Protein G Agarose (Fast Flow, for IP)
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Protein G Agarose (Fast Flow, 免疫沉淀用)(P2053-50ml)
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| P2053-2ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml | 168.00元 |
| P2053-10ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 10ml | 718.00元 |
| P2053-50ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 50ml | 2970.00元 |
本Protein G Agarose (Fast Flow, for IP)主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)，也可以用于抗体的纯化。
Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁表面蛋白，分子量为42kDa；Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)结合，结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区，但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合，而Protein G有时与Fab区也有一定结合。同时，两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A、G与琼脂糖凝胶(agarose)以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化。
Protein G Agarose适合于免疫沉淀human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3，rat IgG1、IgG2a、IgG2b、 IgG2c，以及rabbit、goat多克隆抗体。下表是碧云天Protein A、Protein G、Protein A+G Agarose产品与人、小鼠、大鼠常见的免疫球蛋白亚类的结合能力及不同物种的总结合能力情况表。
| Species | Ig | Protein A | Protein G | A+G |
| Human | IgG1 | ++++ | ++++ | ++++ |
| IgG2 | ++++ | ++++ | ++++ | |
| IgG3 | – | ++++ | ++++ | |
| IgG4 | ++++ | ++++ | ++++ | |
| IgA | ++ | – | ++ | |
| IgD | ++ | – | ++ | |
| IgE | ++ | – | ++ | |
| IgM | ++ | – | ++ | |
| Mouse | IgG1 | + | ++++ | ++++ |
| IgG2a | ++++ | ++++ | ++++ | |
| IgG2b | +++ | +++ | +++ | |
| IgG3 | ++ | +++ | +++ | |
| IgM | +/- | – | +/- | |
| Rat | IgG1 | – | + | + |
| IgG2a | – | ++++ | ++++ | |
| IgG2b | – | ++ | ++ | |
| IgG2c | + | ++ | ++ | |
| IgM | +/- | – | +/- |
| Total Ig | Protein A | Protein G | A+G |
| Human | ++++ | ++++ | ++++ |
| Mouse | +++ | +++ | +++ |
| Rat | +/- | ++ | ++ |
| Rabbit | ++++ | +++ | ++++ |
| Goat | – | ++ | ++ |
| Chicken | – | + | + |
| Cow | ++ | ++++ | ++++ |
| Guinea Pig | ++++ | ++ | ++++ |
| Hamster | + | ++ | ++ |
| Horse | ++ | ++++ | ++++ |
| Pig | +++ | +++ | +++ |
| Sheep | +/- | ++ | ++ |
| ++++: Strong Binding |
| ++~+++: Medium Binding |
| +: Weak Binding |
| +/-: Weak or No Binding |
| -: No Binding |
本产品中的重组Protein G可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合，分子量为22kDa。该重组Protein G通过改造，仅保留了与IgG Fc端结合相关的氨基酸序列，去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列(如白蛋白结合位点)，从而可以有效减少非特异性结合。每个Protein G分子可以结合3个IgG。
本产品中的Protein G共价连接到4%的高交联度、高流速琼脂糖(cross-linked, 4% Agarose, Fast Flow)上。每毫升Protein
G agarose beads (沉淀物)中共偶联有约2mg的重组Protein G。每毫升Protein G agarose beads (沉淀物)可以结合超过20mg human IgG。本产品中agarose beads的平均直径为90μm，抗体纯化时的推荐线性流速为50-300cm/h，耐压指数最高为0.3MPa。
本产品配制在可以直接用于免疫沉淀和抗体纯化的适当溶液中，每毫升中共含有0.25ml agarose beads (沉淀物)。
本Protein G Agarose (Fast Flow, for IP)如果用于常规的免疫沉淀，每毫升本产品(沉淀和溶液为1:3的混合物)可以免疫沉淀50次。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2053-2ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml |
| P2053-10ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 10ml |
| P2053-50ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 50ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
4℃保存，一年有效。请勿冷冻。
注意事项：
请勿冷冻保存本产品。
Protein G Agarose使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
本产品中含有微量防腐剂，不会影响常规的免疫沉淀和抗体纯化。但如果后续涉及酶活性测定，使用本产品前宜先用TBS等适当溶液洗涤Protein G Agarose beads三次，以充分消除防腐剂可能产生的干扰。
从蛋白样品收集开始，所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)：
a. 蛋白样品的准备：
(a) 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次，然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。可以使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)或各种RIPA裂解液(P0013B、P0013C、P0013D或P0013E)等进行细胞的裂解。
(b) 对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
(c) 对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
注：详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材，参考10厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
b. 去除非特异性结合(可选做)：
(a) 取200微升至1毫升蛋白样品，蛋白量约为200微克至1毫克，加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20微升充分重悬的Protein G Agarose，4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
(b) 2500rpm(约1000g)离心5分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。
注：所谓种属相同的IgG是指，例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG，则在本步骤中可以加入normal mouse IgG，如无normal IgG，可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和normal IgG和Protein G Agarose的孵育，可以充分降低非特异性的结合，降低背景。
c. 免疫沉淀：
(a) 加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动过夜。
(b) 再加入20微升充分重悬的Protein G Agarose，4℃缓慢摇动1-3个小时(为方便后续的洗涤操作，可以把加入充分重悬的Protein G Agarose的量调整为40微升)。
(c) 2500rpm(约1000g)离心5分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清，注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein G Agarose。
(d) 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤(c)。
(e) 完成最后一次洗涤后，去除上清，加入20-40微升1X SDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。
(f) 100℃或沸水浴处理3-5分钟，取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。
2. 免疫共沉淀：
参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(Co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
3. 抗体纯化：
a. 准备工作：
(a) 用0.45微米或0.2微米孔径的滤膜过滤所用的溶液。
(b) 所有的溶液必须用超声等方法脱气(degas)。
(c) 选择适当的纯化柱，用适当量的Protein G Agarose装填纯化柱。也可使用碧云天的预装柱产品(P2026、P2027)。
(d) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤并平衡纯化柱，流速可以用恒流泵控制为1ml/min (1ml预装柱)。如无恒流泵，也可以完全依靠重力洗涤并平衡纯化柱。
b. 抗体纯化：
(a) 把含有待纯化的抗体上样到纯化柱。
(b) 待纯化的抗体过柱后，用10-20倍柱体积的TBS洗涤，以去除未结合和非特异性结合的蛋白。洗涤是否完全可以通过测定280nm的吸光度进行确定。
(c) 洗涤完后，用10ml 50mM glycine，pH2.7作为洗脱液，洗脱结合的抗体。某些抗体和Protein G的结合能力很强，在pH2.7时洗脱效果不太理想，可以使用50mM glycine，pH1.9作为洗脱液。分管收集洗脱下的抗体，根据蛋白浓度或后续的检测效果确定洗脱峰在哪几个收集管中。
c. 纯化柱的再生：
(a) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤纯化柱，使纯化柱达到中性的pH。
(b) 用TBS来保存再生的纯化柱。
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| P2009 | Protein G Agarose (Fast Flow, 进口分装) | 2ml |
| P2012 | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 进口分装) | 2ml |
| P2015-2ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
| P2015-10ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
| P2015-50ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
| P2017-2ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
| P2017-10ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
| P2017-50ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
| P2019-2ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
| P2019-10ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
| P2019-50ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
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| P2025 | Protein A Agarose (Fast Flow, 5ml)预装柱 | 1个 |
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| P2027 | Protein G Agarose (Fast Flow, 5ml)预装柱 | 1个 |
| P2028 | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 1ml)预装柱 | 1个 |
| P2029 | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 5ml)预装柱 | 1个 |
| P2051-2ml | Protein A Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml |
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| P2055-2ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml |
| P2055-10ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 10ml |
| P2055-50ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 50ml |
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1. Zhang M, Gao M, Chen J, Song L, Wei W
CP-25 exerts anti-angiogenic effects on a rat model of adjuvant-induced arthritis by promoting GRK2-induced downregulation of CXCR4-ERK1/2 signaling in endothelial cells.
Mol Med Rep. 2019 Dec;20(6):4831-4842. (IF 2.1)
Agarose Tablets 琼脂糖片剂0.5g/片 凝胶电泳琼脂糖片
Agarose Tablets 琼脂糖片剂0.5g/片 凝胶电泳琼脂糖片
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
琼脂糖（Agarose）是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法（如Northern或Southern）来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散（RID）实验。
本品是由Yeasen 高质量琼脂糖改进而成，使用时无需称量，仅需取适量片剂溶解即可，操作简单快速，且不用担心琼脂糖挂壁，另外本品利用泡罩板包装，便于携带和放置，是实验室DNA/RNA凝胶电泳的最佳选择！
产品性质
|
CAS号（CAS NO.） |
9012-36-6 |
|
外观（Appearance） |
白色片剂 |
|
凝胶强度（Gel Strength, 1.0%） |
≥1200 (g/cm2) |
|
胶凝温度域（Geling Range, 1.5%） |
36±1.5℃ |
|
融胶温度域（Melting Range, 1.5%） |
88±1.5℃ |
|
电渗值（EEO, -mr） |
≤0.13 |
|
硫酸盐（Sulfate, %） |
≤0.15% |
|
水分（Moisture） |
≤10% |
|
灰分（Ash Content） |
≤0.5% |
|
DNA酶（DNase） |
None Detected |
|
RNA酶（RNase） |
None Detected |
|
蛋白酶（Protease） |
None Detected |
运输和保存方法
室温运输和保存即可。有效期5年。
注意事项
1）可用煮沸或微波加热的方法来熔胶，琼脂糖熔化必须彻底！此时琼脂糖胶液清澈，否则，会造成电泳图像模糊不清。熔胶可能会引起暴沸，需注意防止烫伤。微波炉中加热时间不宜过长。
2）用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
使用方法
按0.5g/片剂将适量琼脂糖片剂在缓冲液中浸泡2-3 min使之完全崩解，之后按照常规琼脂糖配制方法操作即可。请参考下表：
|
凝胶浓度% |
1片 |
2片 |
3片 |
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1% |
50 mL |
100 mL |
150 mL |
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2% |
25 mL |
50 mL |
75 mL |
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产品名称 |
货号 |
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Goldview核酸染料（10,000×） |
10201ES03 |
1 mL |
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YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液）HOT |
10202ES76 |
500 μL |
|
YeaGreen核酸染料（10,000× 水溶液） |
10204ES76 |
500 μL |
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Agarose琼脂糖HOT |
10208ES60/76 |
100/500 g |
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Low Melting Point Agarose 低熔点琼脂糖 |
10214ES08/25 |
5/25 g |
|
2000 DNA MarkerHOT |
10501ES60/80 |
100/1000 T |
HB210824
产品描述
琼脂糖（Agarose）是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法（如Northern或Southern）来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散（RID）实验。
本品是由Yeasen 高质量琼脂糖改进而成，使用时无需称量，仅需取适量片剂溶解即可，操作简单快速，且不用担心琼脂糖挂壁，另外本品利用泡罩板包装，便于携带和放置，是实验室DNA/RNA凝胶电泳的最佳选择！
产品性质
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CAS号（CAS NO.） |
9012-36-6 |
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外观（Appearance） |
白色片剂 |
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凝胶强度（Gel Strength, 1.0%） |
≥1200 (g/cm2) |
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胶凝温度域（Geling Range, 1.5%） |
36±1.5℃ |
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88±1.5℃ |
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电渗值（EEO, -mr） |
≤0.13 |
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硫酸盐（Sulfate, %） |
≤0.15% |
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水分（Moisture） |
≤10% |
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灰分（Ash Content） |
≤0.5% |
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DNA酶（DNase） |
None Detected |
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RNA酶（RNase） |
None Detected |
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蛋白酶（Protease） |
None Detected |
运输和保存方法
室温运输和保存即可。有效期5年。
注意事项
1）可用煮沸或微波加热的方法来熔胶，琼脂糖熔化必须彻底！此时琼脂糖胶液清澈，否则，会造成电泳图像模糊不清。熔胶可能会引起暴沸，需注意防止烫伤。微波炉中加热时间不宜过长。
2）用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
使用方法
按0.5g/片剂将适量琼脂糖片剂在缓冲液中浸泡2-3 min使之完全崩解，之后按照常规琼脂糖配制方法操作即可。请参考下表：
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凝胶浓度% |
1片 |
2片 |
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1% |
50 mL |
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10202ES76 |
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10208ES60/76 |
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蛋白L纯化预装柱5mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column
蛋白L纯化预装柱5mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品简介
天然蛋白L（Protein L）是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质，分子量为36 KD。本产品使用的是基因改造后的蛋白L ，既保留了与抗体k链结合的特性，同时也不会影响抗体的抗原结合位点。与 protein A 和 Protein G 相比，Protein L 更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体，包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡，但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。
rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质，产品以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein L为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本产品经过一步亲和层析，可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
本品rProtein L 4FF Chromatography Column，5 mL是一种装填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中压预装柱，规格5 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。
产品信息
|
货号 |
36416ES08 / 36416ES25 |
|
规格 |
5 mL /5×5 mL |
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白L |
|
孔径（Bead size） |
45-165 µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
＞15 mg Mouse IgG/mL基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-10 |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡/洗杂缓冲液：0.15 M NaCl，20 mM Na2HPO4，pH 7.0
洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用说明
【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂缓冲液透析。样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
- 样品纯化（以Akta为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱下端口接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
2. SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3. 填料清洗
rProtein L 4FF Chromatography Column可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
用2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
注意事项
1. 请勿冷冻保存本产品。
2. 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
3. 本产品仅作科研用途。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230412
产品简介
天然蛋白L（Protein L）是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质，分子量为36 KD。本产品使用的是基因改造后的蛋白L ，既保留了与抗体k链结合的特性，同时也不会影响抗体的抗原结合位点。与 protein A 和 Protein G 相比，Protein L 更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体，包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡，但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。
rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质，产品以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein L为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本产品经过一步亲和层析，可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
本品rProtein L 4FF Chromatography Column，5 mL是一种装填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中压预装柱，规格5 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。
产品信息
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货号 |
36416ES08 / 36416ES25 |
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规格 |
5 mL /5×5 mL |
产品性质
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基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
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配体（Ligand） |
重组蛋白L |
|
孔径（Bead size） |
45-165 µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
＞15 mg Mouse IgG/mL基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-10 |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡/洗杂缓冲液：0.15 M NaCl，20 mM Na2HPO4，pH 7.0
洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用说明
【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂缓冲液透析。样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
- 样品纯化（以Akta为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱下端口接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
2. SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3. 填料清洗
rProtein L 4FF Chromatography Column可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
用2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
注意事项
1. 请勿冷冻保存本产品。
2. 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
3. 本产品仅作科研用途。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230412
Q：购买了该产品，还需要额外再购买相应填料吗？
A：不需要了，本品含有填料。
Q：为什么洗脱组分中没有目的蛋白？
A：可能是样品与Protein G 结合力低；换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
Q：为什么样品纯化过程中曲线不稳？
A：可能是样品或 buffer 中有气泡；建议样品和buffer 进行脱气。
Q：为什么柱子反压过高？
A：可能是填料被堵塞；裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤
暂无内容
Heparin Agarose 6FF(肝素亲和纯化介质)
Heparin Agarose 6FF(肝素亲和纯化介质)
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Heparin Agarose 6FF是一种新型亲和层析介质，是将肝素偶联到交联琼脂糖凝胶过滤层析介质上。肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合，因此本产品可应用于上述产品的分离纯化，同时产品基团脱落少，使用寿命长，操作方便。
产品性质
|
基质 |
高度交联的琼脂糖凝胶 |
|
配基 |
肝素 |
|
配基密度 |
>5 mg/mL |
|
粒径 |
45-165 µm |
|
载量 |
>3 mg抗凝血因子Ⅲ（ATⅢ）/mL基质 |
|
耐压流速 |
250-400 cm/h（在0.1 MPa） |
|
耐热性 |
121℃，0.02 M NaH2PO4 pH7.5，30 min，5次 |
|
PH稳定性 |
4~10（长期）；3~13（短期，CIP） |
|
化学稳定性 |
在常用水相溶液中稳定：0.1M氢氧化钠；0.05M乙酸钠；8M尿素；6M盐酸胍；非离子去污剂；10%丙三醇 |
|
储存缓冲液 |
20%乙醇+0.05 mol/L乙酸钠缓冲液，4~8℃ |
运输和保存方法
1.常温运输，避免日晒、雨淋、重压。
2.密封保存在4~8℃（保存溶液为20%乙醇+0.05mol/L乙酸钠缓冲液）干燥、通风、清洁处，不可冷冻。
3.有效期5年。
注意事项
1.该介质从冷室或冰箱中取出后最好在室温下恢复到室温，然后缓慢摇匀后装柱，以免产生气泡影响柱效。
2.吸附：20 mmol/L~50 mmol/L，pH7.4~8.0的缓冲液，为避免离子交换的干扰，缓冲液可适当加50 mmol/L~100 mmol/L NaCl，最常用的为Tris-HCl缓冲溶液。
3.上样样品必须与平衡柱子缓冲液的 pH、电导相同。
4.洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。
5.加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7.本产品仅作科研用途！
使用方法
1 装柱
装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。
2 平衡
用2～5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡，直至pH和电导率保持不变。常用的缓冲液为pH 7.4～8.0的0.02 mol/L～0.05 mol/L的Tris-HCl或PBS缓冲液。
3 上样
样品的预处理：样品需先用0.45 μm滤膜过滤，然后上样，以免堵塞层析柱。上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可通过线性实验找到最佳上样量。
4 洗脱
可通过改变离子强度来达到洗脱效果，一般可在pH7.4～8.0的缓冲液中加0.2～2 mol/L NaCl 进行，也可改变 pH 值来进行洗脱。一般洗脱方式有恒定洗脱、梯度洗脱、阶跃洗脱，推荐使用梯度洗脱。
5 在位清洗
1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：用2 mol/L NaCl溶液反向清洗2～3个柱床体积。
2）去除强疏水性蛋白和脂质等：用70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗4个柱床体积。
6 再生
先用0.1 mol/L Tris-HCl pH7.0缓冲液洗3个柱床体积，然后用0.1 mol/L NaOH（含2 mol/L NaCl）洗3个柱床体积，最后用20%乙醇溶液洗3个柱床体积。经常用酸碱洗填料会使填料的吸附能力下降，所以清洗要尽量缩短时间。
HB220606
Heparin Agarose 6FF是一种新型亲和层析介质，是将肝素偶联到交联琼脂糖凝胶过滤层析介质上。肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合，因此本产品可应用于上述产品的分离纯化，同时产品基团脱落少，使用寿命长，操作方便。
产品性质
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基质 |
高度交联的琼脂糖凝胶 |
|
配基 |
肝素 |
|
配基密度 |
>5 mg/mL |
|
粒径 |
45-165 µm |
|
载量 |
>3 mg抗凝血因子Ⅲ（ATⅢ）/mL基质 |
|
耐压流速 |
250-400 cm/h（在0.1 MPa） |
|
耐热性 |
121℃，0.02 M NaH2PO4 pH7.5，30 min，5次 |
|
PH稳定性 |
4~10（长期）；3~13（短期，CIP） |
|
化学稳定性 |
在常用水相溶液中稳定：0.1M氢氧化钠；0.05M乙酸钠；8M尿素；6M盐酸胍；非离子去污剂；10%丙三醇 |
|
储存缓冲液 |
20%乙醇+0.05 mol/L乙酸钠缓冲液，4~8℃ |
运输和保存方法
1.常温运输，避免日晒、雨淋、重压。
2.密封保存在4~8℃（保存溶液为20%乙醇+0.05mol/L乙酸钠缓冲液）干燥、通风、清洁处，不可冷冻。
3.有效期5年。
注意事项
1.该介质从冷室或冰箱中取出后最好在室温下恢复到室温，然后缓慢摇匀后装柱，以免产生气泡影响柱效。
2.吸附：20 mmol/L~50 mmol/L，pH7.4~8.0的缓冲液，为避免离子交换的干扰，缓冲液可适当加50 mmol/L~100 mmol/L NaCl，最常用的为Tris-HCl缓冲溶液。
3.上样样品必须与平衡柱子缓冲液的 pH、电导相同。
4.洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。
5.加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7.本产品仅作科研用途！
使用方法
1 装柱
装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。
2 平衡
用2～5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡，直至pH和电导率保持不变。常用的缓冲液为pH 7.4～8.0的0.02 mol/L～0.05 mol/L的Tris-HCl或PBS缓冲液。
3 上样
样品的预处理：样品需先用0.45 μm滤膜过滤，然后上样，以免堵塞层析柱。上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可通过线性实验找到最佳上样量。
4 洗脱
可通过改变离子强度来达到洗脱效果，一般可在pH7.4～8.0的缓冲液中加0.2～2 mol/L NaCl 进行，也可改变 pH 值来进行洗脱。一般洗脱方式有恒定洗脱、梯度洗脱、阶跃洗脱，推荐使用梯度洗脱。
5 在位清洗
1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：用2 mol/L NaCl溶液反向清洗2～3个柱床体积。
2）去除强疏水性蛋白和脂质等：用70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗4个柱床体积。
6 再生
先用0.1 mol/L Tris-HCl pH7.0缓冲液洗3个柱床体积，然后用0.1 mol/L NaOH（含2 mol/L NaCl）洗3个柱床体积，最后用20%乙醇溶液洗3个柱床体积。经常用酸碱洗填料会使填料的吸附能力下降，所以清洗要尽量缩短时间。
HB220606
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蛋白G琼脂糖纯化树脂 蛋白G纯化树脂|Protein G Agarose Resin
蛋白G琼脂糖纯化树脂 蛋白G纯化树脂|Protein G Agarose Resin
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，与发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面的蛋白A类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA 和Protein G结合性能不太一样，相比ProteinA， ProteinG 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力，它还可以结合不能与ProteinA很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1（详见附录1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，rProtein G Agarose Resin以琼脂糖凝胶为基质，重组Protein G为配基，具有很高的物理化学稳定性。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白G |
|
孔径（Bead size） |
45-165µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
＞30mg human IgG/ml 基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-10 |
保存方法
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液：0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0
洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1 rProtein G Agarose Resin的装填
将rProtein G Agarose Resin装入合适的层析柱中，注意避免产生气泡。
2 样品纯化
1）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）上样：将样品加到平衡好的rProtein G Agarose Resin中，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
3）洗杂： 用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）洗脱： 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
3 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
4 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
① 用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗；
② 用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗；
② 用5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事项
- 请勿冷冻保存本产品。
- Protein G琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
- 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
|
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
|
Human IgG |
++++ |
++++ |
Mouse IgG |
++++ |
++++ |
|
Human IgG1 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgG2 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG2a |
++++ |
++++ |
|
Human IgG3 |
+ |
++++ |
Mouse IgG2b |
+++ |
+++ |
|
Human IgG4 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG3 |
++ |
+++ |
|
Human IgM |
Use anti-Human IgM |
Mouse IgM |
Use anti-Mouse IgM |
||
|
Human IgE |
NR |
NR |
Chicken IgG (IgY) |
NR |
NR |
|
Human IgA |
+ |
NR |
Cow IgG |
++ |
++++ |
|
Human IgA1 |
+ |
NR |
Goat IgG |
+ |
++++ |
|
Human IgA2 |
+ |
NR |
Goat IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgD |
Use anti-Human IgD |
Goat IgG2 |
++++ |
++++ |
|
|
Rat IgG |
+ |
++ |
Goat IgM |
NR |
NR |
|
Rat IgG1 |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG |
++++ |
++ |
|
Rat IgG2a |
NR |
++++ |
Guinea Pig IgG1 |
++++ |
++ |
|
Rat IgG2b |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG2 |
++++ |
++ |
|
Rat IgG3 |
+ |
++ |
Hamster IgG |
+ |
++ |
|
Sheep IgG |
+ |
++ |
Horse IgG |
+ |
++++ |
|
Sheep IgG1 |
+ |
++ |
Rabbit IgG |
++++ |
+++ |
|
Sheep IgG2 |
+ |
++ |
Rabbit IgM |
NR |
NR |
|
Sheep IgM |
NR |
NR |
Rabbit All isotypes |
+++ |
++ |
|
Pig IgG |
+++ |
+++ |
Monkey IgG |
++++ |
++++ |
|
Cat IgG |
++++ |
+ |
Donkey IgG |
++ |
++++ |
|
Dog IgG |
++++ |
+ |
|
|
|
|
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; |
|||||
附录2 常见问题与解答
|
问题 |
可能原因 |
推荐解决方法 |
|
柱子反压过高 |
筛板被堵塞 |
清洗或更换筛板 |
|
填料被堵塞 |
清洗填料 |
|
|
裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。 |
||
|
样品纯化过程中曲线不稳 |
样品或 buffer 中有气泡 |
赶出气泡 |
|
样品和buffer进行脱气 |
||
|
洗脱组分中没有目的蛋白 |
样品中抗体浓度太低 |
使用其抗原做配体的介质 |
|
抗体被降解 |
适当的提高洗脱pH |
|
|
样品与Protein G结合力低 |
换用Protein A或Protein A/G树脂纯化 |
|
|
回收率逐渐减低 |
上样量太多 |
减少上样量 |
|
柱子太脏，载量降低 |
清洗树脂 |
HB230309
产品描述
天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，与发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面的蛋白A类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA 和Protein G结合性能不太一样，相比ProteinA， ProteinG 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力，它还可以结合不能与ProteinA很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1（详见附录1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，rProtein G Agarose Resin以琼脂糖凝胶为基质，重组Protein G为配基，具有很高的物理化学稳定性。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白G |
|
孔径（Bead size） |
45-165µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
＞30mg human IgG/ml 基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-10 |
保存方法
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液：0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0
洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1 rProtein G Agarose Resin的装填
将rProtein G Agarose Resin装入合适的层析柱中，注意避免产生气泡。
2 样品纯化
1）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）上样：将样品加到平衡好的rProtein G Agarose Resin中，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
3）洗杂： 用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）洗脱： 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
3 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
4 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
① 用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗；
② 用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗；
② 用5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事项
- 请勿冷冻保存本产品。
- Protein G琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
- 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
|
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
|
Human IgG |
++++ |
++++ |
Mouse IgG |
++++ |
++++ |
|
Human IgG1 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgG2 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG2a |
++++ |
++++ |
|
Human IgG3 |
+ |
++++ |
Mouse IgG2b |
+++ |
+++ |
|
Human IgG4 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG3 |
++ |
+++ |
|
Human IgM |
Use anti-Human IgM |
Mouse IgM |
Use anti-Mouse IgM |
||
|
Human IgE |
NR |
NR |
Chicken IgG (IgY) |
NR |
NR |
|
Human IgA |
+ |
NR |
Cow IgG |
++ |
++++ |
|
Human IgA1 |
+ |
NR |
Goat IgG |
+ |
++++ |
|
Human IgA2 |
+ |
NR |
Goat IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgD |
Use anti-Human IgD |
Goat IgG2 |
++++ |
++++ |
|
|
Rat IgG |
+ |
++ |
Goat IgM |
NR |
NR |
|
Rat IgG1 |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG |
++++ |
++ |
|
Rat IgG2a |
NR |
++++ |
Guinea Pig IgG1 |
++++ |
++ |
|
Rat IgG2b |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG2 |
++++ |
++ |
|
Rat IgG3 |
+ |
++ |
Hamster IgG |
+ |
++ |
|
Sheep IgG |
+ |
++ |
Horse IgG |
+ |
++++ |
|
Sheep IgG1 |
+ |
++ |
Rabbit IgG |
++++ |
+++ |
|
Sheep IgG2 |
+ |
++ |
Rabbit IgM |
NR |
NR |
|
Sheep IgM |
NR |
NR |
Rabbit All isotypes |
+++ |
++ |
|
Pig IgG |
+++ |
+++ |
Monkey IgG |
++++ |
++++ |
|
Cat IgG |
++++ |
+ |
Donkey IgG |
++ |
++++ |
|
Dog IgG |
++++ |
+ |
|
|
|
|
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; |
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附录2 常见问题与解答
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方法 |
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柱子反压过高 |
筛板被堵塞 |
清洗或更换筛板 |
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填料被堵塞 |
清洗填料 |
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裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。 |
||
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样品纯化过程中曲线不稳 |
样品或 buffer 中有气泡 |
赶出气泡 |
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样品和buffer进行脱气 |
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洗脱组分中没有目的蛋白 |
样品中抗体浓度太低 |
使用其抗原做配体的介质 |
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抗体被降解 |
适当的提高洗脱pH |
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样品与Protein G结合力低 |
换用Protein A或Protein A/G树脂纯化 |
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回收率逐渐减低 |
上样量太多 |
减少上样量 |
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柱子太脏，载量降低 |
清洗树脂 |
HB230309
Q：为什么柱子反压过高？
A：可能是填料被堵塞；裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤。
Q：为什么洗脱组分中没有目的蛋白？
A：可能是抗体被降解；建议适当的提高洗脱pH。
Q：该产品可以直接使用吗？
A：Protein A 琼脂糖珠最好在使用前充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
Q：该产品可以贮存在–20℃吗？
A：不可以，不可冷冻该产品。应置于 4°贮存。
[1] Yang L, Gu W, Cheung KH, et al. InsP3R-SEC5 interaction on phagosomes modulates innate immunity to Candida albicans by promoting cytosolic Ca2+ elevation and TBK1 activity [published correction appears in BMC Biol. 2020 Nov 2;18(1):158]. BMC Biol. 2018;16(1):46. Published 2018 Apr 27. doi:10.1186/s12915-018-0507-6(IF:5.770)
Agarose Tablets 琼脂糖（片剂）说明书
Agarose Tablets 琼脂糖（片剂）说明书
产品详情
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货号 |
规格 |
价格 |
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78BB10002-box |
1盒（200片） |
￥580.00 |
产品简介
琼脂糖（Agarose）是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法（如Northern或Southern）来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散（RID）实验。
本品是高质量琼脂糖改进而成，使用时无需称量，仅需取适量片剂溶解即可，操作简单快速，且不用担心琼脂糖挂壁，另外本品利用泡罩板包装，便于携带和放置，是实验室DNA/RNA凝胶电泳的良好选择！
产品性质
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CAS号（CAS NO.） |
9012-36-6 |
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外观（Appearance） |
白色片剂 |
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凝胶强度（Gel Strength, 1.0%） |
≥1200 (g/cm2) |
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36±1.5℃ |
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融胶温度域（Melting Range, 1.5%） |
88±1.5℃ |
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电渗值（EEO, -mr） |
≤0.13 |
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硫酸盐（Sulfate, %） |
≤0.15% |
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水分（Moisture） |
≤10% |
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灰分（Ash Content） |
≤0.5% |
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DNA酶（DNase） |
None Detected |
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RNA酶（RNase） |
None Detected |
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蛋白酶（Protease） |
None Detected |
保存条件
室温运输和保存即可。有效期5年。
注意事项
1. 可用煮沸或微波加热的方法来熔胶，琼脂糖熔化！此时琼脂糖胶液清澈，否则，会造成电泳图像模糊不清。熔胶可能会引起暴沸，需注意防止烫伤。微波炉中加热时间不宜过长。
2. 用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
3. 可用煮沸或微波加热的方法来熔胶，琼脂糖熔化。熔胶可能会引起暴沸，需注意防止烫伤。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
蛋白L纯化预装柱1mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column
蛋白L纯化预装柱1mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品简介
天然蛋白L（Protein L）是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质，分子量为36 KD。本产品使用的是基因改造后的蛋白L ，既保留了与抗体k链结合的特性，同时也不会影响抗体的抗原结合位点。与 protein A 和 Protein G 相比，Protein L 更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体，包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡，但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。
rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质，产品以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein L为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本产品经过一步亲和层析，可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
本品rProtein L 4FF Chromatography Column，1 mL是一种装填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中压预装柱，规格1 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。
产品信息
|
货号 |
36415ES03 / 36415ES08 |
|
规格 |
1 mL /5×1 mL |
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白L |
|
孔径（Bead size） |
45-165 µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
＞15 mg Mouse IgG/mL基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-10 |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡/洗杂缓冲液：0.15 M NaCl，20 mM Na2HPO4，pH 7.0
洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用说明
【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂缓冲液透析。样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
- 样品纯化（以Akta为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱下端口接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
2. SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3. 填料清洗
rProtein L 4FF Chromatography Column可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
用2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
注意事项
1. 请勿冷冻保存本产品。
2. 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
3. 本产品仅作科研用途。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
产品简介
天然蛋白L（Protein L）是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质，分子量为36 KD。本产品使用的是基因改造后的蛋白L ，既保留了与抗体k链结合的特性，同时也不会影响抗体的抗原结合位点。与 protein A 和 Protein G 相比，Protein L 更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体，包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡，但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。
rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质，产品以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein L为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本产品经过一步亲和层析，可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
本品rProtein L 4FF Chromatography Column，1 mL是一种装填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中压预装柱，规格1 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。
产品信息
|
货号 |
36415ES03 / 36415ES08 |
|
规格 |
1 mL /5×1 mL |
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白L |
|
孔径（Bead size） |
45-165 µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
＞15 mg Mouse IgG/mL基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-10 |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡/洗杂缓冲液：0.15 M NaCl，20 mM Na2HPO4，pH 7.0
洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用说明
【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用平衡/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂缓冲液透析。样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
- 样品纯化（以Akta为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱下端口接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。
2. SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3. 填料清洗
rProtein L 4FF Chromatography Column可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
用2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
注意事项
1. 请勿冷冻保存本产品。
2. 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
3. 本产品仅作科研用途。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Q：购买了该产品，还需要额外再购买相应填料吗？
A：不需要了，本品含有填料。
Q：为什么洗脱组分中没有目的蛋白？
A：可能是样品与Protein G 结合力低；换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
Q：为什么样品纯化过程中曲线不稳？
A：可能是样品或 buffer 中有气泡；建议样品和buffer 进行脱气。
Q：为什么柱子反压过高？
A：可能是填料被堵塞；裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤。
[1] Fu F, Liu H, Gao R, et al. Protein adduct binding properties of tabun-subtype nerve agents after exposure in vitro and in vivo. Toxicol Lett. 2020;321:1-11. doi:10.1016/j.toxlet.2019.12.014(IF:3.499)
蛋白A纯化预装柱1ml 蛋白纯化预装柱|Protein A 4FF Chromatography Column
蛋白A纯化预装柱1ml 蛋白纯化预装柱|Protein A 4FF Chromatography Column
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品描述
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA 和Protein G结合性能不太一样（详见附录1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白A，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，rProtein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein A为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
本品rProtein A 4FF Chromatography Column，1 mL是一种装填了rProtein A Agarose Resin 4FF的中压预装柱，规格1 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白A |
|
孔径（Bead size） |
45-165 µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3MPa,3bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
＞40 mg Rabbit IgG/ mL 基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-12 |
运输与保存方法
冰袋运输。2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液：0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0
洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1样品纯化（以Akta系统为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1 mL /min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
2 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
① 用2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗；
② 用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗；
② 用5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
|
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
|
Human IgG |
++++ |
++++ |
Mouse IgG |
++++ |
++++ |
|
Human IgG1 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgG2 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG2a |
++++ |
++++ |
|
Human IgG3 |
+ |
++++ |
Mouse IgG2b |
+++ |
+++ |
|
Human IgG4 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG3 |
++ |
+++ |
|
Human IgM |
Use anti-Human IgM |
Mouse IgM |
Use anti-Mouse IgM |
||
|
Human IgE |
NR |
NR |
Chicken IgG (IgY) |
NR |
NR |
|
Human IgA |
+ |
NR |
Cow IgG |
++ |
++++ |
|
Human IgA1 |
+ |
NR |
Goat IgG |
+ |
++++ |
|
Human IgA2 |
+ |
NR |
Goat IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgD |
Use anti-Human IgD |
Goat IgG2 |
++++ |
++++ |
|
|
Rat IgG |
+ |
++ |
Goat IgM |
NR |
NR |
|
Rat IgG1 |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG |
++++ |
++ |
|
Rat IgG2a |
NR |
++++ |
Guinea Pig IgG1 |
++++ |
++ |
|
Rat IgG2b |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG2 |
++++ |
++ |
|
Rat IgG3 |
+ |
++ |
Hamster IgG |
+ |
++ |
|
Sheep IgG |
+ |
++ |
Horse IgG |
+ |
++++ |
|
Sheep IgG1 |
+ |
++ |
Rabbit IgG |
++++ |
+++ |
|
Sheep IgG2 |
+ |
++ |
Rabbit IgM |
NR |
NR |
|
Sheep IgM |
NR |
NR |
Rabbit All isotypes |
+++ |
++ |
|
Pig IgG |
+++ |
+++ |
Monkey IgG |
++++ |
++++ |
|
Cat IgG |
++++ |
+ |
Donkey IgG |
++ |
++++ |
|
Dog IgG |
++++ |
+ |
|
|
|
|
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; |
|||||
附录2 常见问题与解答
|
问题 |
可能原因 |
推荐解决方法 |
|
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
清洗填料 |
|
裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用0.22 µm/0.45 µm滤膜过滤。 |
||
|
样品纯化过程中曲线不稳 |
样品或 buffer 中有气泡 |
赶出气泡 |
|
样品和buffer进行脱气 |
||
|
洗脱组分中没有目的蛋白 |
样品中抗体浓度太低 |
使用其抗原做配体的介质 |
|
抗体被降解 |
适当的提高洗脱pH |
|
|
样品与Protein A结合力低 |
换用Protein G或Protein A/G树脂纯化 |
|
|
回收率逐渐减低 |
上样量太多 |
减少上样量 |
|
柱子太脏，载量降低 |
清洗树脂 |
HB230227
产品描述
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA 和Protein G结合性能不太一样（详见附录1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白A，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，rProtein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，重组Protein A为配基，具有很高的物理化学稳定性，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化，适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
本品rProtein A 4FF Chromatography Column，1 mL是一种装填了rProtein A Agarose Resin 4FF的中压预装柱，规格1 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白A |
|
孔径（Bead size） |
45-165 µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3MPa,3bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
＞40 mg Rabbit IgG/ mL 基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-12 |
运输与保存方法
冰袋运输。2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液：0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0
洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。
1样品纯化（以Akta系统为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1 mL /min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
2 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
① 用2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗；
② 用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗；
② 用5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
|
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
|
Human IgG |
++++ |
++++ |
Mouse IgG |
++++ |
++++ |
|
Human IgG1 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgG2 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG2a |
++++ |
++++ |
|
Human IgG3 |
+ |
++++ |
Mouse IgG2b |
+++ |
+++ |
|
Human IgG4 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG3 |
++ |
+++ |
|
Human IgM |
Use anti-Human IgM |
Mouse IgM |
Use anti-Mouse IgM |
||
|
Human IgE |
NR |
NR |
Chicken IgG (IgY) |
NR |
NR |
|
Human IgA |
+ |
NR |
Cow IgG |
++ |
++++ |
|
Human IgA1 |
+ |
NR |
Goat IgG |
+ |
++++ |
|
Human IgA2 |
+ |
NR |
Goat IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgD |
Use anti-Human IgD |
Goat IgG2 |
++++ |
++++ |
|
|
Rat IgG |
+ |
++ |
Goat IgM |
NR |
NR |
|
Rat IgG1 |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG |
++++ |
++ |
|
Rat IgG2a |
NR |
++++ |
Guinea Pig IgG1 |
++++ |
++ |
|
Rat IgG2b |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG2 |
++++ |
++ |
|
Rat IgG3 |
+ |
++ |
Hamster IgG |
+ |
++ |
|
Sheep IgG |
+ |
++ |
Horse IgG |
+ |
++++ |
|
Sheep IgG1 |
+ |
++ |
Rabbit IgG |
++++ |
+++ |
|
Sheep IgG2 |
+ |
++ |
Rabbit IgM |
NR |
NR |
|
Sheep IgM |
NR |
NR |
Rabbit All isotypes |
+++ |
++ |
|
Pig IgG |
+++ |
+++ |
Monkey IgG |
++++ |
++++ |
|
Cat IgG |
++++ |
+ |
Donkey IgG |
++ |
++++ |
|
Dog IgG |
++++ |
+ |
|
|
|
|
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; |
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附录2 常见问题与解答
|
问题 |
可能原因 |
推荐解决方法 |
|
柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
清洗填料 |
|
裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用0.22 µm/0.45 µm滤膜过滤。 |
||
|
样品纯化过程中曲线不稳 |
样品或 buffer 中有气泡 |
赶出气泡 |
|
样品和buffer进行脱气 |
||
|
洗脱组分中没有目的蛋白 |
样品中抗体浓度太低 |
使用其抗原做配体的介质 |
|
抗体被降解 |
适当的提高洗脱pH |
|
|
样品与Protein A结合力低 |
换用Protein G或Protein A/G树脂纯化 |
|
|
回收率逐渐减低 |
上样量太多 |
减少上样量 |
|
柱子太脏，载量降低 |
清洗树脂 |
HB230227
Q：购买了该产品，还需要额外再购买相应填料吗？
A：不需要了，本品含有填料。
Q：为什么柱子反压过高？
A：可能是填料被堵塞；裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤。
Q：为什么洗脱组分中没有目的蛋白？
A：可能是抗体被降解；建议适当的提高洗脱pH。
Q：为什么样品纯化过程中曲线不稳？
A：可能是样品或 buffer 中有气泡；建议样品和buffer 进行脱气。
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蛋白A/G琼脂糖纯化树脂 蛋白A/G纯化树脂|rProtein A/G Agarose Resin
蛋白A/G琼脂糖纯化树脂 蛋白A/G纯化树脂|rProtein A/G Agarose Resin
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品简介
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。然而两者结合特异性上有所不同（详细见附录1，蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表）。蛋白A，蛋白G常共价偶联在固体载体如琼脂糖珠或丙烯酸树脂小珠上，直接用以做免疫沉淀（IP）或者免疫共沉淀（Co-IP）来进行蛋白功能相关研究，或者直接装在层析柱上来纯化单克隆或者多克隆抗体。
本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品同时将蛋白A和蛋白G共价偶联到琼脂糖凝胶微球表面，比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围，适合于所有蛋白A琼脂糖珠和蛋白G琼脂糖珠单独可以结合的Ig，实用性更高。
产品信息
|
货号 |
36403ES03 / 36403ES05/36403ES08/36403ES25/36403ES60 |
|
规格 |
1 mL /2 mL/5 mL/25 mL/100 mL |
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白A/G |
|
孔径（Bead size） |
45-165 µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
约10-15 mg Rabbit IgG/mL 基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-10 |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
|
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
|
Human IgG |
++++ |
++++ |
Mouse IgG |
++++ |
++++ |
|
Human IgG1 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgG2 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG2a |
++++ |
++++ |
|
Human IgG3 |
+ |
++++ |
Mouse IgG2b |
+++ |
+++ |
|
Human IgG4 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG3 |
++ |
+++ |
|
Human IgM |
Use anti-Human IgM |
Mouse IgM |
Use anti-Mouse IgM |
||
|
Human IgE |
NR |
NR |
Chicken IgG (IgY) |
NR |
NR |
|
Human IgA |
+ |
NR |
Cow IgG |
++ |
++++ |
|
Human IgA1 |
+ |
NR |
Goat IgG |
+ |
++++ |
|
Human IgA2 |
+ |
NR |
Goat IgG1 |
+ |
++++ |
|
Human IgD |
Use anti-Human IgD |
Goat IgG2 |
++++ |
++++ |
|
|
Rat IgG |
+ |
++ |
Goat IgM |
NR |
NR |
|
Rat IgG1 |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG |
++++ |
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Rat IgG2a |
NR |
NR |
Guinea Pig IgG1 |
++++ |
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Rat IgG2b |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG2 |
++++ |
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Rat IgG3 |
+ |
++ |
Hamster IgG |
+ |
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Sheep IgG |
+ |
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Horse IgG |
+ |
++++ |
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Sheep IgG1 |
+ |
++ |
Rabbit IgG |
++++ |
+++ |
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Sheep IgG2 |
+ |
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Rabbit IgM |
NR |
NR |
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Sheep IgM |
NR |
NR |
Rabbit All isotypes |
+++ |
++ |
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Pig IgG |
+++ |
+++ |
Monkey IgG |
++++ |
++++ |
|
Cat IgG |
++++ |
+ |
Donkey IgG |
++ |
++++ |
|
Dog IgG |
++++ |
+ |
|
|
|
|
（+）= weak binding；（++）= moderate binding；（++++）= strong binding；NR= not recommended; （-）= not tested； |
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Ver.CN20230824
产品简介
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。然而两者结合特异性上有所不同（详细见附录1，蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表）。蛋白A，蛋白G常共价偶联在固体载体如琼脂糖珠或丙烯酸树脂小珠上，直接用以做免疫沉淀（IP）或者免疫共沉淀（Co-IP）来进行蛋白功能相关研究，或者直接装在层析柱上来纯化单克隆或者多克隆抗体。
本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品同时将蛋白A和蛋白G共价偶联到琼脂糖凝胶微球表面，比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围，适合于所有蛋白A琼脂糖珠和蛋白G琼脂糖珠单独可以结合的Ig，实用性更高。
产品信息
|
货号 |
36403ES03 / 36403ES05/36403ES08/36403ES25/36403ES60 |
|
规格 |
1 mL /2 mL/5 mL/25 mL/100 mL |
产品性质
|
基质（Matrix） |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体（Ligand） |
重组蛋白A/G |
|
孔径（Bead size） |
45-165 µm |
|
最大流速（Flowmax） |
0.3 MPa, 3 bar |
|
储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
|
载量（Capacity） |
约10-15 mg Rabbit IgG/mL 基质 |
|
pH范围（pH range） |
3-10 |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
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免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
免疫球蛋白亚型 |
Protein A |
Protein G |
|
Human IgG |
++++ |
++++ |
Mouse IgG |
++++ |
++++ |
|
Human IgG1 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG1 |
+ |
++++ |
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Human IgG2 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG2a |
++++ |
++++ |
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Human IgG3 |
+ |
++++ |
Mouse IgG2b |
+++ |
+++ |
|
Human IgG4 |
++++ |
++++ |
Mouse IgG3 |
++ |
+++ |
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Human IgM |
Use anti-Human IgM |
Mouse IgM |
Use anti-Mouse IgM |
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Human IgE |
NR |
NR |
Chicken IgG (IgY) |
NR |
NR |
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Human IgA |
+ |
NR |
Cow IgG |
++ |
++++ |
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Human IgA1 |
+ |
NR |
Goat IgG |
+ |
++++ |
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Human IgA2 |
+ |
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Goat IgG1 |
+ |
++++ |
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Human IgD |
Use anti-Human IgD |
Goat IgG2 |
++++ |
++++ |
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Rat IgG |
+ |
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Goat IgM |
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Rat IgG1 |
NR |
+ |
Guinea Pig IgG |
++++ |
++ |
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Rat IgG2a |
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Guinea Pig IgG1 |
++++ |
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Rat IgG2b |
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Guinea Pig IgG2 |
++++ |
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Rat IgG3 |
+ |
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Hamster IgG |
+ |
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Sheep IgG |
+ |
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Horse IgG |
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Sheep IgG1 |
+ |
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Rabbit IgG |
++++ |
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Sheep IgG2 |
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Rabbit IgM |
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Sheep IgM |
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Rabbit All isotypes |
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Pig IgG |
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Monkey IgG |
++++ |
++++ |
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Cat IgG |
++++ |
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Donkey IgG |
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++++ |
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Dog IgG |
++++ |
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（+）= weak binding；（++）= moderate binding；（++++）= strong binding；NR= not recommended; （-）= not tested； |
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Ver.CN20230824
Q：为什么柱子反压过高？
A：可能是填料被堵塞；裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用 0.22 µm/0.45
µm 滤膜过滤。
Q：为什么洗脱组分中没有目的蛋白？
A：可能是抗体被降解；建议适当的提高洗脱pH。
Q：该产品可以直接使用吗？
A：Protein A 琼脂糖珠最好在使用前充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
Q：该产品可以贮存在–20℃吗？
A：不可以，不可冷冻该产品。应置于 4°贮存。
Q：说明书中COIP实验操作中取适量填料是要加多少量的填料？
A：一般填料的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常用COIP体系为：20ul填料+5ug抗体与总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育。
[1] Chen LJ, Zhang NN, Zhou CX, et al. Gm364 coordinates MIB2/DLL3/Notch2 to regulate female fertility through AKT activation. Cell Death Differ. 2022;29(2):366-380. doi:10.1038/s41418-021-00861-5(IF:15.828)
[2] Zhang K, Chen S, Yang Q, et al. The Oligodendrocyte Transcription Factor 2 OLIG2 regulates transcriptional repression during myelinogenesis in rodents [published correction appears in Nat Commun. 2022 Jun 1;13(1):3164]. Nat Commun. 2022;13(1):1423. Published 2022 Mar 17. doi:10.1038/s41467-022-29068-z(IF:14.919)
[3] Zhu D, Chen C, Liu X, et al. Osteosarcoma cell proliferation suppression via SHP-2-mediated inactivation of the JAK/STAT3 pathway by tubocapsenolide A. J Adv Res. 2021;34:79-91. Published 2021 Jun 11. doi:10.1016/j.jare.2021.06.004(IF:10.479)
[4] Zheng J, Yao L, Zhou Y, et al. A novel function of NLRP3 independent of inflammasome as a key transcription factor of IL-33 in epithelial cells of atopic dermatitis. Cell Death Dis. 2021;12(10):871. Published 2021 Sep 24. doi:10.1038/s41419-021-04159-9(IF:8.469)
[5] Wang J, Zhao D, Ding CZ, et al. MicroRNA-194: a novel regulator of glucagon-like peptide-1 synthesis in intestinal L cells. Cell Death Dis. 2021;12(1):113. Published 2021 Jan 21. doi:10.1038/s41419-020-03366-0(IF:8.469)
[6] Zhu H, Guo Y, Huang A, et al. HDAC3-Regulated PGE2 Production by Microglia Induces Phobic Anxiety Susceptibility After Stroke and Pointedly Exploiting a Signal-Targeted Gamma Visual Stimulation New Therapy. Front Immunol. 2022;13:845678. Published 2022 Feb 18. doi:10.3389/fimmu.2022.845678(IF:7.561)
[7] Wang Z, Xu J, Feng J, et al. Structural and Functional Analyses of Type I IFNa Shed Light Into Its Interaction With Multiple Receptors in Fish. Front Immunol. 2022;13:862764. Published 2022 Mar 22. doi:10.3389/fimmu.2022.862764(IF:7.561)
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[26] Li X, Zhang N, Zhang Y, et al. E3 ligase Fbw7 participates in oxidative stress‑induced myocardial cell injury via interacting with Mcl‑1. Mol Med Rep. 2019;20(2):1561-1568. doi:10.3892/mmr.2019.10394(IF:1.851)
Protein A+G Agarose (Fast Flow, 免疫沉淀用)(P2055-50ml)
Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP)
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| P2055-2ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml | 169.00元 |
| P2055-10ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 10ml | 722.00元 |
| P2055-50ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 50ml | 2992.00元 |
本Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP)主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)，也可以用于抗体的纯化。
Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁表面蛋白，分子量为42kDa；Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)结合，结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区，但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合，而Protein G有时与Fab区也有一定结合。同时，两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A、G与琼脂糖凝胶(agarose)以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化。
Protein A+G Agarose适合于免疫沉淀所有Protein A Agarose和Protein G Agarose单独可以免疫沉淀的抗体，包括human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3，rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c，rabbit IgG，rabbit、goat多克隆抗体。下表是碧云天Protein A、Protein G、Protein A+G Agarose产品与人、小鼠、大鼠常见的免疫球蛋白亚类的结合能力及不同物种的总结合能力情况表。
| Species | Ig | Protein A | Protein G | A+G |
| Human | IgG1 | ++++ | ++++ | ++++ |
| IgG2 | ++++ | ++++ | ++++ | |
| IgG3 | – | ++++ | ++++ | |
| IgG4 | ++++ | ++++ | ++++ | |
| IgA | ++ | – | ++ | |
| IgD | ++ | – | ++ | |
| IgE | ++ | – | ++ | |
| IgM | ++ | – | ++ | |
| Mouse | IgG1 | + | ++++ | ++++ |
| IgG2a | ++++ | ++++ | ++++ | |
| IgG2b | +++ | +++ | +++ | |
| IgG3 | ++ | +++ | +++ | |
| IgM | +/- | – | +/- | |
| Rat | IgG1 | – | + | + |
| IgG2a | – | ++++ | ++++ | |
| IgG2b | – | ++ | ++ | |
| IgG2c | + | ++ | ++ | |
| IgM | +/- | – | +/- |
| Total Ig | Protein A | Protein G | A+G |
| Human | ++++ | ++++ | ++++ |
| Mouse | +++ | +++ | +++ |
| Rat | +/- | ++ | ++ |
| Rabbit | ++++ | +++ | ++++ |
| Goat | – | ++ | ++ |
| Chicken | – | + | + |
| Cow | ++ | ++++ | ++++ |
| Guinea Pig | ++++ | ++ | ++++ |
| Hamster | + | ++ | ++ |
| Horse | ++ | ++++ | ++++ |
| Pig | +++ | +++ | +++ |
| Sheep | +/- | ++ | ++ |
| ++++: Strong Binding |
| ++~+++: Medium Binding |
| +: Weak Binding |
| +/-: Weak or No Binding |
| -: No Binding |
本产品中的重组Protein A和Protein G可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合，分子量分别为14kDa和22KDa。该重组Protein A和Protein G通过改造，仅保留了与IgG Fc端结合相关的氨基酸序列，去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列，从而可以有效减少非特异性结合。每个Protein A分子和Protein G分子可分别结合2个和3个IgG分子。
本产品中的Protein A和Protein G共价连接到4%的高交联度、高流速琼脂糖(cross-linked, 4% Agarose, Fast Flow)上，并按1:1比例混合。每毫升Protein A+G agarose beads (沉淀物)中偶联有约10mg的重组Protein A和1mg的Protein G。每毫升Protein A+G agarose beads (沉淀物)可以结合超过25mg human IgG。本产品中agarose beads的平均直径为90μm，抗体纯化时的推荐线性流速为50-300cm/h，耐压指数最高为0.3MPa。
本产品配制在可以直接用于免疫沉淀和抗体纯化的适当溶液中，每毫升中共含有0.25ml agarose beads (沉淀物)。
本Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP)如果用于常规的免疫沉淀，每毫升本产品(沉淀和溶液为1:3的混合物)可以免疫沉淀50次。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2055-2ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml |
| P2055-10ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 10ml |
| P2055-50ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 50ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
4℃保存，一年有效。请勿冷冻。
注意事项：
请勿冷冻保存本产品。
Protein A+G Agarose使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
本产品含有微量防腐剂，不会影响常规的免疫沉淀和抗体纯化。但如果后续涉及酶活性测定，使用本产品前宜先用TBS等适当溶液洗涤Protein A+G agarose beads三次，以充分消除防腐剂可能产生的干扰。
从蛋白样品收集开始，所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)：
a. 蛋白样品的准备：
(a) 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次，然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。可以使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)或各种RIPA裂解液(P0013B、P0013C、P0013D或P0013E)等进行细胞的裂解。
(b) 对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
(c) 对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
注：详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材，参考10厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
b. 去除非特异性结合(可选做)：
(a) 取200微升至1毫升蛋白样品，蛋白量约为200微克至1毫克，加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20微升充分重悬的Protein A+G Agarose，4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
(b) 2500rpm(约1000g)离心5分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。
注：所谓种属相同的IgG是指，例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG，则在本步骤中可以加入normal mouse IgG，如无normal IgG，可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和normal IgG和Protein A+G Agarose的孵育，可以充分降低非特异性的结合，降低背景。
c. 免疫沉淀：
(a) 加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动过夜。
(b) 再加入20微升充分重悬的Protein A+G Agarose，4℃缓慢摇动1-3个小时(为方便后续的洗涤操作，可以把加入充分重悬的Protein A+G Agarose的量调整为40微升)。
(c) 2500rpm(约1000g)离心5分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清，注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein A+G
Agarose。
(d) 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤(c)。
(e) 完成最后一次洗涤后，去除上清，加入20-40微升1X SDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。
(f) 100℃或沸水浴处理3-5分钟，取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。
2. 免疫共沉淀：
参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(Co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
3. 抗体纯化：
a. 准备工作：
(a) 用0.45微米或0.2微米孔径的滤膜过滤所用的溶液。
(b) 所有的溶液必须用超声等方法脱气(degas)。
(c) 选择适当的纯化柱，用适当量的Protein A+G Agarose装填纯化柱。也可使用碧云天的预装柱产品(P2028、P2029)。
(d) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤并平衡纯化柱，流速可以用恒流泵控制为1ml/min (1ml预装柱)。如无恒流泵，也可以完全依靠重力洗涤并平衡纯化柱。
b. 抗体纯化：
(a) 把含有待纯化的抗体上样到纯化柱。
(b) 待纯化的抗体过柱后，用10-20倍柱体积的TBS洗涤，以去除未结合和非特异性结合的蛋白。洗涤是否完全可以通过测定280nm的吸光度进行确定。
(c) 洗涤完后，用10ml 50mM glycine，pH2.7作为洗脱液，洗脱结合的抗体。某些抗体和Protein A+G的结合能力很强，在pH2.7时洗脱效果不太理想，可以使用50mM glycine，pH1.9作为洗脱液。分管收集洗脱下的抗体，根据蛋白浓度或后续的检测效果确定洗脱峰在哪几个收集管中。
c. 纯化柱的再生：
(a) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤纯化柱，使纯化柱达到中性的pH。
(b) 用TBS来保存再生的纯化柱。
相关产品：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| P2006 | Protein A Agarose (Fast Flow, 进口分装) | 2ml |
| P2009 | Protein G Agarose (Fast Flow, 进口分装) | 2ml |
| P2012 | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 进口分装) | 2ml |
| P2015-2ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
| P2015-10ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
| P2015-50ml | Protein A Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
| P2017-2ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
| P2017-10ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
| P2017-50ml | Protein G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
| P2019-2ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 2ml |
| P2019-10ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 10ml |
| P2019-50ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 抗体纯化用) | 50ml |
| P2024 | Protein A Agarose (Fast Flow, 1ml)预装柱 | 1个 |
| P2025 | Protein A Agarose (Fast Flow, 5ml)预装柱 | 1个 |
| P2026 | Protein G Agarose (Fast Flow, 1ml)预装柱 | 1个 |
| P2027 | Protein G Agarose (Fast Flow, 5ml)预装柱 | 1个 |
| P2028 | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 1ml)预装柱 | 1个 |
| P2029 | Protein A+G Agarose (Fast Flow, 5ml)预装柱 | 1个 |
| P2051-2ml | Protein A Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml |
| P2051-10ml | Protein A Agarose (Fast Flow, for IP) | 10ml |
| P2051-50ml | Protein A Agarose (Fast Flow, for IP) | 50ml |
| P2053-2ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml |
| P2053-10ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 10ml |
| P2053-50ml | Protein G Agarose (Fast Flow, for IP) | 50ml |
| P2055-2ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 2ml |
| P2055-10ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 10ml |
| P2055-50ml | Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) | 50ml |
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使用本产品的文献：
1. Chen Y, Zhu E, Fan S, Ding H, Ma S, Zhu M, Deng S, Chen J, Zhao M
Important roles of C-terminal residues in degradation of capsid protein of classical swine fever virus.
Virol J. 2019 Nov 6;16(1):127. (IF 2.579)