1包被缓冲液,
(1)碳酸盐缓冲液(PH9.6 +0.2 0.05M) 《激素酶免疫测定技术》石老师编著
Na2CO31.59g
NaHCO3 2.93g
加蒸馏水至1000ml。
(2)tris缓冲液(0.05mol/L)50ml 0.1mol/L
(Tris)溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后,加水稀释至100ml 《酶免疫测定技术》杨立国等编著
各种pH值的Tris缓冲液的配制
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所需pH值(25℃)
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0.1mol/L HCl的体积
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7.1
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45.7
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7.2
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44.7
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7.3
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43.4
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7.4
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42.0
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7.5
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40.3
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7.6
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38.5
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7.7
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36.6
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7.8
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34.5
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7.9
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32.0
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8.0
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29.2
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8. 1
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26.2
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8.2
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22.9
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8.3
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19.9
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8.4
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17.2
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8.5
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14.7
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8.6
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12.4
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8.7
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10.3
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8.8
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8.5
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8.9
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7.0
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某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制:将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积(单位:ml)的0.1ml/L HCl混合,加水将体积调至100ml
0.1mol/L盐酸的配置:
买来的浓盐酸是 12 mol/L的,以配制1L 0.1mol/L的盐酸为例:
先用量筒量取8.3 mL的浓盐酸倒入容量瓶,然后将溶液加蒸馏水稀释至体积为1 L,此时的溶液就是0.1mol/L的盐酸。
0.1mol/Ltris的配置:0.1 mol/L溶液为12.114 g/L
则 配制600mlTris缓冲液的方法:
三羟甲基氨基甲烷: 3.6g
浓盐酸: 2.09ml
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3)0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)
磷酸二氢钾 0.2g
磷酸氢二钠 2.90g
氯化钠 8g
加去离子水定容到1000ml。
2洗涤缓冲液(pH7.4 0.15mol/L) 《激素酶免疫测定技术》石老师编著
0.05%Tween-20 0.5ml
加在PBS缓冲液1000ml中。
PBS缓冲液:
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H2O 2.9g
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
加蒸馏水至1000ml。
3测定缓冲液(Ph7.0 含0.87﹪NaCl 和0.1﹪BSA的0.1M磷酸缓冲液)用于标准孕酮,孕酮酶标物及奶样的稀释。 《激素酶免疫测定技术》石老师编著
Na2HPO4·12H2O 21.85g
NaH2PO4·2H2O 6.08g
NaCl 8.70g
BSA 1.00g
溶于1000mL蒸馏水中
4封闭缓冲液
牛血清白蛋白(BSA) 2% 2g
(或5%脱脂奶粉)加洗涤缓冲液100 ml。
0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)+2.0%BSA
2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸盐缓冲液溶解定量至100ml
5底物缓冲液(pH5.4)磷酸盐-柠檬酸缓冲液
0.2M Na2HPO4(无水28.4g/L,带12结晶水71.7g/L) 取25.7ml
0.1M 柠檬酸(无水19.2g/L,带1结晶水21.01g/L) 取24.3ml
加蒸馏水至100ml。
或
柠檬酸(C6H8O7·H2O) 0.47g
Na2HPO4·12H2O 2.00g
6(1) TMB(四甲基联苯胺)显色液(蓝色)
A液(3,3’,5,5’-四甲基联苯胺,TMB):称取TMB20mg溶于10ml无水乙醇中,*溶解后,加双蒸水至100ml。
B液(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液,pH5.0-5.4):称取Na2HPO4·12H2O14.34g,柠檬酸1.87g溶于180ml双蒸水,加0.75%过氧化氢尿素1.28ml,定容至200ml,调pH至5.0-5.4。
将A液和B液按1:l混合后即成TMB-过氧化氢尿素应用液
或
TMB(2mg/ml水) 0.05ml
底物缓冲液 0.95ml
30% H2O2 0.001ml
总体积1ml。
(2)OPD(邻苯二胺)显色液(黄棕色)(现配避光)
OPD(干粉) 0.004g
底物缓冲液 10ml
30% H2O2 0.015ml
总体积10ml。
(3)TMBS底物液(用于显色) 《激素酶免疫测定技术》石老师编著
10mg四甲基联苯胺硫酸盐(TMBS)的二甲基亚砜溶液,用底物缓冲液配成0.2mg/ml的TMBS底物液。用前加H2O2溶液30﹪左右。
7 终止液 2mol/LH2SO4 用于终止反应
在178.3ml水中,逐滴加入浓硫酸(18M,约98%)21.7ml,边加边摇。(浓H2SO4:蒸馏水=1:9)