svarlifescience ILITE ADCC产品

svarlifescience ILITE ADCC产品

 

ILITE ® ADCC组合

在抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)中,带有Fc受体的效应细胞识别并杀死抗体涂层的靶细胞,这些靶细胞在其表面表达肿瘤或病原体特异性抗原。该ILITE ADCC产品组合是基于报告基因系统,并提供测量抗体的功效引发ADCC的便捷而强大的方式对体外

这是通过将与天然FcγRIIIA信号转导途径极为相似的巧妙工程化的效应细胞与同源靶细胞和受控的抗原表达(+)或耗竭(-)结合在一起来实现的。综上所述,我们*的iLite ADCC产品组合为每个目标和系统提供了的灵敏度,真正超过了各个部分的总和。

 

ILITE ® ADCC的生物活性评价投资组合

iLite  ADCC产品组合  中的每个细胞系均以  “测定就绪”格式  提供,以实现快速便捷的工作流程并进一步降低测定变异性,从而使其可用于抗体筛选,表征,稳定性和效能研究。

我们在不断扩大  ILITE ®新颖和具有高度特异性的靶细胞ADCC组合,也能满足大部分客户的要求使用内部/资格预审合格的靶细胞和支持,在冷冻保存的实验支持的格式。

 

效应细胞

FcγRIIIa 
(CD16a,V158变体)

经过改造的效应细胞可更紧密地反映  FcγRIIIA(参与ADCC的主要受体)的信号转导途径。该受体主要由NK细胞表达。

 

效应器(V)
(BM5001)
 

目标细胞

CD20

CD20是一种主要在B细胞上发现的表面抗原。已经开发了抗CD20单克隆抗体,例如利妥昔单抗(Rituximab),这是一种针对癌症的疗法,靶向在B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)上表达的CD20。

 

阳性电池
(BM5010)
阴性细胞
(BM5015)

 

目标细胞

表皮生长因子

EGFR是单克隆抗体(例如西妥昔单抗和特异性酪氨酸激酶(一种在细胞信号传导级联反应中很重要的酶))抑制剂的*靶标。
 

 

阳性细胞
(BM5035)
阴性细胞
(BM5036)

 

目标细胞

HER2

HER2在细胞生长中起关键作用,并且在许多癌症(例如乳腺癌)中经常被上调。单克隆抗体曲妥珠单抗是靶向HER2 / ErbB2阳性乳腺癌的著名药物。
 

 

阳性电池
(BM5011)
阴性细胞
(BM5016)

 

目标细胞

肿瘤坏死因子

一种nti-TNF-α抗体,例如阿达木单抗,英夫利昔单抗等。除结合可溶性TNF-α外,还可与膜结合的TNF-α 结合。我吨重要的是确定的效果的这样的结合,并且如果抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的激活可能出现。           

 

阳性细胞
(BM5013)
阴性细胞
(BM5014)

 

目标细胞

血管内皮生长因子

 mVEGF表示 –  V ascular 内皮生长因子A(VEGF-A)是信号蛋白,其刺激血管的形成。Ť 他的抗VEGF 抗体,贝伐单抗,是一种治疗性抗体是工程通过减缓新血管通过INHI增长咬VEGF -A 。          

 

阳性细胞
(BM5017)
阴性细胞
(BM5018)

 

 

ADCC在药物开发中

为什么需要ADCC分析?

许多基于抗体的治疗剂的活性部分地由其诱导ADCC的能力介导,从而增强了机体对功能障碍细胞的免疫应答。

通过分析由不同药物或候选药物引起的ADCC活性,可以提供药物效力和不良副作用的量度,并且可以建立候选药物的建议ADCC机制。

ADCC分析重要的另一个领域是生物仿制药的开发。对于创新药物及其生物仿制药的分析表征,存在广泛的监管要求。

该  ILITE  ADCC产品线是整个药物开发过程中的宝贵工具。它可以用来以直接,敏感和可再现的方式测量药物诱导ADCC活性的能力。

传统方法与iLite技术  

用于测量ADCC的传统方法使用主要供体外周血单核细胞(PBMC)或纯化的自然杀伤(NK)细胞,这些细胞在其细胞表面表达Fc受体。靶细胞的杀死是该途径活化的终点,并且这些基于细胞的主要测定的响应高度可变,准备工作繁琐并且可能导致较高的背景读数。

在例如癌症中对靶向疗法的期望刺激了单克隆抗体的发展,并且由于它们的相对可及性和特异性,许多抗体具有在肿瘤细胞上发现的靶向细胞表面表达的抗原。

为了克服这些传统方法的许多局限性并满足更强大和可靠的测定的需要,Svar Life Science开发了 表达FC受体的工程  效应细胞以及一系列特异性阳性  靶细胞  和阴性对照细胞系针对许多目标。这些靶细胞可以筛选ADCC的特异性和非特异性激活,从而为每个实验增加价值。

iLite技术,提供宜的ADCC生物测定!

所述ILITE ADCC生物测定组合拥有所有宜生物测定法的特点-大的动态窗口优异的线性度,特异性,再现性,精确度和准确度-并引入*设计的同系物目标(+)和( – )细胞的细胞内的更完整的画面事件。

 

它是用于有力批次释放和抗体筛选等应用以及评估创新者与生物仿制药之间可比性的理想分析方法。此外,该生物测定法可用于评估翻译后修饰(例如糖基化和岩藻糖基化)对单克隆抗体(mAb)效能的影响。

 

ILITE ® ADCC效应物(V)

BM5001

 

ILITE ® ADCC效应FcγRIIIa的(V)测定准备细胞用于定量在动作(MOA)测定的ADCC机制诱导途径激活的治疗性抗体的药物的生物活性。

这些细胞基于人类T淋巴细胞细胞系Jurkat(ATCC#TIB-152),并经过基因改造和优化以表达高水平的低亲和力Fc受体FcRyIIIa(CD16)和萤火虫萤光素酶(FL)专有嵌合启动子控制下的报告基因。

ILITE ® ADCC效应FcγRIIIa的(V)测定准备细胞理想地匹配于ILITE ®ADCC靶细胞,但可以与任何类型的诱导ADCC MOA靶细胞的运行。

仅供研究使用

 

 

 

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)是抗体发挥作用的方式之一,当IgG抗体通过Fab段与靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)表面抗原决定簇特异性结合后,其Fc段可与有FcγR的杀伤细胞(NK细胞、单核-巨噬细胞、中性粒细胞)等效应细胞结合,触发效应细胞的杀伤活性,直接杀伤靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)。

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays 

图:抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)

ADCC检测用Jurkat效应细胞株为改造后的NFAT-Luc-FcγRIIIa Jurkat稳定细胞株(原始株来源于中科院细胞库),可由CD20抗体,B细胞淋巴瘤细胞(Raji、PBMC、WIL2-S细胞系为靶细胞建立ADCC生物学活性检测方法。YEASEN开发的Jurkat效应细胞株无菌无支原体污染细胞株为单克隆细胞株,可用于ADCC作用机制验证糖基化水平检测、抗体筛选等应用

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

42001JP03

42001

Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

1mL(5E6 Cell/mL)

 

运输与保存方法

干冰运输。收到之后如不立即复苏,请立即转入-80℃保存或液氮储存。

 

产品应用

1. Jurkat效应细胞株运输与保存

【注】:细胞株对温度非常敏感,避免反复冻融。收到产品后,如果暂时不使用,请整瓶直接放到-80℃冻存或液氮内。

2. Jurkat细胞株复苏使用特别注意

打开水浴锅,等待升温达到设置的37 ℃后,放入配制好的种子培养基进行预热30±10 min冻存管立即置于37℃水浴中解冻(控制在3 min内),溶解完全即可拿出,解冻过程中勿使水浴锅水面浸过冻存管管口。此细胞株血清使用要求严格,检测时使用推荐超低 IgG胎牛血清。(推荐:货号:1921005PGGibco

2).抗体检测ADCC

细胞Jurkat效应细胞raji细胞株200 g1000 rpm 离心5 min 后用ADCC缓冲液RPMI 1640培养基+4%IgG FBS)重悬洗涤一次后,计数,调节活细胞密度(raji推荐5E5 Cells/mLJurkat推荐3E6 Cells/mL)可进行调试标靶比, Jurkat效应细胞株密度建议不调整。细胞株活率>95%。方可进行实验。一般活率在98-99%之间。

稀释抗体将抗体调节较高浓度成20 µg/mL后,进行梯度稀释低浓度时如3 µg/mL可按2-3倍进行梯度稀释高浓度可按5倍稀释。先确定细胞的检测抗体浓度范围后,再进行浓度和梯度稀释比例的调整。

1、75 µL ADCC Buffer添加到96孔的最外面的孔中,封液,防止蒸发。

2轻轻吹打raji细胞悬液,加入25 µL细胞悬液每孔

3从抗体稀释板中每孔加入25 µL抗体稀释系列,加入到细胞孔内。空白不加抗体,加入25 µL ADCC缓冲液。建议从低浓度到高浓度进行添加。

4、轻轻吹打Jurkat效应细胞悬液,然后在实验台上添加25 µL Jurkat效应细胞,则每孔抗体浓度稀释三倍。(母液浓度为3 µg/mL,则检测起始起始浓度为1 µg/mL。

5用盖子盖住板,在37°C加湿的CO2中孵育6小时。

637°C的培养箱中取出检测板,并将其平衡到环境温度(22-25°C),一般放置20-30 min即可。

7使用手动多通道移液管,添加75 µL Bio-Glo™荧光素酶分析试剂到所有内部96孔板避免制造任何泡沫。孵育5分钟后用酶标仪在白板中读取相对光单位(relative light units,RLU)数值,并按照以反应-阴性作图。

阴性:Jurkat效应细胞株+靶细胞,不含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

反应:Jurkat效应细胞株+靶细胞,含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

例:TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

SpectraMax M5酶标仪检测使用设置:Luminescence,All  nm,实验检测时间设为500-1000m sec;settle time1 sec

3)实验结果

①抗体检测:

TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

使用3 µg/mL母液抗体浓度,按2.5倍稀释,稀释13倍;抗体为:Rituximab, E:T=6:1

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays 

图:检测值比较明显值在(log 106的区间内)

 

注意事项

1、反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温(20-25℃)再使用。

2Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit应在环境温度不超过27℃使用,使用时解冻后继续在室温下孵育20-30分钟96孔白板温度保持一致

3、检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置检测时间段和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同。

4检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板。

5本产品仅作科研用途,禁止应用于人体

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

HB220330

Q:这个细胞可以传代增值吗?大约可以传多少代?

A:可以增值,可以传几十代左右,收到细胞后建议先扩增冻存,然后在进行培养细胞

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

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抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)是抗体发挥作用的方式之一,当IgG抗体通过Fab段与靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)表面抗原决定簇特异性结合后,其Fc段可与有FcγR的杀伤细胞(NK细胞、单核-巨噬细胞、中性粒细胞)等效应细胞结合,触发效应细胞的杀伤活性,直接杀伤靶细胞(病毒感染的细胞及肿瘤细胞)。

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays 

图:抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)

ADCC检测用Jurkat效应细胞株为改造后的NFAT-Luc-FcγRIIIa Jurkat稳定细胞株(原始株来源于中科院细胞库),可由CD20抗体,B细胞淋巴瘤细胞(Raji、PBMC、WIL2-S细胞系为靶细胞建立ADCC生物学活性检测方法。YEASEN开发的Jurkat效应细胞株无菌无支原体污染细胞株为单克隆细胞株,可用于ADCC作用机制验证糖基化水平检测、抗体筛选等应用

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

42001JP03

42001

Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

1mL(5E6 Cell/mL)

 

运输与保存方法

干冰运输。收到之后如不立即复苏,请立即转入-80℃保存或液氮储存。

 

产品应用

1. Jurkat效应细胞株运输与保存

【注】:细胞株对温度非常敏感,避免反复冻融。收到产品后,如果暂时不使用,请整瓶直接放到-80℃冻存或液氮内。

2. Jurkat细胞株复苏使用特别注意

打开水浴锅,等待升温达到设置的37 ℃后,放入配制好的种子培养基进行预热30±10 min冻存管立即置于37℃水浴中解冻(控制在3 min内),溶解完全即可拿出,解冻过程中勿使水浴锅水面浸过冻存管管口。此细胞株血清使用要求严格,检测时使用推荐超低 IgG胎牛血清。(推荐:货号:1921005PGGibco

2).抗体检测ADCC

细胞Jurkat效应细胞raji细胞株200 g1000 rpm 离心5 min 后用ADCC缓冲液RPMI 1640培养基+4%IgG FBS)重悬洗涤一次后,计数,调节活细胞密度(raji推荐5E5 Cells/mLJurkat推荐3E6 Cells/mL)可进行调试标靶比, Jurkat效应细胞株密度建议不调整。细胞株活率>95%。方可进行实验。一般活率在98-99%之间。

稀释抗体将抗体调节较高浓度成20 µg/mL后,进行梯度稀释低浓度时如3 µg/mL可按2-3倍进行梯度稀释高浓度可按5倍稀释。先确定细胞的检测抗体浓度范围后,再进行浓度和梯度稀释比例的调整。

1、75 µL ADCC Buffer添加到96孔的最外面的孔中,封液,防止蒸发。

2轻轻吹打raji细胞悬液,加入25 µL细胞悬液每孔

3从抗体稀释板中每孔加入25 µL抗体稀释系列,加入到细胞孔内。空白不加抗体,加入25 µL ADCC缓冲液。建议从低浓度到高浓度进行添加。

4、轻轻吹打Jurkat效应细胞悬液,然后在实验台上添加25 µL Jurkat效应细胞,则每孔抗体浓度稀释三倍。(母液浓度为3 µg/mL,则检测起始起始浓度为1 µg/mL。

5用盖子盖住板,在37°C加湿的CO2中孵育6小时。

637°C的培养箱中取出检测板,并将其平衡到环境温度(22-25°C),一般放置20-30 min即可。

7使用手动多通道移液管,添加75 µL Bio-Glo™荧光素酶分析试剂到所有内部96孔板避免制造任何泡沫。孵育5分钟后用酶标仪在白板中读取相对光单位(relative light units,RLU)数值,并按照以反应-阴性作图。

阴性:Jurkat效应细胞株+靶细胞,不含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

反应:Jurkat效应细胞株+靶细胞,含抗体Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit检测值

例:TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

SpectraMax M5酶标仪检测使用设置:Luminescence,All  nm,实验检测时间设为500-1000m sec;settle time1 sec

3)实验结果

①抗体检测:

TECAN Spark 酶标仪检测设置:Luminescence,360-700 nm,实验检测时间设为10000 m sec;settle time:1 sec

使用3 µg/mL母液抗体浓度,按2.5倍稀释,稀释13倍;抗体为:Rituximab, E:T=6:1

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays 

图:检测值比较明显值在(log 106的区间内)

 

注意事项

1、反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温(20-25℃)再使用。

2Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit应在环境温度不超过27℃使用,使用时解冻后继续在室温下孵育20-30分钟96孔白板温度保持一致

3、检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置检测时间段和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同。

4检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板。

5本产品仅作科研用途,禁止应用于人体

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

HB220330

Q:这个细胞可以传代增值吗?大约可以传多少代?

A:可以增值,可以传几十代左右,收到细胞后建议先扩增冻存,然后在进行培养细胞

ADCC检测Jurkat效应细胞株|Jurkat Cell Lines for ADCC Bioassays

暂无内容