新型T4 DNA连接酶(400 U/µL)|Novel T4 DNA Ligase
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FAQ
COA
已发表文献
Hieff® Novel T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建库过程中DNA片段和接头连接的单酶产品，该产品已经过高通量测
序验证，质量优异。本酶具有高效的连接能力，兼容各类样本，对于复杂结构核酸片段的连接更显优势，比如华大平台的Bubble接头，均可得到优异的测序质量。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
规格 |
||
|
10298ES40 |
10298ES42 |
10298ES08 |
||
|
10298-A |
Hieff® Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL) |
100 µL |
1 mL |
5 mL |
|
10298-B |
10 × T4 DNA Ligase Buffer |
250 μL |
2×1.25 mL |
10×1.25 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
单位定义
在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反应30 min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
注意事项
1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
使用方法
- 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，涡旋瞬离后置于20℃，反应15 min即可。
表1 Adapter Ligation体系
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名称 |
体积（μL） |
|
dA-tailed DNA |
60 |
|
10 × T4 DNA Ligase Buffer |
10 |
|
50% PEG 6000 |
10* |
|
DNA Adapter |
X** |
|
Hieff® Novel T4 DNA Ligase |
1-5*** |
|
ddH2O |
To 100 |
【注】：*试剂盒内未提供50% PEG 6000，需自行准备。
**接头用量参考表2。
***Hieff® Novel T4 DNA Ligase用量可根据需要添加1-5 μL。
- Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。
表2 500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度
|
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
|
1 μg |
10:1 |
50 ng |
100:1 |
|
500 ng |
20:1 |
25 ng |
200:1 |
|
250 ng |
40:1 |
1 ng |
200:1 |
|
100 ng |
100:1 |
500 pg |
400:1 |
【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。
【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？
第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；
Input DNA摩尔数（pmol）=100 ÷（0.66×300）=0.5 pmol；
第二步，计算接头添加摩尔数。根据表2查询接头添加比例；
根据表2，查得Input DNA 100 ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；
第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；
接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
综上，接头可添加3.4 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）
HB220621
Hieff® Novel T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建库过程中DNA片段和接头连接的单酶产品，该产品已经过高通量测
序验证，质量优异。本酶具有高效的连接能力，兼容各类样本，对于复杂结构核酸片段的连接更显优势，比如华大平台的Bubble接头，均可得到优异的测序质量。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
规格 |
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10298ES40 |
10298ES42 |
10298ES08 |
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10298-A |
Hieff® Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL) |
100 µL |
1 mL |
5 mL |
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10298-B |
10 × T4 DNA Ligase Buffer |
250 μL |
2×1.25 mL |
10×1.25 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。
单位定义
在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反应30 min时，催化50%以上的DNA片段发生连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
注意事项
1）Buffer在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
使用方法
- 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，涡旋瞬离后置于20℃，反应15 min即可。
表1 Adapter Ligation体系
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名称 |
体积（μL） |
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dA-tailed DNA |
60 |
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10 × T4 DNA Ligase Buffer |
10 |
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50% PEG 6000 |
10* |
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DNA Adapter |
X** |
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Hieff® Novel T4 DNA Ligase |
1-5*** |
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ddH2O |
To 100 |
【注】：*试剂盒内未提供50% PEG 6000，需自行准备。
**接头用量参考表2。
***Hieff® Novel T4 DNA Ligase用量可根据需要添加1-5 μL。
- Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表2列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。
表2 500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度
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Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
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1 μg |
10:1 |
50 ng |
100:1 |
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500 ng |
20:1 |
25 ng |
200:1 |
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250 ng |
40:1 |
1 ng |
200:1 |
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100 ng |
100:1 |
500 pg |
400:1 |
【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。
【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？
第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；
Input DNA摩尔数（pmol）=100 ÷（0.66×300）=0.5 pmol；
第二步，计算接头添加摩尔数。根据表2查询接头添加比例；
根据表2，查得Input DNA 100 ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；
第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；
接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
综上，接头可添加3.4 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）
HB220621
Q：10298、10299和10301的区别是什么？
A：10298灵敏度更高，尤其适用于cfDNA样本的建库；10299酶连接效率高，宿主大肠杆菌残留低，尤其适合病原检测、NIPT检测等；10301是一款通用型的快速连接酶，广泛适用于分子克隆和NGS建库等。
Q：10298、10299能否用于分子克隆？
A：可以的，将酶稀释到常规用于克隆的T4连接酶浓度，再按说明书操作。可直接用里面的buffer稀释。
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