Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)(A0502)
产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
A0502 | Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L) | 50μl | 462.00元 |
本Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)(Cy3-labeled Donkey Anti-Goat IgG(H+L))为进口分装,用于免疫荧光染色。
Cy3是近年新开发的一种红色荧光探针。它比绝大部分其它的红色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,而且背景更低。Cy3的吸收(激发)和发射峰参见下表。
Fluorophore | Absorption Peak (nm) | Emission Peak (nm) |
Cy3 | 550 | 570 |
本抗体为用纯化的山羊IgG免疫驴,然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化,并经过小鼠、大鼠、兔、牛和人等多种IgG反复吸附纯化的高品质二抗。对于经过吸附的这些物种的IgG几乎没有结合能力。
本Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例,推荐的调节范围为1:200-1000。
本抗体如果用于常规的免疫染色,以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计,至少可以检测25次。如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗,至少可以多检测75-125次。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
A0502 | Cy3标记驴抗山羊IgG (H+L) | 50μl |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃避光保存,一年有效。
注意事项:
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
2. 如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗,稀释的荧光标记二抗4℃保存。
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Cy3标记山羊抗兔IgG抗体 Cy3山羊抗兔IgG抗体|Cy3 Goat Anti-Rabbit IgG
Cy3标记山羊抗兔IgG抗体 Cy3山羊抗兔IgG抗体|Cy3 Goat Anti-Rabbit IgG
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
本品是由Cy3标记的山羊抗兔IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从山羊抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的兔IgG分子,也会与其他兔免疫球蛋白的轻链结合。可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应,但不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。
Cy3最大激发波长(Amax)为550 nm,最大发射波长(Emax)为570 nm。本品适合做单标实验。要做多标(multiple-labeling)实验,建议使用与相近物种血清蛋白或者免疫球蛋白预先经过亲和吸附处理的二抗。
产品应用
建议稀释浓度:1:50-1:400(For most applications)。
产品性质
抗体浓度(Antibody Concentration) |
100 µL(0.75 mg/mL) |
缓冲液(Buffer) |
0.005 M磷酸钠,0.125 M氯化钠,pH 7.6 |
稳定剂(Stabilizer) |
7.5 mg/mL BSA(无IgG,蛋白酶),50%甘油 |
防腐剂(Preservative) |
0.025% 叠氮化钠 |
原料来源(Source of Material) |
Jackson Immunoresearch 111-165-003 |
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃分装保存,尽量避免反复冻融。有效期1年。
注意事项
1)本品含叠氮化钠,对人体有害,请注意适当防护。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3)本产品仅作科研用途!
产品描述
本品是由Cy3标记的山羊抗兔IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从山羊抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的兔IgG分子,也会与其他兔免疫球蛋白的轻链结合。可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应,但不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。
Cy3最大激发波长(Amax)为550 nm,最大发射波长(Emax)为570 nm。本品适合做单标实验。要做多标(multiple-labeling)实验,建议使用与相近物种血清蛋白或者免疫球蛋白预先经过亲和吸附处理的二抗。
产品应用
建议稀释浓度:1:50-1:400(For most applications)。
产品性质
抗体浓度(Antibody Concentration) |
100 µL(0.75 mg/mL) |
缓冲液(Buffer) |
0.005 M磷酸钠,0.125 M氯化钠,pH 7.6 |
稳定剂(Stabilizer) |
7.5 mg/mL BSA(无IgG,蛋白酶),50%甘油 |
防腐剂(Preservative) |
0.025% 叠氮化钠 |
原料来源(Source of Material) |
Jackson Immunoresearch 111-165-003 |
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃分装保存,尽量避免反复冻融。有效期1年。
注意事项
1)本品含叠氮化钠,对人体有害,请注意适当防护。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3)本产品仅作科研用途!
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[2] Bao L, Dou G, Tian R, et al. Engineered neutrophil apoptotic bodies ameliorate myocardial infarction by promoting macrophage efferocytosis and inflammation resolution. Bioact Mater. 2021;9:183-197. Published 2021 Aug 27. doi:10.1016/j.bioactmat.2021.08.008(IF:14.593)
[3] Li Z, Wu M, Liu S, et al. Apoptotic vesicles activate autophagy in recipient cells to induce angiogenesis and dental pulp regeneration [published online ahead of print, 2022 May 10]. Mol Ther. 2022;S1525-0016(22)00304-5. doi:10.1016/j.ymthe.2022.05.006(IF:11.454)
[4] Wang D, Zhang L, Hu A, et al. Loss of 4.1N in epithelial ovarian cancer results in EMT and matrix-detached cell death resistance. Protein Cell. 2021;12(2):107-127. doi:10.1007/s13238-020-00723-9(IF:10.164)
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[8] Zhang J, Li C, Zhang L, et al. Andrographolide, a diterpene lactone from the Traditional Chinese Medicine Andrographis paniculate, induces senescence in human lung adenocarcinoma via p53/p21 and Skp2/p27 [published online ahead of print, 2022 Jan 10]. Phytomedicine. 2022;98:153933. doi:10.1016/j.phymed.2022.153933(IF:5.340)
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[11] Zheng JM, Wang SS, Tian X, Che DJ. Sustained activation of C3aR in a human podocyte line impairs the morphological maturation of the cells. Mol Med Rep. 2020;22(6):5326-5338. doi:10.3892/mmr.2020.11626(IF:2.100)
Sulfo-Cy3 NHS ester
Sulfo-Cy3 NHS ester
简要描述:Sulfo-Cy3 NHS ester ,Lumiprobe,Lumiprobe代理,Lumiprobe上海代理,Lumiprobe北京代理,Lumiprobe代理,Lumiprobe一级代理,Lumiprobe国内代理,Lumiprobe代理
详细介绍
产品咨询
Lumiprobe,Lumiprobe代理,Lumiprobe上海代理,Lumiprobe北京代理,Lumiprobe代理,Lumiprobe一级代理,Lumiprobe国内代理,Lumiprobe代理
上海金畔生物科技有限公司Sulfo-Cy3 NHS ester专业代理,具体产品信息欢迎电询:
Sulfo-Cy3 NHS ester
水溶性氨基反应,Cy3染料。有效的标签的蛋白质和肽的纯粹的水溶液,而不需要有机共溶剂。理想的低溶解度的蛋白质,而蛋白质易发生变性。
这是磺化,亲水性和水溶性染料。非磺化Cy3 NHS酯也可。
Cy3 NHS酯取代的Alexa Fluor 546,与Dylight 549的所有应用程序
product |
Cat. # | Quantity | Price |
11320 | 1 mg | 2720 | |
21320 | 5 mg | 6970 | |
41320 | 25 mg | 14450 | |
51320 | 50 mg | 25500 | |
61320 | 100 mg | 41650 |
上海金畔生物科技有限公司
Cy3标记山羊抗大鼠IgG(H+L)(A0507)
产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
A0507 | Cy3标记山羊抗大鼠IgG(H+L) | 100μl | 438.00元 |
本Cy3标记山羊抗大鼠IgG(H+L)(Cy3-labeled Goat Anti-Rat IgG(H+L))为进口分装,用于免疫荧光染色。
Cy3是近年新开发的一种红色荧光探针。它比绝大部分其它的红色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,而且背景更低。Cy3的吸收(激发)和发射峰参见下表。
Fluorophore | Absorption Peak (nm) | Emission Peak (nm) |
Cy3 | 550 | 570 |
本抗体为用纯化的大鼠IgG免疫山羊,然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化,并经过人IgG吸附纯化的优质二抗。对人IgG几乎没有结合能力。
本Cy3标记山羊抗大鼠IgG(H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例,推荐的调节范围为1:200-1000。
本抗体如果用于常规的免疫染色,以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计,至少可以检测50次。如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗,至少可以多检测150-250次。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
A0507 | Cy3标记山羊抗大鼠IgG (H+L) | 100μl |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃避光保存,一年有效。
注意事项:
、 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
2. 如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗,稀释的荧光标记二抗4℃保存。
搜索
酪酰胺信号放大(TSA)试剂盒(Cy5荧光标记)|Cy5 TSA Fluorescence System Kit
酪酰胺信号放大(TSA)试剂盒(Cy5荧光标记)|Cy5 TSA Fluorescence System Kit
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
酪酰胺信号放大(TSA)系统可用于检测荧光免疫细胞化学(ICC)、免疫组织化学(IHC)和原位杂交(ISH)技术中的低丰度靶点,可将信号灵敏度提高100倍。TSA荧光试剂盒使用辣根过氧化物酶(HRP)直接催化固定化酶周围的荧光基团共价沉积,该标记过程迅速(小于10min),沉积标记可直接在标准或共聚焦显微镜下观察。TSA试剂盒可与传统染色方法结合使用用于多色成像,也可以顺序进行两个或更多个酪酰胺反应以标记一个样品上的不同靶标。
TSA技术可用于酶缀合物和合适的生色底物的明场显微镜检查,也可以与抗荧光素酶结合物组合使用。与普通实验相比,使用TSA试剂可显著提高信号灵敏度,同时保持稳定的特异性和分辨率。此外,TSA试剂盒可以显著减少一抗或探针的消耗量。
Yeasen酪酰胺信号放大(TSA)系列产品包括三款试剂盒:试剂盒60405JP荧光标记信号为fluorescein,在激发和发射波长494 nm/517 nm下显微检测信号;试剂盒60406JP荧光标记信号为Cyanine 3,在激发和发射波长550 nm/570 nm下显微检测信号;试剂盒60407JP荧光标记信号为Cyanine 5,在激发和发射波长648 nm/667 nm下显微检测信号。
本试剂盒可使用100~300 sides。
产品组分
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
储存条件 |
60407JP03(100~300 sides) |
|||
60407-A |
1X Amplification Diluent |
30 mL |
2~8℃,避光 |
60407-B |
Cyanine 5 Tyramide |
dry, dissolve in 60 μL DMSO |
-15~-25℃,避光 |
60407-C |
Blocking Reagent |
6 g |
2~8℃,避光 |
储存方法
1X Amplification Diluent和Blocking Reagent,2~8℃,避光保存,有效期6个月。
Cyanine 5 Tyramide,粉末状态,-25~-15℃保存,有效期6个月;溶于DMSO后,2~8℃,避光保存。
实验方法(仅供参考)
一、自备试剂
(1) 1× PBS(Cat#41403JP)/1×D-PBS(Cat#60152JP)
(2) DMSO(Cat#60313JP)
(3) 多聚甲醛固定液(Cat#60536JP)
(4) Triton X-100(Cat#20107JP)
(5) 改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)(Cat#36319JP)
(6) 30% H2O2
(7) 一抗和HRP偶联的二抗
(8) 封闭缓冲液:可将1 g BSA(Cat# 36101JP)溶于100 mL含0.5% Triton X-100 的PBS中配置成封闭缓冲液
(9) 下列试剂仅用于 Biotin-Tyramide 系列实验
l 生物素封闭清洗缓冲液:含 1% BSA 和 0.05% Tween 20(Cat# 60305JP)的PBS
l 未标记的链霉亲和素溶液:含 0.1 mg/mL 链霉亲和素的生物素封闭清洗缓冲液
l 生物素溶液:含 0.5 mg/mL 生物素的生物素封闭清洗缓冲液。
以下参考步骤,可用于细胞或组织切片的酪酰胺染色,每个样品使用100 µL-300 μL 酪酰胺染色液(足以覆盖96孔板的一个孔或约 1 cm2的组织部分),可以根据不同的样本尺寸增加或减少酪酰胺染色液的量。
二、溶液配制
1. 酪酰胺荧光储存液:组分B溶解于60 μL DMSO,配制成储存液,储存液置于2-8℃避光保存。
2. 酪酰胺荧光工作液:每次实验前,需要用组分A按照1:50-1:500的比例稀释酪酰胺荧光储存液,配置成含有0.3%的H2O2的酪酰胺荧光工作液(不同的实验目的,稀释比例需要进行调整以达到最优的结果)。每个载玻片大约需要100-300 μL的酪酰胺荧光工作液。
【注】保证配置酪酰胺荧光工作液用到的H2O2新鲜有效。每次实验操作结束以后,请丢弃未用完的酪酰胺荧光工作液。
三、样本处理
1. 细胞样本
(1) 可选:准备一份阴性对照样本(不孵育一抗的样本)。
(2) 1×PBS清洗细胞两次。
(3) 细胞固定:加入适量 4%多聚甲醛固定液(pH 7.4),4℃放置15min。
(4) 1×PBS清洗细胞两次。
(5) 通透细胞:用配制于PBS中的 0.5% TritonX-100 溶液通透,室温放置10min。或者加入冰上预冷的70%乙醇,在-20℃孵育4h。细胞能在70%乙醇中-20℃的条件下保存一周。
(6)1×PBS 清洗细胞两次。
2.石蜡组织切片
(1) 将石蜡切片放置在60℃的烘箱中 30min。
(2) 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2 次,每次 5min,以彻底脱蜡。
【注】二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中操作。
(3) 室温下,将切片样本浸没于无水乙醇中漂洗2次,每次5min。
(4) 室温下,将切片样本按照顺序依次浸没在不同浓度梯度的乙醇(95%、90%、80%、70%)中,每种浓度各漂
洗1次,每次5min。
(5) 室温下,将切片浸没于纯水中漂洗1次,每次3min,再将切片浸没于1×PBS 中漂洗1次,每次3min,用滤纸
小心吸干切片样本周围多余液体。
(6) 用铅笔在切片样本周围描绘样品轮廓,以便后续进行通透与标记。
(7) 抗原修复:将改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)用微波炉加热至沸腾,将脱完蜡及复水好的片子置于缓冲液中,
间断煮沸10min。抗原修复后取出于室温中缓慢降温。
【注】此过程中,玻片上组织要一直浸没于缓冲液中,以保证组织的抗原修复效果。不同的样本选择不同的抗原修
复方法。
(8) 1×PBS清洗两次。
3. 内源性过氧化物酶灭活(可选)
加入3%过氧化氢覆盖样品并在室温下孵育60min,淬灭样品的内源性过氧化物酶活性。
4. 内源性生物素阻断(可选)
进行Biotin-tyramide/Streptavidin检测时,建议阻断样品中的内源性生物素以减少背景。对于Fluorescein/Cyanine
3/Cyanine 5 -Tyramide的试剂盒来说,可省略此步骤。
(1) 在室温下,将样品与未标记的链霉亲和素溶液一起孵育15min。之后使用生物素封闭清洗缓冲液将样品在室温
下洗涤3次,每次5min。
(2) 在室温下将样品与生物素溶液孵育30min,以封闭链霉亲和素上多余的生物素结合位点。之后用生物素封闭清
洗缓冲液洗涤样品3次,每次5min。
5. 免疫标记
(1) 封闭:用封闭缓冲液室温封闭1h。
(2) 用封闭缓冲液将一抗稀释至适当的浓度。将样品与一抗在室温下孵育1h或4℃过夜。
(3) 室温下1×PBS洗涤3次,每次5min。
(4) 在封闭缓冲液中将HRP偶连的二抗稀释。用该溶液在室温下孵育上述样品1h。
(5) 室温下1×PBS洗涤3次,每次5min。
(6) 每个样品准备100μL-300μL酪酰胺荧光工作液。染色液在室温下避光保存,最长可保存24h。
(7) 将样品与染色液在室温下孵育10min。
(8) 在室温下用1×PBS洗涤3次,每次5min。
(9) 可选:如果使用Biotin-tyramide进行标记,可使用荧光标记的Streptavidin进行荧光显色
(10) 显微镜成像。对于载玻片上的组织样本,请盖上盖玻片并密封后,再显微镜成像。
注意事项
1.不同的荧光试剂盒请按照对应建议波长进行操作。
2.与荧光二抗相比,TSA试剂盒显示出更高的灵敏度和信号。因此,实验时一抗的使用浓度较低,可以降低非特异性结合带来的背景荧光,我们建议设置一抗浓度梯度以找到最佳浓度。
3.如需考虑背景荧光,建议设置未与一抗孵育的阴性对照。确保该阴性对照在孵育和洗涤过程中没有被阳性样品中的试剂交叉污染。对于组织样品,我们还建议对未染色的对照(不添加抗体或酪酰胺)进行成像,以确定组织自发荧光对背景的影响。
4.较高的浓度可能会导致信号过强或背景高,可以从1:50到1:500摸索以找到最佳浓度。
5.可以在每个酪酰胺反应后通过进行HRP淬灭或抗体剥离,依次使用多个酪酰胺扩增试剂盒来标记同一样品上的不同靶标。
6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7.本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。
HB230206
酪酰胺信号放大(TSA)系统可用于检测荧光免疫细胞化学(ICC)、免疫组织化学(IHC)和原位杂交(ISH)技术中的低丰度靶点,可将信号灵敏度提高100倍。TSA荧光试剂盒使用辣根过氧化物酶(HRP)直接催化固定化酶周围的荧光基团共价沉积,该标记过程迅速(小于10min),沉积标记可直接在标准或共聚焦显微镜下观察。TSA试剂盒可与传统染色方法结合使用用于多色成像,也可以顺序进行两个或更多个酪酰胺反应以标记一个样品上的不同靶标。
TSA技术可用于酶缀合物和合适的生色底物的明场显微镜检查,也可以与抗荧光素酶结合物组合使用。与普通实验相比,使用TSA试剂可显著提高信号灵敏度,同时保持稳定的特异性和分辨率。此外,TSA试剂盒可以显著减少一抗或探针的消耗量。
Yeasen酪酰胺信号放大(TSA)系列产品包括三款试剂盒:试剂盒60405JP荧光标记信号为fluorescein,在激发和发射波长494 nm/517 nm下显微检测信号;试剂盒60406JP荧光标记信号为Cyanine 3,在激发和发射波长550 nm/570 nm下显微检测信号;试剂盒60407JP荧光标记信号为Cyanine 5,在激发和发射波长648 nm/667 nm下显微检测信号。
本试剂盒可使用100~300 sides。
产品组分
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
储存条件 |
60407JP03(100~300 sides) |
|||
60407-A |
1X Amplification Diluent |
30 mL |
2~8℃,避光 |
60407-B |
Cyanine 5 Tyramide |
dry, dissolve in 60 μL DMSO |
-15~-25℃,避光 |
60407-C |
Blocking Reagent |
6 g |
2~8℃,避光 |
储存方法
1X Amplification Diluent和Blocking Reagent,2~8℃,避光保存,有效期6个月。
Cyanine 5 Tyramide,粉末状态,-25~-15℃保存,有效期6个月;溶于DMSO后,2~8℃,避光保存。
实验方法(仅供参考)
一、自备试剂
(1) 1× PBS(Cat#41403JP)/1×D-PBS(Cat#60152JP)
(2) DMSO(Cat#60313JP)
(3) 多聚甲醛固定液(Cat#60536JP)
(4) Triton X-100(Cat#20107JP)
(5) 改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)(Cat#36319JP)
(6) 30% H2O2
(7) 一抗和HRP偶联的二抗
(8) 封闭缓冲液:可将1 g BSA(Cat# 36101JP)溶于100 mL含0.5% Triton X-100 的PBS中配置成封闭缓冲液
(9) 下列试剂仅用于 Biotin-Tyramide 系列实验
l 生物素封闭清洗缓冲液:含 1% BSA 和 0.05% Tween 20(Cat# 60305JP)的PBS
l 未标记的链霉亲和素溶液:含 0.1 mg/mL 链霉亲和素的生物素封闭清洗缓冲液
l 生物素溶液:含 0.5 mg/mL 生物素的生物素封闭清洗缓冲液。
以下参考步骤,可用于细胞或组织切片的酪酰胺染色,每个样品使用100 µL-300 μL 酪酰胺染色液(足以覆盖96孔板的一个孔或约 1 cm2的组织部分),可以根据不同的样本尺寸增加或减少酪酰胺染色液的量。
二、溶液配制
1. 酪酰胺荧光储存液:组分B溶解于60 μL DMSO,配制成储存液,储存液置于2-8℃避光保存。
2. 酪酰胺荧光工作液:每次实验前,需要用组分A按照1:50-1:500的比例稀释酪酰胺荧光储存液,配置成含有0.3%的H2O2的酪酰胺荧光工作液(不同的实验目的,稀释比例需要进行调整以达到最优的结果)。每个载玻片大约需要100-300 μL的酪酰胺荧光工作液。
【注】保证配置酪酰胺荧光工作液用到的H2O2新鲜有效。每次实验操作结束以后,请丢弃未用完的酪酰胺荧光工作液。
三、样本处理
1. 细胞样本
(1) 可选:准备一份阴性对照样本(不孵育一抗的样本)。
(2) 1×PBS清洗细胞两次。
(3) 细胞固定:加入适量 4%多聚甲醛固定液(pH 7.4),4℃放置15min。
(4) 1×PBS清洗细胞两次。
(5) 通透细胞:用配制于PBS中的 0.5% TritonX-100 溶液通透,室温放置10min。或者加入冰上预冷的70%乙醇,在-20℃孵育4h。细胞能在70%乙醇中-20℃的条件下保存一周。
(6)1×PBS 清洗细胞两次。
2.石蜡组织切片
(1) 将石蜡切片放置在60℃的烘箱中 30min。
(2) 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片 2 次,每次 5min,以彻底脱蜡。
【注】二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中操作。
(3) 室温下,将切片样本浸没于无水乙醇中漂洗2次,每次5min。
(4) 室温下,将切片样本按照顺序依次浸没在不同浓度梯度的乙醇(95%、90%、80%、70%)中,每种浓度各漂
洗1次,每次5min。
(5) 室温下,将切片浸没于纯水中漂洗1次,每次3min,再将切片浸没于1×PBS 中漂洗1次,每次3min,用滤纸
小心吸干切片样本周围多余液体。
(6) 用铅笔在切片样本周围描绘样品轮廓,以便后续进行通透与标记。
(7) 抗原修复:将改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)用微波炉加热至沸腾,将脱完蜡及复水好的片子置于缓冲液中,
间断煮沸10min。抗原修复后取出于室温中缓慢降温。
【注】此过程中,玻片上组织要一直浸没于缓冲液中,以保证组织的抗原修复效果。不同的样本选择不同的抗原修
复方法。
(8) 1×PBS清洗两次。
3. 内源性过氧化物酶灭活(可选)
加入3%过氧化氢覆盖样品并在室温下孵育60min,淬灭样品的内源性过氧化物酶活性。
4. 内源性生物素阻断(可选)
进行Biotin-tyramide/Streptavidin检测时,建议阻断样品中的内源性生物素以减少背景。对于Fluorescein/Cyanine
3/Cyanine 5 -Tyramide的试剂盒来说,可省略此步骤。
(1) 在室温下,将样品与未标记的链霉亲和素溶液一起孵育15min。之后使用生物素封闭清洗缓冲液将样品在室温
下洗涤3次,每次5min。
(2) 在室温下将样品与生物素溶液孵育30min,以封闭链霉亲和素上多余的生物素结合位点。之后用生物素封闭清
洗缓冲液洗涤样品3次,每次5min。
5. 免疫标记
(1) 封闭:用封闭缓冲液室温封闭1h。
(2) 用封闭缓冲液将一抗稀释至适当的浓度。将样品与一抗在室温下孵育1h或4℃过夜。
(3) 室温下1×PBS洗涤3次,每次5min。
(4) 在封闭缓冲液中将HRP偶连的二抗稀释。用该溶液在室温下孵育上述样品1h。
(5) 室温下1×PBS洗涤3次,每次5min。
(6) 每个样品准备100μL-300μL酪酰胺荧光工作液。染色液在室温下避光保存,最长可保存24h。
(7) 将样品与染色液在室温下孵育10min。
(8) 在室温下用1×PBS洗涤3次,每次5min。
(9) 可选:如果使用Biotin-tyramide进行标记,可使用荧光标记的Streptavidin进行荧光显色
(10) 显微镜成像。对于载玻片上的组织样本,请盖上盖玻片并密封后,再显微镜成像。
注意事项
1.不同的荧光试剂盒请按照对应建议波长进行操作。
2.与荧光二抗相比,TSA试剂盒显示出更高的灵敏度和信号。因此,实验时一抗的使用浓度较低,可以降低非特异性结合带来的背景荧光,我们建议设置一抗浓度梯度以找到最佳浓度。
3.如需考虑背景荧光,建议设置未与一抗孵育的阴性对照。确保该阴性对照在孵育和洗涤过程中没有被阳性样品中的试剂交叉污染。对于组织样品,我们还建议对未染色的对照(不添加抗体或酪酰胺)进行成像,以确定组织自发荧光对背景的影响。
4.较高的浓度可能会导致信号过强或背景高,可以从1:50到1:500摸索以找到最佳浓度。
5.可以在每个酪酰胺反应后通过进行HRP淬灭或抗体剥离,依次使用多个酪酰胺扩增试剂盒来标记同一样品上的不同靶标。
6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7.本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。
HB230206
Q1:可以做冰冻切片吗?
A:可以。
Q1:多重染色的TSA, 第一个酪酰胺反应后怎么染下一个?
A:①抗体剥离:使用合适的 buffer 进行微波间断加热处理 10-15 min,buffer 可以使用 0.1 M 柠檬酸钠缓冲液 (pH 6.0),也可以按照您的需要选择别的 buffer, 比如 Tris-EDTA Buffer (10mM Tris Base, 1mM EDTA Solution, 0.05% Tween 20, pH 9.0)。
②在室温下用 1×PBS 洗涤3 次,每次 5 min。每一轮染色结束后可通过荧光显微镜确认染色情况。
③从封闭(步骤 1) 开始进行下一个靶标的荧光免疫。
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Cy3标记的驴抗山羊IgG Donkey Anti-Goat IgG(H+L)
Cy3标记的驴抗山羊IgG Donkey Anti-Goat IgG(H+L)
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
Cy3-AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG(H+L) |
34855JP60 |
100 μL |
产品简介
本品是由Cy3标记的驴抗山羊IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从山羊抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的山羊IgG分子,也会与其他山羊免疫球蛋白的轻链结合。可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应,但不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。
Cy3最大激发波长(Amax)为550nm,最大发射波长(Emax)为570nm。本品适合做单标实验,广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学(ICC),流式细胞术(FC)以及免疫组化(IHC)等。要做多标(multiple-labeling)实验,建议使用与相近物种血清蛋白或者免疫球蛋白预先经过亲和吸附处理的二抗。
产品信息
抗体浓度(Antibody Concentration) |
100 µL (0.75 mg/ml) |
缓冲液(Buffer) |
0.005M 磷酸钠,0.125M 氯化钠,pH7.6 |
稳定剂(Stabilizer) |
7.5mg/ml BSA(无IgG,无蛋白酶) |
防腐剂(Preservative) |
0.025%叠氮化钠 |
产品应用
建议稀释浓度:1:50-1:400(for most application)
储存条件
-25 ~ -15℃分装保存,尽量避免反复冻融。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
2)本产品仅作科研用途!
Ver.CN20240228
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
Cy3-AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG(H+L) |
34855JP60 |
100 μL |
产品简介
本品是由Cy3标记的驴抗山羊IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从山羊抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的山羊IgG分子,也会与其他山羊免疫球蛋白的轻链结合。可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应,但不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。
Cy3最大激发波长(Amax)为550nm,最大发射波长(Emax)为570nm。本品适合做单标实验,广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学(ICC),流式细胞术(FC)以及免疫组化(IHC)等。要做多标(multiple-labeling)实验,建议使用与相近物种血清蛋白或者免疫球蛋白预先经过亲和吸附处理的二抗。
产品信息
抗体浓度(Antibody Concentration) |
100 µL (0.75 mg/ml) |
缓冲液(Buffer) |
0.005M 磷酸钠,0.125M 氯化钠,pH7.6 |
稳定剂(Stabilizer) |
7.5mg/ml BSA(无IgG,无蛋白酶) |
防腐剂(Preservative) |
0.025%叠氮化钠 |
产品应用
建议稀释浓度:1:50-1:400(for most application)
储存条件
-25 ~ -15℃分装保存,尽量避免反复冻融。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
2)本产品仅作科研用途!
Ver.CN20240228
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mrc-holland EK5-Cy5说明书
mrc-holland EK5-Cy5说明书
SALSA MLPA A054 Campylobacter MBiT混合1 probemix 基础研究
SALSA MLPA A054 Campylobacter MBiT mix 1 probemix
这SALSA ® MLPA ®套件是用于基础研究和仅供经验丰富的用户防止洗钱法!该试剂盒使您能够量化基因或染色体区域,其中拷贝数变化的发生或相关性尚未确定。因此,它并不总能为您提供明确的答案,并且结果的解释可能非常复杂。
应用: 空肠弯曲杆菌菌株的基因分型
: 弯曲杆菌
版本: A2
自 2014-10-24 出售
编号 |
描述 |
价钱 |
A054-025R |
SALSA MLPA A054 Campylobacter MBiT mix 1 probemix – 25 rxn |
€86,63 |
A054-050R |
SALSA MLPA A054 Campylobacter MBiT mix 1 probemix – 50 rxn |
€173,25 |
A054-100R |
SALSA MLPA A054 Campylobacter MBiT mix 1 probemix – 100 rxn |
€346,50 |
EK1-FAM |
SALSA MLPA EK1试剂盒 – 100 rxn – FAM |
€294,00 |
EK1-Cy5的 |
SALSA MLPA EK1试剂盒 – 100 rxn – Cy5 |
€294,00 |
EK5-FAM |
SALSA MLPA EK5试剂盒 – 500 rxn – FAM |
€1355,00 |
EK5-Cy5的 |
SALSA MLPA EK5试剂盒 – 500 rxn – Cy5 |
€1355,00 |
请注意,执行MLPA需要使用probemix和试剂盒。 |
下载产品说明A054-A2-0916 A055-A2-0916弯曲杆菌MBiT-v04.pdf(420,04 KB)探针序列A054 A2-0614,A2-0715,A2-0916.xls(36,50 KB)无安全数据Sheet Required Statement.pdf(199,99 KB)
说明
重要说明!
A054和A055探针混合物的方案在以下方面与标准MLPA方案不同:
1)杂交步骤可在1小时内进行,与16小时相反。
2)MLPA缓冲液已包含在探针混合物和稀释缓冲液中。
3)MLPA实验可以单独使用A054或A055,以及在单一反应中组合的两种探针混合物。如果要在低分辨率装置(例如琼脂糖凝胶电泳)上检测MLPA产品,我们建议在不同的反应中使用每种探针混合物。在这种情况下,在杂交步骤之前,将1.5μl探针混合物与1.5μl封闭的稀释缓冲液混合。
在高分辨率设备(例如毛细管测序仪)上分析结果时,将每种探针混合物混合1.5μl。无需额外的稀释缓冲液。
A054 / A055的逐步MLPA协议可以在本文档的后找到。
此SALSA ® MLPA ® probemix被设计成通过检测18个DNA序列的存在(或不存在)亚型空肠弯曲杆菌和大肠。注意,即使不准确地位于连接位点上,探针检测到的序列中的遗传变异也可导致相对峰高的减少或不存在。此外,一些探针信号对样品纯度更敏感,实验条件变化较小。
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上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商
1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。
2:产品种类齐全,经营超过700多品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。
3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。
4:富有竞争良好的信誉,大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、国药、fisher等知药企。
6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。
7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发,欢迎合作。
酪酰胺信号放大(TSA)试剂盒(Cy3荧光标记)|Cy3 TSA Fluorescence System Kit
酪酰胺信号放大(TSA)试剂盒(Cy3荧光标记)|Cy3 TSA Fluorescence System Kit
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
酪酰胺信号放大(TSA)系统可用于检测荧光免疫细胞化学(ICC)、免疫组织化学(IHC)和原位杂交(ISH)技术中的低丰度靶点,可将信号灵敏度提高100倍。TSA荧光试剂盒使用辣根过氧化物酶(HRP)直接催化固定化酶周围的荧光基团共价沉积,该标记过程迅速(小于10min),沉积标记可直接在标准或共聚焦显微镜下观察。TSA试剂盒可与传统染色方法结合使用用于多色成像,也可以顺序进行两个或更多个酪酰胺反应以标记一个样品上的不同靶标。
TSA技术可用于酶缀合物和合适的生色底物的明场显微镜检查,也可以与抗荧光素酶结合物组合使用。与普通实验相比,使用TSA试剂可显著提高信号灵敏度,同时保持稳定的特异性和分辨率。此外,TSA试剂盒可以显著减少一抗或探针的消耗量。
Yeasen酪酰胺信号放大(TSA)系列产品包括三款试剂盒:试剂盒60405JP荧光标记信号为fluorescein,在激发和发射波长494 nm/517 nm下显微检测信号;试剂盒60406JP荧光标记信号为Cyanine 3,在激发和发射波长550 nm/570 nm下显微检测信号;试剂盒60407JP荧光标记信号为Cyanine 5,在激发和发射波长648 nm/667 nm下显微检测信号。
本试剂盒可使用100~300 sides。
产品信息
货号 |
60406JP03 |
规格 |
1 kit |
价格 |
3,125 |
组分信息
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
储存条件 |
60406JP03(100~300 sides) |
|||
60406-A |
1X Amplification Diluent |
30 mL |
2~8℃,避光 |
60406-B |
Cyanine 3 Tyramide |
dry, dissolve in 60 μL DMSO |
-15~-25℃,避光 |
60406-C |
Blocking Reagent |
6 g |
2~8℃,避光 |
储存条件
1X Amplification Diluent和Blocking Reagent,2~8℃,避光保存,有效期6个月。
Cyanine 3 Tyramide,粉末状态,-25~-15℃保存,有效期6个月;溶于DMSO后,2~8℃,避光保存。
使用说明(仅供参考)
一. 自备试剂
(1) 1× PBS(Cat#41403JP)/1×D-PBS(Cat#60152JP)
(2) DMSO(Cat#60313JP)
(3) 多聚甲醛固定液(Cat#60536JP)
(4) Triton X-100(Cat#20107JP)
(5) 改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)(Cat#36319JP)
(6) 30% H2O2
(7) 一抗和HRP偶联的二抗
(8) 封闭缓冲液:可将1 g BSA(Cat# 36101JP)溶于100 mL含0.5% Triton X-100 的PBS中配置成封闭缓冲液
(9) 下列试剂仅用于Biotin-Tyramide系列实验:
a. 生物素封闭清洗缓冲液:含 1% BSA 和 0.05% Tween 20(Cat# 60305JP)的PBS
b. 未标记的链霉亲和素溶液:含 0.1 mg/mL 链霉亲和素的生物素封闭清洗缓冲液
c. 生物素溶液:含 0.5 mg/mL 生物素的生物素封闭清洗缓冲液。
以下参考步骤,可用于细胞或组织切片的酪酰胺染色,每个样品使用100 µL-300 μL 酪酰胺染色液(足以覆盖96孔板的一个孔或约1 cm2的组织部分),可以根据不同的样本尺寸增加或减少酪酰胺染色液的量。
二. 溶液配制
1. 酪酰胺荧光储存液:组分B溶解于60 μL DMSO,配制成储存液,储存液置于2-8℃避光保存。
2. 酪酰胺荧光工作液:每次实验前,需要用组分A按照1:50-1:500的比例稀释酪酰胺荧光储存液,配置成含有0.3%的H2O2的酪酰胺荧光工作液(不同的实验目的,稀释比例需要进行调整以达到最优的结果)。每个载玻片大约需要100-300 μL的酪酰胺荧光工作液。
【注】保证配置酪酰胺荧光工作液用到的H2O2新鲜有效。每次实验操作结束以后,请丢弃未用完的酪酰胺荧光工作液。
三、样本处理
1. 细胞样本
(1) 可选:准备一份阴性对照样本(不孵育一抗的样本)。
(2) 1×PBS清洗细胞两次。
(3) 细胞固定:加入适量 4%多聚甲醛固定液(pH 7.4),4℃放置15 min。
(4) 1×PBS清洗细胞两次。
(5) 通透细胞:用配制于PBS中的0.5% TritonX-100 溶液通透,室温放置10 min。或者加入冰上预冷的70%乙醇,在-20℃孵育4 h。细胞能在70%乙醇中-20℃的条件下保存一周。
(6) 1×PBS清洗细胞两次。
2. 石蜡组织切片
(1) 将石蜡切片放置在60℃的烘箱中30 min。
(2) 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片2次,每次5 min,以彻底脱蜡。
【注】二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中操作。
(3) 室温下,将切片样本浸没于无水乙醇中漂洗2次,每次5 min。
(4) 室温下,将切片样本按照顺序依次浸没在不同浓度梯度的乙醇(95%、90%、80%、70%)中,每种浓度各漂
洗1次,每次5 min。
(5) 室温下,将切片浸没于纯水中漂洗1次,每次3 min,再将切片浸没于1×PBS 中漂洗1次,每次3 min,用滤纸
小心吸干切片样本周围多余液体。
(6) 用铅笔在切片样本周围描绘样品轮廓,以便后续进行通透与标记。
(7) 抗原修复:将改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)用微波炉加热至沸腾,将脱完蜡及复水好的片子置于缓冲液中,
间断煮沸10 min。抗原修复后取出于室温中缓慢降温。
【注】此过程中,玻片上组织要一直浸没于缓冲液中,以保证组织的抗原修复效果。不同的样本选择不同的抗原修
复方法。
(8) 1×PBS清洗两次。
3. 内源性过氧化物酶灭活(可选)
加入3%过氧化氢覆盖样品并在室温下孵育60 min,淬灭样品的内源性过氧化物酶活性。
4. 内源性生物素阻断(可选)
进行Biotin-tyramide/Streptavidin检测时,建议阻断样品中的内源性生物素以减少背景。对于Fluorescein/Cyanine 3/Cyanine 5 -Tyramide的试剂盒来说,可省略此步骤。
(1) 在室温下,将样品与未标记的链霉亲和素溶液一起孵育15 min。之后使用生物素封闭清洗缓冲液将样品在室温下洗涤3次,每次5 min。
(2) 在室温下将样品与生物素溶液孵育30 min,以封闭链霉亲和素上多余的生物素结合位点。之后用生物素封闭清洗缓冲液洗涤样品3次,每次5 min。
5. 免疫标记
(1) 封闭:用封闭缓冲液室温封闭1 h。
(2) 用封闭缓冲液将一抗稀释至适当的浓度。将样品与一抗在室温下孵育1 h或4℃过夜。
(3) 室温下1×PBS洗涤3次,每次5 min
(4) 在封闭缓冲液中将HRP偶连的二抗稀释。用该溶液在室温下孵育上述样品1 h。
(5) 室温下1×PBS洗涤3次,每次5 min。
(6) 每个样品准备100 μL-300 μL酪酰胺荧光工作液。染色液在室温下避光保存,最长可保存24 h。
(7) 将样品与染色液在室温下孵育10 min。
(8) 在室温下用1×PBS洗涤3次,每次5 min。
(9) 可选:如果使用Biotin-tyramide进行标记,可使用荧光标记的Streptavidin进行荧光显色
(10) 显微镜成像。对于载玻片上的组织样本,请盖上盖玻片并密封后,再显微镜成像。
注意事项
1. 不同的荧光试剂盒请按照对应建议波长进行操作。
2. 与荧光二抗相比,TSA试剂盒显示出更高的灵敏度和信号。因此,实验时一抗的使用浓度较低,可以降低非特异性结合带来的背景荧光,我们建议设置一抗浓度梯度以找到最佳浓度。
3. 如需考虑背景荧光,建议设置未与一抗孵育的阴性对照。确保该阴性对照在孵育和洗涤过程中没有被阳性样品中的试剂交叉污染。对于组织样品,我们还建议对未染色的对照(不添加抗体或酪酰胺)进行成像,以确定组织自发荧光对背景的影响。
4. 较高的浓度可能会导致信号过强或背景高,可以从1:50到1:500摸索以找到最佳浓度。
5. 可以在每个酪酰胺反应后通过进行HRP淬灭或抗体剥离,依次使用多个酪酰胺扩增试剂盒来标记同一样品上的不同靶标。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7. 本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。
Ver.CN20230424
酪酰胺信号放大(TSA)系统可用于检测荧光免疫细胞化学(ICC)、免疫组织化学(IHC)和原位杂交(ISH)技术中的低丰度靶点,可将信号灵敏度提高100倍。TSA荧光试剂盒使用辣根过氧化物酶(HRP)直接催化固定化酶周围的荧光基团共价沉积,该标记过程迅速(小于10min),沉积标记可直接在标准或共聚焦显微镜下观察。TSA试剂盒可与传统染色方法结合使用用于多色成像,也可以顺序进行两个或更多个酪酰胺反应以标记一个样品上的不同靶标。
TSA技术可用于酶缀合物和合适的生色底物的明场显微镜检查,也可以与抗荧光素酶结合物组合使用。与普通实验相比,使用TSA试剂可显著提高信号灵敏度,同时保持稳定的特异性和分辨率。此外,TSA试剂盒可以显著减少一抗或探针的消耗量。
Yeasen酪酰胺信号放大(TSA)系列产品包括三款试剂盒:试剂盒60405JP荧光标记信号为fluorescein,在激发和发射波长494 nm/517 nm下显微检测信号;试剂盒60406JP荧光标记信号为Cyanine 3,在激发和发射波长550 nm/570 nm下显微检测信号;试剂盒60407JP荧光标记信号为Cyanine 5,在激发和发射波长648 nm/667 nm下显微检测信号。
本试剂盒可使用100~300 sides。
产品信息
货号 |
60406JP03 |
规格 |
1 kit |
价格 |
3,125 |
组分信息
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
储存条件 |
60406JP03(100~300 sides) |
|||
60406-A |
1X Amplification Diluent |
30 mL |
2~8℃,避光 |
60406-B |
Cyanine 3 Tyramide |
dry, dissolve in 60 μL DMSO |
-15~-25℃,避光 |
60406-C |
Blocking Reagent |
6 g |
2~8℃,避光 |
储存条件
1X Amplification Diluent和Blocking Reagent,2~8℃,避光保存,有效期6个月。
Cyanine 3 Tyramide,粉末状态,-25~-15℃保存,有效期6个月;溶于DMSO后,2~8℃,避光保存。
使用说明(仅供参考)
一. 自备试剂
(1) 1× PBS(Cat#41403JP)/1×D-PBS(Cat#60152JP)
(2) DMSO(Cat#60313JP)
(3) 多聚甲醛固定液(Cat#60536JP)
(4) Triton X-100(Cat#20107JP)
(5) 改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)(Cat#36319JP)
(6) 30% H2O2
(7) 一抗和HRP偶联的二抗
(8) 封闭缓冲液:可将1 g BSA(Cat# 36101JP)溶于100 mL含0.5% Triton X-100 的PBS中配置成封闭缓冲液
(9) 下列试剂仅用于Biotin-Tyramide系列实验:
a. 生物素封闭清洗缓冲液:含 1% BSA 和 0.05% Tween 20(Cat# 60305JP)的PBS
b. 未标记的链霉亲和素溶液:含 0.1 mg/mL 链霉亲和素的生物素封闭清洗缓冲液
c. 生物素溶液:含 0.5 mg/mL 生物素的生物素封闭清洗缓冲液。
以下参考步骤,可用于细胞或组织切片的酪酰胺染色,每个样品使用100 µL-300 μL 酪酰胺染色液(足以覆盖96孔板的一个孔或约1 cm2的组织部分),可以根据不同的样本尺寸增加或减少酪酰胺染色液的量。
二. 溶液配制
1. 酪酰胺荧光储存液:组分B溶解于60 μL DMSO,配制成储存液,储存液置于2-8℃避光保存。
2. 酪酰胺荧光工作液:每次实验前,需要用组分A按照1:50-1:500的比例稀释酪酰胺荧光储存液,配置成含有0.3%的H2O2的酪酰胺荧光工作液(不同的实验目的,稀释比例需要进行调整以达到最优的结果)。每个载玻片大约需要100-300 μL的酪酰胺荧光工作液。
【注】保证配置酪酰胺荧光工作液用到的H2O2新鲜有效。每次实验操作结束以后,请丢弃未用完的酪酰胺荧光工作液。
三、样本处理
1. 细胞样本
(1) 可选:准备一份阴性对照样本(不孵育一抗的样本)。
(2) 1×PBS清洗细胞两次。
(3) 细胞固定:加入适量 4%多聚甲醛固定液(pH 7.4),4℃放置15 min。
(4) 1×PBS清洗细胞两次。
(5) 通透细胞:用配制于PBS中的0.5% TritonX-100 溶液通透,室温放置10 min。或者加入冰上预冷的70%乙醇,在-20℃孵育4 h。细胞能在70%乙醇中-20℃的条件下保存一周。
(6) 1×PBS清洗细胞两次。
2. 石蜡组织切片
(1) 将石蜡切片放置在60℃的烘箱中30 min。
(2) 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片2次,每次5 min,以彻底脱蜡。
【注】二甲苯有毒,易挥发,请在通风橱中操作。
(3) 室温下,将切片样本浸没于无水乙醇中漂洗2次,每次5 min。
(4) 室温下,将切片样本按照顺序依次浸没在不同浓度梯度的乙醇(95%、90%、80%、70%)中,每种浓度各漂
洗1次,每次5 min。
(5) 室温下,将切片浸没于纯水中漂洗1次,每次3 min,再将切片浸没于1×PBS 中漂洗1次,每次3 min,用滤纸
小心吸干切片样本周围多余液体。
(6) 用铅笔在切片样本周围描绘样品轮廓,以便后续进行通透与标记。
(7) 抗原修复:将改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)用微波炉加热至沸腾,将脱完蜡及复水好的片子置于缓冲液中,
间断煮沸10 min。抗原修复后取出于室温中缓慢降温。
【注】此过程中,玻片上组织要一直浸没于缓冲液中,以保证组织的抗原修复效果。不同的样本选择不同的抗原修
复方法。
(8) 1×PBS清洗两次。
3. 内源性过氧化物酶灭活(可选)
加入3%过氧化氢覆盖样品并在室温下孵育60 min,淬灭样品的内源性过氧化物酶活性。
4. 内源性生物素阻断(可选)
进行Biotin-tyramide/Streptavidin检测时,建议阻断样品中的内源性生物素以减少背景。对于Fluorescein/Cyanine 3/Cyanine 5 -Tyramide的试剂盒来说,可省略此步骤。
(1) 在室温下,将样品与未标记的链霉亲和素溶液一起孵育15 min。之后使用生物素封闭清洗缓冲液将样品在室温下洗涤3次,每次5 min。
(2) 在室温下将样品与生物素溶液孵育30 min,以封闭链霉亲和素上多余的生物素结合位点。之后用生物素封闭清洗缓冲液洗涤样品3次,每次5 min。
5. 免疫标记
(1) 封闭:用封闭缓冲液室温封闭1 h。
(2) 用封闭缓冲液将一抗稀释至适当的浓度。将样品与一抗在室温下孵育1 h或4℃过夜。
(3) 室温下1×PBS洗涤3次,每次5 min
(4) 在封闭缓冲液中将HRP偶连的二抗稀释。用该溶液在室温下孵育上述样品1 h。
(5) 室温下1×PBS洗涤3次,每次5 min。
(6) 每个样品准备100 μL-300 μL酪酰胺荧光工作液。染色液在室温下避光保存,最长可保存24 h。
(7) 将样品与染色液在室温下孵育10 min。
(8) 在室温下用1×PBS洗涤3次,每次5 min。
(9) 可选:如果使用Biotin-tyramide进行标记,可使用荧光标记的Streptavidin进行荧光显色
(10) 显微镜成像。对于载玻片上的组织样本,请盖上盖玻片并密封后,再显微镜成像。
注意事项
1. 不同的荧光试剂盒请按照对应建议波长进行操作。
2. 与荧光二抗相比,TSA试剂盒显示出更高的灵敏度和信号。因此,实验时一抗的使用浓度较低,可以降低非特异性结合带来的背景荧光,我们建议设置一抗浓度梯度以找到最佳浓度。
3. 如需考虑背景荧光,建议设置未与一抗孵育的阴性对照。确保该阴性对照在孵育和洗涤过程中没有被阳性样品中的试剂交叉污染。对于组织样品,我们还建议对未染色的对照(不添加抗体或酪酰胺)进行成像,以确定组织自发荧光对背景的影响。
4. 较高的浓度可能会导致信号过强或背景高,可以从1:50到1:500摸索以找到最佳浓度。
5. 可以在每个酪酰胺反应后通过进行HRP淬灭或抗体剥离,依次使用多个酪酰胺扩增试剂盒来标记同一样品上的不同靶标。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7. 本产品仅用于科研用途,禁止用于人身上。
Ver.CN20230424
Q1:可以做冰冻切片吗?
A:可以。
Q1:多重染色的TSA, 第一个酪酰胺反应后怎么染下一个?
A:①抗体剥离:使用合适的 buffer 进行微波间断加热处理 10-15 min,buffer 可以使用 0.1 M 柠檬酸钠缓冲液 (pH 6.0),也可以按照您的需要选择别的 buffer, 比如 Tris-EDTA Buffer (10mM Tris Base, 1mM EDTA Solution, 0.05% Tween 20, pH 9.0)。
②在室温下用 1×PBS 洗涤3 次,每次 5 min。每一轮染色结束后可通过荧光显微镜确认染色情况。
③从封闭(步骤 1) 开始进行下一个靶标的荧光免疫。
暂无内容
Cy3标记链霉亲和素 链霉亲和素|Cy3-conjugated Streptavidin
Cy3标记链霉亲和素 链霉亲和素|Cy3-conjugated Streptavidin
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌(streptomyces avidinii)的生物素结合蛋白质,其非特异性结合远比亲和素低,且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比,链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷,不含有碳水化合物等更有利的化学性质,所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。
本品是由Cy3标记的链霉亲和素,其最大激发波长为550 nm,最大发射波长为570 nm。建议工作液浓度为:0.5-2 µg/mL for most applications。
产品性质
抗体浓度(Antibody Concentration) |
1.8 mg/mL |
缓冲液(Buffer) |
0.01 M磷酸钠,0.25 M氯化钠,pH 7.6 |
稳定剂(Stabilizer) |
15 mg/mL BSA(无IgG,蛋白酶) |
防腐剂(Preservative) |
0.05%叠氮化钠 |
荧光素(Fluorophore) |
Cy3 bis-NHS ester Amax=550 nm; Emax=570 nm |
运输与保存方法
冰袋运输。4℃分装保存,尽量避免反复冻融。
注意事项
1)本品含叠氮化钠,对人体有害,请注意适当防护。
2)建议工作液现配现用。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4)本产品仅作科研用途!
储存液制备方法
本品以冻干粉的形式提供,需要先溶解配制成相应浓度的储存液后再稀释使用。
1)溶解方法:用0.65 mL ddH2O充分溶解冻干粉(如果不澄清,可对其离心处理),混匀,即可得到100%原液,该溶液可在4℃稳定保存6周;
2)为了更长期保存,可将原液分装后于≤-70℃冻存,不可反复冻融。或者向上述原液中加入等体积甘油(即甘油终浓度为50%),混匀后分装于-20℃冻存,可稳定保存1年。
注:① 此处稀释用甘油须是ACS级或者更高级别甘油。② 加入等体积甘油后,Cys-链霉亲和素原液中各组分均变为原来的1/2.
链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌(streptomyces avidinii)的生物素结合蛋白质,其非特异性结合远比亲和素低,且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比,链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷,不含有碳水化合物等更有利的化学性质,所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。
本品是由Cy3标记的链霉亲和素,其最大激发波长为550 nm,最大发射波长为570 nm。建议工作液浓度为:0.5-2 µg/mL for most applications。
产品性质
抗体浓度(Antibody Concentration) |
1.8 mg/mL |
缓冲液(Buffer) |
0.01 M磷酸钠,0.25 M氯化钠,pH 7.6 |
稳定剂(Stabilizer) |
15 mg/mL BSA(无IgG,蛋白酶) |
防腐剂(Preservative) |
0.05%叠氮化钠 |
荧光素(Fluorophore) |
Cy3 bis-NHS ester Amax=550 nm; Emax=570 nm |
运输与保存方法
冰袋运输。4℃分装保存,尽量避免反复冻融。
注意事项
1)本品含叠氮化钠,对人体有害,请注意适当防护。
2)建议工作液现配现用。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4)本产品仅作科研用途!
储存液制备方法
本品以冻干粉的形式提供,需要先溶解配制成相应浓度的储存液后再稀释使用。
1)溶解方法:用0.65 mL ddH2O充分溶解冻干粉(如果不澄清,可对其离心处理),混匀,即可得到100%原液,该溶液可在4℃稳定保存6周;
2)为了更长期保存,可将原液分装后于≤-70℃冻存,不可反复冻融。或者向上述原液中加入等体积甘油(即甘油终浓度为50%),混匀后分装于-20℃冻存,可稳定保存1年。
注:① 此处稀释用甘油须是ACS级或者更高级别甘油。② 加入等体积甘油后,Cys-链霉亲和素原液中各组分均变为原来的1/2.
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[1] Wu J, Wang J, Wang L, Huang Y. Topical retinoic acid induces corneal strengthening by upregulating transglutaminase 2 in murine cornea. Exp Eye Res. 2022;214:108850. doi:10.1016/j.exer.2021.108850(IF:3.467)
kainos CY-4000**~~
kainos CY-4000**~~
在第一个反应中,将含有 FGF-23 的样品与固定化抗体在微量滴定孔中孵育。样品中的 FGF-23 被抗体捕获。在该反应结束时,洗涤孔以去除未结合的 FGF-23 和其他成分。
在第二个反应中,这种固定化的 FGF-23 与 HRP 标记的抗体一起温育形成“三明治”复合物:
抗 FGF-23 抗体 – N 端 FGF-23 C 端 – HRP 标记的抗 FGF-23 抗体
在该反应结束时,洗涤孔以除去未结合的组分。
在酶反应中,固定在孔上的夹心复合物与底物溶液一起温育,然后通过分光光度微量滴定板读数器进行测量。与孔结合的复合物的酶活性与样品中 FGF-23 的量成正比。
通过绘制吸光度与 FGF-23 标准的每个浓度来生成标准曲线。样品中 FGF-23 的浓度由该曲线确定。
A.产品信息
1) FGF-23 ELISA 试剂盒包含的测试数量/价格
产品名称 | 货号 | 包装尺寸 | 价钱 |
---|---|---|---|
FGF-23 ELISA 试剂盒 | CY-4000 | 96 项测试 | 9500 |