免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 WB/IP裂解液|Lysis Buffer for WB/IP Assays
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
本品细胞/组织裂解液，WB/IP裂解液，是一种非变性条件下的裂解液，含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解，并能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。
注意事项
1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（YEASEN CAT NO.20201JP76）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
使用说明：
(一) 细胞样品
1. 融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105-1×106个细胞/管，然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。
（二）组织样品：
1.把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
3.按照每20 mg组织加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5.充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
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产品名称 |
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RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（强） |
20101JP60 |
100 mL |
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RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱） |
20114JP60 |
100 mL |
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RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中） |
20115JP60 |
100 mL |
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Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液 |
20118JP60 |
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NP-40 (Nonidet P 40) 乙基苯基聚乙二醇 |
20103JP60 |
100 mL |
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Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) 十二烷基硫酸钠（molecular biology） |
20106JP76 |
500 g |
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Triton X-100, Molecular Biology Grade 曲拉通X-100（分子生物学级） |
20107JP76 |
500 mL |
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Triton X-114, Molecular Biology Grade 曲拉通X-114（分子生物学级） |
20108JP76 |
500 mL |
HB181121
本品细胞/组织裂解液，WB/IP裂解液，是一种非变性条件下的裂解液，含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解，并能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。
注意事项
1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用WB/IP裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（YEASEN CAT NO.20201JP76）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
使用说明：
(一) 细胞样品
1. 融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105-1×106个细胞/管，然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。
（二）组织样品：
1.把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
3.按照每20 mg组织加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5.充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
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500 mL |
HB181121
Q：该产品可裂解哪些成分？
A：本品可用于细胞/组织裂解液，WB/IP 裂解液，是一种非变性条件下的裂解液。
Q：RIPA 裂解蛋白后，对蛋白定量是否有影响？
A：用 RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 Yeasen BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（Cat#20201JP76）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。使用其他品牌的BCA 建议参照产品说明书中对去污剂等的耐受范围。
Q：RIPA 裂解液可以用于植物和细菌吗？
A：不能。本品是动物组织和细胞专用的，植物细胞和细菌都有细胞壁，不能裂解；理论上可以加溶壁酶后再裂解，但没有尝试过。
Q：对于组织样品，充分裂解的时间与温度一般是多少？
A：4 度或冰上裂解，时间没有要求，具体实验具体分析，一般细胞是充分裂解后应没有明显的细胞沉淀，织的话用用匀浆器匀浆，直至充分裂解呈匀浆状态。
[1] Guo X, Fu Y, Lee YJ, et al. The PGS1 basic helix-loop-helix protein regulates Fl3 to impact seed growth and grain yield in cereals. Plant Biotechnol J. 2022;20(7):1311-1326. doi:10.1111/pbi.13809(IF:9.803)
[2] Cao G, Li P, He X, et al. FHL3 Contributes to EMT and Chemotherapy Resistance Through Up-Regulation of Slug and Activation of TGFβ/Smad-Independent Pathways in Gastric Cancer. Front Oncol. 2021;11:649029. Published 2021 Jun 4. doi:10.3389/fonc.2021.649029(IF:6.244)
[3] Wang Y, Yang Z, Bao D, et al. Improving Hypoxia Adaption Causes Distinct Effects on Growth and Bioactive Compounds Synthesis in an Entomopathogenic Fungus Cordyceps militaris. Front Microbiol. 2021;12:698436. Published 2021 Jun 22. doi:10.3389/fmicb.2021.698436(IF:5.640)
[4] Chen Q, Wu K, Qin X, Yu Y, Wang X, Wei K. LASP1 promotes proliferation, metastasis, invasion in head and neck squamous cell carcinoma and through direct interaction with HSPA1A. J Cell Mol Med. 2020;24(2):1626-1639. doi:10.1111/jcmm.14854(IF:4.658)
[5] Cao Y, Xie X, Li M, Gao Y. CircHIPK2 Contributes to DDP Resistance and Malignant Behaviors of DDP-Resistant Ovarian Cancer Cells Both in vitro and in vivo Through circHIPK2/miR-338-3p/CHTOP ceRNA Pathway. Onco Targets Ther. 2021;14:3151-3165. Published 2021 May 13. doi:10.2147/OTT.S291823(IF:4.147)
[6] Ding D, Yang X, Luan HQ, Wu XT, Sun LW, Fan YB. The microgravity induces the ciliary shortening and an increased ratio of anterograde/retrograde intraflagellar transport of osteocytes. Biochem Biophys Res Commun. 2020;530(1):167-172. doi:10.1016/j.bbrc.2020.06.119(IF:3.575)
[7] Chen WW, Kang K, Lv J, Yue L, Zhang WQ. Galactose-NlGr11 inhibits AMPK phosphorylation by activating the PI3K-AKT-PKF-ATP signaling cascade via insulin receptor and Gβγ. Insect Sci. 2021;28(3):735-745. doi:10.1111/1744-7917.12795(IF:2.791)
