Hieff NGS^® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina^®是针对Illumina^®高通量测序平台开发的双链DNA甲基化建库试剂盒。本试剂盒通过连接相应的甲基化接头，经亚硫酸氢盐或酶法转化处理，再经过一步扩增即可构建针对Illumina^®平台测序的甲基化文库。试剂盒所有组分均通过质量控制和功能验证，以确保文库的稳定产出，支持多种类型DNA样本，包括gDNA、cfDNA和FFPE等。本试剂盒推荐的样本起始量为10 ng-1000 ng DNA，并兼容市面主流的转化方案。

组分信息

储存条件

-25~–15℃保存，有效期1年。

使用方法

一、自备材料

1. 纯化磁珠：Cat#12601，Hieff NGS^® DNA Selection Beads或Cat#A63880，AMPure XP Beads或其他等效产品。
2. 转化模块：Cat#12222，Hieff^® DNA Bisulfite Conversion Kit；Cat#12223，Hieff^® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit和酶转化模块Cat#12213，Hieff^® DNA Mild methyl- Conversion Kit或其他等效产品。
3. DNA质控：Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer或其他等效产品。
4. 其他材料：无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer (10 mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5+1 mM EDTA)、低吸附EP管、PCR管、磁

力架、PCR仪等。

二、操作流程

 图1 Hieff NGS^® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina^®

  图2 文库片段分布示例

注：10 ng cfDNA使用Hieff NGS^® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina^®建库后的文库片段分布 (Agilent 2100,DNA 1000 Kit)，其中红色代表酶转化方案构建的DNA文库，PCR扩增循环数为10；蓝色代表重亚硫酸盐转化方案构建的DNA文库，PCR 扩增循环数为 12。

Hieff NGS® Methyl-seq DNA Library Prep Kit for Illumina V2是针对Illumina^®测序平台专业开发设计的新一代DNA甲基化建库试剂盒，在前一代建库试剂盒的基础上，改善了接头连接效率，并采用了更加新型的高保真酶，显著提高扩增均一性和保真性。适用于各种经Bisulfite处理的样本类型，包括gDNA、FFPE DNA、cell free DNA (cfDNA)、ChIP DNA等，可以满足Bisulfite处理后的10 pg~250 ng DNA样本建库。该试剂盒可兼容短至40 bp的DNA样本。本产品不仅更加经济，同时也提供了简便快速的建库流程，一般在2小时左右可以完成正常建库。

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20 °C保存，有效期1年。

注意事项

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡，剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染，推荐使用带滤芯的枪头，吸取不同样品时请更换枪头。

5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

6. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染，进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离；使用专用的移液器等设备；并定时对各实验区域进行清洁（使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理），以保证实验环境的洁净度。

7. 本产品仅作科研用途！

案例展示

a. gDNA样本建库示例

图 2：human gDNA 样本 bisulfite 处理后的 Aligent 2100 建库示意图

注：50 ng human gDNA使用ZYMO EZ DNA Methylation-Gold Kit (D5005)处理后，全部投入建库，PCR 扩增10 cycle 得到的文库产量约为20×58.2 ng；

b. FFPE DNA样本建库示例

图 3：FFPE DNA 样本bisulfite 处理后的 Aligent 2100 建库示意图

注：50 ng FFPE DNA 使用ZYMO EZ DNA Methylation-Gold Kit (D5005)处理后，全部投入建库，PCR 扩增 10 cycle 得到的文库产量约为  20×74.8 ng；

c. cfDNA样本建库示例

图 4：cfDNA 样本 bisulfite 处理后的 Aligent 2100 建库示意图

注：10ng cfDNA 使用 ZYMO EZ DNA Methylation-Gold Kit (D5005)处理后，全部投入建库，PCR 扩增 11 cycle 得到的文库产量约为 20×54.4 ng；

常见问题

DNA 文库产量偏低，出现接头二聚体，大片段等问题，可以考虑从如下方面进行优化：

1. a)文库产量偏低，应考虑样本溶液中含有酶抑制剂组分，建议再次纯化；
2. b)文库出现接头二聚体，推荐在互补链延伸之后进行2轮纯化，在第一轮纯化后用50 μL洗脱，然后加入1.2×beads (60 μL)进行再次纯化；
3. c)对于文库大片段的出现，考虑是过度扩增引起，可以适当减少扩增循环数。

HB230313