重组食蟹猴PTK7/CCK4蛋白(His标签) Cynomolgus PTK7/CCK4 Protein

重组食蟹猴PTK7/CCK4蛋白(His标签) Cynomolgus PTK7/CCK4 Protein

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

性能参数

分子别名(Synonyms)

PTK7;CCK-4;

表达区间及表达系统(Source)

Cynomolgus PTK7/CCK4 Protein is expressed from HEK293 with His tag at the C-Terminus. It contains Ala39-Thr712.[Accession | A0A2K5VNI5]

分子量大小(Molecular Weight)

The protein has a predicted MW of 75.73 kDa. Due to glycosylation, the protein migrates to 90-110 kDa based on SDS-PAGE result.

内毒素(Endotoxin)

Less than 1EU per μg by the LAL method.

纯度(Purity)

> 95% as determined by SDS-PAGE and HPLC.

制剂(Formulation)

Lyophilized from 0.22μm filtered solution in PBS (pH 7.4). Normally 8% trehalose is added as protectant before lyophilization.

重构方法(Reconstitution)

Centrifuge the tube before opening. Reconstituting to a concentration more than 100 μg/ml is recommended. Dissolve the lyophilized protein in distilled water.

 

储存条件

The product should be stored at -25~-15℃ for 1 year from date of receipt.

2-7 days, 2 ~ 8 °C under sterile conditions after reconstitution.

3 -6 months, -85~-65℃ under sterile conditions after reconstitution.

Recommend to aliquot the protein into smaller quantities when first used and avoid repeated freeze-thaw cycles.

 

注意事项

1.Please operate with lab coats and disposable gloves,for your safety.

2.This product is for research use only.

重组食蟹猴PTK7/CCK4蛋白(His标签) Cynomolgus PTK7/CCK4 Protein

暂无内容

重组食蟹猴PTK7/CCK4蛋白(His标签) Cynomolgus PTK7/CCK4 Protein

暂无内容

 

性能参数

分子别名(Synonyms)

PTK7;CCK-4;

表达区间及表达系统(Source)

Cynomolgus PTK7/CCK4 Protein is expressed from HEK293 with His tag at the C-Terminus. It contains Ala39-Thr712.[Accession | A0A2K5VNI5]

分子量大小(Molecular Weight)

The protein has a predicted MW of 75.73 kDa. Due to glycosylation, the protein migrates to 90-110 kDa based on SDS-PAGE result.

内毒素(Endotoxin)

Less than 1EU per μg by the LAL method.

纯度(Purity)

> 95% as determined by SDS-PAGE and HPLC.

制剂(Formulation)

Lyophilized from 0.22μm filtered solution in PBS (pH 7.4). Normally 8% trehalose is added as protectant before lyophilization.

重构方法(Reconstitution)

Centrifuge the tube before opening. Reconstituting to a concentration more than 100 μg/ml is recommended. Dissolve the lyophilized protein in distilled water.

 

储存条件

The product should be stored at -25~-15℃ for 1 year from date of receipt.

2-7 days, 2 ~ 8 °C under sterile conditions after reconstitution.

3 -6 months, -85~-65℃ under sterile conditions after reconstitution.

Recommend to aliquot the protein into smaller quantities when first used and avoid repeated freeze-thaw cycles.

 

注意事项

1.Please operate with lab coats and disposable gloves,for your safety.

2.This product is for research use only.

重组食蟹猴PTK7/CCK4蛋白(His标签) Cynomolgus PTK7/CCK4 Protein

暂无内容

重组食蟹猴PTK7/CCK4蛋白(His标签) Cynomolgus PTK7/CCK4 Protein

暂无内容

CCK-8试剂盒 (CCK8) Cell Counting Kit-8

CCK-8试剂盒 (CCK8) Cell Counting Kit-8

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。

CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

 

保存条件

冰袋运输,-25~-15℃避光干燥保存,有效期2

 

CCK-8方法的优势

1)表1 CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

检测方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK-8法

甲臜产物的水溶性

差(需加有机溶剂溶解后再检测)

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

即开即用

即开即用

检测灵敏度

很高

很高

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600 nm

420-480 nm

420-480 nm

430-490 nm

细胞毒性

高,细胞形态完全消失

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

试剂稳定性

一般

较差

一般

很好

批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

2)酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰;

3)细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。

 

CCK-8试剂盒操作说明

. 制作标准曲线(测定细胞具体数量)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内

2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议

3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

. 细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间37,5% CO2)。

2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

. 细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(375% CO2)。

2、向培养板加入10 μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

 

活力计算

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

 

注意事项

1)建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

2有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,要插到培养基面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。

3白细胞可能需要培养较长时间。

4当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

5如果没有450 nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。

6)培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

HB230302

Q:CCK-8 的保存和稳定性如何?

A:CCK-8 稳定性高,避光条件20℃有效期 2 年,4℃有效期 1 年。经常使用建议 4℃ 保存,避免反复冻融。CCK 正常颜色为粉红色,若颜色发生明显偏差,质量可能有发生变化。

Q:CCK-8 的细胞毒性如何?

A:CCK-8 毒性非常低,因此 CCK-8 检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法,中性红染色法或 DNA 荧光染色法。

Q:CCK-8 会对活细胞进行染色吗?

A:不会,首先 WST-8 不会进入细胞染色,整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外 WST 和 WST-8 甲臜都属于高度水溶性组分,反应结束更换新的培养液,即可清除外源组分。因为 CCK-8 是基于 WST-8 能够被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色甲臜产物(Formazan)的原理研制开发的,因而不会对细胞进行染色。

Q:培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢?

A:不会的,培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

Q:在加入 CCK-8 时可否不更换培养基?

A:一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话,有可能会产生误差,必须更换其它培养基。

Q:在实验中OD 值太高或者太低,怎么解决?

A:太高可以缩短加入CCK-8 后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8 试剂后的培养

 

 2 缩短为 1 小时此外当减细胞的数量。太可以 2 法: 1、当增细胞 2、长加CCK-8 后的应时

Q:哪些物质会影响 CCK-8 的实验测定结果?

A:当培养体系内含有还原性物质存在时会还原 WST-8,从而使 OD 值增加;当有氧化性物质存在时会抑制还原反应进而使 OD 值减小。

Q:做细胞毒性实验,我的细胞都死了,为什么我加入CCK8试剂后检测的OD值和对照组OD值差不多?

A:①细胞凋亡或者死亡之后乳酸脱氢酶被释放到细胞培养液中,可以长期存在,从而导致检测的OD值偏大。再次说明细胞的活性和OD值并不能完全划等号。建议客户在加入CCK8的时候更换新的培养基,确保得到准确的结果。

 ②加入细胞中的检测药物是还原性的,从而导致OD值偏高。建议加入CCK8的时候更换新的培养基。

Q:对照组(培养基+CCK8)的值很高,是为什么呢?

A:可以测一下培养基是否含有氧化还原物质,可能是培养基中的物质引起的。

Q:  细胞不贴壁可以测活性吗?预培养是必须的吗?

A: 需要预培养,如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养 ,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。不做细胞预培养,在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

Q: CCK-8能否检测细菌细胞?

A: 可以检测大肠杆菌,但不能检测酵母细胞。向100μl E.coli培养液中加入10μl CCK-8溶液,并培养1-4个小时或过夜。

CCK-8试剂盒 (CCK8) Cell Counting Kit-8

暂无内容

 

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。

CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

 

保存条件

冰袋运输,-25~-15℃避光干燥保存,有效期2

 

CCK-8方法的优势

1)表1 CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

检测方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK-8法

甲臜产物的水溶性

差(需加有机溶剂溶解后再检测)

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

即开即用

即开即用

检测灵敏度

很高

很高

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600 nm

420-480 nm

420-480 nm

430-490 nm

细胞毒性

高,细胞形态完全消失

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

试剂稳定性

一般

较差

一般

很好

批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

2)酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰;

3)细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。

 

CCK-8试剂盒操作说明

. 制作标准曲线(测定细胞具体数量)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内

2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议

3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

. 细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间37,5% CO2)。

2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

. 细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(375% CO2)。

2、向培养板加入10 μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

 

活力计算

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

 

注意事项

1)建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

2有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,要插到培养基面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。

3白细胞可能需要培养较长时间。

4当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

5如果没有450 nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。

6)培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

HB230302

Q:CCK-8 的保存和稳定性如何?

A:CCK-8 稳定性高,避光条件20℃有效期 2 年,4℃有效期 1 年。经常使用建议 4℃ 保存,避免反复冻融。CCK 正常颜色为粉红色,若颜色发生明显偏差,质量可能有发生变化。

Q:CCK-8 的细胞毒性如何?

A:CCK-8 毒性非常低,因此 CCK-8 检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法,中性红染色法或 DNA 荧光染色法。

Q:CCK-8 会对活细胞进行染色吗?

A:不会,首先 WST-8 不会进入细胞染色,整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外 WST 和 WST-8 甲臜都属于高度水溶性组分,反应结束更换新的培养液,即可清除外源组分。因为 CCK-8 是基于 WST-8 能够被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色甲臜产物(Formazan)的原理研制开发的,因而不会对细胞进行染色。

Q:培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢?

A:不会的,培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

Q:在加入 CCK-8 时可否不更换培养基?

A:一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话,有可能会产生误差,必须更换其它培养基。

Q:在实验中OD 值太高或者太低,怎么解决?

A:太高可以缩短加入CCK-8 后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8 试剂后的培养

 

 2 缩短为 1 小时此外当减细胞的数量。太可以 2 法: 1、当增细胞 2、长加CCK-8 后的应时

Q:哪些物质会影响 CCK-8 的实验测定结果?

A:当培养体系内含有还原性物质存在时会还原 WST-8,从而使 OD 值增加;当有氧化性物质存在时会抑制还原反应进而使 OD 值减小。

Q:做细胞毒性实验,我的细胞都死了,为什么我加入CCK8试剂后检测的OD值和对照组OD值差不多?

A:①细胞凋亡或者死亡之后乳酸脱氢酶被释放到细胞培养液中,可以长期存在,从而导致检测的OD值偏大。再次说明细胞的活性和OD值并不能完全划等号。建议客户在加入CCK8的时候更换新的培养基,确保得到准确的结果。

 ②加入细胞中的检测药物是还原性的,从而导致OD值偏高。建议加入CCK8的时候更换新的培养基。

Q:对照组(培养基+CCK8)的值很高,是为什么呢?

A:可以测一下培养基是否含有氧化还原物质,可能是培养基中的物质引起的。

Q:  细胞不贴壁可以测活性吗?预培养是必须的吗?

A: 需要预培养,如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养 ,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。不做细胞预培养,在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

Q: CCK-8能否检测细菌细胞?

A: 可以检测大肠杆菌,但不能检测酵母细胞。向100μl E.coli培养液中加入10μl CCK-8溶液,并培养1-4个小时或过夜。

CCK-8试剂盒 (CCK8) Cell Counting Kit-8

暂无内容

Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒)说明书

Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒)说明书



产品详情

货号

规格

价格

78EA10004-100T

1ml/100T

200

78EA10004-500T

5ml/500T

600

 

 

产品描述

      Jinpan的CCK-8试剂盒是用白色的WST-8固体粉末配置的,颜色为粉红色,保存期更长,实验重复性更好! WST-8(水溶性四唑(2-(2-甲氧基-4硝基苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,被线粒体内的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的甲臜染料(formazan,下图), 这种甲臜染料直接溶解在培养基中。水溶性四唑被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够。细胞增殖越多越快,则培养基的颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。正是利用这一特性开发的CCK-8试剂盒直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法应用非常广泛,可以用于生物活性因子的活性检测,抗肿瘤药物的筛选,细胞增值的测定,细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便,试剂盒包含一管已经配制好的含有水溶性四唑的CCK-8溶液,即开即用,无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜,可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测,适合大规模高通量的样品检测。

         

产品性质

      CCK8试剂盒提供了一种灵敏度高,操作简便,使用安全,重现性好的细胞增殖与活性检测方法。与传统的MTT相比无需有机溶剂和放射性同位素,步骤少,无损失,结果准确!本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作 。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。

      1.MTT实验生成的甲臜不是水溶性的,需要使用DMSO等有机溶剂溶解;而本方法产生的甲臜是水溶性的,不仅省去了溶解的步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。

      2.与MTT方法相比,本方法线性范围更宽,灵敏度更高。本方法对细胞无损害,因此加入CCK-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数多次测定从而找到最佳测定时间。

      3.本方法所用试剂在培养基中比MTT更加稳定,实验效果重复性好。

      4.MTT具有毒性,同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解,会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒,使用中无需有机溶剂,操作更加安全。

      5.本试剂盒在4℃避光可长期保存,使用无需配制,即开即用。

      6.酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰(扣除空白孔即可)

产品特点

                                                      CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

      

检测方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK-8法

甲臜产物的水溶性

需要加DMSO溶解

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

即开即用

即开即用

检测灵敏度

一般

较高

较高

重现性

中等

非常好

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

细胞毒性

细胞形态已消失

很低

细胞形态不变

很低

细胞形态不变

很低

细胞形态不变

试剂稳定性

一般

非常差

一般

很好

批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般,工作量大

便捷

便捷

非常便捷

注意事项

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

运输及保存方法

CCK-8溶液在避光,0-5℃的条件下可以保存一年; -20℃下保存2年;如需经常使用请将试剂存放在0-5℃,为防止背景值增加干扰实验结果,请勿反复冻融。

D3100L4053-CCK-8说明书

订购信息: 

产品名称

货号

规格

保存

价格(元)

活性检测CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒

D3100L4053

1ml

4

245

活性检测CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒

D3100L4054

5ml

4

595

活性检测CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒

D3100L4055

10ml

4

1050

活性检测CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒

D3100L4056

30ml 

4

2080

活性检测CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒

D3100L4057

100ml

4

5850

产品描述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜(formazan,参考图1)。WST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

 

 

图1:WST-8分子结构及检测原理

运输与保存方法

冰袋运输。CCK-8在4℃可保存一年,在-20℃可以存放数年,反复冻融会造成测定背景O.D值升高,如经常使用,建议存放于4℃即可。

操作方法

1. 在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时 (在37℃,5% CO2的条件下)。

2. 向培养板加入10 μL不同浓度的待测物质。如果测定细胞活性,则不需要2-3步骤,直接从第四步操作。

3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,  12, 24或48小时)。

4. 向每孔加入10 μL CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O.D值的读数)。

5. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

注意事项

1)CCK-8试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化反应,如果待检测体系中有较多还原剂(或抗氧化剂)会造成背景O.D值升高,干扰检测结果。如果实验中有还原剂,请检查背景的O.D值,即测定、比较空白培养基加入药物与不加药物的培养基(含细胞)在加入CCK- 8试剂后的O.D值,如果空白O.D值明显偏高,则说明有反应,应设法去除或折算干扰因素。

2)如果细胞培养时间较长,培养基颜色发生变化,应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。细胞培养基酚红不影响测定结果。

3)为使CCK-8试剂盒培养基充分混匀,减少CCK-8在移液器上的残留,建议加样前用培养基稀释CCK-8试剂,混匀后加样。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

CCK-8与同类试剂比较

检测方法

MTT

XTT

WST-1

CCK

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

即开即用

即开即用

检测灵敏度

很高

很高

检测时间

较长

较短

较短

zui短

检测波长

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

细胞毒性

高,细胞形态*消失

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

试剂稳定性

一般

较差

一般

很好

批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

 

CCK-8细胞活性检测试剂盒说明书

CCK-8细胞活性检测试剂盒说明书

产品详情

货号

规格

价格

78EA10020-1ml

1ml

240.00

78EA10020-10ml

10ml

1820.00

78EA10020-30ml

30ml

3640.00

78EA10020-100ml

100ml

10400.00

 产品描述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞活性检测试剂盒是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性相关实验的快速、高灵敏度检测试剂盒。

CCK-8 的主要成分为水溶性四唑盐[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)Water Soluble Tetrazolium-8是一种类似于MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜(Formazan,参考图1)

Water Soluble Tetrazolium-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。活细胞的数目越多,则颜色越深。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1. Water Soluble Tetrazolium-8分子结构及CCK-8检测原理

产品特点

1.   MTT 法生成的甲臜不是水溶性的,需要使用DMSO 等有机溶剂溶解;而CCK-8 产生的甲臜是水溶性的,省去了溶解步骤,因此减少了该操作步骤带来的实验误差。

2.   由于CCK-8 产生的甲臜是水溶性的,无需吸掉培养基后,再用DMSO 等有机溶剂溶解,非常适合用于悬浮细胞的活性测定。

3.   MTT 方法相比,CCK-8 法线性范围更宽,灵敏度更高。

4.    CCK-8 法对细胞无毒性,可以多次测定,选取最佳测定时间。

5.    CCK-8 法无需配制,即开即用。

6.   CCK-8 法适合大规模、高通量的样品检测。

使用方法

使用方法

1.   96 孔板中配制100 μ的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时(在375% CO2的条件下)。

2.    向培养板加入10 μ的待测药物进行处理。

3.  根据实验需要,将培养板在培养箱孵育一段时间 (例如:6, 1224 48 小时)。

注:如果不进行药物处理而直接测定细胞的活性,则不需要2-3 步骤,直接从第步操作。

4.    向每孔加入10 μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O.D 值的读数)。

5.   将培养板在培养箱内孵育2-4 小时。

6.   用酶标仪测定在450 nm 处的吸光度。

7.   如果暂时不测定OD 值,可 以向每孔中加入10 μL 1% SDSw/v 溶液或者 0.1 M HCl 溶液,并盖上培养板盖子,在室温条件下避光保存。24 小时内吸光度不会发生变化。

实验案例分析

 

2. 本实验结果证明:上海金畔生物CCK8与同仁CCK8的测试效果几乎相同。

 

注意事项

1.     由于96 孔板周围一圈最容易蒸发,周围一圈建议不用,改加PBS或水。

2.    CCK-8 检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。如果待测体系中存在还原剂(例如一些抗氧化剂),可能会干扰检测结果,需设法去除其影响。

3.  当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 / (100 μ培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 / (100 μL培养基),且加入CCK-8后孵育的时间长一些。

4.   如果细胞培养时间较长,培养基颜色发生变化,应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8 检测。

 

5.   酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除只含有培养基的对照孔中本底的吸光度而消除,因此不会对检测结果造成影响。