产品简介

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一种GST标签蛋白纯化树脂，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。在结构上，该树脂是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5 mL是装填了GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的一种中压预装柱，规格5 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。

产品信息

产品性质

储存条件

2~8℃保存，有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

平衡/洗杂缓冲液：140 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na₂HPO₄，1.8 mM KH₂PO₄，pH 7.4

洗脱缓冲液：用平衡液配制10 mM 还原型谷胱甘肽（现配现用）

【注】平衡/洗杂缓冲液或洗脱缓冲液中可加入1-10 mM DTT。

使用说明

【注】样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。

1. 样品纯化（以Akta为例）

1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
   注意：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。

6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。

7）清洗与保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。

2. SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

3.   填料清洗

GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。

1）去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的6 M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

注意事项

1.请勿冷冻保存本产品。

2.所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

3.本产品仅作科研用途。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

附表 问题及解决方案

Ver.CN20230921

Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？

A：可能是目的蛋白聚集产生沉淀，建议在细胞裂解前溶液中加入 DTT，终浓度为 1-10 mM。

Q：为什么柱子反压过高？

A：可能是填料被堵塞，建议清洗树脂。

Q：为什么电泳或 Western Blot 检测中发现多条带？

A：可能是Mr 70000 蛋白与目的蛋白一起纯化下来。Mr 70000 蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK 的产物，建议可以在目的蛋白中加入 50 mM Tris-HCl，2 mM ATP，10 mM MgSO4，pH 7.4 在 37℃加热 10min 去除。

Q：为什么目的蛋白没有完全洗脱下来？

A：可能是非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱，建议在洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如 0.1%的 Triton X-100 或者 2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷 Tween-20。

Q：洗脱液怎么配？

A：按说明书用平衡缓冲液配制还原性谷胱甘肽（货号：60342）即可，配完后需要检测PH是否跟平衡缓冲液一致，部分谷胱甘肽溶解后ph会偏酸。

[1] Yang B, Wang Y, Tian M, et al. Fg12 ribonuclease secretion contributes to Fusarium graminearum virulence and induces plant cell death. J Integr Plant Biol. 2021;63(2):365-377. doi:10.1111/jipb.12997(IF:4.885)