CMV-Luc-Blasticidin Lentivirus

CMV-Luc-Blasticidin Lentivirus

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

 

作为分子、基因表达的分析检测的新型方法活体成像技术,主要是利用Firefly Luciferase和fluorescent proteins (GFP/RFP)的分子活体成像技术来精确追踪动物体内的移植细胞。PGMLV-CMV-Luc-Blasticidin慢病毒携同时带Luciferase标记蛋白以及blasticidin抗性,其中Luciferase生物荧光则可用于活体成像检测,blasticidin可用于稳定细胞株的筛选。。

 

质粒图谱

 

CMV-Luc-Blasticidin Lentivirus

 

保存方法

 

-80℃保存,有效期6个月,如保存时间过长,使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1)病毒操作时最好使用生物安全柜,如使用普通超净工作台操作病毒,请不要打开风机。

2)病毒操作时请穿实验服,带口罩和乳胶手套。

3)操作病毒时必须特别小心,不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染,立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前,用70%乙醇清理实验台。

5)病毒操作完成后,用肥皂清洗双手。
6)本产品仅作研究用途!

 

Ver.CN20240104

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作为分子、基因表达的分析检测的新型方法活体成像技术,主要是利用Firefly Luciferase和fluorescent proteins (GFP/RFP)的分子活体成像技术来精确追踪动物体内的移植细胞。PGMLV-CMV-Luc-Blasticidin慢病毒携同时带Luciferase标记蛋白以及blasticidin抗性,其中Luciferase生物荧光则可用于活体成像检测,blasticidin可用于稳定细胞株的筛选。。

 

质粒图谱

 

CMV-Luc-Blasticidin Lentivirus

 

保存方法

 

-80℃保存,有效期6个月,如保存时间过长,使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1)病毒操作时最好使用生物安全柜,如使用普通超净工作台操作病毒,请不要打开风机。

2)病毒操作时请穿实验服,带口罩和乳胶手套。

3)操作病毒时必须特别小心,不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染,立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前,用70%乙醇清理实验台。

5)病毒操作完成后,用肥皂清洗双手。
6)本产品仅作研究用途!

 

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pSilencer 4.1-CMV puro载体说明书

 

pSilencer 4.1-CMV puro

载体描述: 

The pSilencer 4.1-CMV siRNA Expression vectors are linearized with both BamH 1 and Hind III to facilitate directional cloning. They are also purified to remove the digested insert so that it cannot re-ligate with the vector. This greatly increases the percentage of clones bearing the hairpin siRNA template insert after ligation, reducing the time and effort required to screen clones.

质粒图谱: 

pShuttle-CMV载体序列说明书

 

pShuttle-CMV

型号 载体名称 出品公司 载体用途
VXS0388 pShuttle-CMV Stratagene 腺病毒系统
产品参数: 

Size (bp): 7452
5′ sequencing primer: CMV-F

载体抗性: 
卡那霉素(Kanamycin)
载体描述: 

Vector pShuttle-CMV is used for expression of transgenes under a CMV promoter when no GFP tracer is desired.
Max insert size = 6.6kb with pAdEasy®1 and 9.3kb with pAdEasy®2.

质粒图谱: 

pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照(pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid)

pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照(pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid)

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已发表文献

产品描述

 

pGM-CMV-Luc是以CMV作为启动子,启动Luciferase在细胞内的表达,主要用于萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)报告基因的阳性对照和动物的活体成像实验等。通过对质粒上可以被预测出的转录因子结合位点全部进行适当的突变处理,在不改变质粒功能的情况下,使质粒对转录因子的非特异结合降到了最低。

 

质粒图谱

 

pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照(pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid)

 

质粒元件信息

 

CMV promoter

32-634

Minimal TA promoter (pTA)

663-685

Luciferase reporter gene

717-2379

SV40 late poly(A) signal

2414-2635

SV40 early promoter

2683-3101

Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region

3126-3920

Synthetic poly(A) signal

3945-3993

Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region

5108-5968

Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site

6073-6226

 

运输与保存方法

 

冰袋运输。-20 ºC保存。

 

使用说明

 

pGM-CMV-Luc可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

 

注意事项

 

1)本质粒未经翊圣生物允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位;

2)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。

 

 

HB190107

 

 

Q:报告基因质粒的全序列能否提供?结合位点序列两端的酶切位点是什么?

A:全序列和酶切位点序列均是保密的,在已购买的说明书版本上会提供转录因子的结合位点序列和质粒测序引物序列。

Q:LUC 系列的报告基因质粒骨架是什么?报告质粒的启动子是什么?

A:骨架是 PGL-6-TALUC 的启动子是PTA,抗性基因的启动子是SV40。

Q:怎么保证报告基因系列质粒的有效性的?有没有做功能性的实验验证?

A:保证全序列正确。未进行功能性试验验证,可以参考相关文献。

Q:报告基因质粒导入细胞后能稳定遗传吗?

A:不建议做稳转,常用于瞬转。

Q:1μg 报告基因质粒是固体还是液体形式?浓度是多少?报告基因质粒 1μg 包装可以用多少次?

A:液体,浓度在 100ng/μl 左右。不建议直接用,可以转化到感受态细胞如 DH5α中摇菌抽提质粒进行扩大量。

Q:报告基因质粒是针对什么物种的?

A:仅用于哺乳动物,如人,小鼠等。

Q:报告基因质粒转染有什么特别要注意的?

A:没有,和普通质粒转染一样。转染方法参考所用转染试剂。

Q:阴性对照和阳性对照是什么?

A:阴性对照是 Luciferase Reporter Plasmid negative control (荧光素酶报告基因质粒阴性对照11555ES03。阳性对照需客户自己参考相关文献。

[1] Shen AW, Fu LL, Lin L, et al. SNX9 Inhibits Cell Proliferation and Cyst Development in Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease via Activation of the Hippo-YAP Signaling Pathway. Front Cell Dev Biol. 2020;8:811. Published 2020 Aug 21. doi:10.3389/fcell.2020.00811(IF:5.186)
[2] Liu C, He X, Liu X, et al. RPS15A promotes gastric cancer progression via activation of the Akt/IKK-β/NF-κB signalling pathway. J Cell Mol Med. 2019;23(3):2207-2218. doi:10.1111/jcmm.14141(IF:4.658)
[3] Zhu Y, Zhang X, Qi M, Zhang Y, Ding F. miR-873-5p inhibits the progression of colon cancer via repression of tumor suppressor candidate 3/AKT signaling. J Gastroenterol Hepatol. 2019;34(12):2126-2134. doi:10.1111/jgh.14697(IF:3.632)

产品描述

 

pGM-CMV-Luc是以CMV作为启动子,启动Luciferase在细胞内的表达,主要用于萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)报告基因的阳性对照和动物的活体成像实验等。通过对质粒上可以被预测出的转录因子结合位点全部进行适当的突变处理,在不改变质粒功能的情况下,使质粒对转录因子的非特异结合降到了最低。

 

质粒图谱

 

pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照(pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid)

 

质粒元件信息

 

CMV promoter

32-634

Minimal TA promoter (pTA)

663-685

Luciferase reporter gene

717-2379

SV40 late poly(A) signal

2414-2635

SV40 early promoter

2683-3101

Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region

3126-3920

Synthetic poly(A) signal

3945-3993

Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region

5108-5968

Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site

6073-6226

 

运输与保存方法

 

冰袋运输。-20 ºC保存。

 

使用说明

 

pGM-CMV-Luc可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

 

注意事项

 

1)本质粒未经翊圣生物允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位;

2)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。

 

 

HB190107

 

 

Q:报告基因质粒的全序列能否提供?结合位点序列两端的酶切位点是什么?

A:全序列和酶切位点序列均是保密的,在已购买的说明书版本上会提供转录因子的结合位点序列和质粒测序引物序列。

Q:LUC 系列的报告基因质粒骨架是什么?报告质粒的启动子是什么?

A:骨架是 PGL-6-TALUC 的启动子是PTA,抗性基因的启动子是SV40。

Q:怎么保证报告基因系列质粒的有效性的?有没有做功能性的实验验证?

A:保证全序列正确。未进行功能性试验验证,可以参考相关文献。

Q:报告基因质粒导入细胞后能稳定遗传吗?

A:不建议做稳转,常用于瞬转。

Q:1μg 报告基因质粒是固体还是液体形式?浓度是多少?报告基因质粒 1μg 包装可以用多少次?

A:液体,浓度在 100ng/μl 左右。不建议直接用,可以转化到感受态细胞如 DH5α中摇菌抽提质粒进行扩大量。

Q:报告基因质粒是针对什么物种的?

A:仅用于哺乳动物,如人,小鼠等。

Q:报告基因质粒转染有什么特别要注意的?

A:没有,和普通质粒转染一样。转染方法参考所用转染试剂。

Q:阴性对照和阳性对照是什么?

A:阴性对照是 Luciferase Reporter Plasmid negative control (荧光素酶报告基因质粒阴性对照11555ES03。阳性对照需客户自己参考相关文献。

[1] Shen AW, Fu LL, Lin L, et al. SNX9 Inhibits Cell Proliferation and Cyst Development in Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease via Activation of the Hippo-YAP Signaling Pathway. Front Cell Dev Biol. 2020;8:811. Published 2020 Aug 21. doi:10.3389/fcell.2020.00811(IF:5.186)
[2] Liu C, He X, Liu X, et al. RPS15A promotes gastric cancer progression via activation of the Akt/IKK-β/NF-κB signalling pathway. J Cell Mol Med. 2019;23(3):2207-2218. doi:10.1111/jcmm.14141(IF:4.658)
[3] Zhu Y, Zhang X, Qi M, Zhang Y, Ding F. miR-873-5p inhibits the progression of colon cancer via repression of tumor suppressor candidate 3/AKT signaling. J Gastroenterol Hepatol. 2019;34(12):2126-2134. doi:10.1111/jgh.14697(IF:3.632)

CMV-Luc-Neo Lentivirus

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作为分子、基因表达的分析检测的新型方法活体成像技术,主要是利用Firefly Luciferase和fluorescent proteins (GFP/RFP)的分子活体成像技术来精确追踪动物体内的移植细胞。CMV-luc-Neo慢病毒携同时带Luciferase标记蛋白以及Neo抗性,其中Luciferase生物荧光则可用于活体成像检测,Neo可用于稳定细胞株的筛选。

 

质粒图谱

 

CMV-Luc-Neo Lentivirus

 

保存方法

 

-80℃保存,有效期6个月,如保存时间过长,使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1)病毒操作时最好使用生物安全柜,如使用普通超净工作台操作病毒,请不要打开风机。

2)病毒操作时请穿实验服,带口罩和乳胶手套。

3)操作病毒时必须特别小心,不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染,立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前,用70%乙醇清理实验台。

5)病毒操作完成后,用肥皂清洗双手。
6)本产品仅作研究用途!

 

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作为分子、基因表达的分析检测的新型方法活体成像技术,主要是利用Firefly Luciferase和fluorescent proteins (GFP/RFP)的分子活体成像技术来精确追踪动物体内的移植细胞。CMV-luc-Neo慢病毒携同时带Luciferase标记蛋白以及Neo抗性,其中Luciferase生物荧光则可用于活体成像检测,Neo可用于稳定细胞株的筛选。

 

质粒图谱

 

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保存方法

 

-80℃保存,有效期6个月,如保存时间过长,使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1)病毒操作时最好使用生物安全柜,如使用普通超净工作台操作病毒,请不要打开风机。

2)病毒操作时请穿实验服,带口罩和乳胶手套。

3)操作病毒时必须特别小心,不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染,立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前,用70%乙醇清理实验台。

5)病毒操作完成后,用肥皂清洗双手。
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CMV-Luc-Neo Lentivirus

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Cytomegalovirus (CMV) Antigen 说明书

Cytomegalovirus (CMV) Antigen 说明书


Cellero是一家生物技术公司,致力于为全球生命科学研究和治疗提供高质量的细胞和相关服务。公司总部位于美国,旗下拥有多个细胞系列和样本库,包括人类和动物来源的血液、骨髓、脂肪、肝脏、脾脏等细胞类型。此外,公司还提供定制化的服务,可以根据客户的具体需求提供各种不同的细胞和样本。作为一家专业的生物技术公司,Cellero致力于提供高质量、高可靠性的细胞和相关服务,以满足客户在生命科学研究和治疗中的需求。公司不断探索和研究新的细胞类型和技术,以不断提升产品的品质和性能,同时也不断推动生命科学研究的进步和发展。

 

产品信息:

批号:5087AP21

号:1004

浓度:100 ug/mL protein

规格1.0 mL

 

描述: CMV抗原是从感染菌株Ad169的人成纤维细胞中提取的部分纯化的CMV抗原。将抗原制剂暴露在紫外线下以灭活病毒,并进行测试以确保wan全失活。

 

储存: 70℃或以下冷冻保存避免反复冻融

 

活性: 最佳浓度取决于所测定的终点。Hemacare,使用CMV血清阳性PBMC(目录编号1000、1001和1007)观察到T细胞增殖为0.1-2ug/mL。

 

参考文献 Barouch DH,Letvin NL。 (2001)对慢病毒和疱疹病毒的CD8+细胞毒性淋巴细胞反应。 Curr Opin Immunol 13:479-482。

关键词:cellero;1004;cellero 1004;Cytomegalovirus (CMV) Antigen;CMV antigens

CMV-Luc-Puro Lentivirus

CMV-Luc-Puro Lentivirus

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作为分子、基因表达的分析检测的新型方法活体成像技术,主要是利用Firefly Luciferase和fluorescent proteins (GFP/RFP)的分子活体成像技术来精确追踪动物体内的移植细胞。CMV-Luc-Puro慢病毒携同时带Luciferase标记蛋白以及Puro抗性,其中Luciferase生物荧光则可用于活体成像检测,Puro可用于稳定细胞株的筛选。

 

质粒图谱

CMV-Luc-Puro Lentivirus

 

保存方法

 

-80℃保存,有效期6个月,如保存时间过长,使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1)病毒操作时最好使用生物安全柜,如使用普通超净工作台操作病毒,请不要打开风机。

2)病毒操作时请穿实验服,带口罩和乳胶手套。

3)操作病毒时必须特别小心,不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染,立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前,用70%乙醇清理实验台。

5)病毒操作完成后,用肥皂清洗双手。
6)本产品仅作研究用途!

 

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CMV-Luc-Puro Lentivirus

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作为分子、基因表达的分析检测的新型方法活体成像技术,主要是利用Firefly Luciferase和fluorescent proteins (GFP/RFP)的分子活体成像技术来精确追踪动物体内的移植细胞。CMV-Luc-Puro慢病毒携同时带Luciferase标记蛋白以及Puro抗性,其中Luciferase生物荧光则可用于活体成像检测,Puro可用于稳定细胞株的筛选。

 

质粒图谱

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保存方法

 

-80℃保存,有效期6个月,如保存时间过长,使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1)病毒操作时最好使用生物安全柜,如使用普通超净工作台操作病毒,请不要打开风机。

2)病毒操作时请穿实验服,带口罩和乳胶手套。

3)操作病毒时必须特别小心,不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染,立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前,用70%乙醇清理实验台。

5)病毒操作完成后,用肥皂清洗双手。
6)本产品仅作研究用途!

 

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CMV-Luc-Puro Lentivirus

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CMV-Luc-Puro Lentivirus

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cellero CMV抗原说明书

 

我们的召回抗原可用于评估供体的免疫反应。我们还提供用于抗原特异性 T 细胞的肽。使用我们的 PBMC 测试所有抗原的生物活性

 

cellero CMV抗原说明书

CMV抗原

# 1004
尺寸: 100 微克/瓶

捐助者详情

抗凝物 : 未知

附加产品信息:

通过在蔗糖梯度上离心,从 CMV 感染的人成纤维细胞的培养物中富集 CMV 抗原。存在多种病毒蛋白。

抗原产品是蛋白质和病毒裂解物,可刺激对抗原敏感的所有供体的体外免疫反应。这消除了选择优势肽或蛋白质的可能性,允许您对所有供体使用一种抗原。

大多数美国人口都接种了破伤风类毒素,30-40% 的人口巨细胞病毒 (CMV) 呈阳性,这使得这两种抗原成为召回分析的理想选择。

我们提供各种抗原来刺激细胞,所有抗原均使用我们的 PBMC 进行生物活性测试。我们的三种回忆抗原可用于研究不同类型的免疫记忆:巨细胞病毒 (CMV)、破伤风和 M1。

CMV 抗原:CMV 抗原激活 PBMC 通常表明供体对 CMV 呈血清阳性,尽管我们已经观察到来自血清阴性供体的 PBMC 刺激。CMV 建立潜伏感染,并被健康 CMV 阳性供体的免疫系统控制。这导致相对大量的 CMV 反应性 T 淋巴细胞,CD4+ 和 CD8+。

破伤风抗原:破伤风抗原与明矾复合,但能很好地刺激 PBMC 增殖。大多数人接种了这种抗原,因此对它有免疫反应。反应的程度因捐赠者而异,这取决于他们的免疫状态、年龄和自上次接种破伤风疫苗以来的时间。由于明矾的存在,该制剂可能不适合用于体外免疫反应以外的用途。

M1 抗原: M1 肽是流感病毒的免疫优势表位,但仅适用于表达 HLA-A*0201 的供体。我们已经观察到对这种抗原制剂的反应性,但仅在 7-10 天的培养期之后。与 CMV 不同,流感病毒在感染后会从体内清除,因此感染后对抗原的免疫反应减弱。这种抗原只会刺激 CD8+ T 细胞,而不是 CD4+ T 细胞。

当我们将抗原特异性 T 细胞添加到我们的目录时,我们也添加了它们的同源肽抗原。

 

pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus

pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus

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FAQ

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已发表文献

产品描述

 

细胞自噬(autophagy)是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后,送入溶酶体(动物)或液泡(酵母和植物)中进行降解并得以循环利用。

检测自噬形成时,使用电镜耗时长,不利于监测(Monitoring)自噬形成,而hLC3在自噬形成过程中会发生聚集的现象,金畔生物利用hLC3这种现象,构建了带GFP和RFP标记的用于细胞自噬检测的慢病毒和腺病毒产品。无自噬时,RFP-GFP-hLC3融合蛋白弥散在胞浆中,在荧光显微镜下显示为黄色斑点;自噬形成时,由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬小体和溶酶体融合被抑制,自噬溶酶体进程受阻。RFP是一直稳定表达的,因此通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱。

 

质粒图谱

 

pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus

 

保存方法

 

-80℃保存,有效期6个月,如保存时间过长,使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1)病毒操作时最好使用生物安全柜,如使用普通超净工作台操作病毒,请不要打开风机。

2)病毒操作时请穿实验服,带口罩和乳胶手套。

3)操作病毒时必须特别小心,不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染,立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前,用70%乙醇清理实验台。

5)病毒操作完成后,用肥皂清洗双手。
6)本产品仅作研究用途!

 

 

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pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus

暂无内容

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细胞自噬(autophagy)是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后,送入溶酶体(动物)或液泡(酵母和植物)中进行降解并得以循环利用。

检测自噬形成时,使用电镜耗时长,不利于监测(Monitoring)自噬形成,而hLC3在自噬形成过程中会发生聚集的现象,金畔生物利用hLC3这种现象,构建了带GFP和RFP标记的用于细胞自噬检测的慢病毒和腺病毒产品。无自噬时,RFP-GFP-hLC3融合蛋白弥散在胞浆中,在荧光显微镜下显示为黄色斑点;自噬形成时,由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬小体和溶酶体融合被抑制,自噬溶酶体进程受阻。RFP是一直稳定表达的,因此通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱。

 

质粒图谱

 

pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus

 

保存方法

 

-80℃保存,有效期6个月,如保存时间过长,使用前请重新检测病毒滴度。

 

注意事项

 

1)病毒操作时最好使用生物安全柜,如使用普通超净工作台操作病毒,请不要打开风机。

2)病毒操作时请穿实验服,带口罩和乳胶手套。

3)操作病毒时必须特别小心,不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染,立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1 h以上后弃去。

4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前,用70%乙醇清理实验台。

5)病毒操作完成后,用肥皂清洗双手。
6)本产品仅作研究用途!

 

 

Ver.CN20240104

pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus

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