消化法中常使用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶,透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用; 胶原酶作用较缓和,能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞,对细胞损伤小,以胶原I为主。
胰蛋白酶(简称胰酶)是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等. 胰蛋白酶作用较强,容易造成平滑肌细胞损坏;
胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,zui终浓度200u/mL 此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本,所以选择价廉物美的胶原酶是关键,所以不光要看重量还要看每MG的活性单位.
胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构,而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质,因此,这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感,极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。
胶原酶(collagenase)是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬,内含较多结缔组织或胶原成分时,用胰蛋白酶解离细胞的效果较差,这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为zui终浓度200U/ml。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
中文名称: I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、V型胶原酶
英文名称:Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V
CAS号: 9001-12-1
规格:100mg, 1g ,5
产地:Worthington sigma invitrogen
外观: 棕色或棕褐色结晶状冻干粉;
保存:-20°C
胶原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意标签中的活性单位,zui终配制 成为200u/mL就可以了.,
胰蛋白酶的配制、过滤除菌与分装过程
准备样品:干粉,PBS缓冲液,离心管两个、冻存管20个、盒子一个、枪头1盒、灭菌器、注射器。
准备工作:将离心管、冻存管装载盒子中高温高压灭菌。
配制:
1.称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度0.25%用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS(PH到7.2左右)液中。搅拌混匀,置于4℃内12小时。
2.用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌。
3.分装:将除菌之后的胰蛋白酶用移液枪分装至
A: Collagenase I(胶原酶I型) : 主要用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。
订货信息
货号 |
品名 |
包装 |
价格 |
品牌 |
LS004194 |
Collagenase I(胶原酶I型) |
100 mg |
476 |
Worthington |
LS004196 |
Collagenase I(胶原酶I型) |
1 gm |
2464 |
Worthington |
LS004197 |
Collagenase I(胶原酶I型) |
5 gm |
10360 |
Worthington |
17100-017 |
Collagenase I(胶原酶I型) |
1g |
3025 |
invitrogen |
C0130-100MG |
Collagenase I(胶原酶I型) |
100mg |
526.5 |
sigma |
C0130-500MG |
Collagenase I(胶原酶I型) |
500MG |
1473.03 |
sigma |
C0130-1G |
Collagenase I(胶原酶I型) |
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sigma |
C0130-5G |
Collagenase I(胶原酶I型) |
5G |
6113.25 |
sigma |
B: Collagenase II(胶原酶II型) : 适用于肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织细胞的分离。
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货号 |
品名 |
包装 |
价格 |
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LS004177 |
Collagenase II(胶原酶II型) |
5 gm |
10360 |
Worthington |
LS004176 |
Collagenase II(胶原酶II型) |
1 gm |
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LS004174 |
Collagenase II(胶原酶II型) |
100 mg |
476 |
Worthington |
17101-015 |
Collagenase II(胶原酶II型) |
1g |
3025 |
invitrogen |
C6885-25MG |
Collagenase II(胶原酶II型) |
25MG |
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sigma |
C6885-100MG |
Collagenase II(胶原酶II型) |
100mg |
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C6885-500MG |
Collagenase II(胶原酶II型) |
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C6885-1G |
Collagenase II(胶原酶II型) |
1G |
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sigma |
C6885-5G |
Collagenase II(胶原酶II型) |
5G |
7,926.75 |
sigma |
C: Collagenase III(胶原酶 III型) 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用
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LS004182 |
Collagenase III(胶原酶 III型) |
1 gm |
2464 |
Worthington |
LS004183 |
Collagenase III(胶原酶III型) |
5 gm |
10360 |
Worthington |
LS004180 |
Collagenase III(胶原酶III型) |
100 mg |
476 |
Worthington |
D: Collagenase IV(胶原酶IV型):胶原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织, 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用。
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货号 |
品名 |
包装 |
价格 |
品牌 |
17104-019 |
Collagenase IV(胶原酶IV型) |
1g |
3025 |
invitrogen |
C5138-25MG |
Collagenase IV(胶原酶IV型) |
25MG |
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sigma |
C5138-100MG |
Collagenase IV(胶原酶IV型) |
100mg |
772.20 |
sigma |
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Collagenase IV(胶原酶IV型) |
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2,530.71 |
sigma |
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Collagenase IV(胶原酶IV型) |
1G |
4,095.00 |
sigma |
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15,420.60 |
sigma |
LS004189 |
Collagenase IV(胶原酶V型) |
5 gm |
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Worthington |
LS004188 |
Collagenase IV(胶原酶V型) |
1 gm |
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Worthington |
LS004186 |
Collagenase IV(胶原酶V型) |
100 mg |
476 |
Worthington |
E: Collagenase V(胶原酶V型): 胶原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离,结缔组织分离。
货号 |
品名 |
包装 |
价格 |
品牌 |
LS005283 |
Collagenase V(胶原酶V型) |
5 gm |
12460 |
Worthington |
LS005282 |
Collagenase V(胶原酶V型) |
1 gm |
2968 |
Worthington |
LS005280 |
Collagenase V(胶原酶V型) |
100 mg |
588 |
Worthington |
C9263-25MG |
Collagenase V(胶原酶V型) |
25MG |
469.17 |
sigma |
C9263-100MG |
Collagenase V(胶原酶V型) |
100mg |
625.95 |
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C9263-5G |
Collagenase V(胶原酶V型) |
5G |
5,686.20 |
sigma |
我们公司zui大优势是强大的采购,
1:基本什么都能进口,血清,抗体,耗材,还有部分限制进口的,
2: 货品全,现经营过700多个品牌,基本所有生物试剂耗材都可以进口,特别是冷偏的产品那就更有优势,
3:提供加急服务,一般1-2周到货,超过时限加急费全免
4:价格公道,绝大部分价格有优势,当然不能保证100%产品都有价格优势,
5:良好的信誉,大部分客户我们提供货到付款服务,客户包括清华,北大 交大 复旦,中山等100多所大学,ROCHE,阿斯利康,国药 ,fisher等500多家公司
6:我们还是santa,Advanced Biotechnologies Inc;Athens Research & Technology, bangs, BBInternational, crystalchem, dianova, FD Neurotechnologies, Inc. FormuMax Scientific, Inc; Genebridege; Glycotope Biotechnology GmbH; iduron; Innovative Research of America; Ludger ; neuroprobe; omicronbio; Polysciences; prospecbi; QA-BIO;quickzyme;RESEARCH DIETS, INC;sterlitech;sysy;TriLink BioTechnologies, Inc;worthington-biochem;zyagen;……几十家国外公司代理
7:我们还从事invitrogen,qiagen; abcam ;sigma;neb; roche;merck; rnd; BD; GE; pierce; BioLegend….等*批发
消化法中常使用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶,透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用; 胶原酶作用较缓和,能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞,对细胞损伤小,以胶原I为主。
胰蛋白酶(简称胰酶)是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等. 胰蛋白酶作用较强,容易造成平滑肌细胞损坏;
胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,zui终浓度200u/mL 此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本,所以选择价廉物美的胶原酶是关键.
胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构,而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质,因此,这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感,极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。
胶原酶(collagenase)是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬,内含较多结缔组织或胶原成分时,用胰蛋白酶解离细胞的效果较差,这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为zui终浓度200U/ml。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
中文名称: I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶、V型胶原酶
英文名称:Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V
CAS号: 9001-12-1
规格:100mg, 1g ,5
产地:Worthington sigma invitrogen
外观: 棕色或棕褐色结晶状冻干粉;
保存:-20°C
胶原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意标签中的活性单位,zui终配制 成为200u/mL就可以了.,
胰蛋白酶的配制、过滤除菌与分装过程
准备样品:干粉,PBS缓冲液,离心管两个、冻存管20个、盒子一个、枪头1盒、灭菌器、注射器。
准备工作:将离心管、冻存管装载盒子中高温高压灭菌。
配制:
1.称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度0.25%用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS(PH到7.2左右)液中。搅拌混匀,置于4℃内过一晚。
2.用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌。
3.分装:将除菌之后的胰蛋白酶用移液枪分装至
A: Collagenase I(胶原酶I型) : 主要用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。
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货号 |
品名 |
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品牌 |
LS004194 |
Collagenase I(胶原酶I型) |
100 mg |
476 |
Worthington |
LS004196 |
Collagenase I(胶原酶I型) |
1 gm |
2464 |
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LS004197 |
Collagenase I(胶原酶I型) |
5 gm |
10360 |
Worthington |
17100-017 |
Collagenase I(胶原酶I型) |
1g |
3025 |
invitrogen |
C0130-100MG |
Collagenase I(胶原酶I型) |
100mg |
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C0130-500MG |
Collagenase I(胶原酶I型) |
500MG |
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Collagenase I(胶原酶I型) |
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B: Collagenase II(胶原酶II型) : 适用于肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织细胞的分离。
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LS004177 |
Collagenase II(胶原酶II型) |
5 gm |
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LS004176 |
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Collagenase II(胶原酶II型) |
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C6885-25MG |
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C: Collagenase III(胶原酶 III型) 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用
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Collagenase III(胶原酶 III型) |
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Collagenase III(胶原酶III型) |
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D: Collagenase IV(胶原酶IV型):胶原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织, 对哺乳动物的组织有广谱的消化作用。
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17104-019 |
Collagenase IV(胶原酶IV型) |
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C5138-25MG |
Collagenase IV(胶原酶IV型) |
25MG |
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C5138-100MG |
Collagenase IV(胶原酶IV型) |
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E: Collagenase V(胶原酶V型): 胶原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离,结缔组织分离。
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LS005283 |
Collagenase V(胶原酶V型) |
5 gm |
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Collagenase I 胶原酶I型 说明书
产品货号
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LS004194-100mg |
100mg |
¥520.00 |
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产品描述
胶原酶(Collagenase)是一种蛋白酶,一种肽链内切酶,能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列(该序列高频率出现在胶原中,很少发现于其他蛋白中)并切割该序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽,但胶原酶是wei一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶,这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
本品来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有胶原酶(更准确的称法为梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白,多糖和脂质,使得本品非常适用于组织消化。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异,分为四种类型:胶原酶I型,II型,III型和IV型,在应用上有所偏向:
1)胶原酶I(Type I Collagenase):含有比较均匀的各种酶活力(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备;
2)胶原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备;
3)胶原酶III(Type III Collagenase):含有较低的蛋白酶活性,常用于乳腺细胞的制备;
4)胶原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰岛细胞的制备,或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为I型胶原酶,≥125 U/mg solid,可用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺等组织和细胞的解离。
酶活力单位定义
在37℃,pH7.5 的条件下,5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
运输及保存条件
室温运输。4℃避光保存,2年有效。储存液-20℃避光冻存。
使用方法
1. 胶原酶储存液的配制
向每管100 mg的胶原酶中加入100 µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡盐溶液,含Ca2+、Mg2+),轻轻旋涡震荡使其充分溶解,制备成1g/mL(即1000×)的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌,分装成小份量,然后于-20 °C避光冻存。
使用前于冰上解冻,避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为:0.5-2.5 mg/mL,用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL,需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。
2.组织的分离
1. 使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块;
2. 利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次;
3. 加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,使其浸没组织块,并加入胶原酶至需要工作浓度;
4. 于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。
5. 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得,收集备用。未wan全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育;
6. 利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次;
7. 细胞培养液重悬上述细胞,利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
8. 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3. 器官灌注
1. 向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶,另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率;
2. 按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液;
3. 将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛,从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来,未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育;
4. 利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次;
5. 细胞培养液重悬上述细胞,利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
6. 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
注意事项
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
Serva-胶原酶、电泳试剂、生化试剂供应商
德国Serva公司于1953年在德国海德堡(德国生命科学的中心)成立,拥有60年的优质试剂供应经验,在全球范围内生产销售胶原酶、电泳试剂、生化试剂等优质试剂。Serva在产品质量等方面追求最高标准,致力于确保产品性能的一致性和供应的连续性,并通过了ISO 9001:2015认证。Serva的使命是将创新产品推向生命科学市场,不断改进技术能力和全面质量管理,满足客户的需求。
Serva的发展历程:
1953年,Serva由化学家Nikolaus Grubhofer博士在海德堡创建。他的想法是向学术界和工业界的研究实验室提供精细的生物化学试剂,以“服务于科学”(SERVA=lat. servare)。
1961年,Serva第一个产品目录列出了大约450种产品。在20世纪70年代,Serva以其全面的精细生物化学试剂而闻名,为世界各地的实验室提供试剂。生物分子分离(生物分离)技术的发展开创了SERVA的新阶段—专有产品开发。随后,一系列用于电泳和色谱的试剂在20世纪70年代和80年代被推向市场。
1986年,Serva将所有权变更为勃林格殷格翰制药公司(Boehringer Ingelheim Pharma Corporation),为建立“生物业务”做出了贡献。作为美国各种关键产品线的分销合作伙伴,Serva成功满足了日益增长的生命科学研究市场的即时需求。
1998年,勃林格殷格翰制药公司(Boehringer Ingelheim Pharma Corporation)最终决定将Serva出售给总部位于美国的Novex公司,Novex公司是电泳的主要供应商。
1999年Novex公司被美国Invitrogen公司收购。SERVA在2002年之前一直是Invitrogn集团的一部分。
2002年7月,Serva电泳有限公司现在再次独立,wan全由德国股东所有。总部设在海德堡,继续通过全球分销网络提供优质产品。
未来,SERVA将进一步发展的现有技术,成为生命科学市场的领xian者,专注于某一些领域。SERVA的使命是通过合作和战略联盟,提供源自SERVA自身专业知识的创新产品。
主要产品线
一、样品制备相关产品(蛋白制备、核酸制备及定量)
在蛋白质和核酸分析的实验中,可靠、高效和简单的样品制备是实现最佳和可重复结果的关键步骤之一。Serva提供裂解缓冲液、酶、洗涤剂、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、缓冲液、盐等试剂,以及蛋白质提取试剂盒、亲和层析树脂、超滤浓缩器、内毒素去除或清洁剂试剂盒、蛋白定量试剂盒等产品。
二、质谱相关试剂
Serva提供内切蛋白酶、糖苷酶、溶剂、稳定同位素标记等。
三、电泳相关产品
包括核酸电泳、SDS-PAGE、western blot、凝胶制备试剂等。
四、胶原酶和中性蛋白酶
中性蛋白酶是由多肉芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)产生的一种细菌酶,水解非极性氨基酸残基的N端肽键,属于氨基内肽酶。中性蛋白酶只能破坏细胞外基质而不破坏细胞之间的连接,因此主要用于细胞集落的分离和将组织块分解成小块细胞,因为它保持细胞膜的完整性,其温和的蛋白水解作用使酶可以被特异性用于分离原代细胞和次级细胞(亚培养)。中性蛋白酶也常被用作与胶原酶和/或其他蛋白酶结合的次级酶,用于许多原代细胞的分离和组织解离。中性蛋白酶可以破坏细胞表面的分子或者抗原,例如与T细胞分析相关的抗原。因此,如果发现细胞某些表位蛋白的丢失,可以从消化液中将该酶去掉。胶原酶在众多蛋白酶中是du一无二的,它能够攻击和降解结缔组织中常见的三螺旋天然胶原纤维。胶原酶破坏胶原蛋白中存在的肽键,有助于消化细胞外基质,使细胞释放到悬浮液中。
Serva明星产品
品牌 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
Serva |
SERVALYT™ 2-9 Seed-Mix |
4293502 |
25 mL |
Serva |
IEF Marker 3-10, Liquid Mix |
3921201 |
500 μL |
Serva |
SERVALYT™ 3-10 |
42940.01 |
10 mL |
Serva |
β-Propiolactone |
33672-100ML |
100 mL |
Serva |
Collagen R solution 0.2 % |
4725401 |
20 mL |
Serva |
SERVALYT ™ 2-9 Seed-Mix |
42935.01 |
10 mL |
Serva |
Yeast Extract ServabacterR powder |
2454003 |
5 kg |
Serva |
β-Propiolactoneresearch grade |
33672 |
100 mL |
Serva |
SERVALYT™ 3-7 |
4294501 |
10 mL |
Serva |
SERVALYT(TM) 2-9 Seed-Mix |
4293501 |
10 mL |
Serva |
SERVALYT™ 2-11 |
4290001 |
10 mL |
Serva |
SERVALYT™ PRECOTES™ Wide Range pH 3-10 |
4286602 |
5 gels |
Serva |
SERVALYT™ 2-11 |
4290001 |
10 mL |
Serva |
SERVALYTTM 3-10 40% (w/v) |
4294002 |
25 mL |
Serva |
Polyvinylsulfate-K-salt |
3342502 |
10 g |
Serva |
Dodecylsulfate-Na-salt in pellets |
2076503 |
1 kg |
Serva |
FocusGel 6-11 24S |
4332901 |
5 gels |
Serva |
SERVALYT™ 7-9 |
4290701 |
10 mL |
Serva |
SERVALYT™ 8-10 |
4291101 |
10 mL |
Serva |
ERVALYT™ 6-7 |
4292501 |
10 mL |
作为Serva在中国区域经销商,上海金畔生物科技有限公司将为中国客户提供全面的Serva的产品。
advancedbiomatrix胶原酶简介
目录 #5030
该胶原酶产品以 50 mg 包装大小的冻干无菌粉末形式提供。它已经过专门测试并显示可有效水解胶原蛋白和解离组织。
胶原酶由多种酶组成,包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶,旨在有效水解胶原蛋白和解离组织。已经评估了各种胶原酶产品专门用于 Advanced BioMatrix 的胶原蛋白产品。该产品用于提高消化胶原凝胶中分离细胞的活力和功能。
胶原酶以 50 mg 包装大小的冻干无菌粉末形式提供。重构后,产品即可使用。
参数、测试和方法 | 胶原酶 #5030 |
形式 | 冻干粉 |
包装尺寸 | 50 毫克 |
贮存温度 | 2-10°C |
灭菌方法 | 过滤 |
生物负载 (cfu) | < 1 |
资源 | 溶组织梭菌 |
保质期 | 自收到之日起至少 6 个月 |
使用这些建议作为指导来确定适合您的培养系统的最佳凝胶解离程序。
在磷酸盐缓冲盐水或其他 pH 中性介质中重构冻干胶原酶粉末(50 毫克)。可以使用 1 mg/ml 的典型浓度。
从胶原凝胶中吸出培养基。
用预热的 PBS 或其他 pH 中性培养基清洗胶原凝胶 2X,以去除可能抑制胶原降解的培养基。
加入适量的胶原酶溶液(一个凝胶体积就足够了)。例如:对于含有 0.5 ml 凝胶的 24 孔板,添加 0.5 ml 胶原酶溶液。
转移到 37ºC 培养箱中 30-60 分钟。为了促进胶原凝胶的更快解离,凝胶和胶原酶溶液可以使用大口径移液器吸头上下移液。
如有必要,在 37°C 下再孵育 30-60 分钟,以完成凝胶的消化。如果需要,每 15 分钟移取一次凝胶/细胞混合物。注意:较厚的凝胶或含有较高浓度细胞的凝胶可能需要更多时间。
凝胶*消化后,向凝胶/细胞混合物中加入等体积的*培养基,然后收集细胞。
冲洗收集任何残留细胞的培养容器。
在室温下以 250 xg 离心细胞悬液 5 分钟。
小心吸出上清液,将细胞沉淀重悬于 0.5 -1 ml 新鲜培养基中。
使用血细胞计数器和台盼蓝确定细胞计数和活力。
世界*实验材料供应商SERVA Electrophoresis GmbH 上海金畔生物为其中国代理,SERVA Electrophoresis GmbH 在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品,的服务,SERVA Electrophoresis GmbH 就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获
SERVA Electrophoresis GmbH 中国代理,SERVA Electrophoresis GmbH 上海代理,SERVA Electrophoresis GmbH 北京代理,SERVA Electrophoresis GmbH 广东代理,SERVA Electrophoresis GmbH 江苏代理SERVA Electrophoresis GmbH 湖北代理,SERVA Electrophoresis GmbH 天津,SERVA Electrophoresis GmbH 黑龙江代理,SERVA Electrophoresis GmbH 内蒙古代理,SERVA Electrophoresis GmbH 吉林代理,SERVA Electrophoresis GmbH 福建代理,SERVA Electrophoresis GmbH 江苏代理,SERVA Electrophoresis GmbH 浙江代理,SERVA Electrophoresis GmbH 四川代理,
SERVA Electrophoresis GmbH公司(德国)成立于1953年,1961年出版包含450种产品的目录,50年的专业从事生产、开发和销售生化药剂产品而*。目前主要生产销售生化药剂,电泳产品等生命科学研究的试剂和产品,满足了广大消费者的各种需求。2002年7月与世界zui大的胶原酶生产商Nordmark-Arzneimit GmbH公司合作,生产,销售胶原酶,并利用其开展研究,现在SERVA公司名称为SERVA Electrophoresis GmbH。公司已定制了将来的长远发展计划,立足于现有的技术,来开发新的技术与方法,从而使SERVA公司一直立于生命科学专业领域内的地位。SERVA公司的宗旨是随着科学发展,为客户提供始终如一的高品质的产品和服务,并以公司创新性的产品引导科学的发展。该公司已通过ISO 9001 : 2000.认证。
胶原酶NB4标准级来自溶组织梭菌(Clostridium histolyticum)
(Clostridiopeptidase A)
EC 3.4.24.3 • M r ca. 70 000 – 120 000(胶原酶) • CAS [9001-12-1 ]
含有I类和II类胶原酶(1)和蛋白水解活性的平衡比例。
PZ活性(Wünsch):≥0.10U / mg
适用于组织解离中的不同应用,如分离人和啮齿动物肝细胞,软骨细胞,神经元和内皮细胞,成纤维细胞,脂肪组织细胞(如ADSCs),干细胞和啮齿动物成骨细胞。
由于胶原酶NB4标准品级具有与胶原酶NB5无菌级(目录号17459)和胶原酶NB6GMP级(目录号17458)相当的酶学性质,也可以使用该酶以建立具有满足无菌或GMP要求,如组织工程和移植。
单位定义:根据Wünsch(2),1U
在25℃,pH7.1下每分钟催化1μmole4- 苯基偶氮苄基羰基-L-脯氨酰基-L-亮氨酰甘氨酰-L-脯氨酰基-D-精氨酸的水解。
参考文献:
危险 |
危害声明 | H315 – H317 – H319 – H334 – H335 |
注意事项 | P280 |
反应 | P302 + P352 – P304 + P340 – P305 + P351 + P338 – P342 + P311 – P362 – P362 + P364 |
EINECS:232-582-9 • WGK:1 • HS:35079090
存储温度:+2°C至+8°C
相关产品信息如下:
货号 | 规格 |
17454.02 | 500毫克 |
17454.01 | 1克 |
17454.03 | 5克 |
简要描述:worthington代理,worthington中国代理,worthington上海代理,worthington代理,worthingtonworthington专业代理-上海金畔生物科技有限公司,具体产品信息欢迎电询:021-50837765
详细介绍
产品咨询
货号 | 品名 | 价格¥ | 规格 | 品牌 |
LS004196 | Collagenase, Type 1 | 2464 | 1 gm | Worthington2015 |
LS004176 | Collagenase, Type 2 | 2464 | 1 gm | Worthington2015 |
关键词:Worthington Biochemical ,WorthingtonBiochemical ,Collagenase 胶原酶 Collagenase, Type 1 Collagenase, Type 2 胶原酶Ⅰ Collagenase, Type II II型胶原酶 , CLSAFA ,CLSAFB ,CLSAFC ,肌血球素,细胞分离优化试剂盒,肝细胞分离试剂盒,新生鼠心肌细胞分离试剂盒,木瓜蛋白酶分离试剂盒,胶原酶,DNA酶,RNA酶,弹性蛋白酶,木瓜蛋白酶,胰蛋白酶,TRTPCK
Worthington Biochemical——细胞分离酶专业供应商 中国代理,大量现货
Worthington Biochemical——细胞分离酶专业供应商
Worthington Biochemical是一家始于1947年,位于美国新泽西州的生产高纯度酶类及相关生化药剂的世界*公司,公司致力于为客户提供的产品及服务。Worthington供应的生物药剂主要纯化于牛胰腺、植物、发酵产物及其他自然资源,公司专长的蛋白提取与纯化技术保证了其所提供酶类拥有与其提取来源物中同等的生物活性,从而保证了研究结果的可靠性和稳定性。目前Worthington提供的产品覆盖细胞分离消化酶、DNA酶、RNA酶等几乎所有生命科学研究领域。
公司主要产品:
一、无动物成分来源的新产品
1、来源于溶组织梭状芽孢杆菌发酵产物的胶原酶:该系列胶原酶*避免了动物来源成分,适用于无动物源成分胶原酶生物研究。主要产品包括:
CLSAFA:主要为胶原酶活性及其次的蛋白酶活性,性能与1/2型胶原酶类似。
CLSAFB:比CLSAFA有更高的胶原酶活性及酪蛋白酶活性
CLSAFC:有较低的胰蛋白酶活性,性能与4型胶原酶类似。
STZ1 & STZ2:为STEMxyme? AOF Collagenase/Neutral Protease (Dispase?) 混合物酶,适用于干细胞分离。
2、肌血球素:肌血球素是一个球形小分子,分子量约17KD,含有一个亚铁血红素分子,负责心肌和骨骼肌细胞哦氧气存储。
二、经典细胞分离试剂
1、细胞分离优化系统
Worthington Biochemical 公司提供一系列经典的组织/细胞分离用酶的*解决方案,包括多种酶类及相应的使用说明、参考文献与操作手册,致力于使客户利用酶促消化分离获得zui大产量及活度的细胞。Worthington Biochemical 提供的产品种类繁多,适应于不同类型组织细胞的分离,价格合理。主要产品包括胶原蛋白酶1/2/3/4,胰蛋白酶及其抑制剂,透明质酸酶,弹性蛋白酶,木瓜蛋白酶以及DNA酶,中性蛋白酶等。
2、肝细胞分离系统
通常分离肝细胞的酶都是初制的或部分纯化的酶类,里面除了胶原酶外还含有多种杂蛋白酶,不利于肝细胞的分离纯化,实验可重复率低。Worthington 推出的精制1/4型胶原酶成分明确,特别适宜于肝细胞的分离纯化,性能可靠,实验可重复率高,实验方案及参数固定,所分离的肝细胞纯度与活性均较高。
3、新生鼠心肌细胞分离系统
Worthington供应的新生鼠心肌细胞分离系统使用纯化的分离酶,使心肌细胞分离批次间差异大为减小,而且细胞产量、纯度及活性均得以提高。分离操作方便,方案可靠,实验可重复率高。
4、木瓜蛋白酶分离系统
Worthington供应的木瓜蛋白酶适宜于消化分离形态完整、单个分散的细胞,适用于细胞培养、流式细胞术等多个研究领域。 该产品还可适用于温和消化分离中枢神经系统组织(对胎鼠及新生鼠脑神经元分离尤为适宜),获得的细胞产量与活性优于胰蛋白酶。
三、特色产品:
1、胶原酶
?Type 1含有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶及胰蛋白酶活性。
?Type 2 含有更高水平的蛋白酶活性,特别是梭菌蛋白酶。
?Type 3 含有zui低水平的secondary proteases.
?Type 4在消化分离细胞时能zui大程度的保护细胞膜蛋白及上面的受体活性(胰蛋白酶消化时会损伤膜蛋白及其上受体)。
?Type 5 含有高度的胶原酶和酪蛋白酶活性。
?纯化胶原酶(CLSPA/CLSPANK):含有高纯度的胶原酶。
2、DNA酶
Worthington提供不同纯化水平的NDA酶以适应于不同的研究目的, 其中DPRF与DPRFS含有zui低水平的RNA酶及蛋白酶活性,
适宜用于在消化清除DNA的同时zui大程度保护RNA及目的蛋白/酶类的研究,如RT-PCR实验中RNA制备时基因组DNA清除、转录后清除DNA模板、northern杂交时清除非目的DNA、DNA缺口平移、DNA 绘图, 核RNA/蛋白的分离,质粒构建,RNA合成等。Worthington不仅提供牛胰腺来源的DNA酶,而且还提供微生物来源的重组DNA酶,*无动物来源成分,客户可根据研究需要进行选择。
3、RNA酶
Worthington提供的RNA酶 A/ B纯化自牛胰腺组织,并有多种纯化级别适宜于不同研究目的,如无DNA酶的RNA适宜于DNA的分离纯化,无蛋白酶RNA酶适宜于需保存蛋白质完整性与活性。
4、弹性蛋白酶
Worthington提供的弹性蛋白酶纯化自猪胰腺,被广泛应用于组织/细胞的消化分离,特别适宜于II型肺细胞的分离。
5、木瓜蛋白酶:
Worthington提供的木瓜蛋白酶纯化自番木瓜汁,相交于胰腺蛋白酶,木瓜蛋白酶能消化更多的蛋白亚基。在组织消化研究中,木瓜蛋白酶比其他蛋白酶有更高的效率及更低的损伤,适宜于神经细胞的分离。
6、胰蛋白酶
Worthington提供的胰蛋白酶纯化自牛胰腺组织,特别适宜于蛋白质测序研究(TRTPCK)和组织/细胞消化分离研究。该系列产品纯度高,保证了产品很好的溶解度、较小的批次差异及细胞毒性。 除了高纯度胰蛋白酶外,Worthington还提供无病毒及支原体的胰蛋白酶以适应不同的研究需要。
更多产品信息及操作手册请访问http://www.worthington-biochem.com/index/catalog.html
上海金畔生物科技有限公司
实验试剂一站式采购服务商
1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。
2:产品种类齐全,经营超过700多个品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。
3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。
4:富有竞争力的价格优势,绝大部分价格有优势。
5:多年积累良好的信誉,大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、国药、fisher等药企。
6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。
7:我们还是invitrogen,qiagen,worthingtonam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发,欢迎合作。
胶原酶,英文名collagenase,是组织消化中常用的酶。上海金畔生物提供Worthington的胶原酶。
Worthington Biochemical是一家始于1947年,位于美国新泽西州的生产高纯度酶类及相关生化药剂的世界*公司,公司致力于为客户提供zui的产品及服务。Worthington供应的生物药剂主要纯化于牛胰腺、植物、发酵产物及其他自然资源,公司专长的蛋白提取与纯化技术保证了其所提供酶类拥有与其提取来源物中同等的生物活性,从而保证了研究结果的可靠性和稳定性。目前Worthington提供的产品覆盖细胞分离消化酶、DNA酶、RNA酶等几乎所有生命科学研究领域
1 胶原酶的定义
胶原酶(collagenase)又名胶原蛋白水解酶,是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构,而不损伤其它蛋白质和组织。
2 产品信息
2.1 来源 Clostridium histolyticum(溶组织梭菌)
2.2 分类
商业化的胶原酶产品一般是梭状芽孢杆菌裂解液的粗提物,是巯基蛋白酶、梭菌蛋白酶、类胰蛋白酶以及氨基肽酶等蛋白水解酶混合物,能降解胶原蛋白和其他蛋白,及多糖等胞外大分子物质,适用于多种组织的消化应用。每种胶原酶的特定酶谱与获得用于研究的细胞的组织相关(或与细胞置于其中的用途相关),并且作为相关性的结果Worthington建立了1,2,3,4,5类型的粗制胶原酶体系,可以根据所要分离消化的特定组织选择合适的胶原酶类型。
Worthington对于上述类型的胶原酶,同样可以提供经0.22um滤膜过滤处理的,以预包装形式直接重建的,用于细胞分离和培养过程。另可提供无动物源性胶原酶(用*没有动物成分的培养基培养的,并且专门为必须防止潜在的动物源病体介入的生物工艺应用设计的)。
2.3 酶活定义
一个单位的胶原酶相当于在pH 7.5和37℃条件下,5小时内从胶原蛋白上释放1微摩尔L-亮氨酸所需的胶原酶的量。
2.4 使用方法
通常使用浓度:0.05 % ~0.5 % (w/v) 在Hank’s, Earle’s 或者其他平衡盐溶液中。
2.5 存储温度 2-8℃
3 产品指标&列表
3.1 粗制胶原酶
产品名称 | 胶原酶CDU/mgdw | 酪蛋白酶u/mgdw | 梭菌蛋白酶u/mgdw | 胰蛋白酶u/mgdw | 目录号 | |||
100mg | 1g | 5g | bulk | |||||
胶原酶1型 | ≥125 | ≥200 | ≤4.0 | ≤0.5 | LS004194 | LS004196 | LS004197 | LS004200 |
胶原酶2型 | ≥125 | ≥200 | ≥3.5 | ≥0.1 | LS004174 | LS004176 | LS004177 | LS004179 |
胶原酶3型 | ≥100 | ≥50 | ≤3.0 | ≤0.3 | LS004180 | LS004182 | LS004183 | LS004185 |
胶原酶4型 | ≥160 | ≥100 | ≤3.0 | ≤0.1 | LS004186 | LS004188 | LS004189 | LS004191 |
胶原酶5型 | ≥450 | ≥450 | ≤3.0 | ≤0.3 | LS005280 | LS005282 | LS005283 | LS005284 |
3.2 0.22um滤膜过滤处理
产品名称 | 胶原酶CDU/mgdw | 酪蛋白酶u/mgdw | 梭菌蛋白酶u/mgdw | 胰蛋白酶u/mgdw | 目录号 | ||
50mg | 5*50mg | 1g | |||||
胶原酶1型,过滤的 | ≥125 | ≥200 | ≤4.0 | ≤0.5 | LS004214 | LS004216 | LS004217 |
胶原酶2型,过滤的 | ≥125 | ≥200 | ≥3.5 | ≥0.1 | LS004202 | LS004204 | LS004205 |
胶原酶3型,过滤的 | ≥100 | ≥50 | ≤3.0 | ≤0.3 | LS004206 | LS004208 | – |
胶原酶4型,过滤的 | ≥160 | ≥100 | ≤3.0 | ≤0.1 | LS004210 | LS004212 | LS004209 |
胶原酶5型,过滤的 | ≥450 | ≥450 | ≤3.0 | ≤0.3 | LS005286 | LS005287 | LS005288 |
3.3 无动物源性
产品名称 | 胶原酶CDU/mgdw | 酪蛋白酶u/mgdw | 梭菌蛋白酶u/mgdw | 胰蛋白酶u/mgdw | 目录号 | |||
100mg | 1g | 5g | bulk | |||||
胶原酶A | ≥150 | ≥150 | ≤8.0 | ≥0.1 | LS004152 | LS004154 | LS004156 | LS004158 |
胶原酶B | ≥300 | ≥300 | ≤5.0 | ≤0.5 | LS004145 | LS004147 | LS004148 | LS004150 |
胶原酶C | ≥200 | ≥150 | ≤3.0 | ≤0.1 | LS004138 | LS004140 | LS004141 | LS004143 |
无动物源性,过滤的
产品名称 | 胶原酶CDU/mgdw | 酪蛋白酶u/mgdw | 梭菌蛋白酶u/mgdw | 胰蛋白酶u/mgdw | 目录号 | |
50mg | 5*50mg | |||||
胶原酶A,过滤的 | ≥150 | ≥150 | ≤8.0 | ≥0.1 | LS004118 | LS004119 |
胶原酶B,过滤的 | ≥300 | ≥300 | ≤5.0 | ≤0.5 | LS004124 | LS004125 |
胶原酶C,过滤的 | ≥200 | ≥150 | ≤3.0 | ≤0.1 | LS004130 | LS004131 |
胶原酶现货来啦~快来抢购吧!
胶原酶现货信息如下:
货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
LS004179 | Collagenase, Type 2 (CLS-2) | 1000g*1 | Worthington |
LS004176 | Collagenase, Type 2 (CLS-2)2型胶原酶 | 1 gm | worthington |
LS004196 | Collagenase, Type 1 (CLS-1), | 1g | worthington |
LS004179大量现货,胶原酶大量现货
Collagenase I 胶原酶I型说明书
产品详情
货号 |
规格 |
价格 |
LS004194-100mg |
100mg |
¥520.00 |
LS004196-1g |
1g |
¥3,000.00 |
LS004197-5g |
5g |
¥13,500.00 |
胶原酶(Collagenase)是一种蛋白酶,一种肽链内切酶,能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列(该序列高频率出现在胶原中,很少发现于其他蛋白中)并切割该序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽,但胶原酶是一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶,这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
本品来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有胶原酶(更准确的称法为梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白,多糖和脂质,使得本品非常适用于组织消化。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异,分为四种类型:胶原酶I型,II型,III型和IV型,在应用上有所偏向:
1)胶原酶I(Type I Collagenase):含有比较均匀的各种酶活力(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备;
2)胶原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备;
3)胶原酶III(Type III Collagenase):含有较低的蛋白酶活性,常用于乳腺细胞的制备;
4)胶原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰岛细胞的制备,或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为I型胶原酶,≥125 U/mg solid,可用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺等组织和细胞的解离。
酶活力单位定义
在37℃,pH7.5 的条件下,5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
运输及保存条件
室温运输。4℃避光保存,2年有效。储存液-20℃避光冻存。
使用方法
1. 胶原酶储存液的配制
向每管100 mg的胶原酶中加入100 µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡盐溶液,含Ca2+、Mg2+),轻轻旋涡震荡使其充分溶解,制备成1g/mL(即1000×)的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌,分装成小份量,然后于-20 °C避光冻存。
使用前于冰上解冻,避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为:0.5-2.5 mg/mL,用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL,需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。
2.组织的分离
1. 使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块;
2. 利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次;
3. 加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,使其浸没组织块,并加入胶原酶至需要工作浓度;
4. 于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。
5. 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得,收集备用。未解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育;
6. 利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次;
7. 细胞培养液重悬上述细胞,利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
8. 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3. 器官灌注
1. 向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶,另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率;
2. 按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液;
3. 将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛,从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来,未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育;
4. 利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次;
5. 细胞培养液重悬上述细胞,利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
6. 于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
注意事项
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。