BM4000D倒置荧光显微镜

BM4000D倒置荧光显微镜

品牌

BM4000D倒置荧光显微镜由落射荧光显微系统与倒置生物显微系统组成,采用优良的无限远光学系统,配置长工作距离平场物镜与大视野目镜。紧凑稳定的高刚性主体,充分体现了显微操作的防振要求。旋转摆入摆出式聚光系统,可对高培养皿或圆筒状烧瓶进行无沾染培养细胞观察。落射荧光显微系统采用模块化设计理念,可以安全、快揵地调整照明系统,切换荧光滤色片组件。产品可应用于细胞组织,透明液态组织的显微观察,也可用于生物

BM4000D倒置荧光显微镜

产品用途:

   BM4000D倒置荧光显微镜由落射荧光显微系统与倒置生物显微系统组成,采用优良的无限远光学系统,配置长工作距离平场物镜与大视野目镜。紧凑稳定的高刚性主体,充分体现了显微操作的防振要求。旋转摆入摆出式聚光系统,可对高培养皿或圆筒状烧瓶进行无沾染培养细胞观察。落射荧光显微系统采用模块化设计理念,可以安全、快揵地调整照明系统,切换荧光滤色片组件。产品可应用于细胞组织,透明液态组织的显微观察,也可用于生物制药,医学检测、疾病预防等领域内的荧光显微术观察。

产品特点:

激发滤色片组-如下图

BM4000D倒置荧光显微镜

落射荧光观察系统-如下图

BM4000D倒置荧光显微镜

观察系统-人性化设计、操作者观察更舒适。配平场广角目镜,使观察视野更广阔、舒适。

BM4000D倒置荧光显微镜

透明载物台板-观察方便、大大降低载物台受热变形的可能

BM4000D倒置荧光显微镜

慑影慑像观察-仪器本身带有慑像接口、采用通光,适用于低照度的慑影慑像。

BM4000D倒置荧光显微镜

技术参数:

型号

BM4000D

目镜

大视野 WF10X(视场数Φ22mm)

对中望远镜

无限远平场消色差物镜

物镜

PLL 10X0.25 工作距离:4.3 mm,盖玻片厚度:1.2mm.

PLL 20X0.40 工作距离:8.0 mm,盖玻片厚度:1.2mm.

PLL 40X0.60 工作距离:3.5 mm,盖玻片厚度:1.2mm.

相衬物镜

PLL 10X0.25 PHP2 工作距离:4.3 mm,盖玻片厚度:1.2mm.

PLL 20X0.40 PHP2 工作距离:8.0 mm,盖玻片厚度:1.2mm.

PLL 40X0.60 PHP2 工作距离:3.5 mm,盖玻片厚度:1.2mm.

目镜筒

倾斜45˚,瞳距调节范围53~75mm.

落射荧光照明系统

电源箱 110V/230V可选择

汞灯100W/DC

荧光滤色片组

组别

类型

激发片波长

发射片波长

紫外+紫(UV+V)

紫外 (UV)

320nm~380nm

435nm

紫(V)

380nm~415nm

475nm

蓝+绿(B+G)

蓝(B)

450nm~490nm

515nm

绿(G)

495nm~555nm

595nm

调焦机构

粗微动同轴,带锁紧和限位装置,微动格值:2μm.

转换器

五孔转换器

载物台

固定载物台尺寸:227mmX208mm.

玻璃圆载物台板尺寸:Ф118mm.

机械式移动尺寸,移动范围:纵向77mm,横向114mm,

培养皿托板一

内槽尺寸:86mm(宽)X129.5mm(长),可适配圆形培养皿Ф87.5mm

培养皿托板二

内槽尺寸:34mm(宽)X77.5mm(长),可适配圆形培养皿Ф68.5mm

培养皿托板三

内槽尺寸::57mm(宽)X82mm(长)57mm (W)X82mm (L)

透射照明系统

转盘式相衬离聚光镜,工作距离55mm,

6V30W卤素灯,亮度可调

磨砂玻璃,蓝、绿滤色片

BM4000D倒置荧光显微镜

Lucerna品牌代理

Lucerna

简要描述:

绿色荧光蛋白(GFP)的发现和绿色荧光蛋白(GFP)作为生物科学标记工具的发展是生物医学研究的一项重要研究试剂。

绿色荧光蛋白(GFP)的发现和绿色荧光蛋白(GFP)作为生物科学标记工具的发展是生物医学研究的一项重要研究试剂。借助绿色荧光蛋白和相关的荧光蛋白,科学家们能够看到以前看不见的蛋白质,并了解这些蛋白质是如何定位的,以及这些定位是如何对各种细胞刺激作出反应的。


LucernaTM was founded by researchers from the Weill Medical College of Cornell University in 2010. The founding team has collectively over 25 years of experience in the field of RNA biology, aptamer development, and fluorescence imaging. The founders are also the inventors on the fluorescent RNA aptamer technology patents and have published many high profile scientific papers on the technology. LucernaTM has in place a management team with significant industry experience and a diverse Scientific Advisory Board that consists of many leading experts in the fields of RNA biology, microfluidics, molecular imaging, and small molecule chemistry. 


品牌

货号

名称

规格

Lucerna

30-1000

Diglycyl-Lysine Antibody, clone GX41

1mg

Lucerna

30-0100

Diglycyl-Lysine Antibody, clone GX41 

100ug

Lucerna

400-1 mg

DFHBI – 1 mg

1mg

溶酶体绿色荧光探针 溶酶体绿色荧光染料|LysoTracker Green DND-26

溶酶体绿色荧光探针 溶酶体绿色荧光染料|LysoTracker Green DND-26

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

LysoTracker®系列探针是对活细胞中的酸性区室进行选择性染色的一类荧光染料,该类探针具有几大重要的特点,1)选择性标记酸性细胞器;2)纳摩尔级(nM)浓度即可有效标记活细胞;3)具有多色探针提供,可根据情况对样品进行多标实验。LysoTracker®结构上由一个荧光基团和相连的弱碱基构成,可自由穿过细胞膜,一般聚集在球形细胞器上,适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。Lysotracker中性pH下仅仅发生部分质子化,因此该探针标记细胞器的原理可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。

本品LysoTracker® Green DND-26为绿色荧光标记的溶酶体探针,具有504/511 nm的最大激发/发射波长。本品以溶于无水DMSO1 mM储存液形式提供。

 

产品性质

CAS号(CAS NO.

N/A

分子式(Formula

C18H26BClF2N4O

分子量(Molecular Weight

398.6894

Ex/Emnm

504/511

外观(Appearance

黄色溶液

结构式(Structure

溶酶体绿色荧光探针 溶酶体绿色荧光染料|LysoTracker Green DND-26

 

运输和保存方法

室温运输。-20℃避光保存,避免反复冻融。有效期2年。

 

注意事项

1为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2本产品仅作科研用途!

 

使用方法

使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

 

1. 工作液的配制

利用培养基或合适的缓冲液将1 mM 储存液稀释至工作浓度,推荐工作液浓度为50-75 nM

1为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

2)工作液现配现用。

 

2. 染色

2.1 对于贴壁细胞

1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。

2)待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30 min2 h(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。

】:对Lysotracker Green DND-26内化过程的动力学研究表明,活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生碱性效应Alkalizing effect”,也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5 min才可用作pH指示剂。

3)利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。

2.2 对于悬浮细胞

1)离心,吸除上清。

2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育30 min2 h(具体时间需根据细胞类型而定)。

3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液重悬细胞。

4)置于荧光镜下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或加长染色时间。

】:对于悬浮细胞,也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上,然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。

HB221025

Q:染色时,细胞的状态?

A:这四种探针是对活细胞中的酸性区室进行染色。所以必须要在活细胞状态下染色。

Q:染色完成后,细胞是否能固定后再检测荧光信号?

A:固定后会破坏溶酶体的酸性环境从而会造成荧光减弱甚至消失的情况,染色前后均不建议固定。

Q:可以和二抗一起孵育吗?

A:不可以,孵育二抗必须要透化处理,而透化会破坏溶酶体的酸性环境,影响染色效果。

Q:这个探针可以染自噬溶酶体吗?可以染色其他酸性细胞器吗?

A:自噬溶酶体和正常的溶酶体在形态结构上有较大差异,该探针主要是针对常规的溶酶体染色,对于自噬溶酶体的染色效果不是很确定,可以参考一些使用过该产品发表的文献资料确定可以染色其他酸性细胞器,建议极低浓度下才能优先选择染色酸性溶酶体。

Q:植物细胞和组织适用吗?

A:理论上可以,一般植物细胞或者组织要制成原生质体。

Q:染色后可以放置一夜,再荧光检测吗?

A:建议染色完立即检测荧光,时间过长,荧光信号会逐渐减弱。

Q:用细胞培养基配成工作液以后稳定吗?可以存放多久?

A:工作液是需要现配现用的,不建议保存。

Q:检测仪器?

A:荧光显微镜 共聚焦显微镜 酶标仪 流式细胞仪。

Q:如何做到同时染色溶酶体和细胞核的?

A:建议用Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。

Q:保质期多久?

A:-20℃避光保存,半年有效。

Q:荧光信号较弱?

A:大致有 3 个原因:

1.溶酶体探针浓度过低,建议适当增大浓度;

2.染色时间过短,建议延长染色时间;

3.染色完之后,放置过长时间才检测信号;建议染色完立刻检测。

Q:没有荧光信号?

A:大致有 3 个原因:

  1. 先用多聚甲醛 乙醛等固定细胞,破坏了溶酶体的酸性环境。
  2. 染色完后,又用多聚甲醛固定细胞,或者透化细胞,破坏了溶酶体的酸性环境;染色前后均不建议固定细胞;
  1. 染色完到上机检测这一段时间过长,并且没有避光处理。建议避光染色,染色完立即检测荧光信号。

Q:在活细胞状态下,用 50 M 探针染色 50 min,然后发现除了溶酶体,细胞质中也有荧光信号, 这主要是什么原因导致?

A:大致有一下 2 个原因:

  1. 溶酶体探针浓度过大,建议适当降低浓度;
  2. 溶酶体探针染色时间过长,建议适当缩短时间。

 

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产品描述

LysoTracker®系列探针是对活细胞中的酸性区室进行选择性染色的一类荧光染料,该类探针具有几大重要的特点,1)选择性标记酸性细胞器;2)纳摩尔级(nM)浓度即可有效标记活细胞;3)具有多色探针提供,可根据情况对样品进行多标实验。LysoTracker®结构上由一个荧光基团和相连的弱碱基构成,可自由穿过细胞膜,一般聚集在球形细胞器上,适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。Lysotracker中性pH下仅仅发生部分质子化,因此该探针标记细胞器的原理可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。

本品LysoTracker® Green DND-26为绿色荧光标记的溶酶体探针,具有504/511 nm的最大激发/发射波长。本品以溶于无水DMSO1 mM储存液形式提供。

 

产品性质

CAS号(CAS NO.

N/A

分子式(Formula

C18H26BClF2N4O

分子量(Molecular Weight

398.6894

Ex/Emnm

504/511

外观(Appearance

黄色溶液

结构式(Structure

溶酶体绿色荧光探针 溶酶体绿色荧光染料|LysoTracker Green DND-26

 

运输和保存方法

室温运输。-20℃避光保存,避免反复冻融。有效期2年。

 

注意事项

1为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2本产品仅作科研用途!

 

使用方法

使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

 

1. 工作液的配制

利用培养基或合适的缓冲液将1 mM 储存液稀释至工作浓度,推荐工作液浓度为50-75 nM

1为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

2)工作液现配现用。

 

2. 染色

2.1 对于贴壁细胞

1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。

2)待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30 min2 h(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。

】:对Lysotracker Green DND-26内化过程的动力学研究表明,活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生碱性效应Alkalizing effect”,也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5 min才可用作pH指示剂。

3)利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。

2.2 对于悬浮细胞

1)离心,吸除上清。

2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育30 min2 h(具体时间需根据细胞类型而定)。

3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液重悬细胞。

4)置于荧光镜下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或加长染色时间。

】:对于悬浮细胞,也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上,然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。

HB221025

Q:染色时,细胞的状态?

A:这四种探针是对活细胞中的酸性区室进行染色。所以必须要在活细胞状态下染色。

Q:染色完成后,细胞是否能固定后再检测荧光信号?

A:固定后会破坏溶酶体的酸性环境从而会造成荧光减弱甚至消失的情况,染色前后均不建议固定。

Q:可以和二抗一起孵育吗?

A:不可以,孵育二抗必须要透化处理,而透化会破坏溶酶体的酸性环境,影响染色效果。

Q:这个探针可以染自噬溶酶体吗?可以染色其他酸性细胞器吗?

A:自噬溶酶体和正常的溶酶体在形态结构上有较大差异,该探针主要是针对常规的溶酶体染色,对于自噬溶酶体的染色效果不是很确定,可以参考一些使用过该产品发表的文献资料确定可以染色其他酸性细胞器,建议极低浓度下才能优先选择染色酸性溶酶体。

Q:植物细胞和组织适用吗?

A:理论上可以,一般植物细胞或者组织要制成原生质体。

Q:染色后可以放置一夜,再荧光检测吗?

A:建议染色完立即检测荧光,时间过长,荧光信号会逐渐减弱。

Q:用细胞培养基配成工作液以后稳定吗?可以存放多久?

A:工作液是需要现配现用的,不建议保存。

Q:检测仪器?

A:荧光显微镜 共聚焦显微镜 酶标仪 流式细胞仪。

Q:如何做到同时染色溶酶体和细胞核的?

A:建议用Hoechst 33258/ Hoechst 33342 染色细胞核,这个染料可以直接染活细胞不需要固定操作。

Q:保质期多久?

A:-20℃避光保存,半年有效。

Q:荧光信号较弱?

A:大致有 3 个原因:

1.溶酶体探针浓度过低,建议适当增大浓度;

2.染色时间过短,建议延长染色时间;

3.染色完之后,放置过长时间才检测信号;建议染色完立刻检测。

Q:没有荧光信号?

A:大致有 3 个原因:

  1. 先用多聚甲醛 乙醛等固定细胞,破坏了溶酶体的酸性环境。
  2. 染色完后,又用多聚甲醛固定细胞,或者透化细胞,破坏了溶酶体的酸性环境;染色前后均不建议固定细胞;
  1. 染色完到上机检测这一段时间过长,并且没有避光处理。建议避光染色,染色完立即检测荧光信号。

Q:在活细胞状态下,用 50 M 探针染色 50 min,然后发现除了溶酶体,细胞质中也有荧光信号, 这主要是什么原因导致?

A:大致有一下 2 个原因:

  1. 溶酶体探针浓度过大,建议适当降低浓度;
  2. 溶酶体探针染色时间过长,建议适当缩短时间。

 

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[51] Huang X, Wu B, Li J, et al. Anti-tumour effects of red blood cell membrane-camouflaged black phosphorous quantum dots combined with chemotherapy and anti-inflammatory therapy. Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2019;47(1):968-979. doi:10.1080/21691401.2019.1584110(IF:4.462)
[52] Ge J , Zhang K , Fan L , et al. Novel long-wavelength emissive lysosome-targeting ratiometric fluorescent probes for imaging in live cells. Analyst. 2019;144(14):4288-4294. doi:10.1039/c9an00697d(IF:4.019)
[53] Wang H, Zhang Z, Guan J, Lu W, Zhan C. Unraveling GLUT-mediated transcytosis pathway of glycosylated nanodisks. Asian J Pharm Sci. 2021;16(1):120-128. doi:10.1016/j.ajps.2020.07.001(IF:3.968)
[54] Fan JH, Fan GL, Yuan P, et al. A Theranostic Nanoprobe for Hypoxia Imaging and Photodynamic Tumor Therapy. Front Chem. 2019;7:868. Published 2019 Dec 20. doi:10.3389/fchem.2019.00868(IF:3.782)
[55] Ma J, Wu H, Li Y, et al. Novel Core-Interlayer-Shell DOX/ZnPc Co-loaded MSNs@ pH-Sensitive CaP@PEGylated Liposome for Enhanced Synergetic Chemo-Photodynamic Therapy. Pharm Res. 2018;35(3):57. Published 2018 Feb 8. doi:10.1007/s11095-017-2295-z(IF:3.335)
[56] Tang M, Zhang P, Liu J, Long Y, Cheng Y, Zheng H. Cetyltrimethylammonium chloride-loaded mesoporous silica nanoparticles as a mitochondrion-targeting agent for tumor therapy. RSC Adv. 2020;10(29):17050-17057. Published 2020 Apr 30. doi:10.1039/d0ra02023k(IF:3.119)
[57] Gao YY, Yang RQ, Lou KL, et al. In vivo visualization of fluorescence reflecting CDK4 activity in a breast cancer mouse model. MedComm (2020). 2022;3(3):e136. Published 2022 Jun 10. doi:10.1002/mco2.136(IF:0.000)

NADP/NADPH比率荧光检测试剂盒(红色荧光)

NADP/NADPH比率荧光检测试剂盒(红色荧光)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD,辅酶Ⅰ)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP,氧化型辅酶Ⅱ)是细胞中常见的重要辅因子,通过电子交换参与各种代谢反应。NAD与一个磷酸分子以酯键结合形成NADP,NADP作为氧化剂参与光合作用。还原性辅酶II (NADPH)是NADP接受电子后的产物。NADPH作为供氢体可参与体内多种代谢反应,如:脂肪酸和核酸的合成。

该试剂盒适用于测定NADP和NADPH,背景低,灵敏度高。NADPH可以将探针还原为高荧光产物,其信号可以通过荧光酶标仪在Ex/Em = 540/590 nm或在比色测定(OD =576 nm)中定量。

 

产品组分

组分编号

 组分名称

组分规格

储存条件

50140-A

NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix

2 vials

-20℃

50140-B

NADPH Sensor Buffer

20 mL×1

-20℃

50140-C

NADPH Standard

1 vial (167 µg)

-20℃

50140D

NADPH Extraction Solution  

10 m1

-20℃

50140E

NADP Extraction Solution

10 m1

-20℃

50140-F

NADP/NADPH Control Solution

10 m1

-20℃

50140-G

NADP/NADPH Lysis Buffer

10 m1

-20℃

 

运输和保存方法

冰袋运输。避光保存于-20℃,有效期1

 

注意事项

1 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭

2 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3 粉末溶解前请先短暂离心,以保证产品全在管底。

4 请勿吸入、吞咽或者直接接触皮肤和眼睛。

5 本产品仅用于科研用途。

 

实验过程

1 试剂准备

NADPH标准品母液(1 mM):将200 μL PBS (pH 7.4)加入NADPH StandardC组分)中制备1 mM NADPH标准品母液,用时置于冰上,未用完的分装-20°C保存,避免反复冻融。

NADPH梯度标准液(0-10 μM):将990 μL PBS (pH 7.4)加入到10 μL NADH标准母液(1 mM)中制备10 μM NADPH标准液,然后取200 μL的10 μM NADPH标准液按照1:3的比例用PBS (pH 7.4)稀释成NADPH梯度标准液(3.33 μM, 1.11 μM, 0.37 μM, 0.123 μM, 0.041 μM, 0.014 μM)。

【注】:稀释后的NADPH标准液不稳定,应该配置后4 h内使用

NADP/NADPH反应液:向每瓶NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix(组分A)中加入10 mL NADPH Sensor Buffer(B组分),混匀。

【注】:相当于125次测试的检测用量,请根据实际情况进行调整NADP/NADPH反应液在室温下不稳定,注意避光尽快使用。

NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G):用前恢复至室温。

2 样本制备

2.1 细胞样本:收集0.5-1×107个细胞,预冷PBS润洗后,加入100 μL NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G),37°C孵育15 min,1500 rpm室温离心5 min,取上清检测。

2.2 组织样本:取20 mg组织样本,预冷PBS润洗后,加入400 μL NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G),室温匀浆,2500 rpm室温离心5 -10 min,取上清检测。

2.3 细菌样本:4°C 10,000 g离心15 min收集细菌,每107个细菌加入1 mL NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G),室温孵育15 min,2500 rpm室温离心5 -10 min,取上清检测。

2.4 植物样本:取200 mg叶片,加入1 mL NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G),室温匀浆,2500 rpm室温离心5 -10 min,取上清检测。

【注】:建议使用新鲜样本,如果无法及时进行检测,样本建议存于-80 °C,检测时冰上解冻,但是检测的荧光值可能会降低。不要使用RIPA裂解液,因为RIPA裂解液会干扰检测。如果样本中NADPH含量高,注意稀释样本。

3 检测过程

3.1 如下图,向96孔黑色平底孔板中加入25 μL的NADPH标准液、待测样本或空白对照(PBS)。

Table 1. Layout of NADPH standards, Blank Control and test samples in a solid black 96-well microplate.

BL

BL

TS (Total)

TS (Total)

TS (NADPH)

TS (NADPH)

TS (NADP)

TS (NADP)

NS1

NS1

 

 

NS2

NS2

 

 

NS3

NS3

 

 

 

 

 

 

NS4

NS4

 

 

 

 

 

 

NS5

NS5

 

 

 

 

 

 

NS6

NS6

 

 

 

 

 

 

NS7

NS7

 

 

 

 

 

 

NS= NADPH Standard, BL = Blank Control, TS (Total) = Test Sample treated withNADP/NADPH Control Solution , TS (NADPH) = test sample treated with NADPH Extraction Solution, then neutralized by NADP Extraction, TS (NADP) = test sample treated with NADP Extraction Solution , then neutralized by NADPH Extraction Solution

3.2 对于NADPH提取向待测样本中加入25 μL NADPH Extraction Solution(组分D),室温孵育10-15 min,再加入25 μL NADP Extraction Solution(组分E)中和。

3.3 对于NADP提取向待测样本中加入25 μL NADP Extraction Solution(组分E),室温孵育10-15 min,再加入25 μL NADPH Extraction Solution(组分D)中和。

3.4 对于总NADP和NADPH:向待测样本中加入25 μL NADP/NADPH Control Solution(组分F),室温孵育10-15 min,再加入25 μL NADP/NADPH Control Solution(组分F)。

3.5 对于NADH标准液NS1-7:向NADPH标准液中加入25 μL NADP/NADPH Control Solution(组分F),室温孵育10-15 min,再加入25 μL NADP/NADPH Control Solution(组分F)。

Table 2 Reagent composition for each well

Well

Reagent

Treatment

Incubate at RT 10-15 min

Treatment

Total Volume

NS1-7

25 μL NADPH Standard (0-10 μM NADPH)

25 μL F

25 μL F

75 μL

BL

25 μL PBS (pH 7.4)

25 μL F

25 μL F

75 μL

TS (Total)

25 μL Test sanmple

25 μL F

25 μL F

75 μL

TS (NADPH)

25 μL Test sanmple

25 μL D

25 μL E

75 μL

TS (NADP)

25 μL Test sanmple

25 μL E

25 μL D

75 μL

3.6 每孔中加入75 μL NADP/NADPH反应液(测试总体积150 μL),混匀后,室温避光孵育15 min-2 h。

3.7 荧光酶标仪下测量荧光读值(Ex/Em = 540/590 nm);也可以使用白色透明96孔板,使用酶标仪在OD=576±5nm的波长下读数,但灵敏度低于荧光检测。

【注】:高浓度的NADPH(终浓度>100 μM)会导致荧光读值下降,因为NADPH sensor被过度氧化,生成非荧光产物。

 

数据分析

1 从空白标准孔获得的读数用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值,荧光背景会随时间而增加,因此标准品和测试样本的荧光读值计算前需减去空白孔的荧光强度值。然后,通过绘制标准读数以获得标准曲线和方程。

NADP/NADPH比率荧光检测试剂盒(红色荧光)

1 NADPH标准曲线

加入75 μL NADP/NADPH反应液后室温避光孵育30 min后,荧光酶标仪下测量荧光读值。

2 样本中NADPH含量计算公式:NADPH concentration = (B/V)×D。B代表根据标曲计算出的测试样本中NADPH的含量(μM),V代表测试样本体积(μL),D代表测试样本稀释倍数。

3 样本中总NADP和NADPH含量计算公式:Total concentration = (B/V)×D。B代表根据标曲计算出的测试样本中总的NADP和NADPH的含量(μM),V代表测试样本体积(μL),D代表测试样本稀释倍数。

4 使用总NADP和NADPH含量减去NADPH来计算NADP的量。

HB221230

NADP/NADPH比率荧光检测试剂盒(红色荧光)

暂无内容

NADP/NADPH比率荧光检测试剂盒(红色荧光)

暂无内容

 

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD,辅酶Ⅰ)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP,氧化型辅酶Ⅱ)是细胞中常见的重要辅因子,通过电子交换参与各种代谢反应。NAD与一个磷酸分子以酯键结合形成NADP,NADP作为氧化剂参与光合作用。还原性辅酶II (NADPH)是NADP接受电子后的产物。NADPH作为供氢体可参与体内多种代谢反应,如:脂肪酸和核酸的合成。

该试剂盒适用于测定NADP和NADPH,背景低,灵敏度高。NADPH可以将探针还原为高荧光产物,其信号可以通过荧光酶标仪在Ex/Em = 540/590 nm或在比色测定(OD =576 nm)中定量。

 

产品组分

组分编号

 组分名称

组分规格

储存条件

50140-A

NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix

2 vials

-20℃

50140-B

NADPH Sensor Buffer

20 mL×1

-20℃

50140-C

NADPH Standard

1 vial (167 µg)

-20℃

50140D

NADPH Extraction Solution  

10 m1

-20℃

50140E

NADP Extraction Solution

10 m1

-20℃

50140-F

NADP/NADPH Control Solution

10 m1

-20℃

50140-G

NADP/NADPH Lysis Buffer

10 m1

-20℃

 

运输和保存方法

冰袋运输。避光保存于-20℃,有效期1

 

注意事项

1 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭

2 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3 粉末溶解前请先短暂离心,以保证产品全在管底。

4 请勿吸入、吞咽或者直接接触皮肤和眼睛。

5 本产品仅用于科研用途。

 

实验过程

1 试剂准备

NADPH标准品母液(1 mM):将200 μL PBS (pH 7.4)加入NADPH StandardC组分)中制备1 mM NADPH标准品母液,用时置于冰上,未用完的分装-20°C保存,避免反复冻融。

NADPH梯度标准液(0-10 μM):将990 μL PBS (pH 7.4)加入到10 μL NADH标准母液(1 mM)中制备10 μM NADPH标准液,然后取200 μL的10 μM NADPH标准液按照1:3的比例用PBS (pH 7.4)稀释成NADPH梯度标准液(3.33 μM, 1.11 μM, 0.37 μM, 0.123 μM, 0.041 μM, 0.014 μM)。

【注】:稀释后的NADPH标准液不稳定,应该配置后4 h内使用

NADP/NADPH反应液:向每瓶NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix(组分A)中加入10 mL NADPH Sensor Buffer(B组分),混匀。

【注】:相当于125次测试的检测用量,请根据实际情况进行调整NADP/NADPH反应液在室温下不稳定,注意避光尽快使用。

NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G):用前恢复至室温。

2 样本制备

2.1 细胞样本:收集0.5-1×107个细胞,预冷PBS润洗后,加入100 μL NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G),37°C孵育15 min,1500 rpm室温离心5 min,取上清检测。

2.2 组织样本:取20 mg组织样本,预冷PBS润洗后,加入400 μL NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G),室温匀浆,2500 rpm室温离心5 -10 min,取上清检测。

2.3 细菌样本:4°C 10,000 g离心15 min收集细菌,每107个细菌加入1 mL NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G),室温孵育15 min,2500 rpm室温离心5 -10 min,取上清检测。

2.4 植物样本:取200 mg叶片,加入1 mL NADP/NADPH Lysis Buffer(组分G),室温匀浆,2500 rpm室温离心5 -10 min,取上清检测。

【注】:建议使用新鲜样本,如果无法及时进行检测,样本建议存于-80 °C,检测时冰上解冻,但是检测的荧光值可能会降低。不要使用RIPA裂解液,因为RIPA裂解液会干扰检测。如果样本中NADPH含量高,注意稀释样本。

3 检测过程

3.1 如下图,向96孔黑色平底孔板中加入25 μL的NADPH标准液、待测样本或空白对照(PBS)。

Table 1. Layout of NADPH standards, Blank Control and test samples in a solid black 96-well microplate.

BL

BL

TS (Total)

TS (Total)

TS (NADPH)

TS (NADPH)

TS (NADP)

TS (NADP)

NS1

NS1

 

 

NS2

NS2

 

 

NS3

NS3

 

 

 

 

 

 

NS4

NS4

 

 

 

 

 

 

NS5

NS5

 

 

 

 

 

 

NS6

NS6

 

 

 

 

 

 

NS7

NS7

 

 

 

 

 

 

NS= NADPH Standard, BL = Blank Control, TS (Total) = Test Sample treated withNADP/NADPH Control Solution , TS (NADPH) = test sample treated with NADPH Extraction Solution, then neutralized by NADP Extraction, TS (NADP) = test sample treated with NADP Extraction Solution , then neutralized by NADPH Extraction Solution

3.2 对于NADPH提取向待测样本中加入25 μL NADPH Extraction Solution(组分D),室温孵育10-15 min,再加入25 μL NADP Extraction Solution(组分E)中和。

3.3 对于NADP提取向待测样本中加入25 μL NADP Extraction Solution(组分E),室温孵育10-15 min,再加入25 μL NADPH Extraction Solution(组分D)中和。

3.4 对于总NADP和NADPH:向待测样本中加入25 μL NADP/NADPH Control Solution(组分F),室温孵育10-15 min,再加入25 μL NADP/NADPH Control Solution(组分F)。

3.5 对于NADH标准液NS1-7:向NADPH标准液中加入25 μL NADP/NADPH Control Solution(组分F),室温孵育10-15 min,再加入25 μL NADP/NADPH Control Solution(组分F)。

Table 2 Reagent composition for each well

Well

Reagent

Treatment

Incubate at RT 10-15 min

Treatment

Total Volume

NS1-7

25 μL NADPH Standard (0-10 μM NADPH)

25 μL F

25 μL F

75 μL

BL

25 μL PBS (pH 7.4)

25 μL F

25 μL F

75 μL

TS (Total)

25 μL Test sanmple

25 μL F

25 μL F

75 μL

TS (NADPH)

25 μL Test sanmple

25 μL D

25 μL E

75 μL

TS (NADP)

25 μL Test sanmple

25 μL E

25 μL D

75 μL

3.6 每孔中加入75 μL NADP/NADPH反应液(测试总体积150 μL),混匀后,室温避光孵育15 min-2 h。

3.7 荧光酶标仪下测量荧光读值(Ex/Em = 540/590 nm);也可以使用白色透明96孔板,使用酶标仪在OD=576±5nm的波长下读数,但灵敏度低于荧光检测。

【注】:高浓度的NADPH(终浓度>100 μM)会导致荧光读值下降,因为NADPH sensor被过度氧化,生成非荧光产物。

 

数据分析

1 从空白标准孔获得的读数用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值,荧光背景会随时间而增加,因此标准品和测试样本的荧光读值计算前需减去空白孔的荧光强度值。然后,通过绘制标准读数以获得标准曲线和方程。

NADP/NADPH比率荧光检测试剂盒(红色荧光)

1 NADPH标准曲线

加入75 μL NADP/NADPH反应液后室温避光孵育30 min后,荧光酶标仪下测量荧光读值。

2 样本中NADPH含量计算公式:NADPH concentration = (B/V)×D。B代表根据标曲计算出的测试样本中NADPH的含量(μM),V代表测试样本体积(μL),D代表测试样本稀释倍数。

3 样本中总NADP和NADPH含量计算公式:Total concentration = (B/V)×D。B代表根据标曲计算出的测试样本中总的NADP和NADPH的含量(μM),V代表测试样本体积(μL),D代表测试样本稀释倍数。

4 使用总NADP和NADPH含量减去NADPH来计算NADP的量。

HB221230

NADP/NADPH比率荧光检测试剂盒(红色荧光)

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NADP/NADPH比率荧光检测试剂盒(红色荧光)

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NIGHTSEA荧光观测设备怎么用

美国NIGHTSEA专门致力于研究和开发荧光观测装备。NIGHTSEA转基因生物观测利器包括:SFA-RB体视显微镜荧光适配器,DFP-1双荧光蛋白手电筒系列,BLS2单荧光蛋白手电筒系列等。

(一)美国NIGHTSEA转基因生物观测利器的应用之——转基因生物观测:如小鼠幼崽,果蝇幼虫,线虫,斑马鱼,等等。

1. 美国NIGHTSEA转基因生物观测利器—观测转基因果蝇

2. 美国NIGHTSEA转基因生物观测利器—观测转基因斑马鱼

3. 美国NIGHTSEA转基因生物观测利器—观测转基因爪蟾

4. 美国NIGHTSEA转基因生物观测利器—观测转基因线虫

5.美国NIGHTSEA转基因生物观测利器—观测转基因蝾螈

6.美国NIGHTSEA转基因生物观测利器—观测转基因拟南芥种子

 

(二)美国NIGHTSEA转基因生物观测利器的应用之——样本预筛选和辅助解剖

荧光是细胞生物学、神经生物学等多个研究领域中广泛使用的工具。nightseaDFP-1, BLS2SFA-RB可以用于样本的预筛选、辅助解剖等,下面列举几个实例:

1. 荧光蛋白标记的工程病毒载体在神经元功能研究中应用十分广泛,常通过颅内注射研究特定脑区的功能。在此中,常需要对病毒表达区域进行快速解剖用于特定的生化分析。为了提高快速解剖定位度,研究人员选用nightseaBLS2 Bluestar手电筒观测系列,通过配合nightsea滤光眼镜准确定位注射表达了荧光蛋白的伏核区(文献– Xuan Li and Marina E. Wolf, 2011. Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis. J. of Neuroscience Methods, Vol. 201, Issue 1, pp. 177-179. )

EGFP标记的慢病毒载体注射进小鼠大脑区域(Marina Wolf, Rosalind Franklin University
 

2. 研究者从小鼠大脑中提取GFP标记的背纹体。这项困难的工作因有了NIGHTSEADFP-1BLS2(手电筒和眼镜组合)变得简单:很容易看到大脑中的目标区域,让解剖更准确、。

 小鼠大脑中GFP标记的背纹体(Charles Mazel. Sample photographed at laboratory of Stefano Vicini, Georgetown University

3. DFP-1双荧光蛋白手电筒,BLS2单荧光蛋白手电筒,或SFA-RB体视显微镜荧光适配器,可以快速检测样本是否成功染色(Alexa Fluor 488 Phalloidin标记),如下图:

 兔腰肌的肌纤维(用Alexa Fluor 488 Phalloidin标记)

左图:白光观测 右图:Royal Blue荧光观测(Motic SMZ-186体视显微镜观测)

 

4.SFA-RB体视显微镜荧光适配器以斑马鱼为模型,观测不同有害化学物(医药、农药、食品添加剂等)对大脑发育的影响。观测图片如下:

 基因斑马鱼大脑共聚焦图像

图片由Robert ThornCreton Lab, 布朗大学)提供


 

5. 荧光是珊瑚采集研究的重要工具。现在,可以用经济又实惠的SFA-RB体视显微镜荧光适配器安装到体视显微镜上检测珊瑚。

下面的图片是通过立体显微镜观看珊瑚虫,由UNCW威尔明顿纳大学Alina Szmant 博士与NIGHTSEA Charles Mazel博士提供

 

 6. 用于结核分枝杆菌重组株的筛选

在结核分枝杆菌中成功构建了同源重组系统,利用该系统构建了rv1364cpstP跨膜区、pstP胞外区三个突变株,得到双交换突变株的效率为25-62.5%,从双交换突变株得到无痕缺失突变株的效率为100%。通过gfp作为荧光标记基因,利用NightSea BlueStar蓝光手电筒和滤光眼镜,可以对平板上的基因缺失株菌落直接进行快速判定。

采用nightsea BLS2 BlueStar 蓝色手电筒和滤光镜对平板上的结核分枝杆菌绿色荧光蛋白菌落进行快速鉴定。该方法可以从几百个菌落中瞬间锁定阳性克隆。平板上的菌落照片拍摄用单反相机加载购自nightsea公司的滤光片实现。


 

 图片源自[结核分枝杆菌同源重组基因敲除系统的构建和应用]

 

荧光是细胞生物学、神经生物学等领域中广泛使用的工具。美国nightsea致力于研究和开发荧光观测装备,其产品系列有DFP-1双荧光蛋白手电筒系列BLS2单荧光蛋白手电筒系列SFA-RB体视显微镜荧光适配器

DFP-1 Dual Fluorescent Protein Flashlight 双荧光蛋白手电筒系列

DFP-1双荧光蛋白手电筒,有两个可转换的高强度LED,可激发高强度光源。目前,绿色荧光(GFPEGFPfluorescein等)和红色荧光(DsREedTdTomato等)是常用的类型,nightsea常规的DFP-1双荧光蛋白手电筒是激发蓝光和绿光,再分别使用黄色滤光镜和红色滤光镜,就可以分别检测绿色荧光蛋白(GFPEGFPfluorescein等)和红色荧光蛋白(DsREedTdTomato等)了。

Good News

标准的DFP-1双荧光蛋白观测镜,只有RB-Royal BlueGR-Green两种荧光激发装置,也就是说标准的DFP-1只能用于观测绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白。

现在,您可以选择以下任何两种荧光装置,组装成自己专属的双荧光蛋白手电筒。

荧光装置型号

Excitation

激发光

Emission

发射光

可观测荧光

RB-Royal Blue

440-460nm

500nm LP

GFP, eGFP, fluorescein….

CY-Cyan

490-515nm

550nm LP

YFP, Venus, Lucifer Yellow…

GR-Green

510-540nm

600nm LP

DsRed, dTomato…

VI-Violet

400-415nm

460nm LP

CFP, BFP…

UV-Ultra Violet

360-380nm

415nm LP

DAPI

注:

1.RB-Royal Blue用于观测绿色荧光蛋白

GFP:绿色荧光;EGFP:增强型绿色荧光;fluorescein荧光素

2.CY-Cyan用于观测黄色荧光蛋白

YFP:黄色荧光蛋白;Venus:金色;Lucifer Yellow:荧光黄

3.GR-Green用于观测红色荧光蛋白

DsRed:红色荧光蛋白;dTomato:番茄红

4.VI-Violet用于观测紫色荧光蛋白

CFP:青色荧光蛋白;BFP:碱性胎儿蛋白

5.UV-Ultra Violet用于观测紫外光

DAPI:蓝色荧光

nightsea 2018年 产品列表:

货号

品名

规格

价格

品牌

SFA-TENT

Eclipse MicroTent

each

5525

nightsea

SFA-EYE-S

Tru-Block Eye Shields – Standard

set

306

nightsea

SFA-EYE-C

Tru-Block Eye Shields – Compact

set

306

nightsea

SFA-BLH-RB

Light Head-Royal Blue

each

4250

nightsea

SFA-BLH-CY

Light Head-Cyan

each

4250

nightsea

SFA-BLH-GR

Light Head-Green

each

4250

nightsea

SFA-BLH-VI

Light Head-Violet

each

4250

nightsea

SFA-BLH-UV

Light Head-Ultraviolet

each

6545

nightsea

SFA-BF-RB

NIGHTSEA Barrier Filter-Royal Blue

each

3536

nightsea

SFA-BF-GO

NIGHTSEA Barrier Filter-Green Only

each

3536

nightsea

SFA-BF-CY

NIGHTSEA Barrier Filter-Cyan

each

3536

nightsea

SFA-BF-GR

NIGHTSEA Barrier Filter-Green

each

3536

nightsea

SFA-BF-VI

NIGHTSEA Barrier Filter-Violet

each

3536

nightsea

SFA-BF-UV

NIGHTSEA Barrier Filter-Ultraviolet

each

3536

nightsea

SFA-SH-RB

NIGHTSEA Shield-Royal Blue

each

1785

nightsea

SFA-SH-GO

NIGHTSEA Shield-Green Only

each

1785

nightsea

SFA-SH-CY

NIGHTSEA Shield-Cyan

each

1785

nightsea

SFA-SH-GR

NIGHTSEA Shield-Green

each

1785

nightsea

SFA-SH-VI

NIGHTSEA Shield-Violet

each

1785

nightsea

SFA-SH-UV

NIGHTSEA Shield-Ultraviolet

each

1785

nightsea

SFA-AD

NIGHTSEA Adapter

each

2856

nightsea

SFAZ-AD

Leica EZ4 Adapter only

each

2856

nightsea

SFA-XL-AD

NIGHTSEA Oversize Adapter

each

2856

nightsea

SFA-DIM-N

NIGHTSEA DIM Base

each

11305

nightsea

SFA-PULSE-N

NIGHTSEA PULSE Base

each

11305

nightsea

SFA-BASE 

NIGHTSEA Standard Base

each

7055

nightsea

SFA-LHH-L

Light Head Hanger, long working distance

each

1615

nightsea

SFA-LHH-S

Light Head Hanger, short working distance

each

1615

nightsea

SFA-LHC

Single Light Head Cable, V1

each

510

nightsea

SFA-LHC-BNC

Single Light Head Cable, BNC

each

595

nightsea

SFA-DLHC

Dual Light Head Cable, V1

each

1105

nightsea

SFA-DLHC-BNC

Dual Light Head Cable, BNC

each

1105

nightsea

SFA-HK-L

Single hanger kit, long working distance, V1: SFA-LHC + SFA-LHH-L

kit

2125

nightsea

SFA-HK-S

Single hanger kit, short working distance, V1: SFA-LHC + SFA-LHH-S

kit

2125

nightsea

SFA-HK-L-BNC

Single hanger kit, long working distance, BNC: SFA-LHC-BNC + SFA-LHH-L

kit

2125

nightsea

SFA-HK-S-BNC

Single hanger kit, short working distance, BNC: SFA-LHC-BNC + SFA-LHH-S

kit

2125

nightsea

SFA-DHK-L

Dual hanger kit, long working distance, V1: SFA-DLHC + 2x SFA-LHH-L

kit

4165

nightsea

SFA-DHK-S

Dual hanger kit, short working distance, V1: SFA-DLHC + 2x SFA-LHH-S

kit

4165

nightsea

SFA-DHK-L-BNC

Dual hanger kit, long working distance, BNC: SFA-DLHC-BNC + 2x SFA-LHH-L

kit

4165

nightsea

SFA-DHK-S-BNC

Dual hanger kit, short working distance, BNC: SFA-DLHC-BNC + 2x SFA-LHH-S

kit

4165

nightsea

SFA-SWK-S-BNC

Switch Box Kit, short working distance: BNC switch box, 3 BNC cables, one with female/female gooseneck adapter, 2 LH Hangers

kit

5950

nightsea

SFA-SWK-L-BNC

Switch Box Kit, long working distance: BNC switch box, 3 BNC cables, one with female/female gooseneck adapter, 2 LH Hangers

kit

5950

nightsea

DFP-1

DFP Flashlight with RB and GR LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

12835

nightsea

DFP-CG

DFP Flashlight with CY and GR LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

13855

nightsea

DFP-RC

DFP Flashlight with RB and CY LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

13855

nightsea

DFP-VC

DFP Flashlight with VI and CY LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

13855

nightsea

DFP-VG

DFP Flashlight with VI and GR LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

13855

nightsea

DFP-VR

DFP Flashlight with VI and RB LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

13855

nightsea

DFP-UC

DFP Flashlight with UV and CY LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

16065

nightsea

DFP-UG

DFP Flashlight with UV and GR LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

16065

nightsea

DFP-UR

DFP Flashlight with UV and RB LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

16065

nightsea

DFP-UV

DFP Flashlight with UV and VI LEDs, matching filter glasses, carrying case

each

16065

nightsea

BLS-1

BlueStar light plus style VG1 filter glasses

each

3485

nightsea

BLS-2

BlueStar light plus style VG2 filter glasses

each

3655

nightsea

BLS-3

BlueStar light plus style VG3 filter glasses

each

3655

nightsea

VG-1

Yellow filter glasses, style 1

each

578

nightsea

VG-2

Yellow filter glasses, style 2

each

935

nightsea

VG-3

Yellow filter glasses, style 3

each

935

nightsea

RG-2

Red filter glasses, style 2

each

935

nightsea

FG-UV

Filter glasses, Ultraviolet

each

935

nightsea

FG-VI

Filter glasses, Violet

each

935

nightsea

FG-GO

Filter glasses, Green Only

each

935

nightsea

FG-CY

Filter glasses, Cyan

each

935

nightsea

SFA-PULSE-R

PULSE Option – Retrofit

each

4675

nightsea

 

 

上海金畔生物科技有限公司实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2:产品种类齐全,经营超过700多个品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

4:富有竞争力的价格优势,绝大部分价格有优势。

5:多年积累良好的信誉,大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、国药、fisher等药企。

6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发,欢迎合作。

 

荧光金—神经逆行示踪检测COA

中国*代理 大量现货

Hydroxystilbamidine (FluoroGold)

Catalog #: 780000

Selection:20 mg

Price:2600

 

Product Description

Hydroxystilbamidine has been used extensively as a retrograde tracer for neurons and also a histochemical stain. Please also see hydroxystilbamidine 4% in H2O (80023), which is a more convenient, ready-to-use form.

  • λExEm = 361/536 nm

  • Yellow solid soluble in water

  • Store at 4°C and protect from light

  • C18H24N4O7S2

  • MW: 473

FluoroGold is a trademark of Fluorochrome, LLC.

MSDS (PDF): MSDS 80014

相关应用资料:

神经示踪剂应用背景神经示踪剂常用于阐明神经系统的解剖。示踪剂可以顺行,从轴突到胞体;也可以逆行,从胞体到轴突。在这些示踪剂的帮助下,可以确认轴突的起源细胞,他们支配某种特定结构形成;也可以鉴别从某一特定的神经元出来的轴突投射的目标位置。

Fluoro-GoldTM 荧光金(神经逆行示踪检测)

产品背景

Fluoro-GoldTM是当今世界上应用zui普遍和非常有效的神经逆行示踪剂,Fluorogold也称为羟脒替(hydroxystilbamidine),是Fluorochrome, LLC.公司的专有产品,于1985年开始范围内销售。

Fluoro-GoldTM antibody (抗体)为Fluorochrome, LLC.特别开发的高灵敏度抗体,能够大幅度增强Fluorogold的可见度。Fluorochrome, LLC.公司1998年引进该抗体以来,不仅大量文献研究证实其有效性,而且成为行业检测的金标准。

产品优势

1)Fluoro-Gold(荧光金)的产品优势:

﹄ 极其强效的神经逆行荧光示踪剂,灵敏度高且结果稳定;

﹄ 不会非特异性结合传代中未损伤的纤维;

﹄ 不会渗出逆行标记的神经元;

﹄ 标记神经元存活周期广,1天或者高于1个月;

﹄ 可用压力注射或者离子透入(iontophoresed)的方法将染料导入动物体内;

﹄ 与zui常用的其他几种神经解剖技术相兼容,比如免疫荧光术(IF),免疫细胞化学(ICC),放射自显影技术,过氧化物酶免疫组化(HRP-IHC),石蜡包埋和其他逆行荧光示踪剂

﹄ 操作简便安全,保质期长;*可靠的材料来源;

2)Fluoro-Gold(荧光金)与Fluoro-Gold抗体结合使用的优势:

﹄ 大幅度增强荧光金标记的可视度;

﹄ 允许更的解剖标测

﹄ 显示相当细微的解剖结构包含树突,轴突和轴突末梢

应用图片:

  

Left: VTA (40X) after Fluoro-Gold injection in the accumbens.  Antibody is at 1/100,000.

Right: Hypothalamic cells along the 3rd left ventricle (40X) after Flouro-Gold injection in the PVN.  Antibody is at 1/50,000.

产品使用

1)Fluoro-Gold(荧光金)单独标记技术

﹄ 溶解体系(vehicle):溶于蒸馏水,0.9%生理盐水,或溶于0.2M中性磷酸盐缓冲液配置成悬浮液

﹄ 染液浓度:有效染色浓度范围1-10%。初次实验推荐使用浓度4%。 如果注射部位发生意外坏死,或者标记过于密集,可降低浓度至2%。Fluoro-Gold分子量为532.6 daltons。

﹄ 注射方法:压力注射;离子透入;或者晶体注入;

﹄ 术后存活时间:好的逆行神经示踪标记一般在术后2天~2个月内观察到。通常情况下术后的存活周期是3~5天。在染料不会向胞外扩散的前提下存活时间长能够改善远端神经末梢的填充。

﹄ 固定:差不多同所有固定方式兼容,或者也可不做固定;常常使用含4%甲醛的中性生理缓冲盐作为固定剂。注:含高浓度重金属(如锇,汞)的固定剂会导致荧光淬灭,另外含高浓度(>1%)戊二醛可能会加深背景荧光;

﹄ 组化处理:含Fluoro-Gold的组织样本几乎与所有通用的组化处理技术兼容,经常使用的是固定组织的冰冻切片(20 µm)。另还包含未固定组织的恒冷切片(10 µm);塑料(0.2-4 µm)或石蜡(3-10 µm)包埋的薄切片;

﹄ 联合检测:切片进一步处理用于第二种标志物(marker)的检测如放射自显影,HRP组化分析;免疫细胞化学;第二种荧光示踪剂;荧光素复染等等。

﹄ 封片,清洗和盖片:切片通常黏附在明胶包被的载玻片上,风干,二甲苯浸渍,然后加入非荧光的DPX塑性封片剂来盖片;

﹄ 观察与拍照:荧光金可直接用荧光显微镜观察,使用宽带紫外激发滤光片。颜色:中性pH缓冲液处理组织发射金色光;酸性pH缓冲液(如pH=3.3)处理组织发射蓝色;也可以用数码拍照或者胶片曝光来记录结果。

2)Fluoro-Gold(荧光金)+ Fluoro-Gold antibody(荧光金抗体)的组合标记技术

﹄ 抗体特性:兔多克隆(100 µl,1:100 dilutionl),BSA diluent (50 mM KPBS, 0.4% Triton, 1% BSA, 1% NGS)稀释500~1,000×,与 Vector elite kit结合使用大概可做300~1000张切片。

﹄ 抗体使用:荧光金注射入动物体内之后,漂片(以灌注4%甲醛的大鼠脑组织切片,30 µm为例)在Fluoro-Gold 抗体工作液中4度孵育18小时后,清洗,然后用生物素化GAR(Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody ,1:1000,Cat#:BA-1000)室温孵育1h,之后清洗。 切片再用Avidin/Biotin(1:1000, vector, Cat#:PK6100)孵育1h,之后转入DAB显色底物孵育6 mins(Diaminobenzidine (.04%) and Nickel Chloride (2.5%) in 0.1 M NaAcetate with 0.06% H2O2)。切片zui后进行清洗,组织黏合,干燥,脱水和盖片。

    Bangs Laboratories 荧光定量 产品说明

    世界*实验材料供应商 Bangs Laboratories上海金畔生物为其中国代理, Bangs Laboratories在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品,的服务, Bangs Laboratories就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

    Bangs Laboratories中国代理, Bangs Laboratories上海代理, Bangs Laboratories北京代理,Bangs Laboratories广东代理, Bangs Laboratories江苏代理Bangs Laboratories湖北代理,Bangs Laboratories天津,Bangs Laboratories黑龙江代理,Bangs Laboratories内蒙古代理,Bangs Laboratories吉林代理,Bangs Laboratories福建代理, Bangs Laboratories江苏代理, Bangs Laboratories浙江代理, Bangs Laboratories四川代理,

     

    Bangs Laboratories是一家位于美国印地安那州,成立于1988年,专业研发与生产生命科学研究领域各种微球及质控定量标准品和校,材质包括多聚体、硅及磁性材料,直径大小从20nm-200um,品种达2000种以上,适用于流式细胞分析,生物大分子的分离与检测,激光共聚焦,电镜,荧光显微镜与相差显微镜等生物影像分析研究,可广泛应用于临床诊断试剂盒、生物分离等生命科学研究领域。另外还可提供不等,均一性高具有良好热稳定性的羧基或氨基修饰微球,以及个性化的微球定制服务(材质、粒径大小、颜色、修饰方案等)。同时,Bangs Laboratories成功收购了流式标准品公司,在标准品和校领域也成为企业,迄今已研发了许多流式定量标准品及校,可帮助科研和临床工作人员在实验时更容易更准确地评估数据。此外,Bangs Laboratories还同时提供全系列可供1.5ml离心管、试管、96孔板以及培养用磁分离器,以实施细胞分选、mRNA与DNA分离与其它生物大分子的纯化等应用。

     

    FLUORESCENCE QUANTITATION

    荧光定量

    我们的量子™MESF和量子™蜂窝简单®微球是外部标准,使荧光强度单位的标准化,不论仪器和软件。此外,它们用用于标记细胞的实际荧光染料标记,用于对环境的同步响应。珠子在相同的一天和与样品相同的设置下运行,以建立相关仪器通道值和标准荧光强度单位的校准曲线。然后可以根据曲线读取未知数以确定表达(即,来自每个细胞群体的信号的定量)。有关使用这些产品的其他信息,请参阅我们的定量细胞手册或退房PDS 818,提示和故障排除。

    QUANTUM™MESF

    我们的量子™MESF试剂盒包含一个空白人口和一系列标记与不同量Alexa氟的任四种荧光的微球群体的® 488,Alexa氟® 647,APC中,Cy™5,PE-CY™5,或R-PE,或用不同量的FITC标记的五个荧光微球群体。通过直接比较来自纯荧光染料溶液的荧光测量与用相同荧光染料表面标记的微球的荧光测量,进行可溶性荧光(MESF)单元分子中荧光强度的分配。见PDS 849以确定有效的FP比。免费快速校准®每个试剂盒都提供分析模板,以帮助确定细胞的表达水平,并评估仪器线性度和检测阈值。Quantum™MESF套件有三种尺寸:A(20次测试),B(100次测试)和C(280次测试)。

    Catalog Number Description
    488 Quantum™ Alexa Fluor® 488 MESF
    555 Quantum™ FITC-5 MESF
    555p Quantum™ FITC-5 MESF (Premix)
    827 Quantum™ R-PE MESF
    828 Quantum™ PE-Cy™5 MESF
    822 Quantum™ Cy™5 MESF
    647 Quantum™ Alexa Fluor® 647 MESF
    823 Quantum™ APC MESF

     

     

    Columbia SureLight 荧光染料列表

    Columbia Biosciences Corporation 成立于 2007 年,开发和销售荧光蛋白、抗体偶联物和新型蛋白质纯化配体。此外,我们全面的定制服务包括抗体标记、蛋白质纯化和发现服务,例如用于肿瘤学和免疫学临床前药物开发的基于功能性细胞的检测。

    该公司由一支经验丰富的免疫学家、生物学家和化学家组成,他们拥有超过 30 年的行业经验,他们以接受挑战而自豪——寻找问题的解决方案。我们的专长在于培养藻类、提取和纯化染料以及将这些和其他荧光团与抗体结合。

    我们是流式细胞术天然染料市场的生产者,也是生命科学和诊断公司的供应商。

    Columbia Biosciences 是 Pivotal Scientific Limited Alliance 的骄傲成员。


    Columbia SureLight 荧光染料列表


    SureLight Fluorescent Dyes (Unconjugated)

    • Sulfo-SMCC activated SureLight™ Allophycocyanin (APC)

       

      SureLight APC Labeling Protocol: Click here to be redirected to a…

      $333.00  $582.00

       

      #D3-010

      SELECT OPTIONSDETAILS

       

    • Sulfo-SMCC activated SureLight™ Peridinin-Chlorophyll Protein Complex (PerCP) Cy5.5

       

       

      $81.00  $15,322.00

       

      #D27-010

      SELECT OPTIONSDETAILS

       

    • Sulfo-SMCC activated SureLight™ Peridinin-Chlorophyll Protein Complex (PerCP);1mg

       

       

      $90.00

       

      #D11-010

      ADD TO CARTDETAILS

       

    • Sulfo-SMCC 激活的 SureLight™ R-藻红蛋白 (R-PE)

       

      激活的 SureLight™ R-藻红蛋白 (R-PE) 标记方案:单击此处查看详细记录…

      114.00美元 —— 228.00美元

       

      #D5-010

      选择选项细节

       

    • SureLight™ 488 NHS 酯;100ug

       

      SureLight™488 是一种具有激发作用的亮绿色荧光染料,适用于…

      32.00美元

       

      #D44-000-100ug

      添加到购物车细节

       

    • SureLight™ 488 NHS 酯;1mg

       

      SureLight™ 488 是一种亮绿色荧光染料,具有适合…

      156.00美元

       

      #D44-000-1mg

      添加到购物车细节

       

    • SureLight™ 别藻蓝蛋白 (APC)

       

      交联别藻蓝蛋白分离的别藻蓝蛋白在稀释溶液中或当…

      $ 208.00 —— $ 8,323.00

       

      #D3-000

      选择选项细节

       

    • SureLight™ B-藻红蛋白 (B-PE)

       

      由于其高量子产率,B-PE被认为是世界上…

      104.00美元 —— 5,202.00美元

       

      #D4-000

      选择选项细节

       

    • SureLight™ P3;5mg

       

      这种专有染料可用于快速荧光检测、微孔板…

      $ 312.00

       

      #D7-000

      添加到购物车细节

       

    • SureLight™ PE-594

       

      许多应用程序和仪器是专门为 PE-594 开发的。这是…

      156.00美元 —— 10,404.00美元

       

      #D12-000

      选择选项细节

       

    • SureLight™ PE-665(花青 5.0)

       

      许多应用程序和仪器是专门为 PE-665(PE 花青…

      156.00美元 —— 10,404.00美元

       

      #D14-000

      选择选项细节

       

    • SureLight™ PE-695(花青 5.5)

       

      许多应用程序和仪器是专门为 PE-695(R-PE 花青…

      156.00美元 —— 10,404.00美元

       

      #D15-000

      选择选项细节

       

    • SureLight™ PE-777

       

      许多应用程序和仪器是专门为 PE-777(PE 花青…

      156.00美元 —— 10,404.00美元

       

      #D16-000

      选择选项细节

       

    • SureLight™ PerCP 花青素 5.5

       

       

      156.00美元 —— 10,404.00美元

       

      #D27-000

      选择选项细节

       

    • SureLight™ Peridinin-叶绿素蛋白复合物 (PerCP)

       

      结构特征 Peridinin 是一种捕光色素,与叶绿素和…

      156.00美元 —— $ 8,323.00

       

      #D11-000

      选择选项细节

       

    • SureLight™ 聚合链霉亲和素 R-藻红蛋白(高强度)

       

      SureLight™ 聚合物 SAPE(高强度)的重要特性 • 比…亮 8-10 倍

      253.00美元 —— 12,750.00美元

       

      #D5-2212R

       

     

    流式细胞术纳米聚苯乙烯和纳米荧光尺寸标准套件

    SPHEROTM流式细胞仪纳米荧光尺寸标准试剂盒•由4种直径为220nm至1.33µm的荧光珠组成
    •设计用于表征微粒(MPs,0.5-0.9µm)、水生细菌(0.2-0.6µm)和血小板(0.9-3µm)
    •用于在具有更高前向散射灵敏度的新型细胞仪中定义MP分析的最佳设置
    •为流式细胞仪提供亚微米尺寸标准化工具
    •额外的130nm填充可作为NFPPS-0152-5提供

     

    goldbio D-荧光素​钾盐说明书

    goldbio D-荧光素钾盐说明书

    Gold Biotechnology®, Inc. 与每位研究人员共享一个愿景:生命科学研究的每个方面都将向我们介绍一个有影响力的发现和学习的未来,造福整个世界。如果研究人员的热情不会被对试剂质量的担忧所玷污,尤其是质量成本,那么我们的愿景就会更快地实现。这就是我们在这里的原因!我们相信未来会发生变化和繁荣,我们希望通过成为以优惠价格获得高品质产品的资源来帮助您实现这一目标。通过为我们的客户提供尽可能化学品,并在 GoldBio 实验室进行测试以确保满足我们自己的质量规格,您可以确保您的研究顺利进行。

    生物发光已被证明是生物学研究中的基本工具。科学家们已经利用自然发生的生物发光反应的力量进行报告分析,其中荧光素酶在添加发光底物后产生光。在 GoldBio,我们拥有大量荧光素底物,可用于动物模型和基于细胞的检测中的荧光素酶成像。此外,我们还开发了必要的资源,以进一步促进您的基因网络和信号通路研究,包括可靠的荧光素酶检测方案、指南和关于荧光素底物体外和体内使用的综合手册。

    GoldBio 提供多种荧光素底物,包括 Firefly D-荧光素盐(已证实和已发表),非常适合小鼠荧光素酶成像、细胞培养和 ATP 测定。我们还提供腔肠素,可用于 BRET(生物发光共振能量转移)、ELlSA、高通量筛选分析以及细胞和组织中超氧阴离子和过氧亚硝酸盐的化学发光检测。

    GoldBio 还提供高灵敏度的单和双 Illumination™ 检测试剂盒,允许以高灵敏度和线性度在体外测量萤火虫和海肾活动,并提供闪光和辉光型格式,以满足您不同的检测和发射持续时间需求。此外,为了您的方便,GoldBio 的 Illumination™ 检测试剂盒还提供冻干形式。在这里,您还将找到不同的荧光素测定裂解缓冲液选项以及各种支持试剂。

    D-荧光素,钾盐(Proven and Published®)

    Catalog ID Size Pricing
    LUCK-100 100 mg $ 54.00
    LUCK-250 250 mg $ 129.00
    LUCK-300 300 mg $ 151.00
    LUCK-500 500 mg $ 194.00
    LUCK-1G 1 g $ 245.00   $ 199.00
    LUCK-2G 2 x 1 g $ 472.00   $ 398.00
    LUCK-3G 3 x 1 g $ 702.00   $ 597.00
    LUCK-4G 4 x 1 g $ 928.00   $ 796.00
    LUCK-5G 5 x 1 g $ 1,150.00   $ 995.00
    LUCK-10G 10 x 1 g $ 2,280.00

    描述

    升荧光素是一种常见的生物发光报告基因,用于荧光素酶表达的体内成像。萤火虫荧光素酶的这种水溶性底物利用 ATP 和 Mg2+ 作为辅助因子,在有氧的情况下发出特征性的黄绿色光,在 37°C 时在体内转变为红光。通过利用 ATP,该反应可进一步用于指示能量或生命的存在,从而起到生死染色的作用。

    荧光素是整个生物技术领域中使用的常用试剂,专门用于体内成像。荧光素酶标记的肿瘤细胞、干细胞或传染病通常被接种到研究动物(如大鼠或小鼠)中进行研究。荧光素的注射允许通过生物发光成像 (BLI) 在这些模型系统中实时、无创地监测疾病进展和/或药物功效。

    荧光素也常用于体外研究,包括荧光素酶和 ATP 检测、基因报告检测、高通量测序和各种污染检测。®

    产品规格

    目录编号 幸运®
    CAS# 115144-35-9
    兆瓦 318.42 克/摩尔
    年级 分子生物学级
    存储/处理 -20°C 干燥保存。避光。