细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒说明书
产品详情
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货号 |
规格 |
价格 |
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78EA10010-100T |
100T |
询价 |
产品描述
细胞周期（cell cycle）是指连续分裂的细胞从一次分裂完成开始到下次分裂为止的全过程，分为间期和分裂期（M期），细胞间期又分为休眠期（G0期）,DNA合成前期（G1期），DNA合成期（S期），DNA合成后期（G2期）整个周期可以表示为：G0-G1-S-G2-M。
本公司生产的细胞周期检测是通过经典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining，PI staining)方法进行周期分析的检测试剂盒。PI是一种DNA的荧光染料，可以结合双链DNA产生荧光，其荧光强度与DNA的含量成正比。经碘化丙啶染色后假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。利用流式细胞仪进行荧光分析从而对DNA进行定量，实现细胞周期检测。
产品组成
本试剂盒常用于贴壁细胞或者悬浮细胞的培养，如果检测对象为组织样品，必须消化成单个细胞后在进行染色检测，规格为50T，每T可检测的样本的细胞数量在10-100万之间。
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名称 |
规格 |
保存条件 |
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染色缓冲液 |
25 mL |
-20℃ |
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碘化丙啶染色液(20X) |
1.25 mL |
-20℃ |
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RNase A (50X) |
0.5 mL |
-20℃ |
运输与保存
冰袋运输，-20℃保存一年。
实验步骤
1. 细胞样品的准备：
a. 对于贴壁细胞：收集培养液上清，PBS润洗细胞一遍，胰酶消化细胞，加入前面收集的培养液终止消化，得到的细胞悬液1000g离心5min收集细胞沉淀备用。
b. 对于悬浮细胞：1000g左右离心3-5 min，沉淀细胞。
（如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力）
2.细胞固定：
（1）向步骤1收集得到的沉淀中加入300 μL预冷的PBS，轻柔吹打混匀，轻柔涡旋的过程中滴加700 μL预冷的无水乙醇，最后于4℃固定30 min或更长时间。通常固定2 h或以上更能保证染色效果，固定12-24h可能效果更佳。
（2）1000g左右离心5 min去除固定液，预冷PBS清洗一遍后再次离心，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
3. 细胞染色：
（1）参考下表配制碘化丙啶染色液（配置好的碘化丙啶染色液4℃保存，宜当日内使用）：
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名称 |
1个样品 |
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染色缓冲液 |
0.5 mL |
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碘化丙啶染色液(20X) |
25 μL |
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RNase A (50X) |
10 μL |
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总体积 |
0.535 mL |
（2）每个样品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液缓慢并充分重悬细胞沉淀， 37ºC避光孵育30min。随后可以4ºC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 h内完成流式检测。
4.流式检测分析：检测激发波长为488 nm处红色荧光，用流式细胞仪对DNA含量进行分析，确定细胞周期变化情况。
注意事项
（1）需自备PBS和70%乙醇，整个过程避光操作。
（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。
（3）本产品仅作科研用途！