃。

^****为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约1 min。

2. 待测样本TS的制备

根据实验设置待测样本TS，具体操作如下：

1）取100 μL待测样本加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为TS，进行样本前处理，制备待测样本TS纯化液。

3. 阴性抽提质控NCS的制备

根据实验设置阴性抽提质控NCS，具体操作如下：

1）取100 μL样本基质溶液（或DNA稀释液）加入1.5 mL洁净的离心管中，标记为NCS。

2）阴性质控NCS和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。

4. 无模板对照NTC的制备

根据实验设置无模板对照NTC，具体操作如下：

1）无模板对照NTC无需进行样本前处理，在qPCR法检测残留DNA含量阶段开始配置即可。

2）每管或孔中NTC样本为20 μL Mix混合液（即15 μL HEK293 qPCR Mix + 5μL对应HEK293 Primer&Probe Mix）+ 10 μL DNA Dilution Buffer，建议配置3个重复孔的量。

5. 反应体系

82 bp反应体系	体积(μL)
HEK293 qPCR Mix^*	15
HEK293 Primer&Probe Mix-82	5
DNA Template^**	10
总体积^***	30

表2 82 bp扩增片段的反应体系

133 bp反应体系	体积(μL)
HEK293 qPCR Mix^*	15
HEK293 Primer&Probe Mix-133	5
DNA Template^**	10
总体积^***	30

表3 133 bp扩增片段的反应体系

227 bp反应体系	体积(μL)
HEK293 qPCR Mix^*	15
HEK293 Primer&Probe Mix-227	5
DNA Template^**	10
总体积^***	30

表4 227 bp扩增片段的反应体系

515 bp反应体系	体积(μL)
HEK293 qPCR Mix^*	15
HEK293 Primer&Probe Mix-515	5
DNA Template^**	10
总体积^***	30

表5 515 bp扩增片段的反应体系

^*根据反应孔数计算本次所需的Mix混合液总量：Mix混合液=（反应孔数+2）× (15+5) μL（含有2孔的损失量）。通常，每个样本做3个重复孔。

^**反应孔数=（5个浓度梯度的标准曲线+1个无模板对照NTC+1个阴性抽提质控NCS+N个待测样TS）× 3。

NTC (No Template Control)：DNA Dilution Buffer

NCS (Negative Control Solution)：样本基质溶液或DNA Dilution Buffer进行样本前处理后，所得纯化液为NCS

TS (Test Sample)：待测样本

下表为参考板位：

82 bp

133 bp

227 bp

515 bp

Std1

Std2

Std3

Std4

Std5

NCS

NTC

表6 上机参考板位

6. 扩增程序参数设置（两步法）（以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例）

1）创建空白新程序，选择绝对定量检测模板。

4）扩增程序设置：设置三步法扩增程序，反应体积30 μL。

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
污染消化	37℃	5 min	1
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	45
退火	60℃	30 sec
延伸（收集荧光）	72℃	30 sec

表7 扩增程序

7. qPCR结果分析

4）结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。

5）阴性质控NCS的Ct值应大于标曲最低浓度Ct的均值。

6）无模板对照NTC的检测结果应为Undetermined或Ct值≥32。

Ver.CN20230515

暂无内容

多功能DNA/siRNA 转染试剂说明书

发表于2024年11月23日由上海金畔生物科技有限公司

polyplus-transfection 多功能 DNA/siRNA 转染试剂说明书

jetPRIME ^®

高DNA转染效率
核酸含量低
细胞活力
一种用于 DNA 和/或 siRNA 转染的试剂
性价比高

规格

试剂	jetPRIME ^®
分子交付	DNA, siRNA, DNA & siRNA
应用	质粒转染基因组编辑病毒生产 siRNA 转染不同核酸的共同递送
细胞类型	在血清存在下生长的贴壁细胞系
转染次数	1.5 ml jetPRIME ^®转染试剂足以在 24 孔板中进行多达 1500 次转染或在 6 孔板中进行 375 次转染
贮存	5°C ± 3°C，适当储存可稳定至少一年
提供	jetPRIME 缓冲区

概括

jetPRIME® 是一种功能强大且用途广泛的 DNA 和 siRNA 转染试剂，适用于日常实验，可产生高效可靠的科学结果。jetPRIME® 可确保在各种贴壁细胞中实现高 DNA转染效率和出色的基因沉默。jetPRIME ® 也是DNA/siRNA 共转染或多种质粒共递送的理想选择。此外，我们的 jetPRIME® 试剂对细胞非常温和，因为它在转染过程中需要少量的试剂和核酸。

订购信息

参考编号	试剂量	缓冲量
114-01	0.1毫升	5毫升
114-07	0.75 毫升	60毫升
114-15	1.5 毫升	2 x 60 毫升
114-75	5 x 1.5 毫升	10 x 60 毫升
712-60	X	60毫升

1.5 ml 足以在 6 孔板中进行约 375 次转染

描述

转染效率

jetPRIME ^®是一种适用于日常实验的强大转染试剂。它导致各种来源的转染贴壁细胞系以及原代细胞的比例异常高。

与竞争对手的试剂相比，使用 jetPRIME ^®试剂获得了 70% 至 90% 的转染效率（图 1 和图 2）。

图 1：jetPRIME 与其主要竞争对手的转染效率比较。在 24 孔板中转染后 24 小时，通过 FACS 分析在各种细胞系中评估转染效率。根据制造商对 Lipofectamine ^® 2000 和 jetPRIME ^®的推荐使用条件。

图 2：jetPRIME ^®与 Lipofectamine ^® 3000 的转染效率比较。在 96 孔板或 24 孔板中转染后 24 小时，通过 FACS 分析在各种细胞系中评估转染效率。根据制造商对 lipofectamine ^® 3000 和 jetPRIME ^®的推荐使用条件。

成本效益：更少的 DNA 和更少的试剂

jetPRIME ^® 是一种强大的体外转染试剂，需要少量试剂和质粒 DNA，因此使用起来非常经济高效 （表 1）。

表 1：推荐使用条件。根据制造商的建议，用于转染的 6 孔板中每孔 DNA 和试剂（jetPRIME ^®和竞争对手）的数量。

除了降低成本之外，使用更少的 DNA 还可以最大限度地减少转染引发的不利细胞毒性作用。因此，jetPRIME ^® 是实现高转染效率和出色细胞活力的试剂。

更好的细胞活力

jetPRIME ^® 在转染过程中对细胞极其温和，从而提高细胞活力并改善转染结果。用 jetPRIME ^®转染的细胞是健康的，而竞争者则观察到主要的细胞毒性（图 3）。

图 3：转染后 24 小时的细胞活力。根据制造商对每种试剂的建议，在转染后 24 小时对 HeLa 细胞进行相差显微镜检查。

易于使用的协议

jetPRIME ^® 是一种易于使用的转染试剂（图 4）：

快速且轻松地扩大和缩小规模
与血清和抗生素兼容

图 4：jetPRIME ^®协议。方便的 DNA、siRNA 和 DNA 和 siRNA 共转染方案。

在我们的博客部分查看我们的专家提示，以加快 DNA 转染。

应用

质粒转染

jetPRIME ^®导致各种来源的转染贴壁细胞系以及原代细胞的比例非常高（表 1）。

表 1：使用 jetPRIME ^®的各种细胞类型的转染效率。转染后 24 小时通过 FACS 分析确定 GFP 阳性细胞的百分比。

质粒是在细菌中常见的环状 DNA 小分子。质粒与染色体 DNA 分开存在和复制，并且在细菌中它们通常携带有利于细菌生存的基因。质粒可被有意引入所需细胞并用于在特定细胞系中过表达感兴趣的基因。此过程称为 DNA 转染，是研究基因功能或目标蛋白质的常用方法。

基因组编辑

CRISPR/Cas9 系统在哺乳动物细胞中的使用最近成为一种在特定位点修改细胞基因组的非常方便的方法。它涉及将 (a) 一个或多个编码 Cas9、特定 gRNA 和最终插入序列的质粒瞬时转染到哺乳动物细胞中，或 (b) 一个或两个质粒和一个 RNA 分子（gRNA）的混合物.

可用应用说明：使用 jetPRIME ^{® 进行}CRISPR/Cas9 介导的基因破坏。

siRNA转染

jetPRIME ^® 导致多种细胞系中内源基因表达的抑制率超过 90%。例如，jetPRIME ^®介导的HeLa 细胞转染与10 nM siRNA 双链体靶向HeLa 细胞中的内源性核纤层蛋白A/C 显着降低了核纤层蛋白A/C 基因的表达水平（图1）。

图 1：使用 jetPRIME ^{® 的}内源性 lamin A/C 静音。用 10 nM 的 21-mer 核纤层蛋白 A/C siRNA 转染 HeLa 细胞。48 小时后，使用抗 lamin A/C 抗体通过免疫荧光显微镜评估 lamin A/C 沉默。

不同核酸的共转染

jetPRIME ^® 非常适用于 DNA 和 siRNA/miRNA共转染实验或多种 DNA 质粒的共递送。

我们使用 jetPRIME ^®进行了 DNA 和 siRNA 递送，并在各种细胞系中观察到高效的基因沉默且毒性极低。使用 10 nM siRNA 在贴壁细胞中实现了超过 90% 的沉默（图 2）。

图 2：使用 jetPRIME ^{® 共}转染 DNA 和 siRNA 后，几种细胞系中的外源荧光素酶沉默。在 6 孔板中，每孔使用 400 ng p4CMV-Luc 和 10 nM 荧光素酶 siRNA 进行实验。

质量

每批 jetPRIME ^®试剂都通过用表达 GFP 的质粒对 HeLa 细胞进行 DNA 转染进行内部测试，并且每瓶试剂都提供分析证书。

polyplus-transfection DNA 转染试剂产品说明书

发表于2024年11月22日由上海金畔生物科技有限公司

Polyplus-transfection® SA 是家生物技术公司，通过创新的核酸转染解决方案支持基因和细胞治疗、生物制剂制造和生命科学研究。Polyplus-transfection 的优势在于在制造转染解决方案方面拥有20 年的经验，并提供量身定制的科学和监管支持以加速研究。

polyplus-transfection DNA 转染试剂产品说明书

jetOPTIMUS ®

高效：在难以转染的细胞中达到最大基因表达
经济高效：使用最少的试剂量和 DNA 量
生物学相关：保持出色的细胞活力和形态
省时：使用优化的即用型方案进行转染

试剂	jetOPTIMUS ® DNA 转染试剂
分子交付	质粒DNA
应用	来自质粒 DNA 转染的瞬时和稳定基因表达 CRISPR 使用 DNA 方法进行基因组编辑
细胞类型	难以转染的贴壁哺乳动物细胞： – 原代细胞（上皮细胞、肝细胞、内皮细胞、成纤维细胞等） – 干细胞（胚胎、间充质、诱导多能细胞）- 癌细胞系
转染次数	按照标准方案，1.5 ml jetOPTIMUS ®转染试剂足以在 24 孔板中进行 3000 次转染或在 6 孔板中进行 750 次转染
贮存	5°C ± 3°C，适当储存可稳定至少一年
提供	jetOPTIMUS ®缓冲液

概括

®在您需要的细胞模型中完成您的 DNA 转染！

作为转染专家，我们知道生物学家必须使用生理相关的细胞模型。对于基因表达研究，转染是在给定细胞模型中引入感兴趣基因的技术，因为与物理技术（例如微注射、电穿孔）相比，转染具有成本效益和使用简单性。

由于不同的原因，几种类型的细胞（原代细胞、干细胞或癌细胞系）仍然难以用 DNA 转染：分裂速度慢、细胞脆弱性和细胞防御机制。为了解决当前 DNA 转染的局限性并补充我们现有的基因表达产品组合（jetPEI®、jetPRIME®、jetMESSENGER®），Polyplus-transfection® 设计了一种创新的递送纳米颗粒：jetOPTIMUS®。

jetOPTIMUS® 是一种强大的转染试剂，可改善贴壁细胞（甚至难以转染的细胞）中 DNA 的细胞摄取和内体逃逸，从而提高转染效率。为了在相关生理条件下工作，使用 jetOPTIMUS® 进行转染需要最少的 DNA 量和试剂量，以保持出色的细胞活力和形态。

订购信息

参考编号	试剂大小	缓冲区大小
117-01	0.1 毫升	10 毫升
117-07	0.75 毫升	2 x 60 毫升
117-15	1.5 毫升	4 x 60 毫升
717-60	X	60 毫升

描述

优化难转染细胞的 DNA 转染效率

jetOPTIMUS ^®是一种创新的阳离子纳米技术，旨在提高易转染和难转染细胞的 DNA 转染效率，用作体外细胞培养模型。在各种原代细胞和细胞系上进行了测试，jetOPTIMUS ^®通过达到比主要竞争对手更高的转染效率和基因表达证明了其优越性。

图 1：jetOPTIMUS ^®优于其主要竞争对手。在 24 孔板中用编码 GFP 蛋白的质粒转染 24 小时后，通过 FACS 分析在各种细胞系中评估转染效率。根据制造商对 Lipofectamine ^® 3000 和 jetOPTIMUS ^®的建议设置条件。

先进的纳米技术：使用更少的材料实现基因表达！

jetOPTIMUS ^{® 的}开发旨在提高对多种细胞类型的转染效率，同时保持尽可能低的 DNA 量，并与主要竞争对手相比减少所需的试剂量。因此，科学家可以增加转染次数并将每次反应的成本降低多达七倍（表 1）。

表 1：在 24 孔板中，与 Lipofectamine ^® 3000相比，所需的 jetOPTIMUS ^®体积更小。

出色的细胞活力和形态

达到高转染效率通常以细胞完整性为代价，对细胞周期、代谢和信号通路产生不利影响。在 Polyplus-transfection，我们对细胞完整性不做任何妥协：jetOPTIMUS ^®转染试剂对细胞温和，允许从基因表达研究中生成生物学相关数据。

图 2：细胞在转染后 24 小时保持健康并保持良好的形态。根据制造商对每种试剂的建议，用编码 GFP 蛋白的质粒转染 24 小时后，对 MDCK 和 VERO 细胞进行相差显微镜检查。

优化的转染方案

jetOPTIMUS ^®是一种即用型转染试剂，自带复合缓冲液（jetOPTIMUS ^® Buffer）。该方案针对使用简单（所有板尺寸）、培养基兼容性（抗生素、血清）和成本效益（DNA 量和试剂量）进行了优化。

图 3：24 孔板中用于 DNA 转染的 jetOPTIMUS ^®方案的简单性。

应用

DNA转染

CRISPR基因组编辑

病毒生产

jetOPTIMUS ^®转染试剂对于在有血清的经典培养基（如 DMEM）中生长的贴壁细胞中 AAV 和慢病毒的常规病毒生产非常有效。

每批 jetOPTIMUS ^®都按照标准方案在 HeLa 细胞中通过 DNA 转染进行内部测试。每批将提供分析证书。

Polyplus-transfection ^®自 2002 年起获得 ISO 9001 质量管理体系认证；这一级别的认证向全球客户保证，供应商已为产品开发、制造、销售和客户支持建立了可靠且有效的流程

Hieff Canace®耐U+高保真DNA聚合酶混合液(Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix)

发表于2024年11月22日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff Canace®耐U+高保真DNA聚合酶混合液(Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix是即用型2×预混溶液，包含Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase，dNTP以及对高通量测序文库扩增而精心优化的缓冲体系，具有灵敏度高、特异性强、保真性好等优点。在进行扩增反应时，体系只需加入引物和模板即可，简化了实验操作步骤，减少了人为误差，提高了实验通量和结果的重复性。本产品提供是所有试剂组分均经过严格质检，最高程度保障产品优异性能和批次间稳定性。

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

使用说明

使用说明正文

文库扩增反应体系（冰上配制）
将表1中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。
于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。

表1. PCR扩增反应体系

组分	体积 (µL)
模板DNA	X
正向引物 (10-25 μM）	1-2.5
反向引物 (10-25 μM）	1-2.5
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix	25
ddH2O	Total to 50

使用移液器轻轻吹打货震荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底。
将PCR管置于PCR仪中，设置表2所示反应程序，进行PCR扩增。

表2. PCR扩增反应程序

温度	时间	循环数
98°C	1 min	1
98°C	10 sec	1-15（根据实验要求）
60°C	30 sec
72°C	30 sec
72°C	5 min	1
4°C	Hold	–

【注】：

1)预变性温度推荐使用98°C。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；文库为1 min；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。

2) 退火温度推荐使用60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3) 延伸温度和时间：推荐使用72°C，延伸时间根据实际需要进行调整。

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

使用说明

使用说明正文

文库扩增反应体系（冰上配制）
将表1中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。
于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。

表1. PCR扩增反应体系

组分	体积 (µL)
模板DNA	X
正向引物 (10-25 μM）	1-2.5
反向引物 (10-25 μM）	1-2.5
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix	25
ddH2O	Total to 50

使用移液器轻轻吹打货震荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底。
将PCR管置于PCR仪中，设置表2所示反应程序，进行PCR扩增。

表2. PCR扩增反应程序

温度	时间	循环数
98°C	1 min	1
98°C	10 sec	1-15（根据实验要求）
60°C	30 sec
72°C	30 sec
72°C	5 min	1
4°C	Hold	–

【注】：

1)预变性温度推荐使用98°C。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；文库为1 min；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。

3) 延伸温度和时间：推荐使用72°C，延伸时间根据实际需要进行调整。

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Hieff Canace®耐U+高保真DNA聚合酶混合液(Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix)

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磁珠法DNA提取的优势

发表于2024年11月22日由上海金畔生物科技有限公司

1.生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应，能够用DNA提取，满足微量生物样本DNA提取的要求。

2.磁珠表面能够进行化学修饰，从而与DNA进行特异性吸附，去除样品DNA溶液中的抑制物质，如：有机溶剂、去污剂、金属离子、燃料等。

3.生物磁珠表面功能团数量可以控制获得可提取DNA溶液的浓度信息，实现定量的要求。

4.生物磁珠可以通过特殊的合成工艺使其具有超顺磁特性，因此，能够通过仪器进行自动化操作，满足数据库建设对大批量样本提取的需要，减少人为因素。

5.用时少，操作简单，是用于大多数生物检材。

6.低廉，便于广泛应用。由于纳米生物磁珠合成采用的都是低价无机和有机原料。无须特殊的仪器设备，使得zui终的合成和研发成本都很便宜，适合于我国的基本国情和经济现状。

7.适应了建立DNA数据库所需的大量生物样本的提取，为我国DNA数据库的建设铺平了道路，打下了基础。

与传统提取DNA法相比速度更快！纯度更高！一般情况下不需离心操作，单一样品多应在1h内提取完毕。对全血、骨骼、植物等提取DNA在不PCR扩增的情况下能在凝胶电泳中看到较为明亮的条带。

上海金畔生物科技有限公司

Relaxed pBR322 DNA 说明书

发表于2024年11月21日由上海金畔生物科技有限公司

世界*实验材料供应商 inspiralis 上海金畔生物为其中国代理， inspiralis 在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， inspiralis 就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

inspiralis 中国代理, inspiralis 上海代理， inspiralis 北京代理，inspiralis 广东代理， inspiralis 江苏代理inspiralis 湖北代理,inspiralis 天津,inspiralis 黑龙江代理,inspiralis 内蒙古代理,inspiralis 吉林代理,inspiralis 福建代理, inspiralis 江苏代理,inspiralis 浙江代理, inspiralis 四川代理,

inspiralis自1995以来，一直为制药行业和学术界提供抗感染、抗癌研究产品和服务。inspiralis专门供应（包括细菌拓扑异构酶旋转酶，拓扑异构酶IV，人类拓扑异构酶I和II和基板超螺旋和轻松的pBR322和kDNA）和提供拓扑异构酶抑制剂筛选试验（低和高通量），inspiralis的目标是提升研究抗感染、抗癌市场研究效率，以便更好的为客户及人类谋得福利。

Relaxed pBR322 DNA

通过大规模碱裂解方法（Sambrook 等人，1989）¹ 从pBR322的高拷贝数衍生物（Boros 等人，1984）²产生超螺旋质粒pBR322 DNA ，并使用鸡红细胞拓扑异构酶I （Trask和Muller，1983）³。

在TE（10mM Tris-HCl（pH7.5），1mM EDTA）中以1mg / ml的浓度在干冰上运输。储存于4°C。

当在温育缓冲液中37℃，反应体积为30μl，反应体积为30μl，与1U脱乙酰壳多糖旋转酶温育30分钟时，0.5μg松弛的pBR322*转化为超螺旋形式。

Relaxed pBR322 DNA
货号	品名	规格	价格
R5001	Relaxed pBR322 plasmid	50 μg	2246
R2502	Relaxed pBR322 plasmid	250 μg	8258
R5003	Relaxed pBR322 plasmid	500 μg	15960
R1004	Relaxed pBR322 plasmid	1 mg	30658

新型T4 DNA连接酶(400 U/µL)|Novel T4 DNA Ligase

发表于2024年11月20日由上海金畔生物科技有限公司

新型T4 DNA连接酶(400 U/µL)|Novel T4 DNA Ligase

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff^® Novel T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建库过程中DNA片段和接头连接的单酶产品，该产品已经过高通量测

序验证，质量优异。本酶具有高效的连接能力，兼容各类样本，对于复杂结构核酸片段的连接更显优势，比如华大平台的Bubble接头，均可得到优异的测序质量。

产品组分

组分编号	组分名称	规格
组分编号	组分名称	10298ES40	10298ES42	10298ES08
10298-A	Hieff^® Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL)	100 µL	1 mL	5 mL
10298-B	10 × T4 DNA Ligase Buffer	250 μL	2×1.25 mL	10×1.25 mL

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

单位定义

在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反应30 min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

注意事项

1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

使用方法

目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，涡旋瞬离后置于20℃，反应15 min即可。

表1 Adapter Ligation体系

名称	体积（μL）
dA-tailed DNA	60
10 × T4 DNA Ligase Buffer	10
50% PEG 6000	10*
DNA Adapter	X**
Hieff^® Novel T4 DNA Ligase	1-5***
ddH₂O	To 100

【注】：*试剂盒内未提供50% PEG 6000，需自行准备。

**接头用量参考表2。

***Hieff^®Novel T4 DNA Ligase用量可根据需要添加1-5 μL。

Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

表2 500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比	Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比
1 μg	10:1	50 ng	100:1
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	1 ng	200:1
100 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？

第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；

Input DNA摩尔数（pmol）=100 ÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，计算接头添加摩尔数。根据表2查询接头添加比例；

根据表2，查得Input DNA 100 ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

综上，接头可添加3.4 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）

HB220621

Hieff^® Novel T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建库过程中DNA片段和接头连接的单酶产品，该产品已经过高通量测

产品组分

组分编号	组分名称	规格
组分编号	组分名称	10298ES40	10298ES42	10298ES08
10298-A	Hieff^® Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL)	100 µL	1 mL	5 mL
10298-B	10 × T4 DNA Ligase Buffer	250 μL	2×1.25 mL	10×1.25 mL

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

单位定义

在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反应30 min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

注意事项

1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

使用方法

目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，涡旋瞬离后置于20℃，反应15 min即可。

表1 Adapter Ligation体系

名称	体积（μL）
dA-tailed DNA	60
10 × T4 DNA Ligase Buffer	10
50% PEG 6000	10*
DNA Adapter	X**
Hieff^® Novel T4 DNA Ligase	1-5***
ddH₂O	To 100

【注】：*试剂盒内未提供50% PEG 6000，需自行准备。

**接头用量参考表2。

***Hieff^®Novel T4 DNA Ligase用量可根据需要添加1-5 μL。

Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

表2 500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比	Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比
1 μg	10:1	50 ng	100:1
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	1 ng	200:1
100 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？

第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；

Input DNA摩尔数（pmol）=100 ÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，计算接头添加摩尔数。根据表2查询接头添加比例；

根据表2，查得Input DNA 100 ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

综上，接头可添加3.4 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）

HB220621

Q：10298、10299和10301的区别是什么？

A：10298灵敏度更高，尤其适用于cfDNA样本的建库；10299酶连接效率高，宿主大肠杆菌残留低，尤其适合病原检测、NIPT检测等；10301是一款通用型的快速连接酶，广泛适用于分子克隆和NGS建库等。

Q：10298、10299能否用于分子克隆？

A：可以的，将酶稀释到常规用于克隆的T4连接酶浓度，再按说明书操作。可直接用里面的buffer稀释。

新型T4 DNA连接酶(400 U/µL)|Novel T4 DNA Ligase

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Stratec 粪便DNA提取试剂盒 1038111200

发表于2024年11月20日由上海金畔生物科技有限公司

世界*实验材料供应商 Stratec 上海金畔生物为其中国代理， Stratec 在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， Stratec 就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

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STRATEC是的OEM合作伙伴，全自动化分析仪系统，实验室数据管理软件，以及用于分子诊断（MDX）样品制备和稳定的解决方案的世界。
对于超过30年，STRATEC已经在体外诊断（IVD）和生命科学产业玩家的可靠伙伴。凭借其技术和经验STRATEC的深度广度可以提供围绕仪器仪表，软件开发和样品制备的创新技术和科学的解决方案。

STRATEC分子是STRATEC商业提供用于核酸样品收集，稳定和纯化的创新解决方案。

公司成立于1992年的自主开发和研究设施，STRATEC分子已经成为其在开发和商业化产品，为临床诊断和生命科学研究的手动和自动应用专业技术享誉。

STRATEC分子的开发和制造设施位于校园柏林布赫，德国。
信息服务和产品也可以通过任何STRATEC集团位置的获得。

产品名称：Stool Collection Tubes with Stool DNA Stabilizer

中文名称：粪便DNA提取试剂盒

品牌：Stratec

产地：德国

货号：1038111200

规格：50 tubes

保存温度：15-30°C

作用：从粪便样品中提取高纯度的基因组DNA菌等微生物、以及一些未消化食物样品的DNA。由于粪便中存在大量抑制因子，常规的DNA纯化方式不能有效地去除这些杂质，导致下游实验的失败，如PCR不能扩增出所需片段。该试剂盒采用了简便的硅胶柱纯化方式和*的溶液系统，能有效去除动物粪便中各种影响下游实验(如PCR)的抑制因子，并能地回收粪便中的基因组DNA。一次可处理0.05-0.2g样品，纯化的DNA可直接用PCR等实验。

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产品名称： DNA (Double Stranded) from Plasmid

DNA（双链）质粒

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相关产品信息如下：

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概括

订购信息

描述

转染效率

成本效益：更少的 DNA 和更少的试剂

更好的细胞活力

易于使用的协议

应用

质粒转染

基因组编辑

siRNA转染

不同核酸的共转染

质量

jetOPTIMUS ®

概括

订购信息

描述

优化难转染细胞的 DNA 转染效率

先进的纳米技术：使用更少的材料实现基因表达！

出色的细胞活力和形态

优化的转染方案

应用

DNA转染

CRISPR基因组编辑

病毒生产

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