标签归档：示踪

荧光金—神经逆行示踪检测COA

发表于由

中国*代理 大量现货

Hydroxystilbamidine (FluoroGold)

Catalog #: 780000

Selection:20 mg

Price：2600

 

Product Description

Hydroxystilbamidine has been used extensively as a retrograde tracer for neurons and also a histochemical stain. Please also see hydroxystilbamidine 4% in H2O (80023), which is a more convenient, ready-to-use form.

  • λEx/λEm = 361/536 nm

  • Yellow solid soluble in water

  • Store at 4°C and protect from light

  • C18H24N4O7S2

  • MW: 473

FluoroGold is a trademark of Fluorochrome, LLC.

MSDS (PDF): MSDS 80014

相关应用资料：

神经示踪剂应用背景：神经示踪剂常用于阐明神经系统的解剖。示踪剂可以顺行，从轴突到胞体；也可以逆行，从胞体到轴突。在这些示踪剂的帮助下，可以确认轴突的起源细胞，他们支配某种特定结构形成；也可以鉴别从某一特定的神经元出来的轴突投射的目标位置。

Fluoro-GoldTM 荧光金（神经逆行示踪检测）

产品背景

Fluoro-GoldTM是当今世界上应用zui普遍和非常有效的神经逆行示踪剂，Fluorogold也称为羟脒替（hydroxystilbamidine），是Fluorochrome, LLC.公司的专有产品，于1985年开始范围内销售。

Fluoro-GoldTM antibody （抗体）为Fluorochrome, LLC.特别开发的高灵敏度抗体，能够大幅度增强Fluorogold的可见度。Fluorochrome, LLC.公司1998年引进该抗体以来，不仅大量文献研究证实其有效性，而且成为行业检测的金标准。

产品优势

1）Fluoro-Gold（荧光金）的产品优势：

﹄ 极其强效的神经逆行荧光示踪剂，灵敏度高且结果稳定；

﹄ 不会非特异性结合传代中未损伤的纤维；

﹄ 不会渗出逆行标记的神经元；

﹄ 标记神经元存活周期广，1天或者高于1个月；

﹄ 可用压力注射或者离子透入（iontophoresed）的方法将染料导入动物体内；

﹄ 与zui常用的其他几种神经解剖技术相兼容，比如免疫荧光术（IF），免疫细胞化学（ICC），放射自显影技术，过氧化物酶免疫组化（HRP-IHC）,石蜡包埋和其他逆行荧光示踪剂

﹄ 操作简便安全，保质期长；*可靠的材料来源；

2）Fluoro-Gold（荧光金）与Fluoro-Gold抗体结合使用的优势：

﹄ 大幅度增强荧光金标记的可视度；

﹄ 允许更的解剖标测

﹄ 显示相当细微的解剖结构包含树突，轴突和轴突末梢

应用图片：

  

Left: VTA (40X) after Fluoro-Gold injection in the accumbens.  Antibody is at 1/100,000.

Right: Hypothalamic cells along the 3rd left ventricle (40X) after Flouro-Gold injection in the PVN.  Antibody is at 1/50,000.

产品使用

1）Fluoro-Gold（荧光金）单独标记技术

﹄ 溶解体系（vehicle）：溶于蒸馏水，0.9%生理盐水，或溶于0.2M中性磷酸盐缓冲液配置成悬浮液

﹄ 染液浓度：有效染色浓度范围1-10%。初次实验推荐使用浓度4%。 如果注射部位发生意外坏死，或者标记过于密集，可降低浓度至2%。Fluoro-Gold分子量为532.6 daltons。

﹄ 注射方法：压力注射；离子透入；或者晶体注入；

﹄ 术后存活时间：好的逆行神经示踪标记一般在术后2天~2个月内观察到。通常情况下术后的存活周期是3~5天。在染料不会向胞外扩散的前提下存活时间长能够改善远端神经末梢的填充。

﹄ 固定：差不多同所有固定方式兼容，或者也可不做固定；常常使用含4%甲醛的中性生理缓冲盐作为固定剂。注：含高浓度重金属（如锇，汞）的固定剂会导致荧光淬灭，另外含高浓度（＞1%）戊二醛可能会加深背景荧光；

﹄ 组化处理：含Fluoro-Gold的组织样本几乎与所有通用的组化处理技术兼容，经常使用的是固定组织的冰冻切片（20 µm）。另还包含未固定组织的恒冷切片（10 µm）；塑料（0.2-4 µm）或石蜡（3-10 µm）包埋的薄切片；

﹄ 联合检测：切片进一步处理用于第二种标志物（marker）的检测如放射自显影，HRP组化分析；免疫细胞化学；第二种荧光示踪剂；荧光素复染等等。

﹄ 封片，清洗和盖片：切片通常黏附在明胶包被的载玻片上，风干，二甲苯浸渍，然后加入非荧光的DPX塑性封片剂来盖片；

﹄ 观察与拍照：荧光金可直接用荧光显微镜观察，使用宽带紫外激发滤光片。颜色：中性pH缓冲液处理组织发射金色光；酸性pH缓冲液（如pH=3.3）处理组织发射蓝色；也可以用数码拍照或者胶片曝光来记录结果。

2）Fluoro-Gold（荧光金）+ Fluoro-Gold antibody（荧光金抗体）的组合标记技术

﹄ 抗体特性：兔多克隆（100 µl，1:100 dilutionl），BSA diluent (50 mM KPBS, 0.4% Triton, 1% BSA, 1% NGS)稀释500~1,000×,与 Vector elite kit结合使用大概可做300~1000张切片。

﹄ 抗体使用：荧光金注射入动物体内之后，漂片（以灌注4%甲醛的大鼠脑组织切片，30 µm为例）在Fluoro-Gold 抗体工作液中4度孵育18小时后，清洗，然后用生物素化GAR（Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody ，1:1000，Cat#：BA-1000）室温孵育1h，之后清洗。 切片再用Avidin/Biotin（1:1000， vector， Cat#:PK6100）孵育1h，之后转入DAB显色底物孵育6 mins（Diaminobenzidine (.04%) and Nickel Chloride (2.5%) in 0.1 M NaAcetate with 0.06% H2O2）。切片zui后进行清洗，组织黏合，干燥，脱水和盖片。

    Targeting Systems—转染、荧光示踪

    发表于由

    Targeting Systems—转染、荧光示踪

    Targeting Systems公司是一家依靠美国国立卫生研究院（NIH）的小型商业创新研究基金资助，于1996年5月成立的高科技生物制品企业。在成立的*年即推出其*产品线—Targefect。Targeting Systems公司从成立zui初的一个员工目前已发展为拥有多样化的和强大的知识产权的生物企业，产品超过100种。凭借其在生物荧光研究领域的优势，Targeting Systems公司致力于新药研发、药物筛选、基因表达及干细胞研究与治疗的技术与产品供应。同时，Targeting Systems公司也在功能基因组学上*优势，包括基因表达调控，通过胞内注入功能性活性蛋白从而改变细胞功能状态，以及超敏感的报告基因检测的研发。目前公司的主打产品是荧光素酶（Luciferases）检测试剂盒，可以广泛应用于药物筛选、基因表达和干细胞研究。

    Targeting Systems公司的产品的主要应用：

    一、新药研发与药物筛选

    荧光素酶是Targeting Systems公司的主打产品，该系列产品拥有zui强的荧光强度(红色、蓝色和绿色)，产品有着非常宽的光谱选择，是目前市场上拥有zui大选择余地的超敏荧光素酶供应商，共有7种颜色的光谱，比市场上常规的Photinus和Renilla荧光素酶的荧光强6 – 1000倍。产品包括Gaussia荧光素酶，Cypridina荧光素酶，绿/蓝分泌型Renilla荧光素酶，红色Luciola Italica荧光素酶以及ans荧光素酶检测试剂。可一次性应用单/双或3个荧光素酶进行研究。

    二、基因转染—Targefect产品线

    Targeting Systems公司*的Virofect转染技术（一种腺病毒来源的强化配方，可直接将目的基因导入细胞核，zui大程度增强难转染细胞的转染效率）可实现转染以及难转染细胞的转染，包括多种原代培养细胞，转染效果甚至优于电转染。还提供根据特定细胞设计的转染试剂及转染实验方案，以提高特定难转染细胞的转染效率。多种因素促成了Targefect产品线的转染与*优势，包括Tarefect F-2 试剂，多肽增强子，Virofect转染技术等。这些*优势包括

    1、使用*配方的试剂完成基因直接入核核；

    2、使用简单而易于操作的脂质配方完成部分难转染细胞的基因转染；

    3、使用基于腺病毒的增强试剂配方，利用细胞表面的腺病毒受体进行基因转染，这种方法可得到的基因转染以及增加所转基因的表达效率；

    4、产品包括适用于大多数细胞株的细胞特异的转染试剂与方案。

     

     

    Human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) 
    Targefect-HUVEC

     

    HEK-293 cells 
    Targefect-293

     

    Human hepatocytes 
    Targefect-Hepatocyte

     

     

     

     

     

     

     

    Even Large DNA loads Vascularare efficiently delivered. Delivery of 170kD BACs in CV-1 cells 
    Targefect-BAC

     

    Smooth muscle cells 
    Targefect-SMC

     

    Macrophages (Raw 267.4 cells)
    Targefect-RAW

    三、肿瘤成像与细胞示踪

    Targeting Systems公司利用慢病毒–荧光素酶结合技术 (LentiGlo TM)可表达zui强的荧光，实现稳定转染（几乎100%的转染效率），是体内生物成像（培养细胞或活体动物）的理想产品。LentiPower™试剂盒可在研究人员实验室快速得包装自己的荧光表达慢病毒。Targeting Systems公司的肿瘤成像与细胞示踪产品还具有以下优势：

    快速制备稳定转染的细胞；

    凭借特定的分泌型荧光素酶及强荧光蛋白可在体外培养细胞或体内研究基因表达；

    具有zui高的转染效率，可稳定转染多数难转染细胞，如干细胞和神经细胞；

    利用多种颜色（光谱）的荧光素酶及报告子可在同一组细胞中分析多个分子通路；

    可在研究人员自己的启动子或目的时间点研究基因表达；

    使用安全的自失活载体，可在研究干细胞或体内肿瘤生长和存活时不损伤细胞。

    四、基因沉默（konckdown）

    利用Targeting Systems公司的Targefect siRNA试剂盒可转入 siRNA /microRNA ，凭借基于Gaussia荧光素酶的pSiiScreen系统，可在体内或体外筛选。是实时高通量筛选siRNAs的理想工具。

    五、干细胞研究

    胚胎干细胞及间充质干细胞的转染试剂，利用蛋白输送系统可定向干细胞分化类型，而LentiGlo可检测细胞的生长和存活状态。

    转染试剂：可将功能性活性蛋白导入各种原代人类干细胞的胞内或核内，通过导入特定的转录因子监测体内干细胞的分化状态。

    StemTrack™：用于体内外无损伤监测干细胞存活、生长于分化。

    Profect蛋白输送试剂（Protein delivery Reagents）：

    LentiGlo™：是Targeting Systems公司提供的*慢病毒–荧光素酶产品，可稳定转染人类干细胞，使之成为与荧光蛋白一起高共表达特定荧光素酶的细胞类型。

    六、蛋白导入系统

    Targeting Systems公司的蛋白导入系统可实现胞内或核内导入功能性蛋白、多肽或抗体，可将蛋白导入巨噬细胞，进而研究微生物导致的疾病的发病机理。具有如下优势优势：

    可为包括人类干细胞在内的大多数细胞株导入多种蛋白；

    导入蛋白具有高活性；

    可导入功能性抗体；

    可导入功能性酶（如CRE重组酶、caspase，β–半乳糖苷酶，荧光素酶等）进行多方面的细胞学研究；

    可将功能性蛋白导入分化的细胞；

    可用于鉴定微生物（细菌或寄生虫）发病机理的毒性因素，病理机制及鉴定特定的药物靶点；

    可实现多个蛋白的同时共导入，导入效率高，可实现难转染细胞的蛋白导入。

    七、LiveResponse™

    该产品是Targeting Systems公司的产品，可使用5种分泌型的强荧光报告子—Gaussia荧光素酶(482 nm), Cypridina荧光素酶(463 nm), Blue-shifted Renilla荧光素酶（467 nm）, Green Renilla荧光素酶(527 nm)及Red Italica firefly荧光素酶(613 nm)—在同一群细胞分析4种不同启动子活性，在活性中检测 NFKB 、CRE构件、 GPVR谱及凋亡。该产品还具有以下优势：

    高的灵敏度及快速检测功能

    在同一群细胞中可分析3条或更多哦分子通路，而且不损伤细胞的前提下进行实时研究。

    通过选择不同发射波长的荧光素酶，可以实现一次荧光素酶试剂导入中研究多个荧光素酶报告子。

    高荧光强度及稳定性使这些新颖的荧光素酶报告子非常适合于高通量筛选应用

    与其他商业荧光素酶检测系统相比具有高性价比

    体内无损伤应用。

    八、蛋白表达系统

    Targefect-293/Targefect-293F是Targeting Systems公司高水平的蛋白表达体系，其*的脂质体转染配方可实现293细胞和CHO细胞的转染，操作方法简便。

    常用神经示踪剂及其示踪特点

    发表于由

    【摘要】 丰富的神经示踪技术极大的促进了神经解剖学的发展，为神经生物学的各种研究提供了良好基础，在此，我们概述了常用神经示踪剂及其示踪特点，重点介绍了各种荧光染料和植物凝集素IB4的示踪特点。

    【关键词】 神经示踪剂;辣根过氧化物酶;荧光染料;植物凝集素IB4;病毒

    Common characteristics of the neural tracers

    　　Zhu He1,2, Li Li2, Zhao Lei2, Ma Ketao2, Si Junqiang2

    　　（Shihezhi University, Shihezhi Xinjiang 832002）

    自20世纪70年代初Kristenson将辣根过氧化物酶（HRP）应用于追踪神经纤维以来，该方面的研究取得了的迅猛发展。此后，许多用途广泛、敏感性强并能选择性地进行顺行、逆行标记或同时具有顺、逆行标记的追踪物质被应用到神经纤维的研究，对神经解剖学的发展起到了积极的推动作用。现就常用的神经示踪剂及其示踪特点综述如下：

    　　1辣根过氧化物酶

    　　1.1辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase，HRP） HRP是一种含血红素基的植物糖蛋白。HRP法是20世纪70年代发展并被广泛应用的一种神经追踪方法，但由于HRP显影需要许多复杂的免疫组织化学技术，而且HRP参与细胞代谢，不能在细胞内长期存留，易扩散到邻近组织造成神经元的误染，其反应产物较不稳定，易丢失，另外还存在“再摄取”现象[1]， 使得HRP在神经逆行示踪方面的应用大大减少。

    订货信息：

    OBT7271 HORSERADISH PEROXIDASE   12107 1 g AbD Serotec
    OBT7272 HORSERADISH PEROXIDASE   2485 25 mg AbD Serotec
    OBT7273 HORSERADISH PEROXIDASE   4314 100 mg AbD Serotec

     

    　　1.2 霍乱毒素亚单位B结合的辣根过氧化物酶（CBHRP）R. N.Ranson等[2] 对传统的辣根过氧化物酶的染色方法进行了改进，采用结合了霍乱毒素亚单位B的辣根过氧化物酶（CBHRP）作为示踪剂，清晰显示了神经元的胞体和轴突结构。近来也有采用四甲基联苯胺（TMB）为底物替代传统的二氨基联苯胺（DAB）来示踪豚鼠的面神经[3]的报道。TMB与DAB相比有不致癌和HRP反应灵敏度高，操作简便，步骤少，用时短及成本低等诸多优点。

    ADI-80-0350 TMB substrate, （10 ml）   360 10 ml ENZO
    ADI-80-0615 TMB substrate, （5 ml）   360 5 ml ENZO
    ADI-80-1805 TMB substrate, （50 ml）   600 50 ml ENZO
    BUF022 DAB SUBSTRATE BUFFER   1292 2 x 50ml AbD Serotec

     

    　　HRP法标记的神经元经组织化学法处理后,细胞失去了活性,无法进行膜片箝等神经电生理的研究,限制了HRP法在这一领域内的应用。

    　　2荧光染料

    　　从上世纪50年代开始，荧光染料示踪技术发展起来。它贮存稳定，特别是组合采用不同的荧光染料分别标记神经元胞核和胞浆，可实现荧光双标或多重标记，这是荧光素示踪的一个zui大优点。这种示踪剂染色后只需使用荧光显微镜，便可观察到已被标记的神经纤维或胞体。下面介绍几种常用的荧光素。

    　　2.1 固蓝（Fast blue，FB）FB系水溶性染料，其颗粒较细密，易于被神经轴索摄取，所以标记神经纤维或胞体多于其他染料，易于从标记细胞内扩散到周围组织，照射时褪色较快，即使保存在低温、避光条件下，仍不能长期保存。对需要标记后较长时间的观察，或需分离培养神经元细胞进行实验研究则不太理想。

    订货信息

    17740-5 Fast Blue   15827 5mg polysiences
    17740-2 Fast Blue   7446 2mg polysiences
    17740-1 Fast Blue   4131 1mg polysiences

    　　2.2 荧光金（Fluoro gold，FG）FG系脂溶性染料，能标记细胞质，它在紫外线（323nm）激发下发金黄色光（408nm），属慢速轴浆运输类，细胞核不着色，能很好显示树突分支，细胞外无荧光染料渗漏，不易扩散，与周围组织分界清晰，褪色比较慢，可以经受许多组织学染色处理，因而可以和HRP、免疫组织化学等方法结合。其在细胞质内的存在不超过3周[4]。

    订货信息：厂家 fluorochrome

    780000 荧光金 Fluoro-Gold 10mg ￥2000
    780001 荧光金 Fluoro-Gold 50mg ￥6700
    780002 荧光金 Fluoro-Gold 100mg ￥12800
    780003 荧光金 Fluoro-Gold 150mg ￥18000
    780004 荧光金 Fluoro-Gold 200mg ￥21500
    781001 荧光金抗体 Antibody to Fluoro-Gold 0.1ml×￥1 5700
    781002 荧光金抗体 Antibody to Fluoro-Gold 0.1ml×￥2 9800
    781003 荧光金抗体 Antibody to Fluoro-Gold 0.1ml×3 12800
    782001 红色荧光金 Fluoro-Ruby 30mg 3200
     

    　　有学者将其用于视神经的研究,标记了视神经纤维的分布路径和走向[5]。Takayuki Nakajima等[6]采用荧光金结合SP、CGRP免疫荧光标记反应，发现大鼠L6DRG和S1DRG内均存在大小不等的SP/CGRP双标记神经元及中小型大小的FG/SP、FG/CGRP双标记阳性细胞和FG/SP/CGRP三标记阳性细胞，这些标记阳性细胞可能与包皮系带损伤后阴茎自发性疼痛的产生和传递有关。

    　　2.3 羰化青（1,1′ Dioctadecyl3,3,3′,3′ tetramethylindocarbocyanine perchlorate，DiI） DiI是一种紫红色晶体，具有高度的亲脂性,在水中的溶解度很低，通常用乙醇溶解。它荧光强而稳定,无毒性，不影响被标记细胞的存活、生长，在标记细胞内消失慢、单纯沿脂质膜扩散，有良好的轴突特异性，且对过路纤维影响小。在549nm激发光下可以产生发射波长为565 nm红色荧光[7]。

    　　1986年Honig[8]等报道DiI可作为荧光示踪剂用于培养的神经细胞和骨骼肌细胞。DiI对试管内动物胚胎的感觉和运动神经元没有显著的毒性作用，因而适用于活的组织、细胞的示踪、标记。但也有研究报道显示DiI易于淬灭及易向神经元胞体外扩散的问题[9]。总的来说, DiI具有在细胞内稳定表达、标记细胞形态良好、对活体细胞无毒性、在标记细胞内消失慢[10]、使用简便、染色速度快的特点。尤其是不影响被标记细胞的电生理和生化特性使其越来越多的被用于神经科学领域的研究[11]。

    AAT-22035 DiIC12（3） perchlorate [1,1-Didodecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate]   975 25 mg AAT Bioquest
    AAT-22044 DiIC16（3） perchlorate[1,1-Dihexadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate]   975 25 mg AAT Bioquest
    AAT-22102 DiI perchlorate [1,1-Dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate]   975 100 mg AAT Bioquest

     

    　　2.4 荧光染料双标染色法 双标技术是通过不同示踪剂对细胞核、细胞浆亲和力不同，用两种示踪剂对不同的神经纤维或靶器官进行标识。

    　　2.4.1 固蓝（Fast Blue） 和核黄（Nclear Yellow） 双标染色 Viterbo F等[12] 用固蓝和核黄双标染色研究损伤后的胫神经和腓神经的侧芽来源情况，对神经纤维进行了直接的形态学观察。

    订货信息：

    AAT-17539 Nuclear Yellow [Hoechst S769121]   2535 25 mg AAT Bioquest
    17740-5 Fast Blue   15827 5mg polysiences
    17740-2 Fast Blue   7446 2mg polysiences
    17740-1 Fast Blue   4131 1mg polysiences

    　　2.4.2固蓝（Fast Blue）和双脒基黄（Diamidino Yellow） 双标染色 双脒基黄（Diamidino Yellow）荧光激发波长360 nm，经神经轴浆流的逆行转运可达细胞核，细胞核呈绿色、黄绿色或黄白色。激发后荧光很强时，细胞浆有时映出部分黄绿色或黄白色。C.T. Byers等[13]比较了固蓝（Fast Blue）和双脒基黄（Diamidino Yellow）逆行标记神经元的效力,研究结果显示无论是单独使用还是二者按任何次序联合使用,被标记的神经元的数目是一致的。证明使用FB和DY进行荧光双标的方法是可行的。相对于FB和其他的荧光染料组合形式,DY和FB的组合更为合理。DY能够标记细胞核的同时FB可以清晰的显示细胞浆,在同一荧光显微镜下,二者可以清晰的显示被标记的细胞而充分互补。

    　　2.4.3 台盼蓝（Trypan Blue） 和双脒基黄（Diamidino Yellow） 双标染色 台盼蓝荧光激发波长为375 nm，经神经轴浆流的逆行转运可达细胞浆，激发后细胞浆呈亮蓝色。Yang等[14] 使用双脒基黄和台盼蓝荧光双标研究切断腓总神经后行腓总神经断端和胫总神经吻合的脊髓背根神经节细胞发现,在相应L4L6背根神经节及相应脊髓腰膨大中分别存在双脒基黄和台盼蓝双标的细胞，说明两神经之间有交叉支配的存在，表明神经端侧缝合后的再生方式是侧枝芽生。

    　　1991年Fritzsch和Sonntag[15]比较研究了荧光素和生物素葡糖聚胺的标记效力，随后Harsh[16]等在1991年又比较了FG素和DiI两者之间的标记效能。1993年，Brushart等人又分别比较研究了荧光素和HRP之间的标记效能。这几种示踪剂的组合的弊端是在同一显微镜下不能被同时观察到。更重要的是，生物素葡糖聚胺和DiI通常情况下不被未损伤神经摄取的特性决定使用两者作为标记物时必须先切断或损伤被标记神经。常用的几种荧光染料中，TB和FB能够标记细胞浆，NY和DY能够特异的结合被标记细胞的细胞核。

    　由于荧光素分子量小，用于逆行追踪的共同问题是易于扩散，比HRP法更难于确定有效注射部位。与HRP法相似，荧光素示踪法也存在过路纤维摄入问题。褪色是荧光素的一大缺点，在激发光照射下较快褪色，因此允许观察的时间短。即使在低温、避光条件下，切片保存时间仍有限，不能长期保存。

    　　3 生物素葡糖聚胺（Biotindextran amine, BDA）

    　　BDA应用于轴浆运输的各种示踪剂，常用来研究神经元的分支投射，但很少有直接用于观察周围神经局部轴突的研究。BDA具有保存时间长，并可与多种荧光追踪剂及各种免疫组织化学技术相结合的优点[17]，能满足光镜及电镜下观察的要求。相对于HRP与荧光素示踪剂，经处理的BDA标记组织标本可以保存6个月以上，不影响zui终显影结果。

    　　4病毒

    　　常用在神经通路示踪方面的两类病毒是腺病毒（Adenovirus）、腺病毒伴随病毒（Adenoassociatedvirus,rAAV）和疱疹病毒。

    　　腺病毒和腺病毒伴随病毒在神经示踪中的应用得益于绿色荧光蛋白（Greenfluorescenceprotein,GFP）基因的发现。日本科学家下村修、美国科学家马丁·沙尔菲和美籍华裔科学家钱永健正是因为在发现和研究绿色荧光蛋白方面做出的重大贡献摘取了2008年的诺贝尔化学奖。

    　　GFP来源于维多利亚水母（AequoreaVictoria）,其荧光发射峰在509nm，zui大激发波长为395 nm，并在470 nm处有1个肩峰[18]，其化学性质相当稳定[19]。荧光蛋白的显著优点是与生物相容性好，标记生物分子后不影响其生物活性，发光强度高，易于识别与检测。但是，目前荧光蛋白种类还比较少，而且大部分都是从生物体中提取，较难大批量生产[20] 。

    　　4.1腺病毒（Adenovirus）、腺病毒伴随病毒（Adenoassociatedvirus,rAAV）构建表达GFP的腺病毒和rAAV载体，用于神经细胞和神经通路的示踪，具有*的优点。GFP产生的荧光可以耐受光漂白和福尔马林的固定，能够制成长期保存的标本[21]，可用于不同神经元的形态学分析和纤维的研究，尤其适用于某些特定功能的局部神经环路的研究。

    　　但是注入GFP 基因重组病毒的多少将影响GFP荧光的强弱。如果注入重组病毒过少时，荧光浅淡而不易观察，如果注入的GFP基因重组病毒较多，它在标记神经元及突起的同时，会增多对神经胶质细胞的标记，产生干扰[22]。

    　　4.2 疱疹病毒（Herper virus）疱疹病毒的主要特点是亲神经性和跨神经元传递。疱疹病毒是具有复制能力的病毒，作为神经通路的示踪剂,它能够对示踪信号进行放大，增加了示踪的灵敏度。在应用疱疹病毒作为神经示踪剂时，对病毒毒株的选择对实验成败具有重要的意义。

    　　5植物凝集素IB4

    　　凝集素（Lectins）是一类从各种植物种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖的蛋白。凝集素zui大的特点是能识别细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞膜表面的糖基。

    　　作为初级伤害性感受器的小直径感觉神经元根据和IB4结合能力的不同可以分为植物凝集素阳性的非肽能神经元和植物凝集素阴性的肽能神经元，前者呈胶质源性营养因子依赖性，而后者则呈神经生长因子依赖性[23]。植物凝集素阳性的非肽能神经元的动作电位相对于植物凝集素阴性的肽能神经元而言，其持续时间较长、具有更高密度的河豚毒素不敏感的钠电流以及更小的热伤害刺激电流[24]。Belyantseva等[25]发现在遭受慢性损伤后，植物凝集素阴性的肽能神经元会大量的增生。

    　　综上所述，辣根过氧化物酶zui早应用于神经的逆行示踪，但由于使用方法较复杂且稳定性差、易扩散，限制了它的应用;荧光示踪剂使用方法简便易行、易观察，但存在荧光淬灭现象，仅适用于短期观察，而生物素葡聚糖胺则不存在这种现象，其结果可以保存较长时间;其他毒素或病毒鳌合物能良好地显示神经元链或网络，但目前在神经示踪方面应用较少;物凝集素IB4能特异地和脊神经节内与伤害性刺激相关的小型神经元结合，为脊髓背根神经节痛觉相关小直径细胞的研究提供了极大的方便。

    【参考文献】
    　　1 Kamijo Y, Koyama J, Oikawa S, et al. Regenerative process of the facial nerve: rate of regeneration of fibers and their bifurcations[J]. Neurosci Res, 2003, 46（2）: 135-143.

    　　2 Ranson RN, Motawei K, Pyner S, et al. The paraventricular nucleus of the hypothalamus sends efferents to the spinal cord of the rat that closely appose sympathetic preganglionic neurones projecting to the slate ganglion[J]. Experimental Brain Research, 1998, 120（2）: 164-172.

    　　3 Sahni V, Qi Y and Frostick S. Peripheral nerve regeneration[J]. Eur Surg, 2005, 37（4）: 187-192.

    　　4 SellesNavarro I, VillggasPerez MP, SalvadorSilva M, et al. Retinal ganglion cell death after different transient periods of pressureinduced ischemia and survival intervals. A quantitative in vivo study[J]. Invest Ophthalmol Vis, 1996, 37（10）: 2002-2014.

    　　5 Chen Pei, Wang Peng, Chen Guangli and Gong Shusheng. Study on remodeling of astrocytes in facial neuclus after peripheral injury[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology, 2005, 25（6）: 726-728.

    　　6 Takayuki N, Seiji O, Yamamoto S , et al. Differences in innervation and innervated neurons between hip and inguinal skin[J]. Clinical Orthopaedics and Related Research, 2008, 466（10）: 2527-2532.

    　　7 Swift MJ, Crago PE, Grill WM. Applied electric fields acceletate the diffusion rate and, increase the diffusion distance of DiI in fixed tissue[J]. Neurosci Methods, 2005: 141（1）: 155-163.

    　　8 Honig NM, Hume RI. Fluorescent carbocyanine dyes allow livingneurons of identified origin to be studied in long term cultures[J]. Cell Biol, 1986, 103（1）: 171-187.

    　　9 Mandado M , Molist P, Anadón R. A DiItracing study of the neural connections of the pineal organ in two elasmobranchs （Scyliorhinus canicula and Raja montagui） suggests a pineal projection to the midbrain GnRHimmunoreactive nucleus[J]. Cell and Tissue Research, 2001, 303（3）: 391-401.

    　　10Fernandez B, Bellido D, Vilella E, et al. Lipoprotein lipasemediated uptake of lipoprotein in human fibroblasts: evidence for an LDL receptorindependent internalization pathway[J]. Journal of Lipid Research, 1996, 37（3）: 464-481.

    　　11Paul A. st. John. Toxicity of “DiI” for embryonic rat motoneurons and sensory meurons in vitro[J]. Life Sci, 1991, 49（26）: 2013-2021.

    　　12Viterbo F, Trindade JC, Hoshino K, et al. Two endtoside neurorrhaphies and nerve graft with removal of the epineural sheath experimental study in rats[J]. Br J Plast Surg, 1994 , 47（2）: 75-80.

    　　13Byers CT, Fan R, Messina A, et al. Comparing the efficacy of two fluorescent retrograde tracers in labeling the motor and sensory neuron populations of the rat sciatic nerve[J]. Journal of Neuroscience Methods, 2002, 114（1）: 159-164.

    　　14Yang L, Zhang FX, Huang F, et al. Peripheral nerve injury induces transsynaptic modification of channels, receptors and signal pathways in rat dorsal spinal cord[J]. Eur J Neurosci, 2004, 19（6）: 871-883.

    　　15Curtis R,Tonra JR, Stark JL. Neuronal injury increases retrograde axonal transport of the neurotrophins to spinal sensory neurons and motor neurons via multiple receptor mechanisms[J]. Mol Cell Neurosci, 1998, 12（1）: 105-118.

    　　16Harsh C, Archibald SJ, Madison RD. Doublelabelling of saphenous nerve neurone pools: a model for determining the accuracy of axon regeneration at the single neuron level[J]. J Neurosci Methods, 1991, 39（1）: 123-129.

    　　17Fritzsch B, Sonntag R. Sequential double labelling with different fluorescent dyes coupled to dextran amines as a tool to estimate the accuracy of tracer application and of regeneration[J]. J Neurosci Methods, 1991, 39（1）: 9-17.

    　　18PalmG, Zdanov J, Gaitanaris AG, et al. The structural basis for spectral variations in green fluorescent protein[J]. Nature Struct Biol, 1997, 4（2）: 361-365.

    　　19Heim R, Cubitt AB, Tsien RY. Improved green fluorescence[J]. Nature, 1995, 373（6516）: 663-672.

    　　20Anna P, Alberto PG, Domingo RG, et al. Efficacy of the fluorescent dyes fast blue, fluorogold, and diamidino yellow for retrograde tracing to dorsal root ganglia after subcutaneous injection[J]. Journal of Neuroscience Methods, 1998, 86（1）: 7-16.

    　　21Tsien RY.The green fluorescent protein[J]. Annu Rev Biochem, 1998, 67（2）: 509-544.

    　　22常成, 高晓群. 病毒在神经通路示踪中的应用[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2004, 13（2）: 250-254.

    　　23Molliver DC, Wright DE, Leitner ML, et al. IB4binding DRG neurons switch from NGF to GDNF dependence in early postnatal life[J]. Neuron, 1997, 19（6）: 849-861.

    　　24Cheryl L. Stucky and Gary RL. Isolectin B4positive andnegative nociceptors are functionally distinct[J]. The Journal of Neuroscience, 1999, 19（15）: 6497-6505.

    　　25Belyantseva IA, Lewin GR. Stability and plasticity of primary afferent projections following nerve regeneration and central degeneration[J]. Eur J Neurosci, 1999, 11（2）: 457-469.