双萤光素酶报告基因检测试剂盒|Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit

双萤光素酶报告基因检测试剂盒|Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)是一种分子量约为61 kDa的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,能够催化萤光素(luciferin)氧化成oxyluciferin,在氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物萤光。海肾萤光素酶(Renilla luciferase)是一种分子量约为36 kDa的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化腔肠素(coelenterazine)氧化成coelenteramide,在氧化的过程中会发出波长为480nm左右的生物萤光。两种生物萤光都可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示:

双萤光素酶报告基因检测试剂盒|Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 
1:萤火虫和海肾萤光素酶检测原理图

通常将目的基因的5´UTR或启动子克隆至Firefly Luciferase的上游,或3´UTR克隆至Firefly Luciferase的下游,通过检测萤火虫萤光素酶的量来检测启动子或调控元件的转录调控作用。Renilla Luciferase作为内参,来消除细胞数量转染效率等的差异。Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit首先以萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶报告基因的活性,之后在淬灭该萤光反应的同时,以腔肠素为底物检测海肾萤光素酶报告基因的活性。该试剂盒具有灵敏度的特点

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11402JP60100 T

11402JP801000 T

11402-A

细胞裂解液

20 mL

10×20 mL

11402-B

萤火虫萤光素酶缓冲液

10 mL

10×10 mL

11402-C

萤火虫萤光素酶底物(50 ×

200 μL

10×200 μL

11402-D

海肾萤光素酶缓冲液

10 mL

10×10 mL

11402-E

海肾萤光素酶底物(50 ×

200 μL

10×200 μL

 

运输和保存方式

干冰运输。 -20℃保存,有效期1

萤火虫萤光素酶反应工作液和海肾萤光素酶反应工作液现配现用,且不能反复冻融,建议分装-20℃-80℃分装保存。

 

实验步骤

I.前处理

 

1.细胞

1构建相应的载体。

2转染步骤请参照相关的说明书。

3)将细胞裂解液充分混匀,按如下方式加入细胞裂解液,充分裂解细胞。

a: 对于贴壁细胞,吸尽细胞培养液,按照下表比例加入细胞裂解液,轻轻旋转培养皿或者培养板使裂解液完全覆盖细胞;

b: 对于悬浮细胞,离心弃去上清,按照下表比例加入裂解液

细胞培养板

96孔板

48孔板

24孔板

12孔板

6孔板

裂解液加入量

100 μL

150 μL

200 μL

300 μL

500 μL

4)冰上孵育5 min,充分裂解细胞。
裂解产物可室温保存6 h4℃保存16 h80℃可长期存放。(裂解产物不能多次反复冻融)

5)(选作)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

 

2.叶片组织(以烟草叶片为例,仅供参考)
1)构建相应的载体。
2挑取转化有重组质粒的农杆菌单菌落,接种到2 mL LB液体培养基(添加相应抗生素)中,28℃ 220 rpm培养过夜。
3农杆菌培养至OD6001.01700× g离心5 min收集菌体后,用1/2MS液体培养基清洗菌体2次;用含有150 μmol/L乙酰丁香酮的1/2MS液体培养基将农杆菌的OD600调至1.0
4将待检测的农杆菌菌液进行混合,使每种菌液的OD6000.5
5选取生长期为1个月左右完全伸展的烟草叶片,将混合好的菌液用1 mL注射器(去掉针头)从烟草叶背面进行注射。为保证实验结果的一致性,需要将对照载体和待检测目标载体的菌液注射在同一叶片的不同部位上, 以保证相同的生长背景。
6)正常温室生长条件下,24-48 h即可取样观察。
73-4直径为6-8 mm的叶盘,放入2 mLEP(提前放入3-4小钢珠)中,液氮中冷冻使用破碎仪进行研磨破碎(45 Hz30 s)。破碎完全后在EP管中加入100 μL裂解液。
8)冰上孵育5 min左右,充分裂解叶片。
910000-16000 rpm离心1 min,取上清。

 

3.原生质体(仅供参考)
1)构建相应的载体。
2)制备原生质体参考文献Yoo SD, Cho YH, Sheen J (2007). Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis. Nat Protoc 2, 1565–1572)。

3)WI溶液配置:0.5 M甘露醇和20mm KCl 溶于4 mm MJP (pH 5.7),可在室温下保存。
W5溶液配置:154 mM NaCl, 125 mM CaCl2 和5 mM KCl溶于2 mm MJP (pH 5.7),可在室温下保存。

4)2 mL EP管中加入相应的载体(加入量需要摸索),加入100 μL原生质体悬浮液。轻摇混匀后,加入110 μL PEG-CaCl2溶液,轻弹混匀。在室温放置10-15 min
5加入440 μL W5溶液,上下颠倒以停止转化。
6200 × g 室温离心5 min,弃去上清,加入800 μL WI溶液重悬原生质体。
7)室温避光培养16-24 h

8)将原生质体加入2 mL离心管中,离心收集原生质体,加入100 μL左右的裂解液。
9)冰上孵育5 min左右,充分裂解原生质体。
10)(选做)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

 

II.萤光检测

1)取20 μL裂解液,加至培养板中。按照实验需要,可设置3-5孔重复。

2)配制萤火虫萤光素酶反应工作液和海肾萤光素酶反应液,即萤火虫萤光素酶底物(50 ×)和海肾萤光素酶底物(50 ×分别用对应的缓冲液稀释至1 ×工作液。并孵育至室温。

3)加入100 μL萤火虫萤光素酶反应液,震板混匀,检测萤火虫萤光素酶的活力,检测尽量在30 min内完成。

4)加入100 μL海肾萤光素酶反应液,震板混匀,检测海肾萤光素酶的活力,检测尽量在30 min内完成。

5)分析数据。

实验设计:根据不同实验目的,在每个培养板中都应设置对照组实验组和空白对照组。为了保证实验准确性,理论上每个实验组(包括对照组)都应当减去空白对照组的萤火虫和海肾萤光素酶的发光测量值。
 

a.空白对照 

背景F:未转染细胞+萤火虫萤光素酶检测试剂。

背景R:未转染细胞+萤火虫萤光素酶检测试剂+海肾萤光素酶检测试剂。

注:空白对照组的样品量必须与实验样品量相同,包含与实验样品相同的培养基/血清组合,并加上完全相同的检测试剂。

b.实验组:转染细胞经实验化合物处理(即实验组F和实验组R)

c.对照组:转染细胞不经处理,用以标准化结果(即对照组F和对照组R)

计算结果:

实验组比值=(实验组F-背景F/(实验组R-背景R)

对照组比值=(对照组F-背景F/(对照组R-背景R)

表达倍数=实验组比值/对照组比值。

双萤光素酶报告基因检测试剂盒|Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit

2:细胞样品萤火虫和海肾萤光素酶检测流程图

 

注意事项

1)检测过程中需自备耗材和设备包括如下:PBS100 μL移液器或者排枪不透光白色酶标Luminometer发光计多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器;

2)反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温20-25℃再使用;

3)检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同

4)检测设置:Luminescence350-700 nm,建议检测时间设为2-10 sec

5)检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板黑色酶标板也可用,但因黑色会吸收光信号,可能会降低信号;

6)单管萤光测定仪测定,每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致;

7E组分海肾萤光素酶底物易挥发,注意密封保存

8为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套。

9本产品仅作科研用途!

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit辉光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

11404JP60/80

100/1000 T

Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 辉光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒

11405JP60/80

100/1000 T

Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

11401JP60/76/80

100/500/1000 T

pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc萤光素酶报告基因质粒阳性对照

11556JP03

1 μg

Luciferase Reporter Plasmid negative control (萤光素酶报告基因质粒阴性对照)

11555JP03

1 μg

pGMLR-TK Luciferase Reporter PlasmidpGMLR-TK海肾萤光素酶报告基因质粒)

11557JP03

1 μg

pGMLR-CMV Luciferase Reporter PlasmidpGMLR-CMV海肾萤光素酶报告基因质粒)

11558JP03

1 μg

Hieff Trans Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂

40802JP03

1 mL

HB230504

Q:细胞裂解之后的裂解液能否在-80℃保存?

A可保存在-80℃,基本与蛋白的保存方法类似。裂解后的样本可在 -80 ℃保存半年-20 ℃保存一个月。

Q双荧光素酶报告基因检测试剂盒中的两个底物是否需要避光的?

A这两个底物操作过程中不需要严格避光。保存的时候避光保存,更重要的保存条件是低温,尤其是腔肠素,推荐80℃保存。

Q双荧光素酶报告基因载体共转染时比例该如何进行优化与调整?

A比例:根据具体实验情况进行调整。建议做预实验:如海参载体萤火虫载体比例分别用 1:101:201:501:100。萤火虫荧光素酶检测发光值大于海参荧光素酶发光值的比例比较好。

Q:海肾和萤火虫是在同一个孔里面检测吗?萤火虫的萤光不会影响海肾的萤光吗?能否分开检测呢?

A:同一个孔里检测。不会相互影响,我们的海肾荧光素酶底物中有淬灭萤火虫荧光值的物质。可以分开检测,但是在一个孔里检测会更加准确。

Q:使用的是promega的仪器进行检测,发现海肾的本底值偏高很多,是为什么呢?

A:我们的产品与promega的仪器不适配,会导致本底值偏高。使用酶标仪检测不会出现这种情况,建议使用酶标仪检测。

Q:W5和WI指的是什么呢?

A:

WI solution Prepare 4 mM MJP (pH 5.7) containing 0.5 M mannitol and 20 mM KCl. The prepared WI solution can be stored at room temperature (22-25 °C).
W5 solution Prepare 2 mM MJP (pH 5.7) containing 154 mM NaCl, 125 mM CaCl2 and 5 mM KCl. The prepared W5 solution can be stored at room temperature.

 

Q:检测萤火虫荧光素酶,酶标仪使用什么样的板子呢?

A:白色不透明的酶标板,图片见说明书

 

Q:裂解液不够用了,怎么办呢?

A:10ml PBS里加入0.3ml Triton

[1] Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucine-tRNA-synthase-2-expressing B cells contribute to colorectal cancer immunoevasion. Immunity. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Chen Y, Lu Z, Qi C, et al. N6-methyladenosine-modified TRAF1 promotes sunitinib resistance by regulating apoptosis and angiogenesis in a METTL14-dependent manner in renal cell carcinoma. Mol Cancer. 2022;21(1):111. Published 2022 May 10. doi:10.1186/s12943-022-01549-1(IF:27.401)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Macrophage IRX3 promotes diet-induced obesity and metabolic inflammation. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y(IF:25.606)
[4] Sun B, Yang X, Hou F, et al. Regulation of host and virus genes by neuronal miR-138 favours herpes simplex virus 1 latency. Nat Microbiol. 2021;6(5):682-696. doi:10.1038/s41564-020-00860-1(IF:17.745)
[5] Tian WH, Ye JY, Cui MQ, et al. A transcription factor STOP1-centered pathway coordinates ammonium and phosphate acquisition in Arabidopsis. Mol Plant. 2021;14(9):1554-1568. doi:10.1016/j.molp.2021.06.024(IF:13.164)
[6] Qiao J, Jiang H, Lin Y, et al. A novel miR167a-OsARF6-OsAUX3 module regulates grain length and weight in rice. Mol Plant. 2021;14(10):1683-1698. doi:10.1016/j.molp.2021.06.023(IF:13.164)
[7] Wang Y, Wang Z, Shao C, et al. Melatonin may suppress lung adenocarcinoma progression via regulation of the circular noncoding RNA hsa_circ_0017109/miR-135b-3p/TOX3 axis [published online ahead of print, 2022 Jun 4]. J Pineal Res. 2022;e12813. doi:10.1111/jpi.12813(IF:13.007)
[8] Chen H, Moreno-Moral A, Pesce F, et al. WWP2 regulates pathological cardiac fibrosis by modulating SMAD2 signaling [published correction appears in Nat Commun. 2019 Sep 9;10(1):4085]. Nat Commun. 2019;10(1):3616. Published 2019 Aug 9. doi:10.1038/s41467-019-11551-9(IF:11.878)
[9] Xiang X, Fu Y, Zhao K, et al. Cellular senescence in hepatocellular carcinoma induced by a long non-coding RNA-encoded peptide PINT87aa by blocking FOXM1-mediated PHB2. Theranostics. 2021;11(10):4929-4944. Published 2021 Mar 4. doi:10.7150/thno.55672(IF:11.556)
[10] Xu Y, Jiang Y, Wang Y, et al. LINC00473-modified bone marrow mesenchymal stem cells incorporated thermosensitive PLGA hydrogel transplantation for steroid-induced osteonecrosis of femoral head: A detailed mechanistic study and validity evaluation. Bioeng Transl Med. 2021;7(2):e10275. Published 2021 Dec 8. doi:10.1002/btm2.10275(IF:10.711)
[11] Huang X, He M, Huang S, et al. Circular RNA circERBB2 promotes gallbladder cancer progression by regulating PA2G4-dependent rDNA transcription [published correction appears in Mol Cancer. 2022 Jun 2;21(1):122]. Mol Cancer. 2019;18(1):166. Published 2019 Nov 21. doi:10.1186/s12943-019-1098-8(IF:10.679)
[12] Ma L, An R, Jiang L, et al. Effects of ZmHIPP on lead tolerance in maize seedlings: Novel ideas for soil bioremediation. J Hazard Mater. 2022;430:128457. doi:10.1016/j.jhazmat.2022.128457(IF:10.588)
[13] Xu C, Fan L, Lin Y, et al. Fusobacterium nucleatum promotes colorectal cancer metastasis through miR-1322/CCL20 axis and M2 polarization. Gut Microbes. 2021;13(1):1980347. doi:10.1080/19490976.2021.1980347(IF:10.245)
[14] Xiang Y, Bian X, Wei T, et al. ZmMPK5 phosphorylates ZmNAC49 to enhance oxidative stress tolerance in maize. New Phytol. 2021;232(6):2400-2417. doi:10.1111/nph.17761(IF:10.152)
[15] Gao Y, Li Z, Yang C, et al. Pseudomonas syringae activates ZAT18 to inhibit salicylic acid accumulation by repressing EDS1 transcription for bacterial infection. New Phytol. 2022;233(3):1274-1288. doi:10.1111/nph.17870(IF:10.152)
[16] Zhao H, Lu J, Yan T, et al. Opioid receptor signaling suppresses leukemia through both catalytic and non-catalytic functions of TET2. Cell Rep. 2022;38(4):110253. doi:10.1016/j.celrep.2021.110253(IF:9.423)
[17] He R, Shi J, Xu D, et al. SULF2 enhances GDF15-SMAD axis to facilitate the initiation and progression of pancreatic cancer. Cancer Lett. 2022;538:215693. doi:10.1016/j.canlet.2022.215693(IF:8.679)
[18] Wu Q, Li L, Miao C, et al. Osteopontin promotes hepatocellular carcinoma progression through inducing JAK2/STAT3/NOX1-mediated ROS production. Cell Death Dis. 2022;13(4):341. Published 2022 Apr 13. doi:10.1038/s41419-022-04806-9(IF:8.469)
[19] Wu Y, Wang L, Ansah EO, et al. The sucrose transport regulator OsDOF11 mediates cytokinin degradation during rice development. Plant Physiol. 2022;189(2):1083-1094. doi:10.1093/plphys/kiac104(IF:8.340)
[20] Ruan J, Chen H, Zhu T, et al. Brassinosteroids repress the seed maturation program during the seed-to-seedling transition. Plant Physiol. 2021;186(1):534-548. doi:10.1093/plphys/kiab089(IF:8.340)
[21] Hou Y, Lu H, Li J, et al. A photoaffinity labeling strategy identified EF1A1 as a binding protein of cyclic dinucleotide 2'3'-cGAMP. Cell Chem Biol. 2022;29(1):133-144.e20. doi:10.1016/j.chembiol.2021.08.006(IF:8.116)
[22] Cao L, Zhang Y, Mi J, et al. α-Hederin inhibits the platelet activating factor-induced metastasis of HCC cells through disruption of PAF/PTAFR axis cascaded STAT3/MMP-2 expression. Pharmacol Res. 2022;178:106180. doi:10.1016/j.phrs.2022.106180(IF:7.658)
[23] Xie S, Wei H, Peng A, et al. Ikzf2 Regulates the Development of ICOS+ Th Cells to Mediate Immune Response in the Spleen of S. japonicum-Infected C57BL/6 Mice. Front Immunol. 2021;12:687919. Published 2021 Aug 12. doi:10.3389/fimmu.2021.687919(IF:7.561)
[24] Song Y, Guo Y, Li X, et al. RBM39 Alters Phosphorylation of c-Jun and Binds to Viral RNA to Promote PRRSV Proliferation. Front Immunol. 2021;12:664417. Published 2021 May 17. doi:10.3389/fimmu.2021.664417(IF:7.561)
[25] Zeng J, Li G, Xia Y, et al. miR-204/COX5A axis contributes to invasion and chemotherapy resistance in estrogen receptor-positive breast cancers. Cancer Lett. 2020;492:185-196. doi:10.1016/j.canlet.2020.07.027(IF:7.360)
[26] Li D, Zhou J, Zheng C, et al. OsTGAL1 suppresses the resistance of rice to bacterial blight disease by regulating the expression of salicylic acid glucosyltransferase OsSGT1. Plant Cell Environ. 2022;45(5):1584-1602. doi:10.1111/pce.14288(IF:7.228)
[27] Sun J, Shi Y, Shi H, et al. Intracellular Low Iron Exerts Anti-BK Polyomavirus Effect by Inhibiting the Protein Synthesis of Exogenous Genes. Microbiol Spectr. 2021;9(3):e0109421. doi:10.1128/Spectrum.01094-21(IF:7.171)
[28] Sun Q, Xu Y, Yuan F, et al. Rho family GTPase 1 (RND1), a novel regulator of p53, enhances ferroptosis in glioblastoma. Cell Biosci. 2022;12(1):53. Published 2022 May 3. doi:10.1186/s13578-022-00791-w(IF:7.133)
[29] Yuan F, Sun Q, Zhang S, et al. The dual role of p62 in ferroptosis of glioblastoma according to p53 status. Cell Biosci. 2022;12(1):20. Published 2022 Feb 25. doi:10.1186/s13578-022-00764-z(IF:7.133)
[30] Liu J, Gao L, Zhan N, et al. Hypoxia induced ferritin light chain (FTL) promoted epithelia mesenchymal transition and chemoresistance of glioma. J Exp Clin Cancer Res. 2020;39(1):137. Published 2020 Jul 16. doi:10.1186/s13046-020-01641-8(IF:7.068)
[31] Sun C, Li D, Gao Z, et al. OsRLR4 binds to the OsAUX1 promoter to negatively regulate primary root development in rice [published correction appears in J Integr Plant Biol. 2022 May;64(5):1131]. J Integr Plant Biol. 2022;64(1):118-134. doi:10.1111/jipb.13183(IF:7.061)
[32] Xiang Y, Sun X, Bian X, et al. The transcription factor ZmNAC49 reduces stomatal density and improves drought tolerance in maize. J Exp Bot. 2021;72(4):1399-1410. doi:10.1093/jxb/eraa507(IF:6.992)
[33] Zhou H, Li X, Wu RX, et al. Periodontitis-compromised dental pulp stem cells secrete extracellular vesicles carrying miRNA-378a promote local angiogenesis by targeting Sufu to activate the Hedgehog/Gli1 signalling. Cell Prolif. 2021;54(5):e13026. doi:10.1111/cpr.13026(IF:6.831)
[34] Tao J, Li S, Wang Q, et al. Construction of a high-density genetic map based on specific-locus amplified fragment sequencing and identification of loci controlling anthocyanin pigmentation in Yunnan red radish [published online ahead of print, 2022 Jan 19]. Hortic Res. 2022;9:uhab031. doi:10.1093/hr/uhab031(IF:6.793)
[35] Ma X, Yuan Y, Li C, et al. Brassinosteroids suppress ethylene-induced fruitlet abscission through LcBZR1/2-mediated transcriptional repression of LcACS1/4 and LcACO2/3 in litchi. Hortic Res. 2021;8(1):105. Published 2021 May 1. doi:10.1038/s41438-021-00540-z(IF:6.793)
[36] Zhang R, Chang J, Li J, et al. Disruption of the bHLH transcription factor Abnormal Tapetum 1 causes male sterility in watermelon. Hortic Res. 2021;8(1):258. Published 2021 Dec 1. doi:10.1038/s41438-021-00695-9(IF:6.793)
[37] Sun Y, Wang L, Xu X, et al. FOXO4 Inhibits the Migration and Metastasis of Colorectal Cancer by Regulating the APC2/β-Catenin Axis. Front Cell Dev Biol. 2021;9:659731. Published 2021 Sep 23. doi:10.3389/fcell.2021.659731(IF:6.684)
[38] Zhang Y, Hu R, Xi B, Nie D, Xu H, Liu A. Mechanisms of Senescence-Related NKG2D Ligands Release and Immune Escape Induced by Chemotherapy in Neuroblastoma Cells. Front Cell Dev Biol. 2022;10:829404. Published 2022 Mar 2. doi:10.3389/fcell.2022.829404(IF:6.684)
[39] Zhu L, Qi W, Yang G, et al. Toxoplasma gondii Rhoptry Protein 7 (ROP7) Interacts with NLRP3 and Promotes Inflammasome Hyperactivation in THP-1-Derived Macrophages. Cells. 2022;11(10):1630. Published 2022 May 12. doi:10.3390/cells11101630(IF:6.600)
[40] Zeng H, Li L, Gao Y, Wu G, Hou Z, Liu S. Long noncoding RNA UCA1 regulates HCV replication and antiviral response via miR-145-5p/SOCS7/IFN pathway. Int J Biol Sci. 2021;17(11):2826-2840. Published 2021 Jul 5. doi:10.7150/ijbs.59227(IF:6.582)
[41] Zhao P, Zhu Y, Sun L, et al. Circulating Exosomal miR-1-3p from Rats with Myocardial Infarction Plays a Protective Effect on Contrast-Induced Nephropathy via Targeting ATG13 and activating the AKT Signaling Pathway. Int J Biol Sci. 2021;17(4):972-985. Published 2021 Mar 2. doi:10.7150/ijbs.55887(IF:6.582)
[42] Cui W, Wang S, Han K, et al. Ferredoxin 1 is downregulated by the accumulation of abscisic acid in an ABI5-dependent manner to facilitate rice stripe virus infection in Nicotiana benthamiana and rice. Plant J. 2021;107(4):1183-1197. doi:10.1111/tpj.15377(IF:6.486)
[43] Wang Y, He S, Long Y, et al. Genetic variations in ZmSAUR15 contribute to the formation of immature embryo-derived embryonic calluses in maize. Plant J. 2022;109(4):980-991. doi:10.1111/tpj.15609(IF:6.486)
[44] Tang C, Wang X, Ji C, et al. The Role of miR-640: A Potential Suppressor in Breast Cancer via Wnt7b/β-catenin Signaling Pathway. Front Oncol. 2021;11:645682. Published 2021 Apr 12. doi:10.3389/fonc.2021.645682(IF:6.244)
[45] Meng X, Deng Y, He S, Niu L, Zhu H. m6A-Mediated Upregulation of LINC00857 Promotes Pancreatic Cancer Tumorigenesis by Regulating the miR-150-5p/E2F3 Axis. Front Oncol. 2021;11:629947. Published 2021 Feb 18. doi:10.3389/fonc.2021.629947(IF:6.244)
[46] Yu Q, Zhang W, Zhou X, Shen W, Xing C, Yang X. Regulation of lnc-TLCD2-1 on Radiation Sensitivity of Colorectal Cancer and Comprehensive Analysis of Its Mechanism. Front Oncol. 2021;11:714159. Published 2021 Jul 15. doi:10.3389/fonc.2021.714159(IF:6.244)
[47] Zhang XY, Chen ZC, Li N, et al. Exosomal transfer of activated neutrophil-derived lncRNA CRNDE promotes proliferation and migration of airway smooth muscle cells in asthma. Hum Mol Genet. 2022;31(4):638-650. doi:10.1093/hmg/ddab283(IF:6.150)
[48] Yang HY, Liu M, Sheng Y, et al. All-trans retinoic acid impairs glucose-stimulated insulin secretion by activating the RXR/SREBP-1c/UCP2 pathway. Acta Pharmacol Sin. 2022;43(6):1441-1452. doi:10.1038/s41401-021-00740-2(IF:6.150)
[49] Jiang T, Peng D, Shi W, et al. IL-6/STAT3 Signaling Promotes Cardiac Dysfunction by Upregulating FUNDC1-Dependent Mitochondria-Associated Endoplasmic Reticulum Membranes Formation in Sepsis Mice. Front Cardiovasc Med. 2022;8:790612. Published 2022 Jan 18. doi:10.3389/fcvm.2021.790612(IF:6.050)
[50] Ji H, Zhang K, Pan G, et al. Deoxyelephantopin Induces Apoptosis and Enhances Chemosensitivity of Colon Cancer via miR-205/Bcl2 Axis. Int J Mol Sci. 2022;23(9):5051. Published 2022 May 2. doi:10.3390/ijms23095051(IF:5.924)
[51] Li H, Luo Y, Ma B, et al. Hierarchical Action of Mulberry miR156 in the Vegetative Phase Transition. Int J Mol Sci. 2021;22(11):5550. Published 2021 May 24. doi:10.3390/ijms22115550(IF:5.924)
[52] Li H, Ma B, Luo Y, et al. The Mulberry SPL Gene Family and the Response of MnSPL7 to Silkworm Herbivory through Activating the Transcription of MnTT2L2 in the Catechin Biosynthesis Pathway. Int J Mol Sci. 2022;23(3):1141. Published 2022 Jan 20. doi:10.3390/ijms23031141(IF:5.924)
[53] Xia S, Wang Z, Chen L, et al. Dihydroartemisinin regulates lipid droplet metabolism in hepatic stellate cells by inhibiting lncRNA-H19-induced AMPK signal. Biochem Pharmacol. 2021;192:114730. doi:10.1016/j.bcp.2021.114730(IF:5.858)
[54] Feng Y, He PY, Kong WD, et al. Apoptosis-promoting properties of miR-3074-5p in MC3T3-E1 cells under iron overload conditions. Cell Mol Biol Lett. 2021;26(1):37. Published 2021 Aug 16. doi:10.1186/s11658-021-00281-w(IF:5.787)
[55] Li D, Wang Z, Sun S, et al. VvMYB15 and VvWRKY40 Positively Co-regulated Anthocyanin Biosynthesis in Grape Berries in Response to Root Restriction [published correction appears in Front Plant Sci. 2022 Feb 22;13:850160]. Front Plant Sci. 2021;12:789002. Published 2021 Dec 9. doi:10.3389/fpls.2021.789002(IF:5.754)
[56] Ding J, Karim H, Li Y, et al. Re-examination of the APETALA2/Ethylene-Responsive Factor Gene Family in Barley (Hordeum vulgare L.) Indicates a Role in the Regulation of Starch Synthesis. Front Plant Sci. 2021;12:791584. Published 2021 Dec 1. doi:10.3389/fpls.2021.791584(IF:5.754)
[57] Geng M, Hua Y, Liu Y, et al. Evolutionary history and functional characterization of Lj-TICAM-a and Lj-TICAM-b formed via lineage-specific tandem duplication in lamprey (Lampetra japonica). Genomics. 2021;113(4):2756-2768. doi:10.1016/j.ygeno.2021.06.022(IF:5.736)
[58] Hou F, Sun Z, Deng Y, et al. Interactome and Ubiquitinome Analyses Identify Functional Targets of Herpes Simplex Virus 1 Infected Cell Protein 0. Front Microbiol. 2022;13:856471. Published 2022 Apr 18. doi:10.3389/fmicb.2022.856471(IF:5.640)
[59] Zhou L, Ao L, Yan Y, et al. Levo-corydalmine Attenuates Vincristine-Induced Neuropathic Pain in Mice by Upregulating the Nrf2/HO-1/CO Pathway to Inhibit Connexin 43 Expression. Neurotherapeutics. 2020;17(1):340-355. doi:10.1007/s13311-019-00784-7(IF:5.552)
[60] Lei B, Liu J, Yao Z, et al. NF-κB-Induced Upregulation of miR-146a-5p Promoted Hippocampal Neuronal Oxidative Stress and Pyroptosis via TIGAR in a Model of Alzheimer's Disease. Front Cell Neurosci. 2021;15:653881. Published 2021 Apr 16. doi:10.3389/fncel.2021.653881(IF:5.505)
[61] Hsueh CY, Huang Q, Gong H, et al. A positive feed-forward loop between Fusobacteriumnucleatum and ethanol metabolism reprogramming drives laryngeal cancer progression and metastasis. iScience. 2022;25(2):103829. Published 2022 Jan 30. doi:10.1016/j.isci.2022.103829(IF:5.458)
[62] Zhang S, Xing M, Chen G, Tong L, Zhang H, Du D. Up-regulation of miR-335 and miR-674-3p in the rostral ventrolateral medulla contributes to stress-induced hypertension. J Neurochem. 2022;161(5):387-404. doi:10.1111/jnc.15589(IF:5.372)
[63] Fan Z, Yang G, Zhang W, et al. Hypoxia blocks ferroptosis of hepatocellular carcinoma via suppression of METTL14 triggered YTHDF2-dependent silencing of SLC7A11. J Cell Mol Med. 2021;25(21):10197-10212. doi:10.1111/jcmm.16957(IF:5.310)
[64] Wang W, Li T, Chen Q, Deng B, Deng L, Zeng K. Transcription Factor CsWRKY65 Participates in the Establishment of Disease Resistance of Citrus Fruits to Penicillium digitatum. J Agric Food Chem. 2021;69(20):5671-5682. doi:10.1021/acs.jafc.1c01411(IF:5.279)
[65] Jin CL, Ye M, Song ZW, et al. Lysine Interacts with Frizzled7 to Activate β-Catenin in Satellite Cell-Participated Skeletal Muscle Growth. J Agric Food Chem. 2022;70(12):3745-3756. doi:10.1021/acs.jafc.2c01027(IF:5.279)
[66] Xia H, Shen Y, Hu R, et al. Methylation of MYBA1 is Associated with the Coloration in "Manicure Finger" Grape Skin. J Agric Food Chem. 2021;69(51):15649-15659. doi:10.1021/acs.jafc.1c04550(IF:5.279)
[67] Huang Y, Zheng W, Ji C, et al. Circular RNA circRPPH1 promotes breast cancer progression via circRPPH1-miR-512-5p-STAT1 axis. Cell Death Discov. 2021;7(1):376. Published 2021 Dec 6. doi:10.1038/s41420-021-00771-y(IF:5.241)
[68] Wang X, Song H, Fang L, Wu T. EIF4A3-mediated circPRKCI expression promotes triple-negative breast cancer progression by regulating WBP2 and PI3K/AKT signaling pathway. Cell Death Discov. 2022;8(1):92. Published 2022 Mar 2. doi:10.1038/s41420-022-00892-y(IF:5.241)
[69] Chen H, Luo J, Chen S, et al. Non-drug efflux function of ABCC5 promotes enzalutamide resistance in castration-resistant prostate cancer via upregulation of P65/AR-V7. Cell Death Discov. 2022;8(1):241. Published 2022 May 3. doi:10.1038/s41420-022-00951-4(IF:5.241)
[70] Du XF, Cui HT, Pan HH, et al. Role of the miR-133a-5p/FBXO6 axis in the regulation of intervertebral disc degeneration. J Orthop Translat. 2021;29:123-133. Published 2021 Jun 19. doi:10.1016/j.jot.2021.05.004(IF:5.191)
[71] Zhou Y, Zheng R, Liu S, et al. Host E3 ligase HUWE1 attenuates the proapoptotic activity of the MERS-CoV accessory protein ORF3 by promoting its ubiquitin-dependent degradation. J Biol Chem. 2022;298(2):101584. doi:10.1016/j.jbc.2022.101584(IF:5.157)
[72] Chen S, Deng Y, Chen H, et al. Neuronal miR-138 Represses HSV-2 Lytic Infection by Regulating Viral and Host Genes with Mechanistic Differences from HSV-1. J Virol. 2022;96(9):e0034922. doi:10.1128/jvi.00349-22(IF:5.103)
[73] Wang D, Li Y, Liu Y, et al. NPM1 promotes cell proliferation by targeting PRDX6 in colorectal cancer. Int J Biochem Cell Biol. 2022;147:106233. doi:10.1016/j.biocel.2022.106233(IF:5.085)
[74] Deng Z, Zheng L, Xie X, Wei H, Peng J. GPA peptide enhances Nur77 expression in intestinal epithelial cells to exert a protective effect against DSS-induced colitis. FASEB J. 2020;34(11):15364-15378. doi:10.1096/fj.202000391RR(IF:4.966)
[75] Huang X, Sun L, Wen S, et al. RNA sequencing of plasma exosomes revealed novel functional long noncoding RNAs in hepatocellular carcinoma. Cancer Sci. 2020;111(9):3338-3349. doi:10.1111/cas.14516(IF:4.966)
[76] Wang X, Yao Z, Fang L. miR-22-3p/PGC1β Suppresses Breast Cancer Cell Tumorigenesis via PPARγ. PPAR Res. 2021;2021:6661828. Published 2021 Mar 12. doi:10.1155/2021/6661828(IF:4.964)
[77] Yu MC, Ding GY, Ma P, et al. CircRNA UBAP2 serves as a sponge of miR-1294 to increase tumorigenesis in hepatocellular carcinoma through regulating c-Myc expression. Carcinogenesis. 2021;42(10):1293-1303. doi:10.1093/carcin/bgab068(IF:4.944)
[78] Wang Q, Ren D, Bi Y, et al. Association and functional study between ADIPOQ and metabolic syndrome in elderly Chinese Han population. Aging (Albany NY). 2020;12(24):25819-25827. doi:10.18632/aging.104203(IF:4.831)
[79] Yuan J, Li X, Zhang G, et al. USP39 mediates p21-dependent proliferation and neoplasia of colon cancer cells by regulating the p53/p21/CDC2/cyclin B1 axis. Mol Carcinog. 2021;60(4):265-278. doi:10.1002/mc.23290(IF:4.784)
[80] Tang Y, Wang L, Qu Z, et al. BSISTER transcription factors directly binds to the promoter of IAA19 and IAA29 genes to up-regulate gene expression and promote the root development. Plant Sci. 2022;321:111324. doi:10.1016/j.plantsci.2022.111324(IF:4.729)
[81] Li D, Liu B, Wang Z, et al. Sugar accumulation may be regulated by a transcriptional cascade of ABA-VvGRIP55-VvMYB15-VvSWEET15 in grape berries under root restriction. Plant Sci. 2022;322:111288. doi:10.1016/j.plantsci.2022.111288(IF:4.729)
[82] Gan Z, Yuan X, Shan N, et al. AcWRKY40 mediates ethylene biosynthesis during postharvest ripening in kiwifruit. Plant Sci. 2021;309:110948. doi:10.1016/j.plantsci.2021.110948(IF:4.729)
[83] Bai HL, Kang CM, Sun ZQ, et al. TTDA inhibited apoptosis by regulating the p53-Bax/Bcl2 axis in glioma. Exp Neurol. 2020;331:113380. doi:10.1016/j.expneurol.2020.113380(IF:4.691)
[84] Zhang H, Hu Y, Gu B, Cui X, Zhang J. VaMYB44 transcription factor from Chinese wild Vitis amurensis negatively regulates cold tolerance in transgenic Arabidopsis thaliana and V. vinifera. Plant Cell Rep. 2022;41(8):1673-1691. doi:10.1007/s00299-022-02883-w(IF:4.570)
[85] Sun W, Zu S, Shao G, Wang W, Gong F. Long non-coding DANCR targets miR-185-5p to upregulate LIM and SH3 protein 1 promoting prostate cancer via the FAK/PI3K/AKT/GSK3β/snail pathway. J Gene Med. 2021;23(7):e3344. doi:10.1002/jgm.3344(IF:4.565)
[86] Luo SY, Wang JQ, Liu C, et al. Hif-1α/Hsf1/Hsp70 signaling pathway regulates redox homeostasis and apoptosis in large yellow croaker ( Larimichthys crocea) under environmental hypoxia. Zool Res. 2021;42(6):746-760. doi:10.24272/j.issn.2095-8137.2021.224(IF:4.560)
[87] Liu J, Zhu M, Tang Q. Human umbilical cord mesenchymal stem cells-derived exosomal microRNA-181a retards nasopharyngeal carcinoma development by mediating KDM5C. J Cancer Res Clin Oncol. 2021;147(10):2867-2877. doi:10.1007/s00432-021-03684-6(IF:4.553)
[88] Huang Y, Wan S, Yang M. Circ_0067680 expedites the osteogenic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells through miR-4429/CTNNB1/Wnt/β-catenin pathway. Biol Direct. 2021;16(1):16. Published 2021 Oct 14. doi:10.1186/s13062-021-00302-w(IF:4.540)
[89] Wang B, Cai Y, Li X, Kong Y, Fu H, Zhou J. ETV4 mediated lncRNA C2CD4D-AS1 overexpression contributes to the malignant phenotype of lung adenocarcinoma cells via miR-3681-3p/NEK2 axis. Cell Cycle. 2021;20(24):2607-2618. doi:10.1080/15384101.2021.2005273(IF:4.534)
[90] Geng S, Tu S, Fu W, Wang J, Bai Z. LncRNA PITPNA-AS1 stimulates cell proliferation and suppresses cell apoptosis in glioblastoma via targeting miR-223-3p/EGFR axis and activating PI3K/AKT signaling pathway. Cell Cycle. 2021;20(19):1988-1998. doi:10.1080/15384101.2021.1958503(IF:4.534)
[91] Ma X, Li C, Yuan Y, Zhao M, Li J. Xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase genes LcXTH4/7/19 are involved in fruitlet abscission and are activated by LcEIL2/3 in litchi. Physiol Plant. 2021;173(3):1136-1146. doi:10.1111/ppl.13509(IF:4.500)
[92] Zhang L, Ouyang P, He G, et al. Exosomes from microRNA-126 overexpressing mesenchymal stem cells promote angiogenesis by targeting the PIK3R2-mediated PI3K/Akt signalling pathway. J Cell Mol Med. 2021;25(4):2148-2162. doi:10.1111/jcmm.16192(IF:4.486)
[93] Chen N, Ma B, Guo S, Yin B, Zhang J, Deng G. microRNA-196b alleviates lipopolysaccharide-induced inflammatory injury by targeting NRAS. Mol Immunol. 2022;147:10-20. doi:10.1016/j.molimm.2022.03.122(IF:4.407)
[94] Zhang Y, Wang X, Huang X, et al. Transcriptome sequencing profiling identifies miRNA-331-3p as an osteoblast-specific miRNA in infected bone nonunion. Bone. 2021;143:115619. doi:10.1016/j.bone.2020.115619(IF:4.398)
[95] Zhou YM, Yao YL, Liu W, Shen XM, Shi LJ, Wu L. MicroRNA-134 inhibits tumor stem cell migration and invasion in oral squamous cell carcinomas via downregulation of PI3K-Akt signaling pathway by inhibiting LAMC2 expression. Cancer Biomark. 2020;29(1):51-67. doi:10.3233/CBM-191362(IF:4.388)
[96] Ma Y, Luo Q, Ou Y, et al. New insights into the proteins interacting with the promoters of silkworm fibroin genes. Sci Rep. 2021;11(1):15880. Published 2021 Aug 5. doi:10.1038/s41598-021-95400-0(IF:4.380)
[97] Zhu M, Li X, Sun R, et al. The C/EBPβ-Dependent Induction of TFDP2 Facilitates Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Proliferation. Virol Sin. 2021;36(6):1341-1351. doi:10.1007/s12250-021-00403-w(IF:4.327)
[98] Yin Q, Wang J, Fu Q, Gu S, Rui Y. CircRUNX2 through has-miR-203 regulates RUNX2 to prevent osteoporosis. J Cell Mol Med. 2018;22(12):6112-6121. doi:10.1111/jcmm.13888(IF:4.302)
[99] Gao L, Liu J, Xu P, et al. AKT Inhibitor SC66 Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis in Human Glioblastoma Through Down-Regulating AKT/β-Catenin Pathway. Front Pharmacol. 2020;11:1102. Published 2020 Jul 31. doi:10.3389/fphar.2020.01102(IF:4.225)
[100] Shan N, Zhang Y, Xu Y, et al. Ethylene-induced potassium transporter AcKUP2 gene is involved in kiwifruit postharvest ripening. BMC Plant Biol. 2022;22(1):108. Published 2022 Mar 9. doi:10.1186/s12870-022-03498-9(IF:4.215)
[101] Cao Y, Bi M, Yang P, et al. Construction of yeast one-hybrid library and screening of transcription factors regulating LhMYBSPLATTER expression in Asiatic hybrid lilies (Lilium spp.). BMC Plant Biol. 2021;21(1):563. Published 2021 Nov 29. doi:10.1186/s12870-021-03347-1(IF:4.215)
[102] Ma J, Zhang X, Zhang H, Chen H. lncRNA MEG3 Suppresses the Progression of Ankylosis Spondylitis by Regulating the Let-7i/SOST Axis. Front Mol Biosci. 2020;7:173. Published 2020 Jul 24. doi:10.3389/fmolb.2020.00173(IF:4.188)
[103] Anwar M, Yu W, Yao H, Zhou P, Allan AC, Zeng L. NtMYB3, an R2R3-MYB from Narcissus, Regulates Flavonoid Biosynthesis. Int J Mol Sci. 2019;20(21):5456. Published 2019 Nov 1. doi:10.3390/ijms20215456(IF:4.183)
[104] Xu W, Chen B, Ke D, Chen X. MicroRNA-138-5p targets the NFIB-Snail1 axis to inhibit colorectal cancer cell migration and chemoresistance [published correction appears in Cancer Cell Int. 2020 Nov 3;20(1):533]. Cancer Cell Int. 2020;20:475. Published 2020 Oct 1. doi:10.1186/s12935-020-01573-5(IF:4.175)
[105] Tian C, Hu S, Yu J, Li W, Li P, Huang H. CREB1 transcription-activated lncRNA PVT1 promotes cardiac fibrosis via miR-145/HCN1 axis. Int J Cardiol. 2022;353:88-95. doi:10.1016/j.ijcard.2022.01.024(IF:4.164)
[106] Zhou Y, Zhu Y, Dong X, et al. Exosomes Derived from Pancreatic Cancer Cells Induce Osteoclast Differentiation Through the miR125a-5p/TNFRSF1B Pathway. Onco Targets Ther. 2021;14:2727-2739. Published 2021 Apr 19. doi:10.2147/OTT.S282319(IF:4.147)
[107] Zhu Y, Li P, Dan X, Kang X, Ma Y, Shi Y. miR-377 Inhibits Proliferation and Differentiation of Bovine Skeletal Muscle Satellite Cells by Targeting FHL2. Genes (Basel). 2022;13(6):947. Published 2022 May 26. doi:10.3390/genes13060947(IF:4.096)
[108] Bu X, Zhao Y, Chang M, Ge X. Downregulation of lncRNA SNHG14 alleviates neurons injury by modulating the miR-181c-5p/BMF axis in ischemic stroke. Brain Res Bull. 2021;174:379-388. doi:10.1016/j.brainresbull.2021.06.026(IF:4.079)
[109] Guo H, Jiang Y, Gu Z, et al. ZFP36 protects against oxygen-glucose deprivation/reoxygenation-induced mitochondrial fragmentation and neuronal apoptosis through inhibiting NOX4-DRP1 pathway. Brain Res Bull. 2022;179:57-67. doi:10.1016/j.brainresbull.2021.12.003(IF:4.079)
[110] Yang L, Liu Z, Ma J, et al. CircRPPH1 serves as a sponge for miR-296-5p to enhance progression of breast cancer by regulating FOXP4 expression. Am J Transl Res. 2021;13(7):7556-7573. Published 2021 Jul 15. (IF:4.060)
[111] Gao G, Li X, Zhang J, Yu H. YY1 as a promoter regulating the circ_0001946/miR-671-5p/EGFR axis to promote chemotherapy resistance in breast cancer cells. Am J Transl Res. 2022;14(4):2550-2566. Published 2022 Apr 15. (IF:4.060)
[112] Xiao E, Zhang D, Zhan W, et al. circNFIX facilitates hepatocellular carcinoma progression by targeting miR-3064-5p/HMGA2 to enhance glutaminolysis. Am J Transl Res. 2021;13(8):8697-8710. Published 2021 Aug 15. (IF:4.060)
[113] Wang H, Song X, Song C, Wang X, Cao H. m6A-seq analysis of microRNAs reveals that the N6-methyladenosine modification of miR-21-5p affects its target expression. Arch Biochem Biophys. 2021;711:109023. doi:10.1016/j.abb.2021.109023(IF:4.013)
[114] Huang Y, Wu P, Zheng J, Qiu L. Identification of cis-acting elements in response to fenvalerate in the CYP6B7 promoter of Helicoverpa armigera. Pestic Biochem Physiol. 2022;183:105060. doi:10.1016/j.pestbp.2022.105060(IF:3.963)
[115] Li X, Wang N, She W, et al. Identification and Functional Analysis of the CgNAC043 Gene Involved in Lignin Synthesis from Citrusgrandis "San Hong". Plants (Basel). 2022;11(3):403. Published 2022 Jan 31. doi:10.3390/plants11030403(IF:3.935)
[116] Wu Y, Zhang M, Bi X, Hao L, Liu R, Zhang H. JPR1 mediated circ_0004018 suppresses angiogenesis in hepatocellular carcinoma via recruiting FUS and stabilizing TIMP2 expression. Exp Cell Res. 2021;408(2):112804. doi:10.1016/j.yexcr.2021.112804(IF:3.905)
[117] Luo E, Wang D, Yan G, et al. The NF-κB/miR-425-5p/MCT4 axis: A novel insight into diabetes-induced endothelial dysfunction. Mol Cell Endocrinol. 2020;500:110641. doi:10.1016/j.mce.2019.110641(IF:3.693)
[118] Zhang C, Wang Q, Liu AQ, et al. MicroRNA miR-155 inhibits cyprinid herpesvirus 3 replication via regulating AMPK-MAVS-IFN axis. Dev Comp Immunol. 2022;129:104335. doi:10.1016/j.dci.2021.104335(IF:3.636)
[119] Zhang G, Li G, Xiang Y, Zhang A. The transcription factor ZmMYB-CC10 improves drought tolerance by activating ZmAPX4 expression in maize. Biochem Biophys Res Commun. 2022;604:1-7. doi:10.1016/j.bbrc.2022.02.051(IF:3.575)
[120] Han T, Yan J, Xiang Y, Zhang A. Phosphorylation of ZmNAC84 at Ser-113 enhances the drought tolerance by directly modulating ZmSOD2 expression in maize. Biochem Biophys Res Commun. 2021;567:86-91. doi:10.1016/j.bbrc.2021.06.026(IF:3.575)
[121] Jiang H, Guo W, Yuan S, Song L. PLOD1 Is a Prognostic Biomarker and Mediator of Proliferation and Invasion in Osteosarcoma. Biomed Res Int. 2020;2020:3418398. Published 2020 Oct 19. doi:10.1155/2020/3418398(IF:3.411)
[122] Li Z, Chen Z, Feng Y, Hu G, Jiang Y. CircMMP11 acts as a ce-circRNA in breast cancer progression by regulating miR-1204. Am J Transl Res. 2020;12(6):2585-2599. Published 2020 Jun 15. (IF:3.375)
[123] Ma H, Liu T, Xu Y, Wang X, Wang J, Liu X. MiR-519d and miR-328-3p Combinatorially Suppress Breast Cancer Progression. Onco Targets Ther. 2020;13:12987-12997. Published 2020 Dec 18. doi:10.2147/OTT.S281962(IF:3.337)
[124] Chu P, He L, Zhu D, et al. Identification, expression and functional characterisation of CYP1A in grass carp (Ctenopharyngodon idella). Fish Shellfish Immunol. 2019;95:35-43. doi:10.1016/j.fsi.2019.10.022(IF:3.298)
[125] Yin D, Shao Y, Yang K, et al. Fowl adenovirus serotype 4 uses gga-miR-181a-5p expression to facilitate viral replication via targeting of STING. Vet Microbiol. 2021;263:109276. doi:10.1016/j.vetmic.2021.109276(IF:3.293)
[126] Abudurexiti M, Zhu W, Wang Y, et al. Targeting CPT1B as a potential therapeutic strategy in castration-resistant and enzalutamide-resistant prostate cancer. Prostate. 2020;80(12):950-961. doi:10.1002/pros.24027(IF:3.279)
[127] Meng J, Song X, Yan G, Wang H, Li H, Lou D. Dendrobine suppresses endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis through upregulating microRNA miR-381-3p to decrease caspase-4. Bioengineered. 2021;12(1):4452-4463. doi:10.1080/21655979.2021.1956672(IF:3.269)
[128] Zhou Y, Pan A, Zhang Y, Li X. Hsa_circ_0039569 facilitates the progression of endometrial carcinoma by targeting the miR-197/high mobility group protein A1 axis. Bioengineered. 2022;13(2):4212-4225. doi:10.1080/21655979.2022.2027060(IF:3.269)
[129] Zhang Y, Yu Y, Cao X, Chen P. Role of lncRNA FAM83H antisense RNA1 (FAM83H-AS1) in the progression of non-small cell lung cancer by regulating the miR-545-3p/heparan sulfate 6-O-sulfotransferase (HS6ST2) axis. Bioengineered. 2022;13(3):6476-6489. doi:10.1080/21655979.2022.2031668(IF:3.269)
[130] Wu W, Wang L, Li S. Hox transcript antisense RNA knockdown inhibits osteosarcoma progression by regulating the phosphoinositide 3-kinase/AKT pathway through the microRNA miR-6888-3p/spleen tyrosine kinase axis. Bioengineered. 2022;13(4):9397-9410. doi:10.1080/21655979.2022.2059614(IF:3.269)
[131] Ge Z, Liu H, Ji T, et al. Long non-coding RNA 00960 promoted the aggressiveness of lung adenocarcinoma via the miR-124a/SphK1 axis. Bioengineered. 2022;13(1):1276-1287. doi:10.1080/21655979.2021.1996507(IF:3.269)
[132] Hao W, Lin F, Shi H, Guan Z, Jiang Y. Long non-coding RNA OIP5-AS1 regulates smoke-related chronic obstructive pulmonary disease via targeting micro RNA -410-3p/IL-13. Bioengineered. 2021;12(2):11664-11676. doi:10.1080/21655979.2021.2000199(IF:3.269)
[133] Shuang Y, Liu J, Niu J, Guo W, Li C. A novel circular RNA circPPFIA1 promotes laryngeal squamous cell carcinoma progression through sponging miR-340-3p and regulating ELK1 expression. Bioengineered. 2021;12(1):5220-5230. doi:10.1080/21655979.2021.1959866(IF:3.269)
[134] Zhou H, Jia X, Yang F, Shi P. miR-148a-3p suppresses the progression of acute myeloid leukemia via targeting cyclin-dependent kinase 6 (CDK6). Bioengineered. 2021;12(1):4508-4519. doi:10.1080/21655979.2021.1956400(IF:3.269)
[135] Mao K, Jin R, Ren Z, et al. miRNAs targeting CYP6ER1 and CarE1 are involved in nitenpyram resistance in Nilaparvata lugens. Insect Sci. 2022;29(1):177-187. doi:10.1111/1744-7917.12910(IF:3.262)
[136] Zhang W, Qin P, Gong X, et al. Identification of circRNAs in the Liver of Whitespotted Bamboo Shark (Chiloscyllium plagiosum). Front Genet. 2020;11:596308. Published 2020 Dec 11. doi:10.3389/fgene.2020.596308(IF:3.260)
[137] Xie D, Li S, Wu T, Wang X, Fang L. MiR-181c suppresses triple-negative breast cancer tumorigenesis by targeting MAP4K4. Pathol Res Pract. 2022;230:153763. doi:10.1016/j.prp.2022.153763(IF:3.250)
[138] Jia A, Yang ZW, Shi JY, Liu JM, Zhang K, Cui YF. MiR-325-3p Alleviates Acute Pancreatitis via Targeting RIPK3 [published online ahead of print, 2022 Jan 30]. Dig Dis Sci. 2022;10.1007/s10620-021-07322-6. doi:10.1007/s10620-021-07322-6(IF:3.199)
[139] Li M, Noshay JM, Dong X, Springer NM, Li Q. A capture-based assay for detection and characterization of transposon polymorphisms in maize [published online ahead of print, 2021 Apr 26]. G3 (Bethesda). 2021;11(7):jkab138. doi:10.1093/g3journal/jkab138(IF:3.154)
[140] Wu W, Duan C, Lv H, et al. MiR-let-7d-3p inhibits granulosa cell proliferation by targeting TLR4 in polycystic ovary syndrome. Reprod Toxicol. 2021;106:61-68. doi:10.1016/j.reprotox.2021.10.003(IF:3.143)
[141] Yu L, Ren Y. Long Noncoding RNA Small Nucleolar RNA Host Gene 3 Mediates Prostate Cancer Migration, Invasion, and Epithelial-Mesenchymal Transition by Sponging miR-487a-3p to Regulate TRIM25 [published online ahead of print, 2021 Jan 7]. Cancer Biother Radiopharm. 2021;10.1089/cbr.2020.3988. doi:10.1089/cbr.2020.3988(IF:3.099)
[142] Ye M, Ma J, Liu B, Liu X, Ma D, Dong K. Linc01105 acts as an oncogene in the development of neuroblastoma [published correction appears in Oncol Rep. 2021 Sep;46(3):]. Oncol Rep. 2019;42(4):1527-1538. doi:10.3892/or.2019.7257(IF:3.041)
[143] Huo W, Wang Y, Chen T, et al. Triclosan activates c-Jun/miR-218-1-3p/SLC35C1 signaling to regulate cell viability, migration, invasion and inflammatory response of trophoblast cells in vitro. BMC Pregnancy Childbirth. 2022;22(1):470. Published 2022 Jun 6. doi:10.1186/s12884-022-04791-z(IF:3.007)
[144] Dong L, Wang M, Gao X, et al. miR-9-5p promotes myogenic differentiation via the Dlx3/Myf5 axis. PeerJ. 2022;10:e13360. Published 2022 May 3. doi:10.7717/peerj.13360(IF:2.984)
[145] Chen J, Shi P, Zhang J, et al. CircRNA_0044556 diminishes the sensitivity of triple‑negative breast cancer cells to adriamycin by sponging miR‑145 and regulating NRAS. Mol Med Rep. 2022;25(2):51. doi:10.3892/mmr.2021.12567(IF:2.952)
[146] Ding X, Deng G, Liu J, et al. GOLM1 silencing inhibits the proliferation and motility of human glioblastoma cells via the Wnt/β-catenin signaling pathway. Brain Res. 2019;1717:117-126. doi:10.1016/j.brainres.2019.03.035(IF:2.929)
[147] Yang F, Chen R. Loss of PHLDA1 has a protective role in OGD/R-injured neurons via regulation of the GSK-3β/Nrf2 pathway. Hum Exp Toxicol. 2021;40(11):1909-1920. doi:10.1177/09603271211014596(IF:2.903)
[148] Wang L, Zhang L, Wang L. SNHG7 Contributes to the Progression of Non-Small-Cell Lung Cancer via the SNHG7/miR-181a-5p/E2F7 Axis. Cancer Manag Res. 2020;12:3211-3222. Published 2020 May 7. doi:10.2147/CMAR.S240964(IF:2.886)
[149] Tian Y, Guan Y, Su Y, Luo W, Yang G, Zhang Y. MiR-582-5p Inhibits Bladder Cancer-Genesis by Suppressing TTK Expression. Cancer Manag Res. 2020;12:11933-11944. Published 2020 Nov 20. doi:10.2147/CMAR.S274835(IF:2.886)
[150] Xia L, Shen D, Wang H, Ren L, Chen Y, Li G. Identification of Small-Molecule Regulators of Testicular Receptor 4 via a Drug Repurposing Screening. ACS Omega. 2020;5(47):30625-30632. Published 2020 Nov 19. doi:10.1021/acsomega.0c04623(IF:2.870)
[151] Cao Y, Zhang F, Wang H, et al. LncRNA MALAT1 mediates doxorubicin resistance of hepatocellular carcinoma by regulating miR-3129-5p/Nova1 axis. Mol Cell Biochem. 2021;476(1):279-292. doi:10.1007/s11010-020-03904-6(IF:2.795)
[152] Ding X, Sun J, Zhang X. Circ_0076305 facilitates prostate cancer development via sponging miR-411-5p and regulating PGK1. Andrologia. 2022;54(6):e14406. doi:10.1111/and.14406(IF:2.775)
[153] Yang F, Chen R. Sestrin1 exerts a cytoprotective role against oxygen-glucose deprivation/reoxygenation-induced neuronal injury by potentiating Nrf2 activation via the modulation of Keap1. Brain Res. 2021;1750:147165. doi:10.1016/j.brainres.2020.147165(IF:2.733)
[154] Zhang Z. MiR-124-3p Suppresses Prostatic Carcinoma by Targeting PTGS2 Through the AKT/NF-κB Pathway. Mol Biotechnol. 2021;63(7):621-630. doi:10.1007/s12033-021-00326-7(IF:2.695)
[155] Jin S, He J, Li J, Guo R, Shu Y, Liu P. MiR-873 inhibition enhances gefitinib resistance in non-small cell lung cancer cells by targeting glioma-associated oncogene homolog 1. Thorac Cancer. 2018;9(10):1262-1270. doi:10.1111/1759-7714.12830(IF:2.569)
[156] Zhang J, Xu X, Wang M. Clinical significance of serum miR-101-3p expression in patients with neonatal sepsis. Per Med. 2021;18(6):541-550. doi:10.2217/pme-2020-0182(IF:2.512)
[157] Shi Z, He J, He J, Xu Y. Micro-fragmented adipose tissue regulated the biological functions of osteoarthritis synoviocytes by upregulating MiR-92a-3p expression. Tissue Cell. 2022;74:101716. doi:10.1016/j.tice.2021.101716(IF:2.466)
[158] Huang J, Qin Y, Lin C, Huang X, Zhang F. MTHFD2 facilitates breast cancer cell proliferation via the AKT signaling pathway. Exp Ther Med. 2021;22(1):703. doi:10.3892/etm.2021.10135(IF:2.447)
[159] Shi F, Yang Q, Shen D, Chen J. CircRNA WHSC1 promotes non-small cell lung cancer progression via sponging microRNA-296-3p and up-regulating expression of AKT serine/threonine kinase 3. J Clin Lab Anal. 2021;35(8):e23865. doi:10.1002/jcla.23865(IF:2.352)
[160] Wang K, Li M, Zhang T, Xu C, Yu F, Duan H. LINC01116 Facilitates Melanoma 1 Progression Via Sequestering miR-3612 and Up-regulating GDF11 and SDC3. Arch Med Res. 2022;53(1):44-50. doi:10.1016/j.arcmed.2021.06.008(IF:2.235)
[161] Wang L, Zhang J. Long intergenic ncRNA 00473 improves the invasion of trophoblastic cells via miR-16-5p. Pregnancy Hypertens. 2021;23:174-184. doi:10.1016/j.preghy.2020.12.003(IF:2.095)
[162] Li K, Zhou Z, Li J, Xiang R. miR-146b Functions as an Oncogene in Oral Squamous Cell Carcinoma by Targeting HBP1. Technol Cancer Res Treat. 2020;19:1533033820959404. doi:10.1177/1533033820959404(IF:2.074)
[163] Xu W, Sun D, Wang Y, et al. Inhibitory effect of microRNA-608 on lung cancer cell proliferation, migration, and invasion by targeting BRD4 through the JAK2/STAT3 pathway. Bosn J Basic Med Sci. 2020;20(3):347-356. Published 2020 Aug 3. doi:10.17305/bjbms.2019.4216(IF:2.050)
[164] Li Y, Liu L. LncRNA OIP5-AS1 Signatures as a Biomarker of Gestational Diabetes Mellitus and a Regulator on Trophoblast Cells. Gynecol Obstet Invest. 2021;86(6):509-517. doi:10.1159/000520340(IF:2.031)
[165] Li Y, Liu Y, Zhang J, Li J, Shu Y. Propofol Suppresses Glioma Tumorigenesis by Regulating circ_0047688/miR-516b-5p/IFI30 Axis [published online ahead of print, 2022 Jun 28]. Biochem Genet. 2022;10.1007/s10528-022-10243-2. doi:10.1007/s10528-022-10243-2(IF:1.890)
[166] Zheng Q, Yu JJ, Li C, Li J, Wang J, Wang S. miR-224 targets BTRC and promotes cell migration and invasion in colorectal cancer. 3 Biotech. 2020;10(11):485. doi:10.1007/s13205-020-02477-x(IF:1.798)
[167] Chen Y, Niu K, Song Q, Feng Q. Effect of G-quadruplex loop mutations on the G-quadruplex formation, protein binding and transcription of BmPOUM2 in Bombyx mori. Arch Insect Biochem Physiol. 2022;110(1):e21876. doi:10.1002/arch.21876(IF:1.698)
[168] Wang Z, Chen R, Xu Z, et al. MiR-155-5p promotes renal interstitial fibrosis in obstructive nephropathy via inhibiting SIRT1 signaling pathway. J Recept Signal Transduct Res. 2021;41(5):466-475. doi:10.1080/10799893.2020.1825491(IF:1.466)
[169] Zhou Y, Zhang F, Xu F, et al. lncRNA NEAT1 regulates CYP1A2 and influences steroid-induced necrosis. Open Life Sci. 2021;16(1):969-980. Published 2021 Sep 13. doi:10.1515/biol-2021-0097(IF:0.938)

产品描述

萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)是一种分子量约为61 kDa的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,能够催化萤光素(luciferin)氧化成oxyluciferin,在氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物萤光。海肾萤光素酶(Renilla luciferase)是一种分子量约为36 kDa的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化腔肠素(coelenterazine)氧化成coelenteramide,在氧化的过程中会发出波长为480nm左右的生物萤光。两种生物萤光都可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示:

双萤光素酶报告基因检测试剂盒|Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 
1:萤火虫和海肾萤光素酶检测原理图

通常将目的基因的5´UTR或启动子克隆至Firefly Luciferase的上游,或3´UTR克隆至Firefly Luciferase的下游,通过检测萤火虫萤光素酶的量来检测启动子或调控元件的转录调控作用。Renilla Luciferase作为内参,来消除细胞数量转染效率等的差异。Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit首先以萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶报告基因的活性,之后在淬灭该萤光反应的同时,以腔肠素为底物检测海肾萤光素酶报告基因的活性。该试剂盒具有灵敏度的特点

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11402JP60100 T

11402JP801000 T

11402-A

细胞裂解液

20 mL

10×20 mL

11402-B

萤火虫萤光素酶缓冲液

10 mL

10×10 mL

11402-C

萤火虫萤光素酶底物(50 ×

200 μL

10×200 μL

11402-D

海肾萤光素酶缓冲液

10 mL

10×10 mL

11402-E

海肾萤光素酶底物(50 ×

200 μL

10×200 μL

 

运输和保存方式

干冰运输。 -20℃保存,有效期1

萤火虫萤光素酶反应工作液和海肾萤光素酶反应工作液现配现用,且不能反复冻融,建议分装-20℃-80℃分装保存。

 

实验步骤

I.前处理

 

1.细胞

1构建相应的载体。

2转染步骤请参照相关的说明书。

3)将细胞裂解液充分混匀,按如下方式加入细胞裂解液,充分裂解细胞。

a: 对于贴壁细胞,吸尽细胞培养液,按照下表比例加入细胞裂解液,轻轻旋转培养皿或者培养板使裂解液完全覆盖细胞;

b: 对于悬浮细胞,离心弃去上清,按照下表比例加入裂解液

细胞培养板

96孔板

48孔板

24孔板

12孔板

6孔板

裂解液加入量

100 μL

150 μL

200 μL

300 μL

500 μL

4)冰上孵育5 min,充分裂解细胞。
裂解产物可室温保存6 h4℃保存16 h80℃可长期存放。(裂解产物不能多次反复冻融)

5)(选作)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

 

2.叶片组织(以烟草叶片为例,仅供参考)
1)构建相应的载体。
2挑取转化有重组质粒的农杆菌单菌落,接种到2 mL LB液体培养基(添加相应抗生素)中,28℃ 220 rpm培养过夜。
3农杆菌培养至OD6001.01700× g离心5 min收集菌体后,用1/2MS液体培养基清洗菌体2次;用含有150 μmol/L乙酰丁香酮的1/2MS液体培养基将农杆菌的OD600调至1.0
4将待检测的农杆菌菌液进行混合,使每种菌液的OD6000.5
5选取生长期为1个月左右完全伸展的烟草叶片,将混合好的菌液用1 mL注射器(去掉针头)从烟草叶背面进行注射。为保证实验结果的一致性,需要将对照载体和待检测目标载体的菌液注射在同一叶片的不同部位上, 以保证相同的生长背景。
6)正常温室生长条件下,24-48 h即可取样观察。
73-4直径为6-8 mm的叶盘,放入2 mLEP(提前放入3-4小钢珠)中,液氮中冷冻使用破碎仪进行研磨破碎(45 Hz30 s)。破碎完全后在EP管中加入100 μL裂解液。
8)冰上孵育5 min左右,充分裂解叶片。
910000-16000 rpm离心1 min,取上清。

 

3.原生质体(仅供参考)
1)构建相应的载体。
2)制备原生质体参考文献Yoo SD, Cho YH, Sheen J (2007). Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis. Nat Protoc 2, 1565–1572)。

3)WI溶液配置:0.5 M甘露醇和20mm KCl 溶于4 mm MJP (pH 5.7),可在室温下保存。
W5溶液配置:154 mM NaCl, 125 mM CaCl2 和5 mM KCl溶于2 mm MJP (pH 5.7),可在室温下保存。

4)2 mL EP管中加入相应的载体(加入量需要摸索),加入100 μL原生质体悬浮液。轻摇混匀后,加入110 μL PEG-CaCl2溶液,轻弹混匀。在室温放置10-15 min
5加入440 μL W5溶液,上下颠倒以停止转化。
6200 × g 室温离心5 min,弃去上清,加入800 μL WI溶液重悬原生质体。
7)室温避光培养16-24 h

8)将原生质体加入2 mL离心管中,离心收集原生质体,加入100 μL左右的裂解液。
9)冰上孵育5 min左右,充分裂解原生质体。
10)(选做)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

 

II.萤光检测

1)取20 μL裂解液,加至培养板中。按照实验需要,可设置3-5孔重复。

2)配制萤火虫萤光素酶反应工作液和海肾萤光素酶反应液,即萤火虫萤光素酶底物(50 ×)和海肾萤光素酶底物(50 ×分别用对应的缓冲液稀释至1 ×工作液。并孵育至室温。

3)加入100 μL萤火虫萤光素酶反应液,震板混匀,检测萤火虫萤光素酶的活力,检测尽量在30 min内完成。

4)加入100 μL海肾萤光素酶反应液,震板混匀,检测海肾萤光素酶的活力,检测尽量在30 min内完成。

5)分析数据。

实验设计:根据不同实验目的,在每个培养板中都应设置对照组实验组和空白对照组。为了保证实验准确性,理论上每个实验组(包括对照组)都应当减去空白对照组的萤火虫和海肾萤光素酶的发光测量值。
 

a.空白对照 

背景F:未转染细胞+萤火虫萤光素酶检测试剂。

背景R:未转染细胞+萤火虫萤光素酶检测试剂+海肾萤光素酶检测试剂。

注:空白对照组的样品量必须与实验样品量相同,包含与实验样品相同的培养基/血清组合,并加上完全相同的检测试剂。

b.实验组:转染细胞经实验化合物处理(即实验组F和实验组R)

c.对照组:转染细胞不经处理,用以标准化结果(即对照组F和对照组R)

计算结果:

实验组比值=(实验组F-背景F/(实验组R-背景R)

对照组比值=(对照组F-背景F/(对照组R-背景R)

表达倍数=实验组比值/对照组比值。

双萤光素酶报告基因检测试剂盒|Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit

2:细胞样品萤火虫和海肾萤光素酶检测流程图

 

注意事项

1)检测过程中需自备耗材和设备包括如下:PBS100 μL移液器或者排枪不透光白色酶标Luminometer发光计多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器;

2)反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温20-25℃再使用;

3)检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同

4)检测设置:Luminescence350-700 nm,建议检测时间设为2-10 sec

5)检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板黑色酶标板也可用,但因黑色会吸收光信号,可能会降低信号;

6)单管萤光测定仪测定,每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致;

7E组分海肾萤光素酶底物易挥发,注意密封保存

8为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套。

9本产品仅作科研用途!

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit辉光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

11404JP60/80

100/1000 T

Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 辉光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒

11405JP60/80

100/1000 T

Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

11401JP60/76/80

100/500/1000 T

pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc萤光素酶报告基因质粒阳性对照

11556JP03

1 μg

Luciferase Reporter Plasmid negative control (萤光素酶报告基因质粒阴性对照)

11555JP03

1 μg

pGMLR-TK Luciferase Reporter PlasmidpGMLR-TK海肾萤光素酶报告基因质粒)

11557JP03

1 μg

pGMLR-CMV Luciferase Reporter PlasmidpGMLR-CMV海肾萤光素酶报告基因质粒)

11558JP03

1 μg

Hieff Trans Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂

40802JP03

1 mL

HB230504

Q:细胞裂解之后的裂解液能否在-80℃保存?

A可保存在-80℃,基本与蛋白的保存方法类似。裂解后的样本可在 -80 ℃保存半年-20 ℃保存一个月。

Q双荧光素酶报告基因检测试剂盒中的两个底物是否需要避光的?

A这两个底物操作过程中不需要严格避光。保存的时候避光保存,更重要的保存条件是低温,尤其是腔肠素,推荐80℃保存。

Q双荧光素酶报告基因载体共转染时比例该如何进行优化与调整?

A比例:根据具体实验情况进行调整。建议做预实验:如海参载体萤火虫载体比例分别用 1:101:201:501:100。萤火虫荧光素酶检测发光值大于海参荧光素酶发光值的比例比较好。

Q:海肾和萤火虫是在同一个孔里面检测吗?萤火虫的萤光不会影响海肾的萤光吗?能否分开检测呢?

A:同一个孔里检测。不会相互影响,我们的海肾荧光素酶底物中有淬灭萤火虫荧光值的物质。可以分开检测,但是在一个孔里检测会更加准确。

Q:使用的是promega的仪器进行检测,发现海肾的本底值偏高很多,是为什么呢?

A:我们的产品与promega的仪器不适配,会导致本底值偏高。使用酶标仪检测不会出现这种情况,建议使用酶标仪检测。

Q:W5和WI指的是什么呢?

A:

WI solution Prepare 4 mM MJP (pH 5.7) containing 0.5 M mannitol and 20 mM KCl. The prepared WI solution can be stored at room temperature (22-25 °C).
W5 solution Prepare 2 mM MJP (pH 5.7) containing 154 mM NaCl, 125 mM CaCl2 and 5 mM KCl. The prepared W5 solution can be stored at room temperature.

 

Q:检测萤火虫荧光素酶,酶标仪使用什么样的板子呢?

A:白色不透明的酶标板,图片见说明书

 

Q:裂解液不够用了,怎么办呢?

A:10ml PBS里加入0.3ml Triton

[1] Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucine-tRNA-synthase-2-expressing B cells contribute to colorectal cancer immunoevasion. Immunity. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Chen Y, Lu Z, Qi C, et al. N6-methyladenosine-modified TRAF1 promotes sunitinib resistance by regulating apoptosis and angiogenesis in a METTL14-dependent manner in renal cell carcinoma. Mol Cancer. 2022;21(1):111. Published 2022 May 10. doi:10.1186/s12943-022-01549-1(IF:27.401)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Macrophage IRX3 promotes diet-induced obesity and metabolic inflammation. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y(IF:25.606)
[4] Sun B, Yang X, Hou F, et al. Regulation of host and virus genes by neuronal miR-138 favours herpes simplex virus 1 latency. Nat Microbiol. 2021;6(5):682-696. doi:10.1038/s41564-020-00860-1(IF:17.745)
[5] Tian WH, Ye JY, Cui MQ, et al. A transcription factor STOP1-centered pathway coordinates ammonium and phosphate acquisition in Arabidopsis. Mol Plant. 2021;14(9):1554-1568. doi:10.1016/j.molp.2021.06.024(IF:13.164)
[6] Qiao J, Jiang H, Lin Y, et al. A novel miR167a-OsARF6-OsAUX3 module regulates grain length and weight in rice. Mol Plant. 2021;14(10):1683-1698. doi:10.1016/j.molp.2021.06.023(IF:13.164)
[7] Wang Y, Wang Z, Shao C, et al. Melatonin may suppress lung adenocarcinoma progression via regulation of the circular noncoding RNA hsa_circ_0017109/miR-135b-3p/TOX3 axis [published online ahead of print, 2022 Jun 4]. J Pineal Res. 2022;e12813. doi:10.1111/jpi.12813(IF:13.007)
[8] Chen H, Moreno-Moral A, Pesce F, et al. WWP2 regulates pathological cardiac fibrosis by modulating SMAD2 signaling [published correction appears in Nat Commun. 2019 Sep 9;10(1):4085]. Nat Commun. 2019;10(1):3616. Published 2019 Aug 9. doi:10.1038/s41467-019-11551-9(IF:11.878)
[9] Xiang X, Fu Y, Zhao K, et al. Cellular senescence in hepatocellular carcinoma induced by a long non-coding RNA-encoded peptide PINT87aa by blocking FOXM1-mediated PHB2. Theranostics. 2021;11(10):4929-4944. Published 2021 Mar 4. doi:10.7150/thno.55672(IF:11.556)
[10] Xu Y, Jiang Y, Wang Y, et al. LINC00473-modified bone marrow mesenchymal stem cells incorporated thermosensitive PLGA hydrogel transplantation for steroid-induced osteonecrosis of femoral head: A detailed mechanistic study and validity evaluation. Bioeng Transl Med. 2021;7(2):e10275. Published 2021 Dec 8. doi:10.1002/btm2.10275(IF:10.711)
[11] Huang X, He M, Huang S, et al. Circular RNA circERBB2 promotes gallbladder cancer progression by regulating PA2G4-dependent rDNA transcription [published correction appears in Mol Cancer. 2022 Jun 2;21(1):122]. Mol Cancer. 2019;18(1):166. Published 2019 Nov 21. doi:10.1186/s12943-019-1098-8(IF:10.679)
[12] Ma L, An R, Jiang L, et al. Effects of ZmHIPP on lead tolerance in maize seedlings: Novel ideas for soil bioremediation. J Hazard Mater. 2022;430:128457. doi:10.1016/j.jhazmat.2022.128457(IF:10.588)
[13] Xu C, Fan L, Lin Y, et al. Fusobacterium nucleatum promotes colorectal cancer metastasis through miR-1322/CCL20 axis and M2 polarization. Gut Microbes. 2021;13(1):1980347. doi:10.1080/19490976.2021.1980347(IF:10.245)
[14] Xiang Y, Bian X, Wei T, et al. ZmMPK5 phosphorylates ZmNAC49 to enhance oxidative stress tolerance in maize. New Phytol. 2021;232(6):2400-2417. doi:10.1111/nph.17761(IF:10.152)
[15] Gao Y, Li Z, Yang C, et al. Pseudomonas syringae activates ZAT18 to inhibit salicylic acid accumulation by repressing EDS1 transcription for bacterial infection. New Phytol. 2022;233(3):1274-1288. doi:10.1111/nph.17870(IF:10.152)
[16] Zhao H, Lu J, Yan T, et al. Opioid receptor signaling suppresses leukemia through both catalytic and non-catalytic functions of TET2. Cell Rep. 2022;38(4):110253. doi:10.1016/j.celrep.2021.110253(IF:9.423)
[17] He R, Shi J, Xu D, et al. SULF2 enhances GDF15-SMAD axis to facilitate the initiation and progression of pancreatic cancer. Cancer Lett. 2022;538:215693. doi:10.1016/j.canlet.2022.215693(IF:8.679)
[18] Wu Q, Li L, Miao C, et al. Osteopontin promotes hepatocellular carcinoma progression through inducing JAK2/STAT3/NOX1-mediated ROS production. Cell Death Dis. 2022;13(4):341. Published 2022 Apr 13. doi:10.1038/s41419-022-04806-9(IF:8.469)
[19] Wu Y, Wang L, Ansah EO, et al. The sucrose transport regulator OsDOF11 mediates cytokinin degradation during rice development. Plant Physiol. 2022;189(2):1083-1094. doi:10.1093/plphys/kiac104(IF:8.340)
[20] Ruan J, Chen H, Zhu T, et al. Brassinosteroids repress the seed maturation program during the seed-to-seedling transition. Plant Physiol. 2021;186(1):534-548. doi:10.1093/plphys/kiab089(IF:8.340)
[21] Hou Y, Lu H, Li J, et al. A photoaffinity labeling strategy identified EF1A1 as a binding protein of cyclic dinucleotide 2'3'-cGAMP. Cell Chem Biol. 2022;29(1):133-144.e20. doi:10.1016/j.chembiol.2021.08.006(IF:8.116)
[22] Cao L, Zhang Y, Mi J, et al. α-Hederin inhibits the platelet activating factor-induced metastasis of HCC cells through disruption of PAF/PTAFR axis cascaded STAT3/MMP-2 expression. Pharmacol Res. 2022;178:106180. doi:10.1016/j.phrs.2022.106180(IF:7.658)
[23] Xie S, Wei H, Peng A, et al. Ikzf2 Regulates the Development of ICOS+ Th Cells to Mediate Immune Response in the Spleen of S. japonicum-Infected C57BL/6 Mice. Front Immunol. 2021;12:687919. Published 2021 Aug 12. doi:10.3389/fimmu.2021.687919(IF:7.561)
[24] Song Y, Guo Y, Li X, et al. RBM39 Alters Phosphorylation of c-Jun and Binds to Viral RNA to Promote PRRSV Proliferation. Front Immunol. 2021;12:664417. Published 2021 May 17. doi:10.3389/fimmu.2021.664417(IF:7.561)
[25] Zeng J, Li G, Xia Y, et al. miR-204/COX5A axis contributes to invasion and chemotherapy resistance in estrogen receptor-positive breast cancers. Cancer Lett. 2020;492:185-196. doi:10.1016/j.canlet.2020.07.027(IF:7.360)
[26] Li D, Zhou J, Zheng C, et al. OsTGAL1 suppresses the resistance of rice to bacterial blight disease by regulating the expression of salicylic acid glucosyltransferase OsSGT1. Plant Cell Environ. 2022;45(5):1584-1602. doi:10.1111/pce.14288(IF:7.228)
[27] Sun J, Shi Y, Shi H, et al. Intracellular Low Iron Exerts Anti-BK Polyomavirus Effect by Inhibiting the Protein Synthesis of Exogenous Genes. Microbiol Spectr. 2021;9(3):e0109421. doi:10.1128/Spectrum.01094-21(IF:7.171)
[28] Sun Q, Xu Y, Yuan F, et al. Rho family GTPase 1 (RND1), a novel regulator of p53, enhances ferroptosis in glioblastoma. Cell Biosci. 2022;12(1):53. Published 2022 May 3. doi:10.1186/s13578-022-00791-w(IF:7.133)
[29] Yuan F, Sun Q, Zhang S, et al. The dual role of p62 in ferroptosis of glioblastoma according to p53 status. Cell Biosci. 2022;12(1):20. Published 2022 Feb 25. doi:10.1186/s13578-022-00764-z(IF:7.133)
[30] Liu J, Gao L, Zhan N, et al. Hypoxia induced ferritin light chain (FTL) promoted epithelia mesenchymal transition and chemoresistance of glioma. J Exp Clin Cancer Res. 2020;39(1):137. Published 2020 Jul 16. doi:10.1186/s13046-020-01641-8(IF:7.068)
[31] Sun C, Li D, Gao Z, et al. OsRLR4 binds to the OsAUX1 promoter to negatively regulate primary root development in rice [published correction appears in J Integr Plant Biol. 2022 May;64(5):1131]. J Integr Plant Biol. 2022;64(1):118-134. doi:10.1111/jipb.13183(IF:7.061)
[32] Xiang Y, Sun X, Bian X, et al. The transcription factor ZmNAC49 reduces stomatal density and improves drought tolerance in maize. J Exp Bot. 2021;72(4):1399-1410. doi:10.1093/jxb/eraa507(IF:6.992)
[33] Zhou H, Li X, Wu RX, et al. Periodontitis-compromised dental pulp stem cells secrete extracellular vesicles carrying miRNA-378a promote local angiogenesis by targeting Sufu to activate the Hedgehog/Gli1 signalling. Cell Prolif. 2021;54(5):e13026. doi:10.1111/cpr.13026(IF:6.831)
[34] Tao J, Li S, Wang Q, et al. Construction of a high-density genetic map based on specific-locus amplified fragment sequencing and identification of loci controlling anthocyanin pigmentation in Yunnan red radish [published online ahead of print, 2022 Jan 19]. Hortic Res. 2022;9:uhab031. doi:10.1093/hr/uhab031(IF:6.793)
[35] Ma X, Yuan Y, Li C, et al. Brassinosteroids suppress ethylene-induced fruitlet abscission through LcBZR1/2-mediated transcriptional repression of LcACS1/4 and LcACO2/3 in litchi. Hortic Res. 2021;8(1):105. Published 2021 May 1. doi:10.1038/s41438-021-00540-z(IF:6.793)
[36] Zhang R, Chang J, Li J, et al. Disruption of the bHLH transcription factor Abnormal Tapetum 1 causes male sterility in watermelon. Hortic Res. 2021;8(1):258. Published 2021 Dec 1. doi:10.1038/s41438-021-00695-9(IF:6.793)
[37] Sun Y, Wang L, Xu X, et al. FOXO4 Inhibits the Migration and Metastasis of Colorectal Cancer by Regulating the APC2/β-Catenin Axis. Front Cell Dev Biol. 2021;9:659731. Published 2021 Sep 23. doi:10.3389/fcell.2021.659731(IF:6.684)
[38] Zhang Y, Hu R, Xi B, Nie D, Xu H, Liu A. Mechanisms of Senescence-Related NKG2D Ligands Release and Immune Escape Induced by Chemotherapy in Neuroblastoma Cells. Front Cell Dev Biol. 2022;10:829404. Published 2022 Mar 2. doi:10.3389/fcell.2022.829404(IF:6.684)
[39] Zhu L, Qi W, Yang G, et al. Toxoplasma gondii Rhoptry Protein 7 (ROP7) Interacts with NLRP3 and Promotes Inflammasome Hyperactivation in THP-1-Derived Macrophages. Cells. 2022;11(10):1630. Published 2022 May 12. doi:10.3390/cells11101630(IF:6.600)
[40] Zeng H, Li L, Gao Y, Wu G, Hou Z, Liu S. Long noncoding RNA UCA1 regulates HCV replication and antiviral response via miR-145-5p/SOCS7/IFN pathway. Int J Biol Sci. 2021;17(11):2826-2840. Published 2021 Jul 5. doi:10.7150/ijbs.59227(IF:6.582)
[41] Zhao P, Zhu Y, Sun L, et al. Circulating Exosomal miR-1-3p from Rats with Myocardial Infarction Plays a Protective Effect on Contrast-Induced Nephropathy via Targeting ATG13 and activating the AKT Signaling Pathway. Int J Biol Sci. 2021;17(4):972-985. Published 2021 Mar 2. doi:10.7150/ijbs.55887(IF:6.582)
[42] Cui W, Wang S, Han K, et al. Ferredoxin 1 is downregulated by the accumulation of abscisic acid in an ABI5-dependent manner to facilitate rice stripe virus infection in Nicotiana benthamiana and rice. Plant J. 2021;107(4):1183-1197. doi:10.1111/tpj.15377(IF:6.486)
[43] Wang Y, He S, Long Y, et al. Genetic variations in ZmSAUR15 contribute to the formation of immature embryo-derived embryonic calluses in maize. Plant J. 2022;109(4):980-991. doi:10.1111/tpj.15609(IF:6.486)
[44] Tang C, Wang X, Ji C, et al. The Role of miR-640: A Potential Suppressor in Breast Cancer via Wnt7b/β-catenin Signaling Pathway. Front Oncol. 2021;11:645682. Published 2021 Apr 12. doi:10.3389/fonc.2021.645682(IF:6.244)
[45] Meng X, Deng Y, He S, Niu L, Zhu H. m6A-Mediated Upregulation of LINC00857 Promotes Pancreatic Cancer Tumorigenesis by Regulating the miR-150-5p/E2F3 Axis. Front Oncol. 2021;11:629947. Published 2021 Feb 18. doi:10.3389/fonc.2021.629947(IF:6.244)
[46] Yu Q, Zhang W, Zhou X, Shen W, Xing C, Yang X. Regulation of lnc-TLCD2-1 on Radiation Sensitivity of Colorectal Cancer and Comprehensive Analysis of Its Mechanism. Front Oncol. 2021;11:714159. Published 2021 Jul 15. doi:10.3389/fonc.2021.714159(IF:6.244)
[47] Zhang XY, Chen ZC, Li N, et al. Exosomal transfer of activated neutrophil-derived lncRNA CRNDE promotes proliferation and migration of airway smooth muscle cells in asthma. Hum Mol Genet. 2022;31(4):638-650. doi:10.1093/hmg/ddab283(IF:6.150)
[48] Yang HY, Liu M, Sheng Y, et al. All-trans retinoic acid impairs glucose-stimulated insulin secretion by activating the RXR/SREBP-1c/UCP2 pathway. Acta Pharmacol Sin. 2022;43(6):1441-1452. doi:10.1038/s41401-021-00740-2(IF:6.150)
[49] Jiang T, Peng D, Shi W, et al. IL-6/STAT3 Signaling Promotes Cardiac Dysfunction by Upregulating FUNDC1-Dependent Mitochondria-Associated Endoplasmic Reticulum Membranes Formation in Sepsis Mice. Front Cardiovasc Med. 2022;8:790612. Published 2022 Jan 18. doi:10.3389/fcvm.2021.790612(IF:6.050)
[50] Ji H, Zhang K, Pan G, et al. Deoxyelephantopin Induces Apoptosis and Enhances Chemosensitivity of Colon Cancer via miR-205/Bcl2 Axis. Int J Mol Sci. 2022;23(9):5051. Published 2022 May 2. doi:10.3390/ijms23095051(IF:5.924)
[51] Li H, Luo Y, Ma B, et al. Hierarchical Action of Mulberry miR156 in the Vegetative Phase Transition. Int J Mol Sci. 2021;22(11):5550. Published 2021 May 24. doi:10.3390/ijms22115550(IF:5.924)
[52] Li H, Ma B, Luo Y, et al. The Mulberry SPL Gene Family and the Response of MnSPL7 to Silkworm Herbivory through Activating the Transcription of MnTT2L2 in the Catechin Biosynthesis Pathway. Int J Mol Sci. 2022;23(3):1141. Published 2022 Jan 20. doi:10.3390/ijms23031141(IF:5.924)
[53] Xia S, Wang Z, Chen L, et al. Dihydroartemisinin regulates lipid droplet metabolism in hepatic stellate cells by inhibiting lncRNA-H19-induced AMPK signal. Biochem Pharmacol. 2021;192:114730. doi:10.1016/j.bcp.2021.114730(IF:5.858)
[54] Feng Y, He PY, Kong WD, et al. Apoptosis-promoting properties of miR-3074-5p in MC3T3-E1 cells under iron overload conditions. Cell Mol Biol Lett. 2021;26(1):37. Published 2021 Aug 16. doi:10.1186/s11658-021-00281-w(IF:5.787)
[55] Li D, Wang Z, Sun S, et al. VvMYB15 and VvWRKY40 Positively Co-regulated Anthocyanin Biosynthesis in Grape Berries in Response to Root Restriction [published correction appears in Front Plant Sci. 2022 Feb 22;13:850160]. Front Plant Sci. 2021;12:789002. Published 2021 Dec 9. doi:10.3389/fpls.2021.789002(IF:5.754)
[56] Ding J, Karim H, Li Y, et al. Re-examination of the APETALA2/Ethylene-Responsive Factor Gene Family in Barley (Hordeum vulgare L.) Indicates a Role in the Regulation of Starch Synthesis. Front Plant Sci. 2021;12:791584. Published 2021 Dec 1. doi:10.3389/fpls.2021.791584(IF:5.754)
[57] Geng M, Hua Y, Liu Y, et al. Evolutionary history and functional characterization of Lj-TICAM-a and Lj-TICAM-b formed via lineage-specific tandem duplication in lamprey (Lampetra japonica). Genomics. 2021;113(4):2756-2768. doi:10.1016/j.ygeno.2021.06.022(IF:5.736)
[58] Hou F, Sun Z, Deng Y, et al. Interactome and Ubiquitinome Analyses Identify Functional Targets of Herpes Simplex Virus 1 Infected Cell Protein 0. Front Microbiol. 2022;13:856471. Published 2022 Apr 18. doi:10.3389/fmicb.2022.856471(IF:5.640)
[59] Zhou L, Ao L, Yan Y, et al. Levo-corydalmine Attenuates Vincristine-Induced Neuropathic Pain in Mice by Upregulating the Nrf2/HO-1/CO Pathway to Inhibit Connexin 43 Expression. Neurotherapeutics. 2020;17(1):340-355. doi:10.1007/s13311-019-00784-7(IF:5.552)
[60] Lei B, Liu J, Yao Z, et al. NF-κB-Induced Upregulation of miR-146a-5p Promoted Hippocampal Neuronal Oxidative Stress and Pyroptosis via TIGAR in a Model of Alzheimer's Disease. Front Cell Neurosci. 2021;15:653881. Published 2021 Apr 16. doi:10.3389/fncel.2021.653881(IF:5.505)
[61] Hsueh CY, Huang Q, Gong H, et al. A positive feed-forward loop between Fusobacteriumnucleatum and ethanol metabolism reprogramming drives laryngeal cancer progression and metastasis. iScience. 2022;25(2):103829. Published 2022 Jan 30. doi:10.1016/j.isci.2022.103829(IF:5.458)
[62] Zhang S, Xing M, Chen G, Tong L, Zhang H, Du D. Up-regulation of miR-335 and miR-674-3p in the rostral ventrolateral medulla contributes to stress-induced hypertension. J Neurochem. 2022;161(5):387-404. doi:10.1111/jnc.15589(IF:5.372)
[63] Fan Z, Yang G, Zhang W, et al. Hypoxia blocks ferroptosis of hepatocellular carcinoma via suppression of METTL14 triggered YTHDF2-dependent silencing of SLC7A11. J Cell Mol Med. 2021;25(21):10197-10212. doi:10.1111/jcmm.16957(IF:5.310)
[64] Wang W, Li T, Chen Q, Deng B, Deng L, Zeng K. Transcription Factor CsWRKY65 Participates in the Establishment of Disease Resistance of Citrus Fruits to Penicillium digitatum. J Agric Food Chem. 2021;69(20):5671-5682. doi:10.1021/acs.jafc.1c01411(IF:5.279)
[65] Jin CL, Ye M, Song ZW, et al. Lysine Interacts with Frizzled7 to Activate β-Catenin in Satellite Cell-Participated Skeletal Muscle Growth. J Agric Food Chem. 2022;70(12):3745-3756. doi:10.1021/acs.jafc.2c01027(IF:5.279)
[66] Xia H, Shen Y, Hu R, et al. Methylation of MYBA1 is Associated with the Coloration in "Manicure Finger" Grape Skin. J Agric Food Chem. 2021;69(51):15649-15659. doi:10.1021/acs.jafc.1c04550(IF:5.279)
[67] Huang Y, Zheng W, Ji C, et al. Circular RNA circRPPH1 promotes breast cancer progression via circRPPH1-miR-512-5p-STAT1 axis. Cell Death Discov. 2021;7(1):376. Published 2021 Dec 6. doi:10.1038/s41420-021-00771-y(IF:5.241)
[68] Wang X, Song H, Fang L, Wu T. EIF4A3-mediated circPRKCI expression promotes triple-negative breast cancer progression by regulating WBP2 and PI3K/AKT signaling pathway. Cell Death Discov. 2022;8(1):92. Published 2022 Mar 2. doi:10.1038/s41420-022-00892-y(IF:5.241)
[69] Chen H, Luo J, Chen S, et al. Non-drug efflux function of ABCC5 promotes enzalutamide resistance in castration-resistant prostate cancer via upregulation of P65/AR-V7. Cell Death Discov. 2022;8(1):241. Published 2022 May 3. doi:10.1038/s41420-022-00951-4(IF:5.241)
[70] Du XF, Cui HT, Pan HH, et al. Role of the miR-133a-5p/FBXO6 axis in the regulation of intervertebral disc degeneration. J Orthop Translat. 2021;29:123-133. Published 2021 Jun 19. doi:10.1016/j.jot.2021.05.004(IF:5.191)
[71] Zhou Y, Zheng R, Liu S, et al. Host E3 ligase HUWE1 attenuates the proapoptotic activity of the MERS-CoV accessory protein ORF3 by promoting its ubiquitin-dependent degradation. J Biol Chem. 2022;298(2):101584. doi:10.1016/j.jbc.2022.101584(IF:5.157)
[72] Chen S, Deng Y, Chen H, et al. Neuronal miR-138 Represses HSV-2 Lytic Infection by Regulating Viral and Host Genes with Mechanistic Differences from HSV-1. J Virol. 2022;96(9):e0034922. doi:10.1128/jvi.00349-22(IF:5.103)
[73] Wang D, Li Y, Liu Y, et al. NPM1 promotes cell proliferation by targeting PRDX6 in colorectal cancer. Int J Biochem Cell Biol. 2022;147:106233. doi:10.1016/j.biocel.2022.106233(IF:5.085)
[74] Deng Z, Zheng L, Xie X, Wei H, Peng J. GPA peptide enhances Nur77 expression in intestinal epithelial cells to exert a protective effect against DSS-induced colitis. FASEB J. 2020;34(11):15364-15378. doi:10.1096/fj.202000391RR(IF:4.966)
[75] Huang X, Sun L, Wen S, et al. RNA sequencing of plasma exosomes revealed novel functional long noncoding RNAs in hepatocellular carcinoma. Cancer Sci. 2020;111(9):3338-3349. doi:10.1111/cas.14516(IF:4.966)
[76] Wang X, Yao Z, Fang L. miR-22-3p/PGC1β Suppresses Breast Cancer Cell Tumorigenesis via PPARγ. PPAR Res. 2021;2021:6661828. Published 2021 Mar 12. doi:10.1155/2021/6661828(IF:4.964)
[77] Yu MC, Ding GY, Ma P, et al. CircRNA UBAP2 serves as a sponge of miR-1294 to increase tumorigenesis in hepatocellular carcinoma through regulating c-Myc expression. Carcinogenesis. 2021;42(10):1293-1303. doi:10.1093/carcin/bgab068(IF:4.944)
[78] Wang Q, Ren D, Bi Y, et al. Association and functional study between ADIPOQ and metabolic syndrome in elderly Chinese Han population. Aging (Albany NY). 2020;12(24):25819-25827. doi:10.18632/aging.104203(IF:4.831)
[79] Yuan J, Li X, Zhang G, et al. USP39 mediates p21-dependent proliferation and neoplasia of colon cancer cells by regulating the p53/p21/CDC2/cyclin B1 axis. Mol Carcinog. 2021;60(4):265-278. doi:10.1002/mc.23290(IF:4.784)
[80] Tang Y, Wang L, Qu Z, et al. BSISTER transcription factors directly binds to the promoter of IAA19 and IAA29 genes to up-regulate gene expression and promote the root development. Plant Sci. 2022;321:111324. doi:10.1016/j.plantsci.2022.111324(IF:4.729)
[81] Li D, Liu B, Wang Z, et al. Sugar accumulation may be regulated by a transcriptional cascade of ABA-VvGRIP55-VvMYB15-VvSWEET15 in grape berries under root restriction. Plant Sci. 2022;322:111288. doi:10.1016/j.plantsci.2022.111288(IF:4.729)
[82] Gan Z, Yuan X, Shan N, et al. AcWRKY40 mediates ethylene biosynthesis during postharvest ripening in kiwifruit. Plant Sci. 2021;309:110948. doi:10.1016/j.plantsci.2021.110948(IF:4.729)
[83] Bai HL, Kang CM, Sun ZQ, et al. TTDA inhibited apoptosis by regulating the p53-Bax/Bcl2 axis in glioma. Exp Neurol. 2020;331:113380. doi:10.1016/j.expneurol.2020.113380(IF:4.691)
[84] Zhang H, Hu Y, Gu B, Cui X, Zhang J. VaMYB44 transcription factor from Chinese wild Vitis amurensis negatively regulates cold tolerance in transgenic Arabidopsis thaliana and V. vinifera. Plant Cell Rep. 2022;41(8):1673-1691. doi:10.1007/s00299-022-02883-w(IF:4.570)
[85] Sun W, Zu S, Shao G, Wang W, Gong F. Long non-coding DANCR targets miR-185-5p to upregulate LIM and SH3 protein 1 promoting prostate cancer via the FAK/PI3K/AKT/GSK3β/snail pathway. J Gene Med. 2021;23(7):e3344. doi:10.1002/jgm.3344(IF:4.565)
[86] Luo SY, Wang JQ, Liu C, et al. Hif-1α/Hsf1/Hsp70 signaling pathway regulates redox homeostasis and apoptosis in large yellow croaker ( Larimichthys crocea) under environmental hypoxia. Zool Res. 2021;42(6):746-760. doi:10.24272/j.issn.2095-8137.2021.224(IF:4.560)
[87] Liu J, Zhu M, Tang Q. Human umbilical cord mesenchymal stem cells-derived exosomal microRNA-181a retards nasopharyngeal carcinoma development by mediating KDM5C. J Cancer Res Clin Oncol. 2021;147(10):2867-2877. doi:10.1007/s00432-021-03684-6(IF:4.553)
[88] Huang Y, Wan S, Yang M. Circ_0067680 expedites the osteogenic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells through miR-4429/CTNNB1/Wnt/β-catenin pathway. Biol Direct. 2021;16(1):16. Published 2021 Oct 14. doi:10.1186/s13062-021-00302-w(IF:4.540)
[89] Wang B, Cai Y, Li X, Kong Y, Fu H, Zhou J. ETV4 mediated lncRNA C2CD4D-AS1 overexpression contributes to the malignant phenotype of lung adenocarcinoma cells via miR-3681-3p/NEK2 axis. Cell Cycle. 2021;20(24):2607-2618. doi:10.1080/15384101.2021.2005273(IF:4.534)
[90] Geng S, Tu S, Fu W, Wang J, Bai Z. LncRNA PITPNA-AS1 stimulates cell proliferation and suppresses cell apoptosis in glioblastoma via targeting miR-223-3p/EGFR axis and activating PI3K/AKT signaling pathway. Cell Cycle. 2021;20(19):1988-1998. doi:10.1080/15384101.2021.1958503(IF:4.534)
[91] Ma X, Li C, Yuan Y, Zhao M, Li J. Xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase genes LcXTH4/7/19 are involved in fruitlet abscission and are activated by LcEIL2/3 in litchi. Physiol Plant. 2021;173(3):1136-1146. doi:10.1111/ppl.13509(IF:4.500)
[92] Zhang L, Ouyang P, He G, et al. Exosomes from microRNA-126 overexpressing mesenchymal stem cells promote angiogenesis by targeting the PIK3R2-mediated PI3K/Akt signalling pathway. J Cell Mol Med. 2021;25(4):2148-2162. doi:10.1111/jcmm.16192(IF:4.486)
[93] Chen N, Ma B, Guo S, Yin B, Zhang J, Deng G. microRNA-196b alleviates lipopolysaccharide-induced inflammatory injury by targeting NRAS. Mol Immunol. 2022;147:10-20. doi:10.1016/j.molimm.2022.03.122(IF:4.407)
[94] Zhang Y, Wang X, Huang X, et al. Transcriptome sequencing profiling identifies miRNA-331-3p as an osteoblast-specific miRNA in infected bone nonunion. Bone. 2021;143:115619. doi:10.1016/j.bone.2020.115619(IF:4.398)
[95] Zhou YM, Yao YL, Liu W, Shen XM, Shi LJ, Wu L. MicroRNA-134 inhibits tumor stem cell migration and invasion in oral squamous cell carcinomas via downregulation of PI3K-Akt signaling pathway by inhibiting LAMC2 expression. Cancer Biomark. 2020;29(1):51-67. doi:10.3233/CBM-191362(IF:4.388)
[96] Ma Y, Luo Q, Ou Y, et al. New insights into the proteins interacting with the promoters of silkworm fibroin genes. Sci Rep. 2021;11(1):15880. Published 2021 Aug 5. doi:10.1038/s41598-021-95400-0(IF:4.380)
[97] Zhu M, Li X, Sun R, et al. The C/EBPβ-Dependent Induction of TFDP2 Facilitates Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Proliferation. Virol Sin. 2021;36(6):1341-1351. doi:10.1007/s12250-021-00403-w(IF:4.327)
[98] Yin Q, Wang J, Fu Q, Gu S, Rui Y. CircRUNX2 through has-miR-203 regulates RUNX2 to prevent osteoporosis. J Cell Mol Med. 2018;22(12):6112-6121. doi:10.1111/jcmm.13888(IF:4.302)
[99] Gao L, Liu J, Xu P, et al. AKT Inhibitor SC66 Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis in Human Glioblastoma Through Down-Regulating AKT/β-Catenin Pathway. Front Pharmacol. 2020;11:1102. Published 2020 Jul 31. doi:10.3389/fphar.2020.01102(IF:4.225)
[100] Shan N, Zhang Y, Xu Y, et al. Ethylene-induced potassium transporter AcKUP2 gene is involved in kiwifruit postharvest ripening. BMC Plant Biol. 2022;22(1):108. Published 2022 Mar 9. doi:10.1186/s12870-022-03498-9(IF:4.215)
[101] Cao Y, Bi M, Yang P, et al. Construction of yeast one-hybrid library and screening of transcription factors regulating LhMYBSPLATTER expression in Asiatic hybrid lilies (Lilium spp.). BMC Plant Biol. 2021;21(1):563. Published 2021 Nov 29. doi:10.1186/s12870-021-03347-1(IF:4.215)
[102] Ma J, Zhang X, Zhang H, Chen H. lncRNA MEG3 Suppresses the Progression of Ankylosis Spondylitis by Regulating the Let-7i/SOST Axis. Front Mol Biosci. 2020;7:173. Published 2020 Jul 24. doi:10.3389/fmolb.2020.00173(IF:4.188)
[103] Anwar M, Yu W, Yao H, Zhou P, Allan AC, Zeng L. NtMYB3, an R2R3-MYB from Narcissus, Regulates Flavonoid Biosynthesis. Int J Mol Sci. 2019;20(21):5456. Published 2019 Nov 1. doi:10.3390/ijms20215456(IF:4.183)
[104] Xu W, Chen B, Ke D, Chen X. MicroRNA-138-5p targets the NFIB-Snail1 axis to inhibit colorectal cancer cell migration and chemoresistance [published correction appears in Cancer Cell Int. 2020 Nov 3;20(1):533]. Cancer Cell Int. 2020;20:475. Published 2020 Oct 1. doi:10.1186/s12935-020-01573-5(IF:4.175)
[105] Tian C, Hu S, Yu J, Li W, Li P, Huang H. CREB1 transcription-activated lncRNA PVT1 promotes cardiac fibrosis via miR-145/HCN1 axis. Int J Cardiol. 2022;353:88-95. doi:10.1016/j.ijcard.2022.01.024(IF:4.164)
[106] Zhou Y, Zhu Y, Dong X, et al. Exosomes Derived from Pancreatic Cancer Cells Induce Osteoclast Differentiation Through the miR125a-5p/TNFRSF1B Pathway. Onco Targets Ther. 2021;14:2727-2739. Published 2021 Apr 19. doi:10.2147/OTT.S282319(IF:4.147)
[107] Zhu Y, Li P, Dan X, Kang X, Ma Y, Shi Y. miR-377 Inhibits Proliferation and Differentiation of Bovine Skeletal Muscle Satellite Cells by Targeting FHL2. Genes (Basel). 2022;13(6):947. Published 2022 May 26. doi:10.3390/genes13060947(IF:4.096)
[108] Bu X, Zhao Y, Chang M, Ge X. Downregulation of lncRNA SNHG14 alleviates neurons injury by modulating the miR-181c-5p/BMF axis in ischemic stroke. Brain Res Bull. 2021;174:379-388. doi:10.1016/j.brainresbull.2021.06.026(IF:4.079)
[109] Guo H, Jiang Y, Gu Z, et al. ZFP36 protects against oxygen-glucose deprivation/reoxygenation-induced mitochondrial fragmentation and neuronal apoptosis through inhibiting NOX4-DRP1 pathway. Brain Res Bull. 2022;179:57-67. doi:10.1016/j.brainresbull.2021.12.003(IF:4.079)
[110] Yang L, Liu Z, Ma J, et al. CircRPPH1 serves as a sponge for miR-296-5p to enhance progression of breast cancer by regulating FOXP4 expression. Am J Transl Res. 2021;13(7):7556-7573. Published 2021 Jul 15. (IF:4.060)
[111] Gao G, Li X, Zhang J, Yu H. YY1 as a promoter regulating the circ_0001946/miR-671-5p/EGFR axis to promote chemotherapy resistance in breast cancer cells. Am J Transl Res. 2022;14(4):2550-2566. Published 2022 Apr 15. (IF:4.060)
[112] Xiao E, Zhang D, Zhan W, et al. circNFIX facilitates hepatocellular carcinoma progression by targeting miR-3064-5p/HMGA2 to enhance glutaminolysis. Am J Transl Res. 2021;13(8):8697-8710. Published 2021 Aug 15. (IF:4.060)
[113] Wang H, Song X, Song C, Wang X, Cao H. m6A-seq analysis of microRNAs reveals that the N6-methyladenosine modification of miR-21-5p affects its target expression. Arch Biochem Biophys. 2021;711:109023. doi:10.1016/j.abb.2021.109023(IF:4.013)
[114] Huang Y, Wu P, Zheng J, Qiu L. Identification of cis-acting elements in response to fenvalerate in the CYP6B7 promoter of Helicoverpa armigera. Pestic Biochem Physiol. 2022;183:105060. doi:10.1016/j.pestbp.2022.105060(IF:3.963)
[115] Li X, Wang N, She W, et al. Identification and Functional Analysis of the CgNAC043 Gene Involved in Lignin Synthesis from Citrusgrandis "San Hong". Plants (Basel). 2022;11(3):403. Published 2022 Jan 31. doi:10.3390/plants11030403(IF:3.935)
[116] Wu Y, Zhang M, Bi X, Hao L, Liu R, Zhang H. JPR1 mediated circ_0004018 suppresses angiogenesis in hepatocellular carcinoma via recruiting FUS and stabilizing TIMP2 expression. Exp Cell Res. 2021;408(2):112804. doi:10.1016/j.yexcr.2021.112804(IF:3.905)
[117] Luo E, Wang D, Yan G, et al. The NF-κB/miR-425-5p/MCT4 axis: A novel insight into diabetes-induced endothelial dysfunction. Mol Cell Endocrinol. 2020;500:110641. doi:10.1016/j.mce.2019.110641(IF:3.693)
[118] Zhang C, Wang Q, Liu AQ, et al. MicroRNA miR-155 inhibits cyprinid herpesvirus 3 replication via regulating AMPK-MAVS-IFN axis. Dev Comp Immunol. 2022;129:104335. doi:10.1016/j.dci.2021.104335(IF:3.636)
[119] Zhang G, Li G, Xiang Y, Zhang A. The transcription factor ZmMYB-CC10 improves drought tolerance by activating ZmAPX4 expression in maize. Biochem Biophys Res Commun. 2022;604:1-7. doi:10.1016/j.bbrc.2022.02.051(IF:3.575)
[120] Han T, Yan J, Xiang Y, Zhang A. Phosphorylation of ZmNAC84 at Ser-113 enhances the drought tolerance by directly modulating ZmSOD2 expression in maize. Biochem Biophys Res Commun. 2021;567:86-91. doi:10.1016/j.bbrc.2021.06.026(IF:3.575)
[121] Jiang H, Guo W, Yuan S, Song L. PLOD1 Is a Prognostic Biomarker and Mediator of Proliferation and Invasion in Osteosarcoma. Biomed Res Int. 2020;2020:3418398. Published 2020 Oct 19. doi:10.1155/2020/3418398(IF:3.411)
[122] Li Z, Chen Z, Feng Y, Hu G, Jiang Y. CircMMP11 acts as a ce-circRNA in breast cancer progression by regulating miR-1204. Am J Transl Res. 2020;12(6):2585-2599. Published 2020 Jun 15. (IF:3.375)
[123] Ma H, Liu T, Xu Y, Wang X, Wang J, Liu X. MiR-519d and miR-328-3p Combinatorially Suppress Breast Cancer Progression. Onco Targets Ther. 2020;13:12987-12997. Published 2020 Dec 18. doi:10.2147/OTT.S281962(IF:3.337)
[124] Chu P, He L, Zhu D, et al. Identification, expression and functional characterisation of CYP1A in grass carp (Ctenopharyngodon idella). Fish Shellfish Immunol. 2019;95:35-43. doi:10.1016/j.fsi.2019.10.022(IF:3.298)
[125] Yin D, Shao Y, Yang K, et al. Fowl adenovirus serotype 4 uses gga-miR-181a-5p expression to facilitate viral replication via targeting of STING. Vet Microbiol. 2021;263:109276. doi:10.1016/j.vetmic.2021.109276(IF:3.293)
[126] Abudurexiti M, Zhu W, Wang Y, et al. Targeting CPT1B as a potential therapeutic strategy in castration-resistant and enzalutamide-resistant prostate cancer. Prostate. 2020;80(12):950-961. doi:10.1002/pros.24027(IF:3.279)
[127] Meng J, Song X, Yan G, Wang H, Li H, Lou D. Dendrobine suppresses endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis through upregulating microRNA miR-381-3p to decrease caspase-4. Bioengineered. 2021;12(1):4452-4463. doi:10.1080/21655979.2021.1956672(IF:3.269)
[128] Zhou Y, Pan A, Zhang Y, Li X. Hsa_circ_0039569 facilitates the progression of endometrial carcinoma by targeting the miR-197/high mobility group protein A1 axis. Bioengineered. 2022;13(2):4212-4225. doi:10.1080/21655979.2022.2027060(IF:3.269)
[129] Zhang Y, Yu Y, Cao X, Chen P. Role of lncRNA FAM83H antisense RNA1 (FAM83H-AS1) in the progression of non-small cell lung cancer by regulating the miR-545-3p/heparan sulfate 6-O-sulfotransferase (HS6ST2) axis. Bioengineered. 2022;13(3):6476-6489. doi:10.1080/21655979.2022.2031668(IF:3.269)
[130] Wu W, Wang L, Li S. Hox transcript antisense RNA knockdown inhibits osteosarcoma progression by regulating the phosphoinositide 3-kinase/AKT pathway through the microRNA miR-6888-3p/spleen tyrosine kinase axis. Bioengineered. 2022;13(4):9397-9410. doi:10.1080/21655979.2022.2059614(IF:3.269)
[131] Ge Z, Liu H, Ji T, et al. Long non-coding RNA 00960 promoted the aggressiveness of lung adenocarcinoma via the miR-124a/SphK1 axis. Bioengineered. 2022;13(1):1276-1287. doi:10.1080/21655979.2021.1996507(IF:3.269)
[132] Hao W, Lin F, Shi H, Guan Z, Jiang Y. Long non-coding RNA OIP5-AS1 regulates smoke-related chronic obstructive pulmonary disease via targeting micro RNA -410-3p/IL-13. Bioengineered. 2021;12(2):11664-11676. doi:10.1080/21655979.2021.2000199(IF:3.269)
[133] Shuang Y, Liu J, Niu J, Guo W, Li C. A novel circular RNA circPPFIA1 promotes laryngeal squamous cell carcinoma progression through sponging miR-340-3p and regulating ELK1 expression. Bioengineered. 2021;12(1):5220-5230. doi:10.1080/21655979.2021.1959866(IF:3.269)
[134] Zhou H, Jia X, Yang F, Shi P. miR-148a-3p suppresses the progression of acute myeloid leukemia via targeting cyclin-dependent kinase 6 (CDK6). Bioengineered. 2021;12(1):4508-4519. doi:10.1080/21655979.2021.1956400(IF:3.269)
[135] Mao K, Jin R, Ren Z, et al. miRNAs targeting CYP6ER1 and CarE1 are involved in nitenpyram resistance in Nilaparvata lugens. Insect Sci. 2022;29(1):177-187. doi:10.1111/1744-7917.12910(IF:3.262)
[136] Zhang W, Qin P, Gong X, et al. Identification of circRNAs in the Liver of Whitespotted Bamboo Shark (Chiloscyllium plagiosum). Front Genet. 2020;11:596308. Published 2020 Dec 11. doi:10.3389/fgene.2020.596308(IF:3.260)
[137] Xie D, Li S, Wu T, Wang X, Fang L. MiR-181c suppresses triple-negative breast cancer tumorigenesis by targeting MAP4K4. Pathol Res Pract. 2022;230:153763. doi:10.1016/j.prp.2022.153763(IF:3.250)
[138] Jia A, Yang ZW, Shi JY, Liu JM, Zhang K, Cui YF. MiR-325-3p Alleviates Acute Pancreatitis via Targeting RIPK3 [published online ahead of print, 2022 Jan 30]. Dig Dis Sci. 2022;10.1007/s10620-021-07322-6. doi:10.1007/s10620-021-07322-6(IF:3.199)
[139] Li M, Noshay JM, Dong X, Springer NM, Li Q. A capture-based assay for detection and characterization of transposon polymorphisms in maize [published online ahead of print, 2021 Apr 26]. G3 (Bethesda). 2021;11(7):jkab138. doi:10.1093/g3journal/jkab138(IF:3.154)
[140] Wu W, Duan C, Lv H, et al. MiR-let-7d-3p inhibits granulosa cell proliferation by targeting TLR4 in polycystic ovary syndrome. Reprod Toxicol. 2021;106:61-68. doi:10.1016/j.reprotox.2021.10.003(IF:3.143)
[141] Yu L, Ren Y. Long Noncoding RNA Small Nucleolar RNA Host Gene 3 Mediates Prostate Cancer Migration, Invasion, and Epithelial-Mesenchymal Transition by Sponging miR-487a-3p to Regulate TRIM25 [published online ahead of print, 2021 Jan 7]. Cancer Biother Radiopharm. 2021;10.1089/cbr.2020.3988. doi:10.1089/cbr.2020.3988(IF:3.099)
[142] Ye M, Ma J, Liu B, Liu X, Ma D, Dong K. Linc01105 acts as an oncogene in the development of neuroblastoma [published correction appears in Oncol Rep. 2021 Sep;46(3):]. Oncol Rep. 2019;42(4):1527-1538. doi:10.3892/or.2019.7257(IF:3.041)
[143] Huo W, Wang Y, Chen T, et al. Triclosan activates c-Jun/miR-218-1-3p/SLC35C1 signaling to regulate cell viability, migration, invasion and inflammatory response of trophoblast cells in vitro. BMC Pregnancy Childbirth. 2022;22(1):470. Published 2022 Jun 6. doi:10.1186/s12884-022-04791-z(IF:3.007)
[144] Dong L, Wang M, Gao X, et al. miR-9-5p promotes myogenic differentiation via the Dlx3/Myf5 axis. PeerJ. 2022;10:e13360. Published 2022 May 3. doi:10.7717/peerj.13360(IF:2.984)
[145] Chen J, Shi P, Zhang J, et al. CircRNA_0044556 diminishes the sensitivity of triple‑negative breast cancer cells to adriamycin by sponging miR‑145 and regulating NRAS. Mol Med Rep. 2022;25(2):51. doi:10.3892/mmr.2021.12567(IF:2.952)
[146] Ding X, Deng G, Liu J, et al. GOLM1 silencing inhibits the proliferation and motility of human glioblastoma cells via the Wnt/β-catenin signaling pathway. Brain Res. 2019;1717:117-126. doi:10.1016/j.brainres.2019.03.035(IF:2.929)
[147] Yang F, Chen R. Loss of PHLDA1 has a protective role in OGD/R-injured neurons via regulation of the GSK-3β/Nrf2 pathway. Hum Exp Toxicol. 2021;40(11):1909-1920. doi:10.1177/09603271211014596(IF:2.903)
[148] Wang L, Zhang L, Wang L. SNHG7 Contributes to the Progression of Non-Small-Cell Lung Cancer via the SNHG7/miR-181a-5p/E2F7 Axis. Cancer Manag Res. 2020;12:3211-3222. Published 2020 May 7. doi:10.2147/CMAR.S240964(IF:2.886)
[149] Tian Y, Guan Y, Su Y, Luo W, Yang G, Zhang Y. MiR-582-5p Inhibits Bladder Cancer-Genesis by Suppressing TTK Expression. Cancer Manag Res. 2020;12:11933-11944. Published 2020 Nov 20. doi:10.2147/CMAR.S274835(IF:2.886)
[150] Xia L, Shen D, Wang H, Ren L, Chen Y, Li G. Identification of Small-Molecule Regulators of Testicular Receptor 4 via a Drug Repurposing Screening. ACS Omega. 2020;5(47):30625-30632. Published 2020 Nov 19. doi:10.1021/acsomega.0c04623(IF:2.870)
[151] Cao Y, Zhang F, Wang H, et al. LncRNA MALAT1 mediates doxorubicin resistance of hepatocellular carcinoma by regulating miR-3129-5p/Nova1 axis. Mol Cell Biochem. 2021;476(1):279-292. doi:10.1007/s11010-020-03904-6(IF:2.795)
[152] Ding X, Sun J, Zhang X. Circ_0076305 facilitates prostate cancer development via sponging miR-411-5p and regulating PGK1. Andrologia. 2022;54(6):e14406. doi:10.1111/and.14406(IF:2.775)
[153] Yang F, Chen R. Sestrin1 exerts a cytoprotective role against oxygen-glucose deprivation/reoxygenation-induced neuronal injury by potentiating Nrf2 activation via the modulation of Keap1. Brain Res. 2021;1750:147165. doi:10.1016/j.brainres.2020.147165(IF:2.733)
[154] Zhang Z. MiR-124-3p Suppresses Prostatic Carcinoma by Targeting PTGS2 Through the AKT/NF-κB Pathway. Mol Biotechnol. 2021;63(7):621-630. doi:10.1007/s12033-021-00326-7(IF:2.695)
[155] Jin S, He J, Li J, Guo R, Shu Y, Liu P. MiR-873 inhibition enhances gefitinib resistance in non-small cell lung cancer cells by targeting glioma-associated oncogene homolog 1. Thorac Cancer. 2018;9(10):1262-1270. doi:10.1111/1759-7714.12830(IF:2.569)
[156] Zhang J, Xu X, Wang M. Clinical significance of serum miR-101-3p expression in patients with neonatal sepsis. Per Med. 2021;18(6):541-550. doi:10.2217/pme-2020-0182(IF:2.512)
[157] Shi Z, He J, He J, Xu Y. Micro-fragmented adipose tissue regulated the biological functions of osteoarthritis synoviocytes by upregulating MiR-92a-3p expression. Tissue Cell. 2022;74:101716. doi:10.1016/j.tice.2021.101716(IF:2.466)
[158] Huang J, Qin Y, Lin C, Huang X, Zhang F. MTHFD2 facilitates breast cancer cell proliferation via the AKT signaling pathway. Exp Ther Med. 2021;22(1):703. doi:10.3892/etm.2021.10135(IF:2.447)
[159] Shi F, Yang Q, Shen D, Chen J. CircRNA WHSC1 promotes non-small cell lung cancer progression via sponging microRNA-296-3p and up-regulating expression of AKT serine/threonine kinase 3. J Clin Lab Anal. 2021;35(8):e23865. doi:10.1002/jcla.23865(IF:2.352)
[160] Wang K, Li M, Zhang T, Xu C, Yu F, Duan H. LINC01116 Facilitates Melanoma 1 Progression Via Sequestering miR-3612 and Up-regulating GDF11 and SDC3. Arch Med Res. 2022;53(1):44-50. doi:10.1016/j.arcmed.2021.06.008(IF:2.235)
[161] Wang L, Zhang J. Long intergenic ncRNA 00473 improves the invasion of trophoblastic cells via miR-16-5p. Pregnancy Hypertens. 2021;23:174-184. doi:10.1016/j.preghy.2020.12.003(IF:2.095)
[162] Li K, Zhou Z, Li J, Xiang R. miR-146b Functions as an Oncogene in Oral Squamous Cell Carcinoma by Targeting HBP1. Technol Cancer Res Treat. 2020;19:1533033820959404. doi:10.1177/1533033820959404(IF:2.074)
[163] Xu W, Sun D, Wang Y, et al. Inhibitory effect of microRNA-608 on lung cancer cell proliferation, migration, and invasion by targeting BRD4 through the JAK2/STAT3 pathway. Bosn J Basic Med Sci. 2020;20(3):347-356. Published 2020 Aug 3. doi:10.17305/bjbms.2019.4216(IF:2.050)
[164] Li Y, Liu L. LncRNA OIP5-AS1 Signatures as a Biomarker of Gestational Diabetes Mellitus and a Regulator on Trophoblast Cells. Gynecol Obstet Invest. 2021;86(6):509-517. doi:10.1159/000520340(IF:2.031)
[165] Li Y, Liu Y, Zhang J, Li J, Shu Y. Propofol Suppresses Glioma Tumorigenesis by Regulating circ_0047688/miR-516b-5p/IFI30 Axis [published online ahead of print, 2022 Jun 28]. Biochem Genet. 2022;10.1007/s10528-022-10243-2. doi:10.1007/s10528-022-10243-2(IF:1.890)
[166] Zheng Q, Yu JJ, Li C, Li J, Wang J, Wang S. miR-224 targets BTRC and promotes cell migration and invasion in colorectal cancer. 3 Biotech. 2020;10(11):485. doi:10.1007/s13205-020-02477-x(IF:1.798)
[167] Chen Y, Niu K, Song Q, Feng Q. Effect of G-quadruplex loop mutations on the G-quadruplex formation, protein binding and transcription of BmPOUM2 in Bombyx mori. Arch Insect Biochem Physiol. 2022;110(1):e21876. doi:10.1002/arch.21876(IF:1.698)
[168] Wang Z, Chen R, Xu Z, et al. MiR-155-5p promotes renal interstitial fibrosis in obstructive nephropathy via inhibiting SIRT1 signaling pathway. J Recept Signal Transduct Res. 2021;41(5):466-475. doi:10.1080/10799893.2020.1825491(IF:1.466)
[169] Zhou Y, Zhang F, Xu F, et al. lncRNA NEAT1 regulates CYP1A2 and influences steroid-induced necrosis. Open Life Sci. 2021;16(1):969-980. Published 2021 Sep 13. doi:10.1515/biol-2021-0097(IF:0.938)

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039M)

Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂

产品编号: RG039M

产品包装:1000次
选择包装

100次 1000次

说明书下载

2858.00 10

价格: ¥ 2858.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG039S Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂 100次 488.00元
RG039M Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂 1000次 2858.00元

碧云天生产的Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Bac-Lumi™ Bacterial Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit,Bac-Lumi™ Bacterial Firefly Luciferase Assay Kit),是一种无需收集和裂解细菌,可以在96孔板等多孔板中通过化学发光法直接测定细菌内萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的超高灵敏度、高信号稳定性的一步法检测试剂盒。

本产品检测灵敏度高。用于LB培养的表达萤火虫萤光素酶的大肠杆菌进行检测,100微升空白LB培养基的信号值为5×103左右,100微升IPTG诱导表达萤火虫萤光素酶3小时的大肠杆菌菌液的信号值实测可达约4.5×109,用LB培养基1:1稀释的菌液信号值为2.2×109,信号值高达空白LB培养基信号值的约4.5×105倍,具有超高的检测灵敏度和发光强度(参考图1A)。实测效果可能会因表达菌株的种类、萤火虫萤光素酶突变体的种类、检测环境等的不同有所差异。

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039M)

图1. Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒对表达萤火虫萤光素酶的大肠杆菌菌液的检测效果。挑取表达萤火虫萤光素酶的单克隆细菌于5ml LB中,37℃培养4小时,加入IPTG,37℃诱导3小时,取菌液进行萤火虫萤光素酶活性检测。图中Sample(1:1)为用LB培养基1:1稀释的菌液。图A为菌液的化学发光强度的检测效果图,图B为菌液的化学发光稳定性的检测效果图。实际读数会因突变体、所用菌株、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本试剂盒操作便捷、读数稳定、10分钟内就可以完成检测。本产品的使用简单快捷,无需收集菌体,也无需更换或去除培养液,只需把试剂盒提供的Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂与培养的菌液等体积混合,反应5分钟后即可进行化学发光检测。并且产生的化学发光信号相对比较稳定,在反应开始后的30分钟内,信号下降通常不超过40%,其信号半衰期随菌株、突变体和培养基等的不同而有所差异(参考图1B)。使用可以测定96孔板的化学发光的多功能酶标仪通常在2分钟内就可以完成一块96孔板的检测。另外,本产品也可以用于裂解保存的细菌样品中萤火虫萤光素酶活性的检测[1]。

本产品稳定性好。Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂稳定性非常好,反复冻融5次对检测效果无明显影响,反复冻融10次检测效果下降不超过10%。本产品4℃条件下,保存3天检测效果下降不超过10%,保存7天检测效果下降不超过30%。室温保存1天可保留70%以上的检测效果,室温保存3天可保留50%以上的检测效果,37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。本产品即使仅保留约50%的检测效果,仍可以满足各种常规检测。

本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量检测(high-throughput screening)。本产品不仅可以与培养的菌液等体积加入到96孔板中进行直接检测,也可以用于裂解并收集保存的细菌样品的萤火虫萤光素酶活性的检测。

萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出波长为560nm左右的生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测萤火虫萤光素酶的表达[2]。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞或细菌,用适当药物等处理细胞或细菌后裂解细胞或细菌,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物等处理对目的基因的转录调控作用[3]。本试剂盒的检测原理参考图2。

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039M)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

对于96孔板,推荐使用100μl菌液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板,推荐使用25μl菌液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但菌液和检测试剂体积的比例须为1:1。虽然我们有检测数据显示适当减少检测试剂的用量很可能仍然会得到较好的检测结果,但对于细菌数量偏多、细菌数量特别少或者重复性要求比较高的情况,建议按照推荐用量进行检测。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG039S Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂 10ml
RG039M Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂 100ml
说明书 1份

保存条件:

-80℃避光保存,至少一年有效;-20℃避光保存,推荐3-6个月内使用。

注意事项:

本产品在-20℃保存其检测效果会逐渐下降,保存半年后其发光效果会降低约50%。因此,本产品如果保存于-20℃,推荐在3-6个月内使用。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细菌菌液和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将检测试剂在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后使用。

尽管经测试本试剂反复冻融5次对于检测效果无显著影响,为保证本产品的稳定性、取得良好的使用效果,第一次解冻后可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。

请使用适合于细菌培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。

待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细菌培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 表达萤火虫萤光素酶菌液的准备:
使用适合进行化学发光检测的白色或黑色96孔板,每孔加入100μl表达萤火虫萤光素酶的菌液(如使用384孔板,每孔接种25μl菌液,具体用量视不同类型的384孔板而定),同时设置不含萤火虫萤光素酶的细菌培养液孔作为阴性对照。
2. 检测试剂的准备:
融解冻存的Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂,按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量,取适量Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂,平衡至室温。
3. 萤光素酶检测:
a. 将待检测的多孔板充分平衡至室温。
b. 96孔板每孔加入100μl Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(384孔板每孔25μl)。
c. 使用有震动混匀功能的酶标仪或多孔板震荡混合仪等设备振荡混匀,室温(约25℃)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。
d. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

常见问题:
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

参考文献::
1. Waidmann MS, Bleichrodt FS, Laslo T, Riedel CU. Bioeng Bugs. 2011. 2(1):8-16.
2. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
3. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.
相关产品:

产品编号 产品名称 包装
RG039S 细菌萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次
RG039M 细菌萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次
FCP966-80pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP966-320pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱
FCP968-80pcs BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP968-320pcs BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039M)
Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039M)

物质安全数据单

下载

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039M)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
报告基因相关

使用本产品的文献:

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)

产品编号: RG010M

产品包装:1000次
选择包装

100次 1000次

说明书下载

2268.00 10

价格: ¥ 2268.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG010S 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 100次 478.00元
RG010M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 1000次 2268.00元

碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (Enhanced Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit II),是一种以萤光素(luciferin)为底物高灵敏度检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。

本产品是萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG009)的不同包装版本,两者的检测效果完全一致。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒,即RG009为即用型液体,其优点是无需配制即可直接使用,但需要-80℃保存,如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品,即RG010,为RG009的冻干粉版本,优点是在-20℃保存非常稳定,缺点是使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。

本产品的性能达到国外主要同类产品同等水平。本产品的性能和用途与Promega公司的Luciferase Assay System基本相同。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1,本产品的发光强度与国外同类产品(Competitor P)相近或略优(图1A),发光信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致(图1B)。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)

图1. 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)的检测效果对比图。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)与碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)的检测效果完全一致。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为化学发光强度的检测效果对比图,图B为化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品,本产品的发光强度可以达到甚至略优于国外同类产品(图1A),特别适用于Firefly luciferase表达水平低的样品检测。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平较高,或者样品数量较多、对发光信号的稳定性要求较高,也可以使用发光强度和灵敏度稍低,但发光信号更稳定的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006/RG007)。

本产品操作简单,检测速度快,从样品制备到完成检测仅需约20分钟。只需用试剂盒提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II,再取100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且发光信号比较稳定,信号半衰期约10分钟。

本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存,配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性非常好,反复冻融5次对检测效果无明显影响,反复冻融10次检测效果下降不超过10%。萤火虫萤光素酶检测试剂II在4℃条件下,保存3天检测效果下降不超过20%,保存5天检测效果下降不超过30%,保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果,室温保存3天可保留60%以上的检测效果,37 ℃保存1天可保留50%以上的检测效果。萤火虫萤光素酶检测试剂II即使仅保留约50%的检测效果,仍可以满足各种常规检测的要求。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中,会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[1]。本试剂盒的检测原理参考图2。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用[2]。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择,请参考碧云天的相关网页:
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm)。

本试剂盒RG010S和RG010M分别可以测定100个和1000个样品。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
RG010S-1 报告基因细胞裂解液 60ml
RG010S-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG010S-3 萤火虫萤光素酶底物 1瓶
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
RG010M-1 报告基因细胞裂解液 RG010S-1×10
RG010M-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 RG010S-2×10
RG010M-3 萤火虫萤光素酶底物 RG010S-3×10
说明书 1份
保存条件:

-20℃避光保存,至少一年有效。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II -80℃避光保存,至少一年有效;-20℃避光保存,推荐3-6个月内使用。

注意事项:

对于订购后可能放置较长时间后再使用的,或者对于检测结果的精度要求特别高的,推荐订购萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010);对于订购后短期内使用完毕的,推荐订购使用更加便捷的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)。

为取得最佳测定效果,在用单管的化学发光仪测定时,样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内,例如30秒内;使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时,宜先把样品全部加好,然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂II。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成萤火虫萤光素酶检测试剂II使用。

尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响,为保证萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果,建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。

检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。。

样品和测定试剂混合后,必须等待1-2秒,再进行测定。测定时间通常为10秒,根据情况也可以测定更长或更短时间,但是同一批样品宜使用相同的测定时间。

为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差,可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参,采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒 (RG027/RG028)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)进行检测;也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参,然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 裂解细胞:将报告基因细胞裂解液充分混匀后,按如下方式加入报告基因细胞裂解液,充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后,10,000-15,000×g离心3-5分钟,取上清用于测定。
注:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
2. 准备检测试剂:融解冻存的萤火虫萤光素酶检测缓冲液,将检测缓冲液全部转移至检测底物瓶中,旋紧瓶盖后适当颠倒混匀,当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II,并平衡至室温。注:冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口,旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面,使粉末尽量掉落至瓶底,然后再轻轻旋开瓶盖,并注意不要损失冻干粉。
3. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪,可以将测定间隔设为2秒,测定时间设为10秒,或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
4. 每个样品测定时,取样品20-100微升(如果样品量足够,请加入100微升;如果样品量不足可以适当减少用量,但同批样品的使用量宜保持一致),取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
5. 各孔加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II,用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果以及与同类竞争产品的检测效果比较可以参考图1。

常见问题:
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

参考文献:
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.

相关产品:

产品编号 产品名称 包装
RG005/RG006 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG007S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100/1000次
RG009S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) 100/1000次
RG010S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 100/1000次
RG016/RG017 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG027/RG028 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG029S/M 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100/1000次
RG051S/M Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG052S/M Bright-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG055S/M One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG056S/M One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG058S/M Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG059S/M Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG088S/M Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG089S/M Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG126S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG127S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液(增强型) 10/100ml
RG129S/M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG132S/M 双萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)
萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)

物质安全数据单

下载

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型)(RG010M)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
报告基因相关

使用本产品的文献:

高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG135M)

高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液

产品编号: RG135M

产品包装:100ml
选择包装

10ml 100ml

说明书下载

268.00 10

价格: ¥ 268.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG135S 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 10ml 48.00元
RG135M 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 100ml 268.00元

碧云天生产的高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Cell Lysis Buffer),也称高斯萤光素酶检测细胞裂解液(Gaussia Luciferase Assay Cell Lysis Buffer)。本产品裂解后的细胞样品,主要用于高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021)和Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072)的检测。本产品制备的样品不适合用于萤火虫萤光素酶报告基因或海肾萤光素酶报告基因的检测。

使用高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021)时,如果需要更多的高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液,可以使用本产品。使用Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072)时,如果希望用于检测细胞裂解样品,也可以使用本产品。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
RG135S 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 10ml
RG135M 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 100ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,一年有效。

注意事项:

本产品裂解后的样品不适合直接用于萤火虫萤光素酶报告基因或海肾萤光素酶报告基因的检测。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 细胞的准备:
接种细胞,同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照,按照细胞培养的常规方法培养细胞。如有需要,可用质粒转染细胞或用病毒感染细胞,或加入药物处理细胞。根据具体情况,继续培养16-72小时。
2. 裂解液的准备:
融解高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液。
3. 细胞裂解液的制备:
去除细胞培养液,用PBS洗涤1次,每孔加入高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(96孔板每孔加入100μl,48孔、24孔、12孔或6孔板,每孔酌情加入约100-500μl裂解液),在摇床上以中等速度摇动裂解15分钟。在光学显微镜下检查细胞是否完全溶解,如果溶解不完全,继续摇动裂解15分钟。后续就可以使用高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021)或Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG072)进行报告基因的检测了。如果不能立即检测,可以将裂解液样品存放于-20℃,至少可保存一个月。

相关产品:

产品编号 产品名称 包装
RG021 高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG072 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG135 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
D2098 pGLuc (报告基因质粒) 1/100µg
D2100 pGLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2103 pGLuc-TA (报告基因质粒) 1/100µg
D2104 pGLuc-Dura-TA (报告基因质粒) 1/100µg
D2107 pGLuc-Dura-miR (报告基因质粒) 1/100µg
D2114 pARE-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2181 pISRE-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2209 pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2225 pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2261 pSTAT3-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2204 pNFκB-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2764 pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒) 1/100µg
D2770 pGLuc-Dura-SV40-C (报告基因质粒) 1/100µg
FCP966 BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒,320个/箱
FCP968 BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒,320个/箱
FCP963 BeyoGold™白色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP965 BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP981 BeyoGold™ 384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP983 BeyoGold™全白384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP985 BeyoGold™全黑384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP986 BeyoGold™白色透明底384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP987 BeyoGold™黑色透明底384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱

高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG135M)
高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG135M)

物质安全数据单

下载

高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG135M)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
报告基因相关

使用本产品的文献:

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型)(RG009M)

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型)

产品编号: RG009M

产品包装:1000次
选择包装

100次 1000次

说明书下载

2268.00 10

价格: ¥ 2268.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG009S 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) 100次 478.00元
RG009M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) 1000次 2268.00元

碧云天生产的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (Enhanced Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit),是一种以萤光素(luciferin)为底物高灵敏度检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。

本产品是萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)的不同包装版本,两者的检测效果完全一致。本产品,即RG009为即用型液体,其优点是无需配制即可直接使用,但需要-80℃保存,如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型),即RG010,为RG009的冻干粉版本,优点是在-20℃保存非常稳定,缺点是使用前需要使用提供的缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。

本产品的性能达到国外主要同类产品同等水平。本产品的性能和用途与Promega公司的Luciferase Assay System基本相同。本产品(RG009)与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1,本产品的发光强度与国外同类产品(Competitor P)相近或略优(图1A),发光信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致(图1B)。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型)(RG009M)

图1. 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) (RG009)的检测效果对比图。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为化学发光强度的检测效果对比图,图B为化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品,本产品的发光强度可以达到甚至略优于国外同类产品(图1A),特别适用于Firefly luciferase表达水平低的样品检测。如果样品中萤火虫萤光素酶的表达水平较高,或者样品数量较多、对发光信号的稳定性要求较高,也可以使用发光强度和灵敏度稍低,但发光信号更稳定的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006/RG007)。

本产品操作简单,检测速度快,从样品制备到完成检测仅需约20分钟。本试剂盒中提供的萤火虫萤光素酶检测试剂为即用型试剂,只需将100微升萤火虫萤光素酶检测试剂与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且发光信号比较稳定,信号半衰期约10分钟。

本产品稳定性好。本试剂盒中的萤火虫萤光素酶检测试剂的稳定性非常好,反复冻融5次对检测效果无明显影响,反复冻融10次检测效果下降不超过10%。在4℃条件下,保存3天检测效果下降不超过20%,保存5天检测效果下降不超过30%,保存7天仍可保留60%以上的检测效果。在室温保存1天可保留70%以上的检测效果,室温保存3天可保留60%以上的检测效果,37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。萤火虫萤光素酶检测试剂即使仅保留约50%的检测效果,仍可以满足各种常规检测的要求。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中,会发出生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[1]。本试剂盒的检测原理参考图2。

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型)(RG009M)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用[2]。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择,请参考碧云天的相关网页:
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm)。

本试剂盒RG009S和RG009M分别可以测定100个和1000个样品。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
RG009S-1 报告基因细胞裂解液 60ml
RG009S-2 萤火虫萤光素酶检测试剂 10ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
RG009M-1 报告基因细胞裂解液 RG009S-1×10
RG009M-2 萤火虫萤光素酶检测试剂 RG009S-2×10
说明书 1份
保存条件:

报告基因细胞裂解液4℃保存3个月有效,-20℃保存一年有效,-80℃可以长期保存;萤火虫萤光素酶检测试剂-80℃避光保存,至少一年有效;-20℃避光保存,推荐3-6个月内使用。

注意事项:

萤火虫萤光素酶检测试剂在-20℃保存其检测效果会逐渐下降,保存半年后其发光效果会降低约50%。因此,本产品如果保存于-20℃,推荐在3-6个月内使用。如果订购后可能放置较长时间后再使用,推荐订购在-20℃保存非常稳定的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) (RG010)。

为取得最佳测定效果,在用单管的化学发光仪测定时,样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内,例如30秒内;使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时,宜先把样品全部加好,然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测试剂在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后使用。

尽管经测试萤火虫萤光素酶检测试剂反复冻融5次对其检测效果无明显影响,为保证萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的使用效果,第一次解冻后可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。

检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。

样品和测定试剂混合后,必须等待1-2秒,再进行测定。测定时间通常为10秒,根据情况也可以测定更长或更短时间,但是同一批样品宜使用相同的测定时间。

为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差,可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的报告基因质粒作为内参,采用碧云天的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)进行检测;也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参,然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 裂解细胞:将报告基因细胞裂解液充分混匀后,按如下方式加入报告基因细胞裂解液,充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后,10,000-15,000×g离心3-5分钟,取上清用于测定。
注:细胞裂解后可立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
2. 融解萤火虫萤光素酶检测试剂,并达到室温。
3. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪,可以将测定间隔设为2秒,测定时间设为10秒,或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
4. 每个样品测定时,取样品20-100微升(如果样品量足够,请加入100微升;如果样品量不足可以适当减少用量,但同批样品的使用量宜保持一致),取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
5. 各孔加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂,用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果以及与同类竞争产品的检测效果比较可以参考图1。

常见问题:
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

参考文献:
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.

相关产品:

产品编号 产品名称 包装
RG005/RG006 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG007S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100/1000次
RG009S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) 100/1000次
RG010S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 100/1000次
RG016/RG017 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG027/RG028 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG029S/M 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100/1000次
RG051S/M Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG052S/M Bright-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG055S/M One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG056S/M One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG058S/M Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG059S/M Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG088S/M Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG089S/M Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG126S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG127S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液(增强型) 10/100ml
RG129S/M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG132S/M 双萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型)(RG009M)
萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型)(RG009M)

物质安全数据单

下载

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型)(RG009M)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
报告基因相关

使用本产品的文献:

萤火虫萤光素酶mRNA(Firefly Luciferase-mRNA)3-O-Me-GAG/N1-Me-Pseudo UTP

萤火虫萤光素酶mRNA(Firefly Luciferase-mRNA)3-O-Me-GAG/N1-Me-Pseudo UTP

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Firefly Luciferase mRNA (3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP)转染到细胞后,可在细胞表达萤火虫光素酶(luciferase)蛋白,该蛋白最初是从萤火虫Photinus pyralis中分离出来的。萤火虫光素酶是一种常用的生物发光(bioluminescence)报告分子,常用于基因调控、细胞活力测定、ATP水平分析和体内成像等研究。荧光素酶可以ATP和氧存在的条件下催化底物荧光素(luciferin) 氧化oxyluciferin,在 luciferin 氧化的过程中,会发出生物荧光( bioluminescence)。然后可以通过化学发光仪( luminometer)或液闪测定仪560 nm波长处测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。

该产品已经是5’端加帽,3’端加poly(A)经过N1-Me-Pseudo UTP 修饰的mRNA,可以模拟真核生物中加工成熟的mRNA。使用3-O-Me-GAG以共转录的方式对mRNA进行加帽,形成了Cap 1结构,增加了mRNA的稳定性和翻译效率。修饰核苷酸N1-Me-Pseudo UTP的添加可以减少先天免疫刺激,增加mRNA的稳定性。Poly(A)尾的添加使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率。

 

产品信息

产品名称

Firefly Luciferase-mRNA (3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP)

长度

2048 bp

浓度

1 mg/mL

储存缓冲液

1 mM柠檬酸钠

 

产品用途

1、转染试剂筛选;

2、适用于mRNA递送,定位,翻译等;

3、适用于基因表达,细胞活性和体内成像等分析。

 

运输和保存方法

干冰运输。80℃保存,有效期两年。

 

注意事项

1、到货后,立即将样品储存于-80℃

2、首次使用时,注意佩戴一次性手套,将样品置于冰上溶解,使用不含RNase的试剂和耗材,避免接触污染;

3、样品首次溶解后,可轻柔离心后进行分装,避免反复冻融。

 

相关产品

产品名称

货号

T7 High Yield RNA Synthesis Kit

10623ES

Cap1-GAG m7(3'OMeG) (5') ppp(5')(2'OMeA) pG (100mM)

10677ES

mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

10614ES

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade

10612ES

Deoxyribonuclease I (DNase I) GMP-grade

10611ES

HB221103

萤火虫萤光素酶mRNA(Firefly Luciferase-mRNA)3-O-Me-GAG/N1-Me-Pseudo UTP

暂无内容

萤火虫萤光素酶mRNA(Firefly Luciferase-mRNA)3-O-Me-GAG/N1-Me-Pseudo UTP

暂无内容

 

Firefly Luciferase mRNA (3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP)转染到细胞后,可在细胞表达萤火虫光素酶(luciferase)蛋白,该蛋白最初是从萤火虫Photinus pyralis中分离出来的。萤火虫光素酶是一种常用的生物发光(bioluminescence)报告分子,常用于基因调控、细胞活力测定、ATP水平分析和体内成像等研究。荧光素酶可以ATP和氧存在的条件下催化底物荧光素(luciferin) 氧化oxyluciferin,在 luciferin 氧化的过程中,会发出生物荧光( bioluminescence)。然后可以通过化学发光仪( luminometer)或液闪测定仪560 nm波长处测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。

该产品已经是5’端加帽,3’端加poly(A)经过N1-Me-Pseudo UTP 修饰的mRNA,可以模拟真核生物中加工成熟的mRNA。使用3-O-Me-GAG以共转录的方式对mRNA进行加帽,形成了Cap 1结构,增加了mRNA的稳定性和翻译效率。修饰核苷酸N1-Me-Pseudo UTP的添加可以减少先天免疫刺激,增加mRNA的稳定性。Poly(A)尾的添加使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率。

 

产品信息

产品名称

Firefly Luciferase-mRNA (3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP)

长度

2048 bp

浓度

1 mg/mL

储存缓冲液

1 mM柠檬酸钠

 

产品用途

1、转染试剂筛选;

2、适用于mRNA递送,定位,翻译等;

3、适用于基因表达,细胞活性和体内成像等分析。

 

运输和保存方法

干冰运输。80℃保存,有效期两年。

 

注意事项

1、到货后,立即将样品储存于-80℃

2、首次使用时,注意佩戴一次性手套,将样品置于冰上溶解,使用不含RNase的试剂和耗材,避免接触污染;

3、样品首次溶解后,可轻柔离心后进行分装,避免反复冻融。

 

相关产品

产品名称

货号

T7 High Yield RNA Synthesis Kit

10623ES

Cap1-GAG m7(3'OMeG) (5') ppp(5')(2'OMeA) pG (100mM)

10677ES

mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

10614ES

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade

10612ES

Deoxyribonuclease I (DNase I) GMP-grade

10611ES

HB221103

萤火虫萤光素酶mRNA(Firefly Luciferase-mRNA)3-O-Me-GAG/N1-Me-Pseudo UTP

暂无内容

萤火虫萤光素酶mRNA(Firefly Luciferase-mRNA)3-O-Me-GAG/N1-Me-Pseudo UTP

暂无内容

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039S)

Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂

产品编号: RG039S

产品包装:100次
选择包装

100次 1000次

说明书下载

488.00 10

价格: ¥ 488.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG039S Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂 100次 488.00元
RG039M Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂 1000次 2858.00元

碧云天生产的Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Bac-Lumi™ Bacterial Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit,Bac-Lumi™ Bacterial Firefly Luciferase Assay Kit),是一种无需收集和裂解细菌,可以在96孔板等多孔板中通过化学发光法直接测定细菌内萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的超高灵敏度、高信号稳定性的一步法检测试剂盒。

本产品检测灵敏度高。用于LB培养的表达萤火虫萤光素酶的大肠杆菌进行检测,100微升空白LB培养基的信号值为5×103左右,100微升IPTG诱导表达萤火虫萤光素酶3小时的大肠杆菌菌液的信号值实测可达约4.5×109,用LB培养基1:1稀释的菌液信号值为2.2×109,信号值高达空白LB培养基信号值的约4.5×105倍,具有超高的检测灵敏度和发光强度(参考图1A)。实测效果可能会因表达菌株的种类、萤火虫萤光素酶突变体的种类、检测环境等的不同有所差异。

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039S)

图1. Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒对表达萤火虫萤光素酶的大肠杆菌菌液的检测效果。挑取表达萤火虫萤光素酶的单克隆细菌于5ml LB中,37℃培养4小时,加入IPTG,37℃诱导3小时,取菌液进行萤火虫萤光素酶活性检测。图中Sample(1:1)为用LB培养基1:1稀释的菌液。图A为菌液的化学发光强度的检测效果图,图B为菌液的化学发光稳定性的检测效果图。实际读数会因突变体、所用菌株、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本试剂盒操作便捷、读数稳定、10分钟内就可以完成检测。本产品的使用简单快捷,无需收集菌体,也无需更换或去除培养液,只需把试剂盒提供的Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂与培养的菌液等体积混合,反应5分钟后即可进行化学发光检测。并且产生的化学发光信号相对比较稳定,在反应开始后的30分钟内,信号下降通常不超过40%,其信号半衰期随菌株、突变体和培养基等的不同而有所差异(参考图1B)。使用可以测定96孔板的化学发光的多功能酶标仪通常在2分钟内就可以完成一块96孔板的检测。另外,本产品也可以用于裂解保存的细菌样品中萤火虫萤光素酶活性的检测[1]。

本产品稳定性好。Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂稳定性非常好,反复冻融5次对检测效果无明显影响,反复冻融10次检测效果下降不超过10%。本产品4℃条件下,保存3天检测效果下降不超过10%,保存7天检测效果下降不超过30%。室温保存1天可保留70%以上的检测效果,室温保存3天可保留50%以上的检测效果,37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。本产品即使仅保留约50%的检测效果,仍可以满足各种常规检测。

本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量检测(high-throughput screening)。本产品不仅可以与培养的菌液等体积加入到96孔板中进行直接检测,也可以用于裂解并收集保存的细菌样品的萤火虫萤光素酶活性的检测。

萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出波长为560nm左右的生物萤光(bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测萤火虫萤光素酶的表达[2]。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞或细菌,用适当药物等处理细胞或细菌后裂解细胞或细菌,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物等处理对目的基因的转录调控作用[3]。本试剂盒的检测原理参考图2。

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039S)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

对于96孔板,推荐使用100μl菌液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板,推荐使用25μl菌液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但菌液和检测试剂体积的比例须为1:1。虽然我们有检测数据显示适当减少检测试剂的用量很可能仍然会得到较好的检测结果,但对于细菌数量偏多、细菌数量特别少或者重复性要求比较高的情况,建议按照推荐用量进行检测。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
RG039S Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂 10ml
RG039M Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂 100ml
说明书 1份

保存条件:

-80℃避光保存,至少一年有效;-20℃避光保存,推荐3-6个月内使用。

注意事项:

本产品在-20℃保存其检测效果会逐渐下降,保存半年后其发光效果会降低约50%。因此,本产品如果保存于-20℃,推荐在3-6个月内使用。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细菌菌液和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将检测试剂在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后使用。

尽管经测试本试剂反复冻融5次对于检测效果无显著影响,为保证本产品的稳定性、取得良好的使用效果,第一次解冻后可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。

请使用适合于细菌培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。

待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细菌培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 表达萤火虫萤光素酶菌液的准备:
使用适合进行化学发光检测的白色或黑色96孔板,每孔加入100μl表达萤火虫萤光素酶的菌液(如使用384孔板,每孔接种25μl菌液,具体用量视不同类型的384孔板而定),同时设置不含萤火虫萤光素酶的细菌培养液孔作为阴性对照。
2. 检测试剂的准备:
融解冻存的Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂,按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量,取适量Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂,平衡至室温。
3. 萤光素酶检测:
a. 将待检测的多孔板充分平衡至室温。
b. 96孔板每孔加入100μl Bac-Lumi™细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(384孔板每孔25μl)。
c. 使用有震动混匀功能的酶标仪或多孔板震荡混合仪等设备振荡混匀,室温(约25℃)孵育5分钟,使发光信号趋于稳定。
d. 使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

常见问题:
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

参考文献::
1. Waidmann MS, Bleichrodt FS, Laslo T, Riedel CU. Bioeng Bugs. 2011. 2(1):8-16.
2. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
3. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.
相关产品:

产品编号 产品名称 包装
RG039S 细菌萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次
RG039M 细菌萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次
FCP966-80pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP966-320pcs BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱
FCP968-80pcs BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒
FCP968-320pcs BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒, 320个/箱

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039S)
Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039S)

物质安全数据单

下载

Bac-Lumi细菌萤火虫萤光素酶检测试剂(RG039S)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
报告基因相关

使用本产品的文献:

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 闪光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒|Luciferase Reporter Gene Assay Kit

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 闪光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒|Luciferase Reporter Gene Assay Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)是一种分子量约为61 kDa的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,能够催化萤光素(luciferin)氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物荧光,该萤光可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示:

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 闪光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒|Luciferase Reporter Gene Assay Kit

1:萤火虫萤光素酶检测原理图

Luciferase Reporter Gene Assay kit是一闪光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒,具有灵敏度高的特点,可以高灵敏的检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11401JP60(100 T)

11401JP76(500 T)

11401JP80(1000 T)

11401-A

细胞裂解液

20 mL

5×20 mL

10×20 mL

11401-B

萤火虫萤光素酶检测试剂

10 mL

5×10 mL

10×10 mL

 

运输和保存方式

干冰运输。-20℃保存,有效期1年。

试剂盒内萤火虫萤光素酶检测试剂不能反复冻融,建议分装-20℃或-80℃保存。

 

注意事项

1)检测过程中需自备耗材和设备包括如下:PBS;100 μL移液器或者排枪;不透光白色酶标板;Luminometer发光计、多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器;

2)反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温20-25℃)再使用;

3)检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同;

4)检测设置:Luminescence,350-700 nm,建议检测时间设为2-10 sec;

5)检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板。黑色酶标板也可用,但因黑色会吸收光信号,可能会降低信号;

6)单管荧光测定仪测定,每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致;

7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套;

8)本产品仅作科研用途!

 

实验步骤

I.前处理

1.细胞

1)构建相应的载体。

2)转染步骤请参照相关的说明书。

3)将细胞裂解液充分混匀,按如下方式加入细胞裂解液,充分裂解细胞。

a: 对于贴壁细胞,吸尽细胞培养液,按照下表比例加入细胞裂解液,轻轻旋转培养皿或者培养板使裂解液完全覆盖细胞;

b: 对于悬浮细胞,离心弃去上清,按照下表比例加入裂解液。

细胞培养板

96孔板

48孔板

24孔板

12孔板

6孔板

裂解液加入量

100 μL

150 μL

200 μL

300 μL

500 μL

冰上孵育5 min,充分裂解细胞。

【注】:裂解产物可室温保存6 h;4℃保存16 h;-80℃可长期存放(裂解产物不能多次反复冻融),本试剂盒裂解液数量按照24孔板添加量进行配制,如需要更多可单独购买(CAT#11406)。

5)(选作)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

2.叶片组织(以烟草叶片为例,仅供参考)

1)构建相应的载体。

2)挑取转化有重组质粒的农杆菌单菌落,接种到2 mL LB液体培养基(添加相应抗生素)中,28℃ 220 rpm培养过夜。

3)农杆菌培养至OD600为1.0,1700× g离心5 min收集菌体后,用1/2MS液体培养基清洗菌体2次;用含有150 μmol/L乙酰丁香酮的1/2MS液体培养基将农杆菌的OD600调至1.0。

4)将待检测的农杆菌菌液进行混合,使每种菌液的OD600为0.5。

5)选取生长期为1个月左右完全伸展的烟草叶片,将混合好的菌液用1 mL注射器(去掉针头)从烟草叶背面进行注射。为保证实验结果的一致性,需要将对照载体和待检测目标载体的菌液注射在同一叶片的不同部位上, 以保证相同的生长背景。

6)正常温室生长条件下,24-48 h即可取样观察。

7)取3-4片直径为6-8 mm的叶盘,放入2 mL的 EP 管(提前放入3-4个小钢珠)中,液氮中冷冻,使用破碎仪进行研磨破碎(45 Hz,30 s)。破碎完全后在EP管中加入100 μL裂解液。

8)冰上孵育5 min左右,充分裂解叶片。

9)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

3.原生质体(仅供参考)

构建相应的载体。

制备原生质体(参考相关文献:Yoo SD, Cho YH, Sheen J (2007). Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis. Nat Protoc 2, 1565–1572)。

2 mL EP管中加入相应的载体(加入量需要摸索),加入100 μL原生质体悬浮液。轻摇混匀后,加入110 μL PEG-CaCl2溶液,轻弹混匀。在室温放置10-15 min。

4)加入440 μL W5溶液,上下颠倒以停止转化。

5)200× g 室温离心5 min,弃去上清,加入800 μL WI溶液重悬原生质体。

室温避光培养16-24 h。

7)将原生质体加入2 mL离心管中,离心收集原生质体,加入100 μL左右的裂解液。

8)冰上孵育5 min左右,充分裂解原生质体。

9)(选做)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

 

II.荧光检测

1)按照仪器说明书要求将荧光测定仪打开,设定参数,测定时间为10 sec,测定间隔为2 sec。

2)取20 μL裂解液加入测量管中(保持每次样品的加样量一致),另外加入100 μL萤火虫萤光素酶检测试剂,震板混匀

2-3次,充分混匀后测定RLU(Relative light unit)

3)分析数据。

①实验设计:根据不同实验目的,在每个培养板中都应设置对照组、实验组和空白对照组。为了保证实验准确性,理论上每个实验组(包括对照组)都应当减去空白对照组的萤火虫萤光素酶的发光测量值。

a.空白对照组:

背景F:未转染细胞+萤火虫萤光素酶检测试剂。

注:空白对照组的样品量必须与实验样品量相同,包含与实验样品相同的培养基/血清组合,并加上完全相同的检测试剂。

b.实验组:转染细胞经实验化合物处理(即实验组F)。

c.对照组:转染细胞不经处理,用以标准化结果(即对照组F)。

②计算结果:

实验组=实验组F-背景F。

对照组=对照组F-背景F。

表达倍数=实验组/对照组。

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit辉光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

11404JP60/80

100/1000 T

Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 辉光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒

11405JP60/80

100/1000 T

Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒

11401JP60/76/80

100/500/1000 T

pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照

11556JP03

1 μg

Luciferase Reporter Plasmid negative control (荧光素酶报告基因质粒阴性对照)

11555JP03

1 μg

pGMLR-TK Luciferase Reporter Plasmid(pGMLR-TK海肾荧光素酶报告基因质粒)

11557JP03

1 μg

pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid(pGMLR-CMV海肾荧光素酶报告基因质粒)

11558JP03

1 μg

Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂

40802JP03

1 mL

 HB220325

Q11401 有很多,现在单要裂解液

A有货号 11406.

Q该试剂盒中裂解后一定要离心吗?

A可以选做。

Q测定时间为 10 s,测定间隔为 2 s,为什么这样推荐?如果这样设置,96 孔板这样设置,会导致每孔时间相差很大。仪器可以同时出数据。工程师建议设置动力学检测, 设置总时间。

A不同仪器,设置时间可以不一样。单管手动检测,就按说明书设置会更好。

Q酶标仪检测吗?

A带有化学发光模块的可以。

Q加入检测试剂后,产生的荧光稳定吗?多长时间内检测数据是准确的?

A加入后海肾会有荧光猝灭的情况,越快越好,尽量 5min 内检测完成。

[1] Hao Y, Fan X, Shi Y, et al. Next-generation unnatural monosaccharides reveal that JPRRB O-GlcNAcylation regulates pluripotency of mouse embryonic stem cells. Nat Commun. 2019;10(1):4065. Published 2019 Sep 6. doi:10.1038/s41467-019-11942-y(IF:11.878)
[2] Wang X, Qin X, Yan M, et al. Loss of exosomal miR-3188 in cancer-associated fibroblasts contributes to HNC progression. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):151. Published 2019 Apr 8. doi:10.1186/s13046-019-1144-9(IF:11.161)
[3] Yin T, Liu Y, Yang M, Wang L, Zhou J, Huo M. Novel Chitosan Derivatives with Reversible Cationization and Hydrophobicization for Tumor Cytoplasm-Specific Burst Co-delivery of siRNA and Chemotherapeutics. ACS Appl Mater Interfaces. 2020;12(13):14770-14783. doi:10.1021/acsami.9b19373(IF:8.758)
[4] He Y, Qu J, Wei L, et al. Generation and Effect Testing of a SARS-CoV-2 RBD-Targeted Polyclonal Therapeutic Antibody Based on a 2-D Airway Organoid Screening System. Front Immunol. 2021;12:689065. Published 2021 Oct 18. doi:10.3389/fimmu.2021.689065(IF:7.561)
[5] Sun H, Chen D, Zhan S, et al. Design and Discovery of Natural Cyclopeptide Skeleton Based Programmed Death Ligand 1 Inhibitor as Immune Modulator for Cancer Therapy. J Med Chem. 2020;63(19):11286-11301. doi:10.1021/acs.jmedchem.0c01262(IF:6.205)
[6] Li S, Zhang L, Zhang G, et al. A nonautophagic role of ATG5 in regulating cell growth by targeting c-Myc for proteasome-mediated degradation. iScience. 2021;24(11):103296. Published 2021 Oct 16. doi:10.1016/j.isci.2021.103296(IF:5.458)
[7] Yang N, Xiong Y, Wang Y, et al. ADAP Y571 Phosphorylation Is Required to Prime STAT3 for Activation in TLR4-Stimulated Macrophages. J Immunol. 2021;206(4):814-826. doi:10.4049/jimmunol.2000569(IF:5.422)
[8] He S, Ma R, Liu Z, et al. Overexpression of BnaAGL11, a MADS-Box Transcription Factor, Regulates Leaf Morphogenesis and Senescence in Brassica napus. J Agric Food Chem. 2022;70(11):3420-3434. doi:10.1021/acs.jafc.1c07622(IF:5.279)
[9] Zhang RY, Zhou SH, He CB, et al. Adjuvant-Protein Conjugate Vaccine with Built-In TLR7 Agonist on S1 Induces Potent Immunity against SARS-CoV-2 and Variants of Concern. ACS Infect Dis. 2022;8(7):1367-1375. doi:10.1021/acsinfecdis.2c00259(IF:5.084)
[10] Li Y, Chen T, Wang W, et al. A high-efficiency Agrobacterium-mediated transient expression system in the leaves of Artemisia annua L. Plant Methods. 2021;17(1):106. Published 2021 Oct 16. doi:10.1186/s13007-021-00807-5(IF:4.993)
[11] Li D, Jiang K, Teng D, et al. Discovery of New Estrogen-Related Receptor α Agonists via a Combination Strategy Based on Shape Screening and Ensemble Docking. J Chem Inf Model. 2022;62(3):486-497. doi:10.1021/acs.jcim.1c00662(IF:4.956)
[12] Liu J, Chen X, Liu Y, et al. Characterization of SARS-CoV-2 worldwide transmission based on evolutionary dynamics and specific viral mutations in the spike protein. Infect Dis Poverty. 2021;10(1):112. Published 2021 Aug 21. doi:10.1186/s40249-021-00895-4(IF:4.388)
[13] Zhou FL, Li SC, Zhu Y, et al. Integrating yeast chemical genomics and mammalian cell pathway analysis [published correction appears in Acta Pharmacol Sin. 2020 May;41(5):729]. Acta Pharmacol Sin. 2019;40(9):1245-1255. doi:10.1038/s41401-019-0231-y(IF:4.010)
[14] Zhu G, Li X, Li J, et al. Arsenic trioxide (ATO) induced degradation of Cyclin D1 sensitized PD-1/PD-L1 checkpoint inhibitor in oral and esophageal squamous cell carcinoma. J Cancer. 2020;11(22):6516-6529. Published 2020 Sep 21. doi:10.7150/jca.47111(IF:3.565)
[15] Xie Y, Li X, Ge J. Cyclophilin A-FoxO1 signaling pathway in endothelial cell apoptosis. Cell Signal. 2019;61:57-65. doi:10.1016/j.cellsig.2019.04.014(IF:3.388)
[16] Wang Y, Bibi M, Min P, Deng W, Zhang Y, Du J. SOX2 promotes hypoxia-induced breast cancer cell migration by inducing NEDD9 expression and subsequent activation of Rac1/HIF-1α signaling. Cell Mol Biol Lett. 2019;24:55. Published 2019 Aug 22. doi:10.1186/s11658-019-0180-y(IF:3.367)
[17] Jian Y, Qiao Q, Tang J, Qin X. Origin recognition complex 1 regulates phospholipase Cδ1 to inhibit cell proliferation, migration and epithelial-mesenchymal transition in lung adenocarcinoma. Oncol Lett. 2022;24(2):252. Published 2022 Jun 10. doi:10.3892/ol.2022.13372(IF:2.967)

产品描述

萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)是一种分子量约为61 kDa的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,能够催化萤光素(luciferin)氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物荧光,该萤光可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示:

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 闪光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒|Luciferase Reporter Gene Assay Kit

1:萤火虫萤光素酶检测原理图

Luciferase Reporter Gene Assay kit是一闪光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒,具有灵敏度高的特点,可以高灵敏的检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11401JP60(100 T)

11401JP76(500 T)

11401JP80(1000 T)

11401-A

细胞裂解液

20 mL

5×20 mL

10×20 mL

11401-B

萤火虫萤光素酶检测试剂

10 mL

5×10 mL

10×10 mL

 

运输和保存方式

干冰运输。-20℃保存,有效期1年。

试剂盒内萤火虫萤光素酶检测试剂不能反复冻融,建议分装-20℃或-80℃保存。

 

注意事项

1)检测过程中需自备耗材和设备包括如下:PBS;100 μL移液器或者排枪;不透光白色酶标板;Luminometer发光计、多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器;

2)反应温度:酶促反应对温度较为敏感,加样检测前务必将所有试剂平衡至室温20-25℃)再使用;

3)检测仪器:能检测化学发光的仪器都适用,但由于不同仪器的设置和灵敏度不同,测得的光信号值也会不同;

4)检测设置:Luminescence,350-700 nm,建议检测时间设为2-10 sec;

5)检测板:为防止孔间干扰,推荐使用不透光白色酶标板。黑色酶标板也可用,但因黑色会吸收光信号,可能会降低信号;

6)单管荧光测定仪测定,每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致;

7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套;

8)本产品仅作科研用途!

 

实验步骤

I.前处理

1.细胞

1)构建相应的载体。

2)转染步骤请参照相关的说明书。

3)将细胞裂解液充分混匀,按如下方式加入细胞裂解液,充分裂解细胞。

a: 对于贴壁细胞,吸尽细胞培养液,按照下表比例加入细胞裂解液,轻轻旋转培养皿或者培养板使裂解液完全覆盖细胞;

b: 对于悬浮细胞,离心弃去上清,按照下表比例加入裂解液。

细胞培养板

96孔板

48孔板

24孔板

12孔板

6孔板

裂解液加入量

100 μL

150 μL

200 μL

300 μL

500 μL

冰上孵育5 min,充分裂解细胞。

【注】:裂解产物可室温保存6 h;4℃保存16 h;-80℃可长期存放(裂解产物不能多次反复冻融),本试剂盒裂解液数量按照24孔板添加量进行配制,如需要更多可单独购买(CAT#11406)。

5)(选作)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

2.叶片组织(以烟草叶片为例,仅供参考)

1)构建相应的载体。

2)挑取转化有重组质粒的农杆菌单菌落,接种到2 mL LB液体培养基(添加相应抗生素)中,28℃ 220 rpm培养过夜。

3)农杆菌培养至OD600为1.0,1700× g离心5 min收集菌体后,用1/2MS液体培养基清洗菌体2次;用含有150 μmol/L乙酰丁香酮的1/2MS液体培养基将农杆菌的OD600调至1.0。

4)将待检测的农杆菌菌液进行混合,使每种菌液的OD600为0.5。

5)选取生长期为1个月左右完全伸展的烟草叶片,将混合好的菌液用1 mL注射器(去掉针头)从烟草叶背面进行注射。为保证实验结果的一致性,需要将对照载体和待检测目标载体的菌液注射在同一叶片的不同部位上, 以保证相同的生长背景。

6)正常温室生长条件下,24-48 h即可取样观察。

7)取3-4片直径为6-8 mm的叶盘,放入2 mL的 EP 管(提前放入3-4个小钢珠)中,液氮中冷冻,使用破碎仪进行研磨破碎(45 Hz,30 s)。破碎完全后在EP管中加入100 μL裂解液。

8)冰上孵育5 min左右,充分裂解叶片。

9)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

3.原生质体(仅供参考)

构建相应的载体。

制备原生质体(参考相关文献:Yoo SD, Cho YH, Sheen J (2007). Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis. Nat Protoc 2, 1565–1572)。

2 mL EP管中加入相应的载体(加入量需要摸索),加入100 μL原生质体悬浮液。轻摇混匀后,加入110 μL PEG-CaCl2溶液,轻弹混匀。在室温放置10-15 min。

4)加入440 μL W5溶液,上下颠倒以停止转化。

5)200× g 室温离心5 min,弃去上清,加入800 μL WI溶液重悬原生质体。

室温避光培养16-24 h。

7)将原生质体加入2 mL离心管中,离心收集原生质体,加入100 μL左右的裂解液。

8)冰上孵育5 min左右,充分裂解原生质体。

9)(选做)10000-16000 rpm离心1 min,取上清。

 

II.荧光检测

1)按照仪器说明书要求将荧光测定仪打开,设定参数,测定时间为10 sec,测定间隔为2 sec。

2)取20 μL裂解液加入测量管中(保持每次样品的加样量一致),另外加入100 μL萤火虫萤光素酶检测试剂,震板混匀

2-3次,充分混匀后测定RLU(Relative light unit)

3)分析数据。

①实验设计:根据不同实验目的,在每个培养板中都应设置对照组、实验组和空白对照组。为了保证实验准确性,理论上每个实验组(包括对照组)都应当减去空白对照组的萤火虫萤光素酶的发光测量值。

a.空白对照组:

背景F:未转染细胞+萤火虫萤光素酶检测试剂。

注:空白对照组的样品量必须与实验样品量相同,包含与实验样品相同的培养基/血清组合,并加上完全相同的检测试剂。

b.实验组:转染细胞经实验化合物处理(即实验组F)。

c.对照组:转染细胞不经处理,用以标准化结果(即对照组F)。

②计算结果:

实验组=实验组F-背景F。

对照组=对照组F-背景F。

表达倍数=实验组/对照组。

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit辉光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

11404JP60/80

100/1000 T

Dual Glo Luciferase Reporter Gene Assay Kit 辉光型双萤光素酶报告基因检测试剂盒

11405JP60/80

100/1000 T

Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒

11401JP60/76/80

100/500/1000 T

pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照

11556JP03

1 μg

Luciferase Reporter Plasmid negative control (荧光素酶报告基因质粒阴性对照)

11555JP03

1 μg

pGMLR-TK Luciferase Reporter Plasmid(pGMLR-TK海肾荧光素酶报告基因质粒)

11557JP03

1 μg

pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid(pGMLR-CMV海肾荧光素酶报告基因质粒)

11558JP03

1 μg

Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂

40802JP03

1 mL

 HB220325

Q11401 有很多,现在单要裂解液

A有货号 11406.

Q该试剂盒中裂解后一定要离心吗?

A可以选做。

Q测定时间为 10 s,测定间隔为 2 s,为什么这样推荐?如果这样设置,96 孔板这样设置,会导致每孔时间相差很大。仪器可以同时出数据。工程师建议设置动力学检测, 设置总时间。

A不同仪器,设置时间可以不一样。单管手动检测,就按说明书设置会更好。

Q酶标仪检测吗?

A带有化学发光模块的可以。

Q加入检测试剂后,产生的荧光稳定吗?多长时间内检测数据是准确的?

A加入后海肾会有荧光猝灭的情况,越快越好,尽量 5min 内检测完成。

[1] Hao Y, Fan X, Shi Y, et al. Next-generation unnatural monosaccharides reveal that JPRRB O-GlcNAcylation regulates pluripotency of mouse embryonic stem cells. Nat Commun. 2019;10(1):4065. Published 2019 Sep 6. doi:10.1038/s41467-019-11942-y(IF:11.878)
[2] Wang X, Qin X, Yan M, et al. Loss of exosomal miR-3188 in cancer-associated fibroblasts contributes to HNC progression. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):151. Published 2019 Apr 8. doi:10.1186/s13046-019-1144-9(IF:11.161)
[3] Yin T, Liu Y, Yang M, Wang L, Zhou J, Huo M. Novel Chitosan Derivatives with Reversible Cationization and Hydrophobicization for Tumor Cytoplasm-Specific Burst Co-delivery of siRNA and Chemotherapeutics. ACS Appl Mater Interfaces. 2020;12(13):14770-14783. doi:10.1021/acsami.9b19373(IF:8.758)
[4] He Y, Qu J, Wei L, et al. Generation and Effect Testing of a SARS-CoV-2 RBD-Targeted Polyclonal Therapeutic Antibody Based on a 2-D Airway Organoid Screening System. Front Immunol. 2021;12:689065. Published 2021 Oct 18. doi:10.3389/fimmu.2021.689065(IF:7.561)
[5] Sun H, Chen D, Zhan S, et al. Design and Discovery of Natural Cyclopeptide Skeleton Based Programmed Death Ligand 1 Inhibitor as Immune Modulator for Cancer Therapy. J Med Chem. 2020;63(19):11286-11301. doi:10.1021/acs.jmedchem.0c01262(IF:6.205)
[6] Li S, Zhang L, Zhang G, et al. A nonautophagic role of ATG5 in regulating cell growth by targeting c-Myc for proteasome-mediated degradation. iScience. 2021;24(11):103296. Published 2021 Oct 16. doi:10.1016/j.isci.2021.103296(IF:5.458)
[7] Yang N, Xiong Y, Wang Y, et al. ADAP Y571 Phosphorylation Is Required to Prime STAT3 for Activation in TLR4-Stimulated Macrophages. J Immunol. 2021;206(4):814-826. doi:10.4049/jimmunol.2000569(IF:5.422)
[8] He S, Ma R, Liu Z, et al. Overexpression of BnaAGL11, a MADS-Box Transcription Factor, Regulates Leaf Morphogenesis and Senescence in Brassica napus. J Agric Food Chem. 2022;70(11):3420-3434. doi:10.1021/acs.jafc.1c07622(IF:5.279)
[9] Zhang RY, Zhou SH, He CB, et al. Adjuvant-Protein Conjugate Vaccine with Built-In TLR7 Agonist on S1 Induces Potent Immunity against SARS-CoV-2 and Variants of Concern. ACS Infect Dis. 2022;8(7):1367-1375. doi:10.1021/acsinfecdis.2c00259(IF:5.084)
[10] Li Y, Chen T, Wang W, et al. A high-efficiency Agrobacterium-mediated transient expression system in the leaves of Artemisia annua L. Plant Methods. 2021;17(1):106. Published 2021 Oct 16. doi:10.1186/s13007-021-00807-5(IF:4.993)
[11] Li D, Jiang K, Teng D, et al. Discovery of New Estrogen-Related Receptor α Agonists via a Combination Strategy Based on Shape Screening and Ensemble Docking. J Chem Inf Model. 2022;62(3):486-497. doi:10.1021/acs.jcim.1c00662(IF:4.956)
[12] Liu J, Chen X, Liu Y, et al. Characterization of SARS-CoV-2 worldwide transmission based on evolutionary dynamics and specific viral mutations in the spike protein. Infect Dis Poverty. 2021;10(1):112. Published 2021 Aug 21. doi:10.1186/s40249-021-00895-4(IF:4.388)
[13] Zhou FL, Li SC, Zhu Y, et al. Integrating yeast chemical genomics and mammalian cell pathway analysis [published correction appears in Acta Pharmacol Sin. 2020 May;41(5):729]. Acta Pharmacol Sin. 2019;40(9):1245-1255. doi:10.1038/s41401-019-0231-y(IF:4.010)
[14] Zhu G, Li X, Li J, et al. Arsenic trioxide (ATO) induced degradation of Cyclin D1 sensitized PD-1/PD-L1 checkpoint inhibitor in oral and esophageal squamous cell carcinoma. J Cancer. 2020;11(22):6516-6529. Published 2020 Sep 21. doi:10.7150/jca.47111(IF:3.565)
[15] Xie Y, Li X, Ge J. Cyclophilin A-FoxO1 signaling pathway in endothelial cell apoptosis. Cell Signal. 2019;61:57-65. doi:10.1016/j.cellsig.2019.04.014(IF:3.388)
[16] Wang Y, Bibi M, Min P, Deng W, Zhang Y, Du J. SOX2 promotes hypoxia-induced breast cancer cell migration by inducing NEDD9 expression and subsequent activation of Rac1/HIF-1α signaling. Cell Mol Biol Lett. 2019;24:55. Published 2019 Aug 22. doi:10.1186/s11658-019-0180-y(IF:3.367)
[17] Jian Y, Qiao Q, Tang J, Qin X. Origin recognition complex 1 regulates phospholipase Cδ1 to inhibit cell proliferation, migration and epithelial-mesenchymal transition in lung adenocarcinoma. Oncol Lett. 2022;24(2):252. Published 2022 Jun 10. doi:10.3892/ol.2022.13372(IF:2.967)

双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029M)

双萤光素酶报告基因检测试剂盒II

产品编号: RG029M

产品包装:1000次
选择包装

100次 1000次

说明书下载

5385.00 10

价格: ¥ 5385.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG029S 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100次 856.00元
RG029M 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II 1000次 5385.00元

碧云天生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit II),是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase),后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase),并且在后续加入海肾萤光素酶底物时,同时加入抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质,该物质可以淬灭约99.9%以上的萤火虫萤光素酶信号,使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性,从而实现双萤光素酶报告基因检测。

本产品是双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)的不同包装版本,两者的检测效果完全一致。双萤光素酶报告基因检测试剂盒,即RG027/RG028中的萤火虫萤光素酶检测试剂为即用型液体,其优点是无需配制即可直接使用,但需要-80℃保存,如果在-20℃保存时间较长后检测效果会逐渐下降。本产品,即RG029,为RG027/RG028的冻干粉版本,优点是在-20℃保存非常稳定,缺点是使用前需要使用提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液充分溶解底物冻干粉后才能使用。

本产品的性能总体优于国外主要同类产品。本产品的用途与Promega公司的Dual-Luciferase® Reporter Assay System基本相同。本产品的检测灵敏度显著优于国外同类产品(Competitor P),萤火虫萤光素酶的信号强度比国外同类产品(Competitor P)提高了约40%,海肾萤光素酶的信号强度比同类产品(Competitor P)提高了约25% (图1A、1B);萤火虫萤光素酶的化学发光的信号稳定性显著优于国外同类产品(Competitor P) (图1C),海肾萤光素酶的化学发光的信号稳定性与国外同类产品(Competitor P)基本一致或略优(图1D);本产品的海肾萤光素酶检测工作液对萤火虫萤光素酶的淬灭效果较国外同类产品(Competitor P)更佳(图1A)。本产品与国外同类产品(Competitor P)的检测效果比较参见图1。

双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029M)

图1. 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029)的检测效果对比图。本试剂盒与碧云天生产的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)的检测效果完全一致。图中所示为本产品和国外同类产品(Competitor P)对共转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒的HeLa细胞裂解样品的检测效果。图A为整体检测效果对比图,图B为萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶的化学发光强度的检测效果对比图,图C为萤火虫萤光素酶的化学发光稳定性的检测效果对比图,图D为海肾萤光素酶的化学发光稳定性的检测效果对比图。实际读数会因细胞种类、转染效率、报告基因质粒、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的样品,萤火虫萤光素酶的检测,本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)高约30-45%,海肾萤光素酶的检测,本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor P)高约20-30% (图1A、B)。

本产品操作简单,读数稳定,检测速度快,从样品制备到完成整个检测过程仅需约25分钟。只需用试剂盒中提供的萤火虫萤光素酶检测缓冲液把检测底物(冻干粉)充分溶解后配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II,海肾萤光素酶检测底物和海肾萤光素酶检测缓冲液按照1:100的比例混合即可配制成海肾萤光素酶检测工作液,再各取100微升先后与20-100微升裂解制备的细胞样品混合后即可立即进行化学发光检测。并且化学发光比较稳定,萤火虫萤光素酶的信号半衰期约15分钟,海肾萤光素酶的信号半衰期约200秒。

本产品的海肾萤光素酶检测工作液对萤火虫萤光素酶的淬灭效果好。本试剂盒中的海肾萤光素酶检缓冲液和海肾萤光素酶检测底物配制的海肾萤光素酶检测工作液含有抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质,海肾萤光素酶检测试剂加入后通过简单的混匀,就可以抑制99.9%以上的萤火虫萤光素酶催化的发光信号,大大提高了后续海肾萤光素酶活性检测的精准性。

本产品稳定性好。本试剂盒在-20℃可以长期保存,配制成萤火虫萤光素酶检测试剂II后的稳定性及海肾萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测底物(100X)的稳定性均较好。萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对检测效果基本无影响,反复冻融10次检测效果下降不超过10%;4℃条件下,保存3天检测效果下降不超过20%,保存5天检测效果下降不超过30%,保存7天仍可保留60%以上的检测效果;室温保存1天可保留70%以上的检测效果,保存3天可保留60%以上的检测效果;37℃保存1天可保留50%以上的检测效果。海肾萤光素酶检测缓冲液反复冻融10次、4℃或室温保存3天对检测效果基本无影响,37℃保存1天对检测效果的影响不超过5%。海肾萤光素酶检测底物(100X)在4℃保存1周、室温保存1天检测效果下降不到10%,室温保存3天、37℃保存1天,仍可保留80%以上的活力。

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物萤光(bioluminescence) [1]。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide,在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定[2]。本试剂盒的检测原理参考图2.

双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029M) 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029M)

图2. 双萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参,以消除细胞数量和转染效率的差异[3]。

关于碧云天萤光素酶报告基因检测试剂盒相关产品的比较和选择,请参考碧云天的相关网页:
http://www.beyotime.com/support/luciferase-reporter-gene-assay.htm

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。

本试剂盒RG029S和RG029M分别可以测定100个和1000个样品。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
RG029S-1 报告基因细胞裂解液 60ml
RG029S-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG029S-3 萤火虫萤光素酶检测底物 1瓶
RG029S-4 海肾萤光素酶检测缓冲液 10ml
RG029S-5 海肾萤光素酶检测底物(100X) 100µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
RG029M-1 报告基因细胞裂解液 RG029S-1×10
RG029M-2 萤火虫萤光素酶检测缓冲液 RG029S-2×10
RG029M-3 萤火虫萤光素酶检测底物 RG029S-3×10
RG029M-4 海肾萤光素酶检测缓冲液 RG029S-4×10
RG029M-5 海肾萤光素酶检测底物(100X) RG029S-5×10
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,一年有效。萤火虫萤光素酶检测底物和海肾萤光素酶检测底物(100X)须-20℃避光保存。萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II,-80℃避光保存,至少一年有效;-20℃避光保存,推荐3-6个月内使用。

注意事项:

对于订购后可能放置较长时间后再使用的,或者对于检测结果的精度要求特别高的,推荐订购双萤光素酶报告基因检测试剂盒II (RG029);对于订购后短期内使用完毕的,推荐订购使用更加便捷的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。

加入海肾萤光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫萤光素酶的抑制可以达到约99.9%以上。但总会残留微量活性,因此,宜在转染时把海肾萤光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫萤光素酶RLU读数的10%。海肾萤光素酶的读数高于萤火虫萤光素酶的读数是完全可以的,通常不会有明显的负面影响。

本试剂盒的海肾萤光素酶检测缓冲液在反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,混匀后直接使用,经测试通常不会影响后续的检测效果。

为取得最佳测定效果,在用单管的化学发光仪测定时,样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同的时间内,例如30秒内;使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时,宜先把样品全部加好,然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前样品和检测试剂均需达到室温后再进行测定。可将萤火虫萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与对应的检测底物混合成检测试剂使用。

尽管经测试萤火虫萤光素酶检测缓冲液和检测底物混合后配制成的萤火虫萤光素酶检测试剂II反复冻融5次对其检测效果无明显影响,为保证萤火虫萤光素酶检测试剂的稳定性、取得良好的检测效果,建议现用现配。没有用完的检测试剂可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。

样品和测定试剂混合后,必须等待1-2秒,再进行测定。测定时间通常为10秒,根据情况也可以测定更长或更短时间,但是同一批样品宜使用相同的测定时间。

检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(FCP966)或BeyoGold™全白96孔细胞培养板(FCP968)。

RG027-4 海肾萤光素酶检测底物(100X)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发,有时会在初次使用时发现体积明显小于100µl的情况,此时用无水乙醇把体积补足至100µl,并混匀后即可使用。

海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用,-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降,因此不可配制成工作液后长期保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放II于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 裂解细胞:将报告基因细胞裂解液充分混匀后,按如下方式加入报告基因细胞裂解液,充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞:吸尽细胞培养液后,参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液;对于悬浮细胞:离心去上清后,参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液(μl/孔) 100 150 200 300 500

注:如果萤光素酶的表达水平比较低,可以尝试使用更少的裂解液,例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b. 充分裂解后,10,000-15,000×g离心3-5分钟,取上清用于测定。
注:细胞裂解后可以立即测定萤光素酶,也可以先冻存,待以后再测定。冻存样品需融解,并达到室温后再进行测定。
2. 融解萤火虫萤光素酶检测缓冲液和海肾萤光素酶检测缓冲液,并达到室温。将萤火虫萤光素酶检测缓冲液全部转移至萤火虫萤光素酶检测底物瓶中,旋紧瓶盖后适当颠倒混匀,当检测底物全部溶解并混匀后即为萤火虫萤光素酶检测试剂II。海肾萤光素酶检测底物(100X)置于冰浴或冰盒上备用。注:冻干粉状的萤火虫萤光素酶检测底物可能会有少量粘附在瓶盖和瓶口,旋开瓶盖前可以拿起瓶子用瓶底并轻轻敲击桌面,使粉末尽量掉落至瓶底,然后再轻轻旋开瓶盖,并注意不要损失冻干粉。
3. 按照每个样品需100微升的量,取适量海肾萤光素酶检测缓冲液,按照1:100加入海肾萤光素酶检测底物(100X)配制成海肾萤光素酶检测工作液。例如,1毫升海肾萤光素酶检测缓冲液中加入10微升海肾萤光素酶检测底物(100X)充分混匀后即可配制成约1毫升海肾萤光素酶检测工作液。
4. 按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪,可以将测定间隔设为2秒,测定时间设为10秒,或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
5. 每个样品测定时,取样品20-100微升(如果样品量足够,请加入100微升;如果样品量不足可以适当减少用量,但同批样品的使用量宜保持一致),取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
6. 加入100微升萤火虫萤光素酶检测试剂II,用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。
7. 在完成上述测定萤火虫萤光素酶步骤后,加入100微升海肾萤光素酶检测工作液,用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU (relative light unit)。本试剂盒的检测效果可以参考图1。
8. 在以海肾萤光素酶为内参的情况下,用萤火虫萤光素酶测定得到的RLU值除以海肾萤光素酶测定得到的RLU值。根据得到的比值来比较不同样品间目的报告基因的激活程度。如果以萤火虫萤光素酶为内参,也可以进行类似计算。

常见问题:
1. Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。 有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2. 可以进行ATP化学发光检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。ATP化学发光的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

参考文献:
1. J R de Wet, K V Wood, M DeLuca, D R Helinski, and S Subramani. Mol Cell Biol. 1987. 7:725-37.
2. Matthews J C, Hori K, Cormier M J. Biochemistry. 1977. 16(1):85-91.
3. E Schenborn, D Groskreutz. Mol Biotechnol. 1999. 13:29-44.

相关产品:

产品编号 产品名称 包装
RG005/RG006 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG007S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100/1000次
RG009S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(增强型) 100/1000次
RG010S/M 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒II (增强型) 100/1000次
RG016/RG017 海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG027/RG028 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG029S/M 双萤光素酶报告基因检测试剂盒II 100/1000次
RG051S/M Bright-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG052S/M Bright-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG055S/M One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG056S/M One-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG058S/M Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG059S/M Steady-Lumi™ II萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG062S/M Renilla-Lumi™海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG066S/M Renilla-Lumi™ Plus海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG088S/M Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG089S/M Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG126S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG127S/M 萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液(增强型) 10/100ml
RG129S/M 海肾萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
RG132S/M 双萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml

双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029M)
双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029M)

物质安全数据单

下载

双萤光素酶报告基因检测试剂盒II(RG029M)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
报告基因相关

使用本产品的文献:

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021S)

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒

产品编号: RG021S

产品包装:100次
选择包装

100次 1000次

说明书下载

518.00 10

价格: ¥ 518.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
RG021S 高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次 518.00元
RG021M 高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 1000次 2698.00元

碧云天生产的高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(Gaussia Luciferase Reporter Gene Assay Kit),也称高斯萤光素酶检测试剂盒(Gaussia Luciferase Assay Kit),是一种高灵敏度、高信号稳定性的以肠腔素(Coelenterazine)为底物来检测分泌型、非ATP依赖的高斯萤光素酶(Gaussia luciferase,简称Gluc)活性的试剂盒。本试剂盒可以检测不同类型的含有高斯萤光素酶的样品,既可以用于细胞培养上清样品的检测,也可以用于细胞裂解样品或纯化的酶的检测,特别适用于高通量筛选(High-throughput screening)和酶活性的实时研究。

本产品的性能达到甚至优于国外主要同类产品。本产品的性能和用途与Thermo Scientific公司的Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit基本相同。本产品的检测灵敏度显著优于国外同类产品(Competitor T) (图1A、B),化学发光的信号稳定性与国外同类产品(Competitor T)基本一致(图1C)。本产品的检测效果及与国外同类产品Competitor T的检测效果比较参见图1。

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021S)

图1. 碧云天高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021)和国外同类产品(Competitor T)对转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒pGLuc-Dura-SV40-C (D2770)的293T细胞的检测效果。图A和B分别为本产品(Beyotime)和国外同类产品(Competitor T)对使用Lipo8000™转染试剂(C0533)转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒48小时的293T细胞培养上清与细胞裂解液样品(分别使用各自的裂解液进行裂解),进行的化学发光强度的检测效果对比图;图C为本产品(Beyotime)和国外同类产品(Competitor T)对转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒48小时的293T细胞培养上清样品,进行的化学发光稳定性的检测效果对比图;图D为本产品对转染阳性高斯萤光素酶报告基因质粒24、48、72小时的293T细胞培养上清样品(转染时的细胞密度约为50-70%),进行的化学发光强度的检测效果图。实际读数会因细胞种类、高斯萤光素酶表达体系、转染效率、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品发光强度高。对于相同的细胞上清样品,本产品的发光效果比国外同类产品(Competitor T)强约20% (图1A);对于相同的细胞裂解样品,本产品的发光效果是国外同类产品(Competitor T)的10-50倍(图1B)。实测效果可能会因细胞种类、检测环境等的不同有所差异。

本产品发光信号非常稳定。发光信号在10分钟内波动不超过15%,反应30分钟内信号波动不超过30%,信号半衰期大于60分钟,在发光稳定性方面和国外同类产品(Competitor T)基本一致(图1C),特别适用于96或384孔板中高斯萤光素酶活性的大批量测定。

本产品操作简单,读数稳定,检测速度快,完成检测仅需约10分钟。高斯萤光素酶为分泌型萤光素酶,报告基因质粒转染哺乳动物细胞后,大部分高斯萤光素酶可以分泌到细胞外,检测时无需裂解细胞,可直接取上清进行检测,操作非常方便,特别适用于不同时间点的报告基因的检测(图1D)。检测时只需把试剂盒提供的高斯萤光素酶检测底物和高斯萤光素酶检测缓冲液按照1:100比例混合配制成高斯萤光素酶检测工作液,再与5-20微升细胞培养上清或细胞裂解样品混合,反应5-10分钟后即可进行化学发光检测,并且产生的化学发光信号比较稳定,信号半衰期大于60分钟。使用可以测定96孔板的化学发光的多功能酶标仪通常在2分钟内就可以完成一块96孔板的检测。

本产品稳定性好。本试剂盒中的高斯萤光素酶检测缓冲液稳定性非常好,反复冻融10次、4℃保存7天或37℃保存1天对检测效果基本无影响。37℃保存3天检测效果下降不超过5%,37℃保存7天检测效果下降不超过20%。高斯萤光素酶检测底物在4℃保存1周、室温保存1天检测效果下降不超过10%,室温保存3天、37℃保存1天,仍可保留80%以上的检测效果。

本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量检测(High-throughput screening);本产品不仅可以用于细胞上清样品的检测,试剂盒同时也提供了高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液,可以用于细胞裂解样品的检测。

本产品兼容性强。本产品兼容各种常见培养液,正常培养液中的酚红、10%以内的胎牛血清或小牛血清、2%以内的DMSO或乙醇、萤光素酶抑制剂等对信号和稳定性基本没有影响,常用的盐类或金属离子在正常浓度下也基本没有影响。

高斯萤光素酶(Gaussia luciferase)是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。高斯萤光素酶为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kDa),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。与萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)和天然的海肾萤光素酶(Renilla luciferase)相比,高斯萤光素酶具有以下优点:高斯萤光素酶为自然分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无需裂解细胞,样本的分析和酶活检测只需要几分钟,使得操作更加方便,更适用于报告基因不同时间点的检测和高通量筛选;高斯萤光素酶是可获得的较亮的萤光素酶,它的发光强度是萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶的萤光信号的1000多倍,具有更高的检测灵敏度;反应无须ATP,不受ATP影响;高斯萤光素酶的稳定性更高,对温度和pH的耐受性强,可适用于多种培养基[1-3]。

高斯萤光素酶产生的生物萤光是由于腔肠嘧啶的氧化作用,这种反应不需要三磷酸腺苷(ATP)或其它辅助因子。在氧气存在的条件下,高斯萤光素酶可以催化腔肠素(Coelenterazine)氧化成Coelenteramide。在Coelenterazine氧化的过程中,会发出波长为480nm左右的生物萤光(Bioluminescence)。生物萤光可以通过化学发光仪(Luminometer)或液闪测定仪进行测定,萤光强度与高斯蛋白表达量相关,与高斯蛋白表达的启动子活性成正比。通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3′-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(Reporter gene)质粒,然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。本试剂盒的检测原理参考图2。

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021S)

图2. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。

碧云天同时提供高斯萤光素酶报告基因的空载体质粒和直接使用的报告基因质粒,详见相关产品。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶、海肾萤光素酶和高斯萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶和高斯荧光素酶。

对于96孔板,按照检测每个样品需要50μl检测工作液的量,此时本试剂盒S和M包装分别可以进行100次和1000次检测。对于384孔板,按照检测每个样品12.5μl检测工作液的量,此时本试剂盒S和M包装可以进行400次和4000次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
RG021S-1 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 10ml
RG021S-2 高斯萤光素酶检测缓冲液 5ml
RG021S-3 高斯萤光素酶检测底物(100X) 50μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
RG021M-1 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 100ml
RG021M-2 高斯萤光素酶检测缓冲液 50ml
RG021M-3 高斯萤光素酶检测底物(100X) 50μl×10
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,6个月有效。RG021-1 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液和RG021-2 高斯萤光素酶检测缓冲液,-20℃保存一年有效;RG021-3 高斯萤光素酶检测底物(100X),-20℃避光保存6个月有效,-80℃避光保存一年有效。

注意事项:

由于萤光素酶的活性对温度比较敏感,所以反应前细胞样品和高斯萤光素酶检测缓冲液均需平衡至室温后再进行测定。可将检测缓冲液在室温或不超过25℃的水浴中融解并混匀后再与检测底物混合成检测工作液使用。

本试剂盒中的高斯萤光素酶检测缓冲液在反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。

高斯萤光素酶检测底物(100X)配制在含有高浓度乙醇的溶液中。由于乙醇容易挥发,有时会在初次使用时发现体积明显小于包装体积的情况,此时用无水乙醇把体积补足至包装体积,并混匀后即可使用。

高斯萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用,-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降,因此不可配制成工作液后长期保存。

细胞的培养和转染等可以使用普通的透明96/384孔板,但是使用多功能酶标仪对细胞培养上清或细胞裂解样品进行化学发光的检测时,请使用孔和孔之间不透光的96/384孔白板或黑板。如果使用普通透明的96/384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。推荐使用碧云天的BeyoGold™全黑或全白96/384孔细胞培养板(FCP966/FCP968/FCP983/FCP985)、白色或黑色透明底96/384孔细胞培养板(FCP963/FCP965/ FCP986/FCP987)。

待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应,从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

对于同一批样品的检测,必须固定所用样品的体积,使不同样品之间的检测数据具有更好的可比性。

如需更多的高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液,可以单独选购碧云天生产的高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液(RG135),该产品与本试剂盒中的高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液的组分完全一致。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.细胞的准备:
使用适合进行化学发光检测的96孔板,每孔接种100μl细胞(如使用384孔板,每孔接种25μl细胞,具体用量视不同类型的384孔板而定),同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照,按照细胞培养和细胞转染的常规方法培养和转染细胞。如有需要,可加入药物处理细胞。继续培养16-72小时。
2.检测试剂的准备:
a.试剂准备:融解高斯萤光素酶检测缓冲液,并平衡至室温。高斯萤光素酶检测底物(100X)放置于冰浴或冰盒上备用。
b.高斯萤光素酶检测工作液的配制:按照检测每个样品需要50μl检测工作液的量,计算所需的高斯萤光素酶检测工作液的量。按照1:100的比例混合适量高斯萤光素酶检测底物(100X)和高斯萤光素酶检测缓冲液,配制成高斯萤光素酶检测工作液。例如,1ml高斯萤光素酶检测缓冲液中加入10μl高斯萤光素酶检测底物(100X)充分混匀后即可配制成约1ml高斯萤光素酶检测工作液。
3.细胞样品的准备:
a.细胞培养上清样品的准备:根据具体实验情况,酌情收集5-200μl细胞培养上清至1.5ml离心管中或收集5-20μl细胞培养上清至检测化学发光用的96孔白板或黑板中,平衡至室温。如有需要,可以在不同的时间点收集培养基,以监测萤光素酶表达的变化。如果不能立即检测,可以将收集好的细胞培养基存放于-20℃。样品在-20℃至少可保存一个月。
b.细胞裂解样品的准备:去除细胞培养液,用PBS洗涤1次,每孔加入高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液100μl,在摇床上以中等速度摇动裂解15分钟。在光学显微镜下检查细胞是否完全溶解,如果溶解不完全,继续摇动裂解15分钟。如果不能立即检测,可以将裂解液样品存放于-20℃,至少可保存一个月。如果细胞最初培养在48孔、24孔、12孔或6孔板中,每孔酌情加入约100-500μl裂解液。
4.萤光素酶检测:
a.取5-20μl细胞培养上清或细胞裂解样品加入96孔白板或黑板。
注1:优先推荐使用5μl样品,样品体积较小时化学发光更加稳定。
注2:对于同一批样品的检测,必须固定所用样品的体积,使不同样品之间的检测数据具有更好的可比性,因为样品体积的大小对于最终的化学发光值会产生一定的影响。
b.每孔加入高斯萤光素酶检测工作液50μl,混匀。
c.室温(约25℃)孵育5-10分钟,使发光信号趋于稳定。
d.使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数,每个孔的检测时间一般为0.25-1秒或更长时间,具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

常见问题:
1.Luminometer和荧光分光光度计有何不同?
荧光分光光度计检测的样品本身不能发光,样品需要由特定波长的激发光激发,然后才能产生荧光并被荧光分光光度计检测。Luminometer检测的样品本身可以发光,不需要激发光进行激发。也就是说luminometer是检测化学发光(萤光)的仪器。有些型号的荧光分光光度计也具有luminometer的功能,即也可以检测化学发光。您所使用的荧光分光光度计能否用于化学发光的测定请仔细阅读该仪器的说明书。
2.可以进行萤光素酶报告基因检测的仪器是否就可以用于本试剂盒的检测?
是。萤光素酶报告基因的检测原理和本试剂盒的原理相同,可以用相同的仪器测定。

参考文献:
1.Tannous BA, Kim DE, Fernandez JL, Weissleder R, Breakefield XO. Mol Ther. 2005. 11(3):435-43.
2.Szent-Gyorgyi C, et al. Proc SPIE. 1999. 3600(1):4-11.
3.Tannous BA. Nat Protoc. 2009. 4:582-591.

相关产品:

产品编号 产品名称 包装
RG021 高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG072 Gaussia-Lumi™高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒 100/1000次
RG135 高斯萤光素酶报告基因细胞裂解液 10/100ml
D2098 pGLuc (报告基因质粒) 1/100µg
D2100 pGLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2103 pGLuc-TA (报告基因质粒) 1/100µg
D2104 pGLuc-Dura-TA (报告基因质粒) 1/100µg
D2107 pGLuc-Dura-miR (报告基因质粒) 1/100µg
D2114 pARE-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2181 pISRE-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2209 pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2225 pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2261 pSTAT3-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2204 pNFκB-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1/100µg
D2764 pGLuc-Dura-SV40-N (报告基因质粒) 1/100µg
D2770 pGLuc-Dura-SV40-C (报告基因质粒) 1/100µg
FCP966 BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒,320个/箱
FCP968 BeyoGold™全白96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 80个/盒,320个/箱
FCP963 BeyoGold™白色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP965 BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP981 BeyoGold™ 384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP983 BeyoGold™全白384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP985 BeyoGold™全黑384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP986 BeyoGold™白色透明底384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱
FCP987 BeyoGold™黑色透明底384孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) 8个/盒,48个/箱

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021S)
高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021S)

物质安全数据单

下载

高斯萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG021S)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
报告基因相关

使用本产品的文献: