biochain Z7030031用户手册和说明
小鼠内皮祖细胞体外生长
产品编号：Z7030031
介绍
内皮祖细胞（epc）是内皮细胞系中的一种原始细胞类型。它们是骨髓来源的细胞，具有类似于胚胎血管母细胞的特性。这些祖细胞迁移到血液中，能够分化成各种成熟的血管内皮细胞类型。
epc在血管生成和血管生成中起着重要作用。近的证据表明
epc在肿瘤生长和转移中的作用。epc数目的改变与淋巴瘤、多发性骨髓瘤、lewis肺癌和肝细胞癌（hcc）有关。在各种疾病的发病机制中，包括冠状动脉疾病（cad）、缺血、肺动脉高压、脑血管疾病、急性心肌梗死、糖尿病、关节炎和伤口愈合中，epc的数量和功能也发生了变化。此外，epc对衰老和吸烟相关疾病有影响，提示epc在这些领域有潜在的应用。
epoc的规范与表征
从7-8周龄c57/bl6小鼠骨髓中分离出生物链小鼠内皮生长细胞（mepoc），并进行体外培养。我们的mepoc产品在第9-10次传代时作为冷冻保存或增殖细胞交付。该细胞被认为是晚期epc，因为它是cd 133-。每个冷冻瓶在1毫升冷冻培养基中含有大于5 x 10 5细胞。我们的mepocs具有与内皮祖细胞相同的纺锤状形态。
保管部
对于冷冻保存的细胞，在接收时立即将细胞从干冰转移到液氮中，并将细胞保存在液氮中，直到需要进行细胞培养进行实验。
航运
冷冻保存的细胞在干冰上运输；增殖细胞在室温下运输。
epoc培养说明
一、MEPOC生长培养基的制备
我们推荐使用Biochain的MEPOC生长培养基（CAT Z7030033）培养我们的MEPC。
一。在室温水浴中解冻MEPOC生长介质补充剂（CAT Z7030034）。
2.在Mepoc基本培养基（CAT Z7030035）的瓶子（500 ml）中加入整个体积（25 ml）的EPOC生长培养基补充剂，制备Mepoc生长培养基。生物链的mepoc生长培养基不含抗生素，但如果担心污染，可以在培养基中添加抗生素。
三。使用前，在37°C水浴中加热部分mepoc生长介质。
二。解冻冷冻细胞
一。在37°C水浴中加热EPOC生长培养基。
2.用70%乙醇擦拭冰冻小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解冻冷冻细胞。
三。将细胞悬液无菌转移到15ml试管中。用1毫升生长培养基冲洗小瓶，并在15毫升试管中与细胞混合。以170克（或1400转/分）的速度离心5分钟，使细胞沉淀。除去上清液。加入5ml新鲜小鼠epc培养基，置于t25烧瓶中。
四。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。每隔一天换一次。健康的培养物显示纺锤体形态，培养2-3天后细胞数量应加倍。
三、亚培养细胞
一。当细胞达到100%汇合时进行继代培养。
2.在通过细胞前一天更换培养基。
三。在37°C水浴中加热Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生长培养基。
四。用Dulbecco的PBS冲洗细胞。
5个。用胰蛋白酶/EDTA溶液（1.5毫升/25平方厘米）培养细胞3-5分钟，直到大约90%的细胞开始分离。轻轻地填充血管使细胞分离。
6.加入相当于胰蛋白酶/EDTA体积1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶，轻轻摇动培养管混合。
7号。轻轻地重新悬浮细胞，并将细胞转移到15ml锥形管中。
8个。在室温下将细胞悬液在170 x g下离心5分钟。
9号。小心地去除上清液，不要干扰细胞颗粒。在生长培养基中重新悬浮细胞。
10个。将它们按1:5的比例放入新的培养皿中。
11号。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。每隔一天换一次。
iv.在充满mepoc生长培养基的t25、t75、t125和t225烧瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。
当烧瓶到达时：
一。从烧瓶中倒出大部分培养基，并在烧瓶中留适量。
2.在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。第二天换成中号，以后每隔一天换一次。健康的培养基在培养2-3天后，纺锤形细胞形态和细胞数量应加倍。
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References
1. Asahara T, Murohara T, Sullivan A, Silver M, van der Zee R, Li T, Witzenbichler B, Schatteman G and Isner JM (1997). Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275:964-967.
2. Gupta M (2007). Circulating endothelial cells and circulating endothelial cell progenitors as surrogate markers for determining response to antiangiogenic agents. Clin Colorectal Cancer 6(5):337-338.
3. Gao D, Nolan DJ, Mellick AS, Bambino K, McDonnell K, Mittal V. Endothelial progenitor cells control the angiogenic switch in mouse lung metastasis. Science. 2008 Jan 11; 319(5860):195-8.