苯基琼脂糖FF(LS)|Phenyl(LS)强疏水层析介质

发表于2024年12月21日由上海金畔生物科技有限公司

产品说明书

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已发表文献

疏水作用层析（hydrophobic interaction chromatography，HIC）是利用生物分子所带有的疏水基团和固定相上的疏水配基之间的相互作用来分离物质的一种层析方法，盐离子可以破坏生物分子表面的水化膜，促进疏水基团和配基之间的结合。

本品Phenyl Agarose FF(LS)是一种高取代的芳香族疏水层析介质，它是在 6%的琼脂糖基架上偶联苯基而成的，结合载量相对Phenyl Agarose FF(HS)较低，配基疏水性强，适合疏水性较弱的生物分子的分离纯化。

产品性质

基质	6%的高度交联的琼脂糖
粒径	45–165 µm
功能基团	苯基
载量	10 mg lgG 或 24 mg HSA/mL
建议流速	300-600 cm/h
pH范围	3-13
储存缓冲液	20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4-30℃保存，有效期4年。

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

1 缓冲液的准备

1）所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。

2）结合缓冲液通常选用含有高浓度盐的磷酸盐缓冲液，如20 mM PB，1.5 M (NH₄)₂SO₄，pH7.0。

3）洗脱缓冲液通常选用不含其他盐类的磷酸盐缓冲液，如50 mM PB，pH7.0，对于较难洗脱的物质可以采用纯水，或者在纯水中加入低浓度乙醇作为洗脱液。

注：需要根据后续的实验结果（目的物是否有沉淀、目的物的结合强弱、回收率、分离度等）对结合缓冲液中的盐的浓度和类型进行调整。

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。需要将样品的 pH 和电导率调整到与结合缓冲液一致。

3 样品纯化

1）将介质装入合适的层析柱，用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液，然后用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2）将样品加到平衡好的Phenyl Agarose FF(LS)中，收集流出液。

3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

5）依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

4 填料清洗

疏水层析填料每次使用后可以分别用2-3倍柱体积的30%异丙醇（70%乙醇）、3倍柱体积的纯化水冲洗层析柱，然后用至少3倍柱体积的平衡液进行平衡。

CIP（Cleaning In Place）清洗

疏水层析填料可以重复使用，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

1）先用2个柱体积的纯化水冲洗掉结合比较紧的蛋白。

2）对于强疏水性蛋白、沉淀蛋白的去除：先用2~3个柱体积1M NaOH清洗，然后立即用5~10个柱体积纯水冲洗。

3）脂蛋白和脂类物质的去除：先用5~10个柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，后用5~10个柱体积纯水冲洗。

4）也可将上述两种清洗条件结合进行清洗，即用含有1M NaOH的30%异丙醇溶液清洗。

HB220815

产品性质

基质	6%的高度交联的琼脂糖
粒径	45–165 µm
功能基团	苯基
载量	10 mg lgG 或 24 mg HSA/mL
建议流速	300-600 cm/h
pH范围	3-13
储存缓冲液	20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4-30℃保存，有效期4年。

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

1 缓冲液的准备

1）所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。

2）结合缓冲液通常选用含有高浓度盐的磷酸盐缓冲液，如20 mM PB，1.5 M (NH₄)₂SO₄，pH7.0。

3）洗脱缓冲液通常选用不含其他盐类的磷酸盐缓冲液，如50 mM PB，pH7.0，对于较难洗脱的物质可以采用纯水，或者在纯水中加入低浓度乙醇作为洗脱液。

注：需要根据后续的实验结果（目的物是否有沉淀、目的物的结合强弱、回收率、分离度等）对结合缓冲液中的盐的浓度和类型进行调整。

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。需要将样品的 pH 和电导率调整到与结合缓冲液一致。

3 样品纯化

2）将样品加到平衡好的Phenyl Agarose FF(LS)中，收集流出液。

3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

4 填料清洗

疏水层析填料每次使用后可以分别用2-3倍柱体积的30%异丙醇（70%乙醇）、3倍柱体积的纯化水冲洗层析柱，然后用至少3倍柱体积的平衡液进行平衡。

CIP（Cleaning In Place）清洗

1）先用2个柱体积的纯化水冲洗掉结合比较紧的蛋白。

2）对于强疏水性蛋白、沉淀蛋白的去除：先用2~3个柱体积1M NaOH清洗，然后立即用5~10个柱体积纯水冲洗。

3）脂蛋白和脂类物质的去除：先用5~10个柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，后用5~10个柱体积纯水冲洗。

4）也可将上述两种清洗条件结合进行清洗，即用含有1M NaOH的30%异丙醇溶液清洗。

HB220815

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GoldBand 200 bp DNA Ladder 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

发表于2024年12月20日由上海金畔生物科技有限公司

GoldBand 200 bp DNA Ladder 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

GoldBand 200 bp DNA Ladder由200 bp、400 bp、600 bp、800 bp、1,000 bp、1,200 bp、1,400 bp、1,600 bp、1,800 bp、2,000 bp、3,000 bp、5,000 bp共12条线状双链DNA片段组成，保存于1× DNA Loading Buffer中，可直接用于电泳分析。其中指示带1,200 bp，浓度为100 ng/5 μL，其他条带均为40 ng/5 μL。该产品适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析，不建议用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	10517ES60 （100 T）	10517ES80 （100 T × 10）
10517-A	GoldBand 200 bp DNA Ladder	500 μL	500 μL × 10
10517-B	5 × DNA Loading buffer	1 mL	1 mL × 10

运输与保存方法

冰袋运输。室温、4℃保存半年；-20℃保存一年，避免反复冻融。

注意事项

1．使用时产品需充分混匀，及时更换电泳缓冲液并使用新制备的凝胶，以达到理想的电泳结果。

2．随附5 × DNA Loading buffer可用于检测样品时使用。

3．如使用该产品电泳时出现抹带、条带不清晰或弯曲等不理想情况，建议尝试用水稀释后上样。如常规宽度胶孔可用水稀释5倍后取8-10 μL进行上样。

4．为了您的安全和健康，请穿实验服并带一次性手套操作。

5．本产品仅作科研用途！

使用方法

1．Marker上样量为5 μL，若为宽胶孔，需适当增加上样量；

2．建议使用1.5-2.0% Agarose，电压4-10 V/cm，0.5×TBE（优先选用）或1×TAE缓冲液电泳；

3．通过EB或YeaRed等其他核酸染料进行染色，在紫外灯下观察电泳条带。

电泳图示

GoldBand 200 bp DNA Ladder 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

HB220422

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	10517ES60 （100 T）	10517ES80 （100 T × 10）
10517-A	GoldBand 200 bp DNA Ladder	500 μL	500 μL × 10
10517-B	5 × DNA Loading buffer	1 mL	1 mL × 10

运输与保存方法

冰袋运输。室温、4℃保存半年；-20℃保存一年，避免反复冻融。

注意事项

1．使用时产品需充分混匀，及时更换电泳缓冲液并使用新制备的凝胶，以达到理想的电泳结果。

2．随附5 × DNA Loading buffer可用于检测样品时使用。

3．如使用该产品电泳时出现抹带、条带不清晰或弯曲等不理想情况，建议尝试用水稀释后上样。如常规宽度胶孔可用水稀释5倍后取8-10 μL进行上样。

4．为了您的安全和健康，请穿实验服并带一次性手套操作。

5．本产品仅作科研用途！

使用方法

1．Marker上样量为5 μL，若为宽胶孔，需适当增加上样量；

2．建议使用1.5-2.0% Agarose，电压4-10 V/cm，0.5×TBE（优先选用）或1×TAE缓冲液电泳；

3．通过EB或YeaRed等其他核酸染料进行染色，在紫外灯下观察电泳条带。

电泳图示

GoldBand 200 bp DNA Ladder 琼脂糖凝胶电泳DNA条带

HB220422

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His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂 Ni-NTA琼脂糖凝胶|HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF

发表于2024年12月13日由上海金畔生物科技有限公司

His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂 Ni-NTA琼脂糖凝胶|HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF

产品说明书

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已发表文献

产品描述

HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni²⁺）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外，因其基质的耐压性（可耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

产品性质

基质（Matrix）	高度交联的6%琼脂糖凝胶
粒径（Bead size）	45-165 µm
载量（Capacity）	＞40 mg 6×His-tagged protein/mL基质
耐压（Tolerance Pressure_max）	0.3 MPa，3 bar
储存缓冲液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存。有效期2年。

注意事项

1) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

使用方法

一、纯化流程

1 缓冲液的准备

缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需配方详见附表2。包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表3。

2 样品准备

2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达的蛋白纯化为例）

1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体，然后加入1/10体积的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1 mM），同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1 mg/mL。
注：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10 µg/mL RNase A和5 µg/mL DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
5）收集上述澄清蛋白液至离心管中，10000 rpm，4℃离心20-30 min。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。

2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白

将细胞培养液转移至离心瓶，5000 rpm离心10 min，收集上清。如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等，即可直接上柱纯化；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。

注：对于大量体积的上清，需加入硫酸铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。

2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）

1）将培养液转移至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体去上清。

2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。

3）将破碎液转移至离心管，10000 rpm，4℃离心20-30 min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。

4）按照菌体：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。

5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3 装柱

1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去离子水。

2）将树脂悬浮，小心地将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上，避免在分配器或进样管中产生气泡。
4）打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如达不到推荐的压力或流速，可以用所用泵的最大流速，这样也可以达到一个较好的装填效果。当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱体积的去离子水。标上柱床高度。注：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%。

5）关闭泵，关闭层析柱出口。

6）如使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。

7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。

8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如需要可重新调整分配器。

4 样品纯化
装柱后，可用各种常规的中压色谱系统，以AKTA使用为例进行说明：
1）将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞，连接至色谱系统中，打开下出口，将纯化柱连接到色谱系统中，注意旋紧。

2）3-5倍柱体积去离子水冲洗纯化柱。

3）至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。1ml规格预装柱推荐流速为1 mL/min，5 mL预装柱推荐流速为5 mL/min。
4）利用泵或注射器上样，收集流出液，以便SDS-PAGE检测蛋白结合情况。
注：若样品粘度增加，即使上样体积很少也会导致层析柱很大反压；上样量不要超过柱子的结合能力；大量样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

5）Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。

注：在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6）Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7）建议用更高浓度咪唑（如500 mM）彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

5 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

二、在位清洗

当填料使用过程中发现反压过高（>0.5 Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗时，先把Ni²⁺脱掉，清洗结束后，将填料保存在20%乙醇中，后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。

1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类

使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积，接触时间为15-20 min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1 M醋酸溶液，接触时间为1-2 h。去污剂处理后，需用70%的乙醇清洗5倍柱体积，彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。

2 去除离子作用结合的蛋白

使用1.5 M NaCl 溶液接触10-15 min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

三、填料再生

当填料使用过程中发现反压过高（>0.5 Mpa），填料上面出现明显的污染，或填料载量明显变低时，需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理，即填料再生。按照下面操作流程进行：

1）使用5倍柱体积去离子水清洗填料；

2）使用5倍柱体积100mM EDTA（pH 8.0）剥落镍离子；

3）使用10倍柱体积去离子水清洗填料；

4）使用0.5M NaOH清洗5倍柱体积，停留10-15min；

5）使用10倍柱体积去离子水清洗填料；

6）使用3-5倍柱体积100mM NiSO₄再生挂镍；

7）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。

相关产品

20502JP10	HisSep Ni-NTA Agarose Resin（His标签蛋白琼脂糖纯化树脂）	10 mL
20502JP50	HisSep Ni-NTA Agarose Resin（His标签蛋白琼脂糖纯化树脂）	50 mL
20502JP60	HisSep Ni-NTA Agarose Resin（His标签蛋白琼脂糖纯化树脂）	100 mL
20502JP80	HisSep Ni-NTA Agarose Resin（His标签蛋白琼脂糖纯化树脂）	1000 mL
20504JP08	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column,5ML（His标签蛋白纯化预装柱，5ML）	5 mL
20504JP25	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column,5ML（His标签蛋白纯化预装柱，5ML）	5×5 mL
20505JP03	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column,1ML（His标签蛋白纯化预装柱，1ML）	1 mL
20505JP08	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1ML（His标签蛋白纯化预装柱，1ML）	5×1 mL

附表1 HisSep Ni-NTA Agarose Resin试剂耐受情况

试剂种类	浓度
还原剂	5 mM DTE 0.5-1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione
变性剂	8 M urea 6 M Gua-HCl
去污剂	2% Triton^TM X-100，nonionic 2% Tween^TM20，nonionic 2% NP-40，nonionic 2% Cholate，anionic 1% CHAPS，zwitterionic
其他类	500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na₂SO₄ 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate
缓冲液	50 mM sodium phosphate，pH7.4 100 mM Tris-HCl，pH7.4 100 mM Tris-acetate，pH7.4 100 mM HEPJP，pH7.4 100 mM MOPS，pH7.4 100 mM sodium acetate，pH7.4

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer，pH8.0	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH调pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g
Wash Buffer，pH8.0	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH调pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g
Elution Buffer，pH8.0	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH调pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g

附表2 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

附表3 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer，pH8.0	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris 15.76 g
Wash Buffer，pH6.3	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至6.3，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris 15.76 g
Elution Buffer，pH4.5	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至4.5，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris 15.76 g

附表4 问题及解决方案

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	裂解液中可能含微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜（0.22 µm或0.45 µm）过滤，或离心去除。
	填料被堵塞	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5 µg/mL），Mg²⁺(终浓度1 mM)，冰上孵育10-15 min
	样品太黏稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白	蛋白可能是包涵体	可通过电泳检测裂解液，分析上清中是否有目的蛋白，包涵体蛋白需按照包涵体蛋白的纯化方式
	表达量太低	优化表达条件，使用包涵体纯化缓冲体系
	目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤中已被洗下来	提高Wash Buffer的pH值，或者降低咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	降低Elution Buffer 的pH，或者增加Elution Buffer中的咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	使用10-100 mM EDTA溶液剥离镍离子，同时得到蛋白
	蛋白降解	菌体破碎时需添加一些蛋白酶抑制剂
	蛋白降解	在4℃下进行纯化操作
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	洗杂不彻底	增加Wash Buffer 体积
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	样品中含有其他His标签蛋白	通过调节pH值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。
填料颜色变浅或变成白色	镍离子脱落或者剥离	按照填料再生的操作重新挂镍离子
填料呈现褐色	缓冲液中含有DTT等还原剂	参考附3适当降低还原剂DTT的浓度，或改用巯基乙醇
上样过程中蛋白发生沉淀	操作温度太低	室温下进行上样
上样过程中蛋白发生沉淀	蛋白发生聚集	在样品和所有缓冲液中添加稳定剂，如0.1%Triton X-100或Tween-20

产品描述

产品性质

基质（Matrix）	高度交联的6%琼脂糖凝胶
粒径（Bead size）	45-165 µm
载量（Capacity）	＞40 mg 6×His-tagged protein/mL基质
耐压（Tolerance Pressure_max）	0.3 MPa，3 bar
储存缓冲液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存。有效期2年。

注意事项

1) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

使用方法

一、纯化流程

1 缓冲液的准备

2 样品准备

2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达的蛋白纯化为例）

2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白

注：对于大量体积的上清，需加入硫酸铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。

2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）

1）将培养液转移至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体去上清。

2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。

3）将破碎液转移至离心管，10000 rpm，4℃离心20-30 min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。

4）按照菌体：裂解液（含8M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。

5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3 装柱

1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去离子水。

5）关闭泵，关闭层析柱出口。

6）如使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。

7）将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。

8）将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡。如需要可重新调整分配器。

2）3-5倍柱体积去离子水冲洗纯化柱。

5）Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。

5 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

二、在位清洗

1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类

2 去除离子作用结合的蛋白

使用1.5 M NaCl 溶液接触10-15 min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

三、填料再生

1）使用5倍柱体积去离子水清洗填料；

2）使用5倍柱体积100mM EDTA（pH 8.0）剥落镍离子；

3）使用10倍柱体积去离子水清洗填料；

4）使用0.5M NaOH清洗5倍柱体积，停留10-15min；

5）使用10倍柱体积去离子水清洗填料；

6）使用3-5倍柱体积100mM NiSO₄再生挂镍；

7）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。

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20502JP10	HisSep Ni-NTA Agarose Resin（His标签蛋白琼脂糖纯化树脂）	10 mL
20502JP50	HisSep Ni-NTA Agarose Resin（His标签蛋白琼脂糖纯化树脂）	50 mL
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20505JP08	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1ML（His标签蛋白纯化预装柱，1ML）	5×1 mL

附表1 HisSep Ni-NTA Agarose Resin试剂耐受情况

试剂种类	浓度
还原剂	5 mM DTE 0.5-1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione
变性剂	8 M urea 6 M Gua-HCl
去污剂	2% Triton^TM X-100，nonionic 2% Tween^TM20，nonionic 2% NP-40，nonionic 2% Cholate，anionic 1% CHAPS，zwitterionic
其他类	500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na₂SO₄ 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate
缓冲液	50 mM sodium phosphate，pH7.4 100 mM Tris-HCl，pH7.4 100 mM Tris-acetate，pH7.4 100 mM HEPJP，pH7.4 100 mM MOPS，pH7.4 100 mM sodium acetate，pH7.4

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer，pH8.0	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH调pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g
Wash Buffer，pH8.0	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH调pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g
Elution Buffer，pH8.0	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH调pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g

附表2 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

附表3 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer，pH8.0	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至8.0，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris 15.76 g
Wash Buffer，pH6.3	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至6.3，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris 15.76 g
Elution Buffer，pH4.5	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至4.5，0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris 15.76 g

附表4 问题及解决方案

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	裂解液中可能含微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜（0.22 µm或0.45 µm）过滤，或离心去除。
	填料被堵塞	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5 µg/mL），Mg²⁺(终浓度1 mM)，冰上孵育10-15 min
	样品太黏稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白	蛋白可能是包涵体	可通过电泳检测裂解液，分析上清中是否有目的蛋白，包涵体蛋白需按照包涵体蛋白的纯化方式
	表达量太低	优化表达条件，使用包涵体纯化缓冲体系
	目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤中已被洗下来	提高Wash Buffer的pH值，或者降低咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	降低Elution Buffer 的pH，或者增加Elution Buffer中的咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	使用10-100 mM EDTA溶液剥离镍离子，同时得到蛋白
	蛋白降解	菌体破碎时需添加一些蛋白酶抑制剂
	蛋白降解	在4℃下进行纯化操作
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	洗杂不彻底	增加Wash Buffer 体积
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	样品中含有其他His标签蛋白	通过调节pH值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。
填料颜色变浅或变成白色	镍离子脱落或者剥离	按照填料再生的操作重新挂镍离子
填料呈现褐色	缓冲液中含有DTT等还原剂	参考附3适当降低还原剂DTT的浓度，或改用巯基乙醇
上样过程中蛋白发生沉淀	操作温度太低	室温下进行上样
上样过程中蛋白发生沉淀	蛋白发生聚集	在样品和所有缓冲液中添加稳定剂，如0.1%Triton X-100或Tween-20

Q：为什么填料会呈现褐色？

A：缓冲液中含有DTT 等还原剂，适当降低还原剂 DTT 的浓度，或改用巯基乙醇。

Q：为什么在上样过程中蛋白发生沉淀？

A：可能是操作温度太低，建议在可在室温下进行上样。

Q：洗脱组分不纯（含多种蛋白）是什么原因？

A：可能是洗杂不彻底：建议增加Wash Buffer 体积；

Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？

A：可能是目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤中已被洗下来：提高 Wash Buffer 的pH 值，或者降低咪唑浓度。

[1] Li C, Zhan W, Yang Z, et al. Broad neutralization of SARS-CoV-2 variants by an inhalable bispecific single-domain antibody. Cell. 2022;185(8):1389-1401.e18. doi:10.1016/j.cell.2022.03.009(IF:41.584)
[2] Li X, Liang Y, Lian C, et al. CST6 protein and peptides inhibit breast cancer bone metastasis by suppressing CTSB activity and osteoclastogenesis. Theranostics. 2021;11(20):9821-9832. Published 2021 Oct 11. doi:10.7150/thno.62187(IF:11.556)
[3] Zhang Z, Chu Y, Li C, et al. Anti-PEG scFv corona ameliorates accelerated blood clearance phenomenon of PEGylated nanomedicines. J Control Release. 2021;330:493-501. doi:10.1016/j.jconrel.2020.12.047(IF:7.727)
[4] Zhang X, Tang W, Wen H, et al. Evaluation of CTB-sLip for Targeting Lung Metastasis of Colorectal Cancer. Pharmaceutics. 2022;14(4):868. Published 2022 Apr 15. doi:10.3390/pharmaceutics14040868(IF:6.321)
[5] Wu Q, Huang Y, Gu L, Chang Z, Li GM. OTUB1 stabilizes mismatch repair protein MSH2 by blocking ubiquitination. J Biol Chem. 2021;296:100466. doi:10.1016/j.jbc.2021.100466(IF:5.157)

Agarose Tablets 琼脂糖片剂0.5g/片凝胶电泳琼脂糖片

发表于2024年12月8日由上海金畔生物科技有限公司

Agarose Tablets 琼脂糖片剂0.5g/片凝胶电泳琼脂糖片

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

琼脂糖（Agarose）是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体，提取自琼脂或者含琼脂的海藻，结构上是一种线性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂，常用于通过凝胶电泳或者印迹法（如Northern或Southern）来进行日常核酸分析，也适用于蛋白应用，如辐射状免疫扩散（RID）实验。

本品是由Yeasen 高质量琼脂糖改进而成，使用时无需称量，仅需取适量片剂溶解即可，操作简单快速，且不用担心琼脂糖挂壁，另外本品利用泡罩板包装，便于携带和放置，是实验室DNA/RNA凝胶电泳的最佳选择！

产品性质

CAS号（CAS NO.）	9012-36-6
外观（Appearance）	白色片剂
凝胶强度（Gel Strength, 1.0%）	≥1200 (g/cm²)
胶凝温度域（Geling Range, 1.5%）	36±1.5℃
融胶温度域（Melting Range, 1.5%）	88±1.5℃
电渗值（EEO, -m_r）	≤0.13
硫酸盐（Sulfate, %）	≤0.15%
水分（Moisture）	≤10%
灰分（Ash Content）	≤0.5%
DNA酶（DNase）	None Detected
RNA酶（RNase）	None Detected
蛋白酶（Protease）	None Detected

运输和保存方法

室温运输和保存即可。有效期5年。

注意事项

1）可用煮沸或微波加热的方法来熔胶，琼脂糖熔化必须彻底！此时琼脂糖胶液清澈，否则，会造成电泳图像模糊不清。熔胶可能会引起暴沸，需注意防止烫伤。微波炉中加热时间不宜过长。

2）用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！

使用方法

按0.5g/片剂将适量琼脂糖片剂在缓冲液中浸泡2-3 min使之完全崩解，之后按照常规琼脂糖配制方法操作即可。请参考下表：

凝胶浓度%	1片	2片	3片
1%	50 mL	100 mL	150 mL
2%	25 mL	50 mL	75 mL

相关产品

产品名称	货号	规格
Goldview核酸染料（10,000×）	10201ES03	1 mL
YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液）^HOT	10202ES76	500 μL
YeaGreen核酸染料（10,000× 水溶液）	10204ES76	500 μL
Agarose琼脂糖^HOT	10208ES60/76	100/500 g
Low Melting Point Agarose 低熔点琼脂糖	10214ES08/25	5/25 g
2000 DNA Marker^HOT	10501ES60/80	100/1000 T

HB210824

产品描述

产品性质

CAS号（CAS NO.）	9012-36-6
外观（Appearance）	白色片剂
凝胶强度（Gel Strength, 1.0%）	≥1200 (g/cm²)
胶凝温度域（Geling Range, 1.5%）	36±1.5℃
融胶温度域（Melting Range, 1.5%）	88±1.5℃
电渗值（EEO, -m_r）	≤0.13
硫酸盐（Sulfate, %）	≤0.15%
水分（Moisture）	≤10%
灰分（Ash Content）	≤0.5%
DNA酶（DNase）	None Detected
RNA酶（RNase）	None Detected
蛋白酶（Protease）	None Detected

运输和保存方法

室温运输和保存即可。有效期5年。

注意事项

2）用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！

使用方法

按0.5g/片剂将适量琼脂糖片剂在缓冲液中浸泡2-3 min使之完全崩解，之后按照常规琼脂糖配制方法操作即可。请参考下表：

凝胶浓度%	1片	2片	3片
1%	50 mL	100 mL	150 mL
2%	25 mL	50 mL	75 mL

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Agarose琼脂糖^HOT	10208ES60/76	100/500 g
Low Melting Point Agarose 低熔点琼脂糖	10214ES08/25	5/25 g
2000 DNA Marker^HOT	10501ES60/80	100/1000 T

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His标签蛋白琼脂糖纯化树脂 Ni-NTA琼脂糖凝胶|HisSep Ni-NTA Agarose Resin

发表于2024年12月8日由上海金畔生物科技有限公司

His标签蛋白琼脂糖纯化树脂 Ni-NTA琼脂糖凝胶|HisSep Ni-NTA Agarose Resin

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

HisSep Ni-NTA Agarose Resin以交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni²⁺）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，与Ni-IDA树脂相比，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室纯化His标签蛋白不可或缺的树脂之一。

产品性质

基质（Matrix）	交联的6%琼脂糖凝胶
粒径（Bead size）	45-165 µm
载量（Capacity）	＞40 mg 6×His-tagged protein/mL基质
耐压（Tolerance Pressure_max）	0.1 MPa, 1 bar
储存缓冲液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅作科研用途！

使用方法

（一）纯化流程

1 缓冲液的准备

缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

附表1 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer (pH8.0)	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g
Wash Buffer (pH8.0)	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g
Elution Buffer(pH8.0)	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g

包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。

附表2 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer (pH8.0)	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g
Wash Buffer (pH6.3)	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至6.3, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g
Elution Buffer(pH4.5)	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至4.5, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g

2 样品准备

2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达的蛋白纯化为例）

1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。

2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体，然后加入1/10体积的裂解液（Lysis buffer）和PMSF（PMSF在破碎前加入，其终浓度为1 mM），同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。

3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1 mg/mL。【注】如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。

4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10 µg/mL RNase A和5 µg/mL DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。

5）收集上述澄清蛋白液，10000 rpm，4℃离心20-30 min。取上清0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤后置于冰上备用或-20℃保存。

2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白

将细胞培养液转移至离心瓶，5000 rpm离心10 min，收集上清。如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等，即可直接上柱纯化；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。【注】对于大量体积的上清，需加入硫酸铵进行沉淀浓缩，之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。

2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）

1）将培养液转移至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体去上清。

2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。

3）将破碎液转移至离心管，10000 rpm，4℃离心20-30 min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。

4）按照菌体：裂解液（含8 M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。

5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3样品纯化

1）装柱：将HisSep Ni-NTA Agarose Resin借助重力的作用装入合适的纯化柱中。

2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗色谱柱。

3）平衡：至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。

4）上样：注意控制加样速度，确保目的蛋白与Ni²⁺充分接触，以提高纯化得率。【注】注意收集流出液，用于后续SDS-PAGE检测蛋白的结合情况。

5）平衡/洗杂：Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。注意收集流出液。【注】在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。

6）洗脱：使用5-10倍柱体积Elution Buffer洗脱，收集洗脱液即目的蛋白溶液。

7）清洗：依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。【注】建议在清洗之前用更高浓度咪唑（如500 mM）彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。

8）保存：5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

4 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

（二）在位清洗

当填料使用过程中发现反压过高（＞0.5 Mpa）或者填料上面出现明显的污染时，需对其进行在位清洗（Cleaning-in-Place，CIP）。在位清洗时，先把Ni²⁺脱掉，清洗结束后，将填料保存在20%乙醇中，后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。

1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类

2 去除离子作用结合的蛋白

使用1.5 M NaCl 溶液接触10-15 min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

（三）填料再生

当填料使用过程中发现反压过高，填料上面出现明显的污染，或填料载量明显变低时，需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理，即填料再生。按照下面操作流程进行：

1）使用5倍柱体积去离子水清洗填料；

2）使用5倍柱体积100 mM EDTA（pH 8.0）剥落镍离子；

3）使用10倍柱体积去离子水清洗填料；

4）使用0.5 M NaOH清洗5倍柱体积，停留10-15 min；

5）使用10倍柱体积去离子水清洗填料；

6）使用3-5倍柱体积100 mM NiSO₄再生挂镍；

7）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。

附表3 HisSep Ni-NTA Agarose Resin试剂耐受情况

试剂种类	浓度
还原剂	5 mM DTE 0.5-1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione
变性剂	8 M urea 6 M Gua-HCl
去污剂	2% Triton^TM X-100(nonionic) 2% Tween^TM20(nonionic) 2% NP-40(nonionic) 2% Cholate (anionic) 1% CHAPS (zwitterionic)
其他类	500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na₂SO₄ 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate
缓冲液	50 mM sodium phosphate, pH7.4 100 mM Tris-HCl, pH7.4 100 mM Tris-acetate, pH7.4 100 mM HEPJP, pH7.4 100 mM MOPS, pH7.4 100 mM sodium acetate, pH7.4

附表4 问题及解决方案

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	裂解液中可能含微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜（0.22 µm或0.45 µm）过滤，或离心去除。
	填料被堵塞	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5 µg/mL），Mg²⁺(终浓度1 mM)，冰上孵育10-15 min
	样品太黏稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白	蛋白可能是包涵体	可通过电泳检测裂解液，分析上清中是否有目的蛋白，包涵体蛋白需按照包涵体蛋白的纯化方式
	表达量太低	优化表达条件，使用包涵体纯化缓冲体系
	目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤中已被洗下来	提高Wash Buffer的pH值，或者降低咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	降低Elution Buffer 的pH，或者增加Elution Buffer中的咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	使用10-100 mM EDTA溶液剥离镍离子，同时得到蛋白
	蛋白降解	菌体破碎时需添加一些蛋白酶抑制剂
	蛋白降解	在4℃下进行纯化操作
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	洗杂不彻底	增加Wash Buffer 体积
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	样品中含有其他His标签蛋白	通过调节pH值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。
填料颜色变浅或变成白色	镍离子脱落或者剥离	按照填料再生的操作重新挂镍离子
填料呈现褐色	缓冲液中含有DTT等还原剂	参考附3适当降低还原剂DTT的浓度，或改用巯基乙醇
上样过程中蛋白发生沉淀	操作温度太低	室温下进行上样
	蛋白发生聚集	在样品和所有缓冲液中添加稳定剂，如0.1%Triton X-100或Tween-20

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20504JP08	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML（His标签蛋白纯化预装柱，5ML）	5 mL
20504JP25		5×5 mL
20505JP03	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1ML（His标签蛋白纯化预装柱，1ML）	1 mL
20505JP08		5×1 mL
20589JP03	Anti-His Affinity Gel(Anti-His标签亲和纯化凝胶)	1 mL
20589JP08		5mL
20589JP25		25 mL
20589JP60		100 mL

HB20220718

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产品描述

产品性质

基质（Matrix）	交联的6%琼脂糖凝胶
粒径（Bead size）	45-165 µm
载量（Capacity）	＞40 mg 6×His-tagged protein/mL基质
耐压（Tolerance Pressure_max）	0.1 MPa, 1 bar
储存缓冲液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅作科研用途！

使用方法

（一）纯化流程

1 缓冲液的准备

缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

附表1 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer (pH8.0)	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g
Wash Buffer (pH8.0)	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g
Elution Buffer(pH8.0)	50 mM NaH₂PO₄ 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	NaH₂PO₄·2H₂O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g

包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。

附表2 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称	配方	配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer (pH8.0)	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g
Wash Buffer (pH6.3)	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至6.3, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g
Elution Buffer(pH4.5)	8 M Urea 100 mM NaH₂PO₄ 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至4.5, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌	Urea 480.5 g NaH₂PO₄·2H₂O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g

2 样品准备

2.1 细菌表达的蛋白（本说明以细菌表达的蛋白纯化为例）

1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。

3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1 mg/mL。【注】如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。

4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10 µg/mL RNase A和5 µg/mL DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。

5）收集上述澄清蛋白液，10000 rpm，4℃离心20-30 min。取上清0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤后置于冰上备用或-20℃保存。

2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白

2.3 包涵体蛋白纯化（以细菌为例）

1）将培养液转移至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体去上清。

2）按照菌体：裂解液=1:10（w/v）的比例将菌体充分悬浮，混匀，冰浴超声破碎。

3）将破碎液转移至离心管，10000 rpm，4℃离心20-30 min，去上清。可重复步骤2）和3）一次。

4）按照菌体：裂解液（含8 M尿素）=1:10（w/v）的比例将包涵体充分悬浮。

5）变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3样品纯化

1）装柱：将HisSep Ni-NTA Agarose Resin借助重力的作用装入合适的纯化柱中。

2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗色谱柱。

3）平衡：至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。

4）上样：注意控制加样速度，确保目的蛋白与Ni²⁺充分接触，以提高纯化得率。【注】注意收集流出液，用于后续SDS-PAGE检测蛋白的结合情况。

6）洗脱：使用5-10倍柱体积Elution Buffer洗脱，收集洗脱液即目的蛋白溶液。

8）保存：5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂，最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中，置于4℃保存。

4 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

（二）在位清洗

1 去除强疏水结合的蛋白，脂蛋白和脂类

2 去除离子作用结合的蛋白

使用1.5 M NaCl 溶液接触10-15 min，之后用去离子水清洗10倍柱体积。

（三）填料再生

1）使用5倍柱体积去离子水清洗填料；

2）使用5倍柱体积100 mM EDTA（pH 8.0）剥落镍离子；

3）使用10倍柱体积去离子水清洗填料；

4）使用0.5 M NaOH清洗5倍柱体积，停留10-15 min；

5）使用10倍柱体积去离子水清洗填料；

6）使用3-5倍柱体积100 mM NiSO₄再生挂镍；

7）去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后，可立即使用，也可保存在20%乙醇中，置于4℃备用。

附表3 HisSep Ni-NTA Agarose Resin试剂耐受情况

试剂种类	浓度
还原剂	5 mM DTE 0.5-1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione
变性剂	8 M urea 6 M Gua-HCl
去污剂	2% Triton^TM X-100(nonionic) 2% Tween^TM20(nonionic) 2% NP-40(nonionic) 2% Cholate (anionic) 1% CHAPS (zwitterionic)
其他类	500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na₂SO₄ 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate
缓冲液	50 mM sodium phosphate, pH7.4 100 mM Tris-HCl, pH7.4 100 mM Tris-acetate, pH7.4 100 mM HEPJP, pH7.4 100 mM MOPS, pH7.4 100 mM sodium acetate, pH7.4

附表4 问题及解决方案

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	裂解液中可能含微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜（0.22 µm或0.45 µm）过滤，或离心去除。
	填料被堵塞	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5 µg/mL），Mg²⁺(终浓度1 mM)，冰上孵育10-15 min
	样品太黏稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白	蛋白可能是包涵体	可通过电泳检测裂解液，分析上清中是否有目的蛋白，包涵体蛋白需按照包涵体蛋白的纯化方式
	表达量太低	优化表达条件，使用包涵体纯化缓冲体系
	目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤中已被洗下来	提高Wash Buffer的pH值，或者降低咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	降低Elution Buffer 的pH，或者增加Elution Buffer中的咪唑浓度
	目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来	使用10-100 mM EDTA溶液剥离镍离子，同时得到蛋白
	蛋白降解	菌体破碎时需添加一些蛋白酶抑制剂
	蛋白降解	在4℃下进行纯化操作
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	洗杂不彻底	增加Wash Buffer 体积
洗脱组分不纯（含多种蛋白）	样品中含有其他His标签蛋白	通过调节pH值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。
填料颜色变浅或变成白色	镍离子脱落或者剥离	按照填料再生的操作重新挂镍离子
填料呈现褐色	缓冲液中含有DTT等还原剂	参考附3适当降低还原剂DTT的浓度，或改用巯基乙醇
上样过程中蛋白发生沉淀	操作温度太低	室温下进行上样
	蛋白发生聚集	在样品和所有缓冲液中添加稳定剂，如0.1%Triton X-100或Tween-20

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HB20220718

Q：柱子反压过高是什么原因？

A：填料可能被堵塞：裂解液中可能含微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜（0.22µm 或 0.45µm）过滤，或离心去除。

Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？

A：蛋白可能是包涵体：可通过电泳检测裂解液，分析上清中是否有目的蛋白，包涵体蛋白需按照包涵体蛋白的纯化方式；

Q：洗脱组分不纯（含多种蛋白）是什么原因？

A：样品中含有其他 His 标签蛋白：通过调节 pH 值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。

Q：为什么填料颜色会变浅或变成白色？

A：镍离子脱落或者剥离，按照填料再生的操作重新挂镍离子。

Q：产品规格的体积指的是什么？

A：指的是填料的体积，不包括保护液的。

Q：填料流速慢的原因？

A：1.柱子在清洗平衡步骤流速减慢，柱子下筛板堵塞或者是试剂中有杂质堵塞。2.上样过程中流速逐渐降低，样品中有不溶物堵塞填料或者是样品粘稠。少数情况蛋白挂柱后流速也会减慢。 3.洗杂洗脱步骤流速减慢，蛋白不稳定在柱子上沉淀，可以选择低温条件纯化，或者是在整个纯化过程中样品试剂中加入甘油保护蛋白。

琼脂糖单柱试剂盒 AK-5101-2

发表于2024年12月2日由上海金畔生物科技有限公司

自1978年以来，EY Laboratories，Inc一直是研究生物化学和临床诊断领域的创新者。三十多年来，安永实验室利用多种技术突破，从用于研究的生化试剂到应用于临床环境和远程第三世界环境的医疗点应用，无需特殊设备。今天，安永实验室继续在所有研究领域进行创新，并推动生化创新的发展。

三十年来，EY Laboratories，Inc。一直服务于近150个国家的研究科学和临床实验室。我们的产品和服务的专业知识和应用领域已达到几乎所有科学学科，包括但不限于：

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化妆品	医疗/医院检测	制药
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国防与武器研究	营养品	物理
Forensics	糖尿病研究	化学工程
生物化学，化学	分子生物学	微生物学

EY Laboratories AK-5101-2

Limax flavus Gel -LFA- Immobilized Lectin, 2mL Kit

Limax flavus Gel -LFA-固定化凝集素，2mL试剂盒

Limax flavus Gel -LFA-固定化凝集素，2mL，预装在柱中，带有单独的洗脱缓冲液和说明书。

所有试剂盒都配有足以进行1-2次实验的缓冲液。

Weight 1.0000 lbs

琼脂糖单柱试剂盒

AK-8003-1	Aegopodium podagragria Gel -APP-固定化凝集素，1mL试剂盒
AK-5001-2	双孢蘑菇凝胶-ABA-固定化凝集素，2mL试剂盒
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AK-7401-2	Galanthus nivalis Gel -GNA-固定化凝集素，2mL试剂盒
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AK-2401-2	Griffonia simplicifolia凝胶-GS-I-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-2401-B-2	Griffonia simplicifolia凝胶-GS-I-B4-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-2402-2	Griffonia simplicifolia Gel -GS-II-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-3801-2	Helix aspersa Gel -HAA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-3601-2	Helix pomatia Gel -HPA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-6201-1	Homarus americanus（加利福尼亚龙虾）凝胶 – HMA-固定化凝集素，1mL试剂盒
AK-8007-1	固定化Allium sativum凝集素（大蒜）-ASA-，1mL试剂盒
AK-8201-1	固定化的Amaranthus caudatus凝集素（流苏花，印加小麦）-ACA-，1mL试剂盒
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AK-8011-1	固定化Calystega sepiem凝集素（Hedge Bindweed Rhizomes）-Calsepa-，1mL试剂盒
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AK-9003-1	固定化的Glechoma hederacea凝集素（地面常春藤）-GHA-，1mL试剂盒
AK-8008-1	固定化朱顶红混合凝集素（Amaryllis）-HHA-，1mL试剂盒
AK-8010-1	固定化lris杂交凝集素（荷兰鸢尾）-IRA-，1mL试剂盒
AK-9001-1	固定化的Marasmium oreades凝集素凝集素（蘑菇）-MOA-，1mL试剂盒
AK-9005-1	固定化Morniga G凝集素（黑桑）-MNA-G-，1mL试剂盒
AK-9004-1	固定化Morniga M Lectin（黑桑）-MNA-M-，1mL试剂盒
AK-9006-1	固定化Polyporus squamosus凝集素（蘑菇）-PSL-，1mL试剂盒
CK-001	个别凝胶套装补充缓冲液
AK-8101-1	Laburnum anagyroides（金链）固定化凝集素-LAL-，1mL试剂盒
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AK-1401-2	Lens culinaris Gel -LcH-固定化凝集素，2mL试剂盒
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AK-7801-2	Maackia amurensis Gel -MAA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-3901-2	Maclura pomifera Gel -MPA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-8006-1	Narcissus psuedonarcissus Gel -NPA-固定化凝集素，1mL试剂盒
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AK-1901-2	Phytolacca americana Gel -Pokeweed-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-2701-1	Pisum sativum Gel -PSA-固定化凝集素，1mL试剂盒
AK-2701-2	Pisum sativum Gel -PSA-固定化凝集素，2mL试剂盒
ABPK-01-2	Protein A Gel，固定化蛋白质，2mL试剂盒
AGK-003-2	纯山羊抗人IgA凝胶，特异性固定化抗体，2mL试剂盒
AGK-001-2	纯山羊抗人IgG凝胶，特异性固定化抗体，2mL试剂盒
AGK-002-2	Pure Goat Anti-Human IgM Gel，特异性固定化抗体，2mL试剂盒
AGK-004-2	Pure Goat抗小鼠IgG凝胶，特异性固定化抗体，2mL试剂盒
AGK-005-2	Pure Goat抗小鼠免疫球蛋白凝胶，特异性固定化抗体，2mL试剂盒
AGK-007-2	Pure Goat抗兔IgG凝胶，特异性固定化抗体，2mL试剂盒
AGK-026-2	Pure Mouse IgG Gel，Immuno Absorbant Immobilized Antibodies，2mL试剂盒
AGK-006-2	Pure Rabbit Anti-Goat IgG Gel，特异性固定化抗体，2mL试剂盒
AGK-008-2	纯兔抗小鼠IgG凝胶，特异性固定化抗体，2mL试剂盒
AGK-032-2	Pure Rat IgG Gel，Immuno Absorbant Immobilized Antibodies，2mL试剂盒
AK-6802-1	Sambucus nigra -SNA-I-固定化凝集素，1mL试剂盒
AK-6802-2	Sambucus nigra -SNA-I-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-6803-1	Sambucus nigra -SNA-II-固定化凝集素，1mL试剂盒
AK-4801-2	Vicia faba Gel -VFA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-4601-2	Vicia villosa Gel -VVA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-3101-2	Wisteria floribunda Gel -WFA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-6803-2	Sambucus nigra -SNA-II-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-4701-2	Solanum tuberosum Gel -STA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-2901-2	Sophora japonica Gel -SJA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-1002-2	链霉。抗生物素蛋白凝胶，固定化抗生物素蛋白，2mL试剂盒
AK-2102-2	Succinyl Triticum vulgare（小麦胚芽） – 琥珀酰WGA凝胶 – 固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-1004-2	琥珀酰化抗生物素蛋白（蛋清）凝胶，固定化抗生物素蛋白，2mL试剂盒
AK-5601-2	Trichosanthes kirilowii Gel -TKA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-2101-2	Triticum vulgare Gel -WGA-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-8001-1	郁金香sp。凝胶-TL-固定化凝集素，1mL试剂盒
AK-2201-2	Ulex europaeus Gel -UEA-I-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-2202-2	Ulex europaeus Gel -UEA-II-固定化凝集素，2mL试剂盒
AK-8005-1	Urtica dioica Gel -UDA-固定化凝集素，1mL试剂盒

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2：产品种类齐全，经营超过700多个品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3：提供加急服务，货品一般1-2周到货。

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5：多年积累良好的信誉，大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、国药、fisher等药企。

6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发，欢迎合作。

DNA凝胶回收试剂盒(琼脂糖凝胶)|Gel Extraction Kit

发表于2024年12月1日由上海金畔生物科技有限公司

DNA凝胶回收试剂盒(琼脂糖凝胶)|Gel Extraction Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

MolPure^® Gel Extraction Kit采用MolPure^® DNA Column G1和高效的溶胶体系，适用于从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收长度为100 bp–40 kb的高质量DNA片段。回收过程中不需要用到有毒的酚、氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀。操作简便，溶胶时间短，加入溶胶液体积小，20 min即可完成整个纯化过程。试剂盒内的MolPure^® DNA Column G1可选择性吸附高达8 μg的DNA片段，不吸附酶、矿物油和其它杂质，得到的DNA纯度高，可直接用于后续酶切、连接、转化、测序和文库构建等实验。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	19101ES08 (5 T)	19101ES50 (50 T)	19101ES70 (200 T)
19101-A	DNA 吸附柱 (MolPure® DNA Column G1)	5 个	50 个	200 个
19101-B	2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube G1)	5 个	50 个	200 个
19101-C	缓冲液 AC (AC Buffer G1)	0.5 mL	5 mL	20 mL
19101-D	溶胶液 BD (BD Buffer G1)	2 mL	20 mL	80 mL
19101-E	漂洗液 W* (Wash Buffer*)	1.3 mL	13 mL	50 mL
19101-F	洗脱液 (Elution Buffer)	1 mL	10 mL	20 mL

运输和保存方法

常温运输，常温保存。产品有效期12个月。

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。

3. 溶胶液BD中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。且应注意避免强光直射。

4. PCR扩增产物和酶切产物等反应体系的纯化，建议使用MolPure^® PCR Purification Kit（Cat#19106）。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途！

实验前准备

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，无水乙醇，离心管等。

2. 除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到13,000 rpm转速的传统台式离心机。

3. 首次使用前，在漂洗液W*（19101-E）瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。如果发现漂洗液W*由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液W*中的乙醇含量。

操作方法

一、样本预处理：

1. 称重含有目的片段的琼脂糖凝胶。

2. 每100 mg 1% 琼脂糖加入100 µL溶胶液BD。

【注】：对于高浓度的琼脂糖凝胶，溶胶液BD加入量需等比例增加。

3. 50~60℃水浴10 min。期间每2-3 min轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。

【注】：对于400 bp以下片段，建议加入0.3倍体积的异丙醇，可显著提高回收率。

二、DNA产物纯化：

1.（选做）向DNA吸附柱G1中加入100 µL缓冲液AC，13,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：仅限临近效期3个月内的产品进行此项操作，常规产品选做此项操作。

【注】：处理后的DNA吸附柱G1仅限当天使用。

2. 将样本混合液加入到DNA吸附柱G1中，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积750 µL，可分多次离心。

3. 将DNA吸附柱G1放回收集管，加入700 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。

【注】：确保漂洗液W*已添加无水乙醇。

4. 加入500 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。

5 将DNA吸附柱G1放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，室温晾干5 min。以除去残留的漂洗液W*。

6. 将DNA吸附柱G1放入新的离心管（自备）中，在DNA吸附柱G1中央加入50 µL洗脱液，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1min。收集滤液，即为DNA溶液。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

7. DNA溶液可置于-20℃长期保存。

HB220623

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	19101ES08 (5 T)	19101ES50 (50 T)	19101ES70 (200 T)
19101-A	DNA 吸附柱 (MolPure® DNA Column G1)	5 个	50 个	200 个
19101-B	2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube G1)	5 个	50 个	200 个
19101-C	缓冲液 AC (AC Buffer G1)	0.5 mL	5 mL	20 mL
19101-D	溶胶液 BD (BD Buffer G1)	2 mL	20 mL	80 mL
19101-E	漂洗液 W* (Wash Buffer*)	1.3 mL	13 mL	50 mL
19101-F	洗脱液 (Elution Buffer)	1 mL	10 mL	20 mL

运输和保存方法

常温运输，常温保存。产品有效期12个月。

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。

4. PCR扩增产物和酶切产物等反应体系的纯化，建议使用MolPure^® PCR Purification Kit（Cat#19106）。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途！

实验前准备

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，无水乙醇，离心管等。

2. 除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到13,000 rpm转速的传统台式离心机。

操作方法

一、样本预处理：

1. 称重含有目的片段的琼脂糖凝胶。

2. 每100 mg 1% 琼脂糖加入100 µL溶胶液BD。

【注】：对于高浓度的琼脂糖凝胶，溶胶液BD加入量需等比例增加。

3. 50~60℃水浴10 min。期间每2-3 min轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。

【注】：对于400 bp以下片段，建议加入0.3倍体积的异丙醇，可显著提高回收率。

二、DNA产物纯化：

1.（选做）向DNA吸附柱G1中加入100 µL缓冲液AC，13,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：仅限临近效期3个月内的产品进行此项操作，常规产品选做此项操作。

【注】：处理后的DNA吸附柱G1仅限当天使用。

2. 将样本混合液加入到DNA吸附柱G1中，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积750 µL，可分多次离心。

3. 将DNA吸附柱G1放回收集管，加入700 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。

【注】：确保漂洗液W*已添加无水乙醇。

4. 加入500 µL漂洗液W*，12,000 rpm室温离心30 s，弃废液。

5 将DNA吸附柱G1放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，室温晾干5 min。以除去残留的漂洗液W*。

6. 将DNA吸附柱G1放入新的离心管（自备）中，在DNA吸附柱G1中央加入50 µL洗脱液，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1min。收集滤液，即为DNA溶液。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将DNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

7. DNA溶液可置于-20℃长期保存。

HB220623

Q：需要多长时间的操作时间？

A：操作简便：20 min 即可完成纯化

Q：胶回收试剂盒回收率为多少？

A：回收率>60%，最高可达 90%。

Q：胶回收可以直接回收 PCR 原液吗？

A：可以。溶液还是加溶胶液，只是不用置于 50-60℃温浴了，其他步骤不变。比例为 PCR 原液 50 uL体系，加 200 uL 溶胶液。片段小的话，也按照说明书的方式加入异丙醇。但更推荐专门的PCR产物纯化试剂盒（货号：19106ES）。

Q: 回收效率低怎么办？

A: 回收小片段，可以多加溶胶液，溶胶后可以加入0.3 倍体积的异丙醇，可显著提高回收率；另外使用70℃预热的洗脱液也可以提高回收产量。

Q：加了溶胶液BD后溶液呈紫色什么原因呢？正常吗？

A: 如溶液颜色为橙色或紫色，建议加入10μL 3M醋酸钠（pH值5.2）溶液混合。混合物的颜色变成黄色

后进行后续实验，黄色是DNA结合的最佳pH值。

Q: 回收率低,有什么建议吗？

A: 1）电泳的时候，用新鲜的电泳液，不新鲜的会导致PH值升高，降低DNA和膜的吸附力;

2）切胶的时候在保证目的片段的情况下，尽可能的减少胶体积，并且减少紫外灯下的暴露时间;

3）观察加了溶胶液后混合物的颜色，如果是如溶液颜色为橙色或紫色，需要加入10μL3M醋酸钠（pH值5.2）溶液混合。混合物的颜色变成黄色后进行后续实验;

4）溶胶要完全，可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数;

5）加洗脱液前，可适当延长室温晾干时间;

6）70℃预热洗脱液，可提高回收率，加洗脱液时注意加到膜中央，延长室温静置时间。

暂无内容

琼脂糖凝胶电泳DNA条带|GoldBand 1 kb DNA ladder

发表于2024年11月28日由上海金畔生物科技有限公司

琼脂糖凝胶电泳DNA条带|GoldBand 1 kb DNA ladder

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

GoldBand 1 kb DNA ladder是由12000 bp、8000 bp、6000 bp、5000 bp、4000 bp、3000 bp、2500 bp、2000 bp、1500 bp、1000 bp、750 bp、500 bp以及250 bp共13条线状双链DNA片段组成，保存于1×DNA Loading Buffer中，可直接用于电泳分析。其中指示带为4000 bp和1500 bp，指示带浓度为100 ng/5 μL，其他条带均为40 ng/5 μL。该产品适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析，不建议用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。

产品组分

编号	组分	产品编码/规格
编号	组分	10510ES60（100 T）	10510ES80（100 T × 10）
10510-A	GoldBand 1 kb DNA ladder	500 μL	500 μL × 10
10510-B	5 × DNA Loading buffer	1 mL	1 mL × 10

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存半年；-20℃保存两年，避免反复冻融。

注意事项

1）使用时产品需充分混匀，及时更换电泳缓冲液并使用新制备的凝胶，以达到理想的电泳结果；

2）随附5×DNA Loading buffer可用于检测样品时使用。

3）如使用该产品电泳时出现抹带、条带不清晰或弯曲等不理想情况，建议尝试用水稀释后上样。如常规宽度胶孔可用水稀释5倍后取8-10 μL进行上样。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

使用方法

1）Marker上样量为5 μL，若为宽胶孔，需适当增加上样量；

2）建议使用0.7-1.2% Agarose，电压4-10 V/cm，1×TAE缓冲液电泳；

3）通过EB或YeaRed等其他核酸染料进行染色，在紫外灯下观察电泳条带。

电泳图示

琼脂糖凝胶电泳DNA条带|GoldBand 1 kb DNA ladder

相关产品

产品名称	货号	规格
GoldBand 2000 DNA Marker HOT	10501ES60/80	100/1000 T
GoldBand 5000 DNA Marker	10504ES60/80	100 /10×100 T
GoldBand 100 bp DNA ladder	10507ES60/80	100 /10×100 T
YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液）HOT	10202ES76	500 μL
Agarose琼脂糖HOT	10208ES60/76	100/500 g

HB210707

产品描述

产品组分

编号	组分	产品编码/规格
编号	组分	10510ES60（100 T）	10510ES80（100 T × 10）
10510-A	GoldBand 1 kb DNA ladder	500 μL	500 μL × 10
10510-B	5 × DNA Loading buffer	1 mL	1 mL × 10

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存半年；-20℃保存两年，避免反复冻融。

注意事项

1）使用时产品需充分混匀，及时更换电泳缓冲液并使用新制备的凝胶，以达到理想的电泳结果；

2）随附5×DNA Loading buffer可用于检测样品时使用。

3）如使用该产品电泳时出现抹带、条带不清晰或弯曲等不理想情况，建议尝试用水稀释后上样。如常规宽度胶孔可用水稀释5倍后取8-10 μL进行上样。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

使用方法

1）Marker上样量为5 μL，若为宽胶孔，需适当增加上样量；

2）建议使用0.7-1.2% Agarose，电压4-10 V/cm，1×TAE缓冲液电泳；

3）通过EB或YeaRed等其他核酸染料进行染色，在紫外灯下观察电泳条带。

电泳图示

琼脂糖凝胶电泳DNA条带|GoldBand 1 kb DNA ladder

相关产品

产品名称	货号	规格
GoldBand 2000 DNA Marker HOT	10501ES60/80	100/1000 T
GoldBand 5000 DNA Marker	10504ES60/80	100 /10×100 T
GoldBand 100 bp DNA ladder	10507ES60/80	100 /10×100 T
YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液）HOT	10202ES76	500 μL
Agarose琼脂糖HOT	10208ES60/76	100/500 g

HB210707

Q：DNA Marker 分不开，条带弯曲严重？

A;可能原因：a）电压过大；b）琼脂糖温度较高时加入YeaRed 核酸染料。

解决方法：电压调至 110-130V，45min 以上。琼脂糖熔解完后，凉至不烫手时加入YeaRed 核酸染料。

暂无内容

蛋白质/核酸转印套装琼脂糖凝胶电泳转印套装

发表于2024年11月25日由上海金畔生物科技有限公司

蛋白质/核酸转印套装琼脂糖凝胶电泳转印套装

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Yeasen MiniPro^TM Blot Ⅰ迷你垂直转印槽是翌圣MiniPro电泳系统的一部分，该系统还包含了可运行 SDS-PAGE 和 Native-PAGE凝胶的MiniPro^TMPET系列的迷你垂直电泳仪。Yeasen MiniPro^TMBlot Ⅰ迷你转印槽可同时容纳两个转移电泳夹套，可以被用于聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶中的蛋白质和核酸样品的转印。

该产品包括除了转印外壳之外的所有配件，比如转印框、转印夹、冷却模块、大孔海绵等，均为电泳系列的通用品。

蛋白质/核酸转印套装琼脂糖凝胶电泳转印套装

运输与保存方法

常温（wet ice）运输。室温保存。

注意事项

1）易碎品，使用时注意破碎，避免误伤

2）运输过程，注意轻拿轻放！

3）本产品仅作科研用途！

HB210427

该产品包括除了转印外壳之外的所有配件，比如转印框、转印夹、冷却模块、大孔海绵等，均为电泳系列的通用品。

蛋白质/核酸转印套装琼脂糖凝胶电泳转印套装

运输与保存方法

常温（wet ice）运输。室温保存。

注意事项

1）易碎品，使用时注意破碎，避免误伤

2）运输过程，注意轻拿轻放！

3）本产品仅作科研用途！

HB210427

Q：转印套装里包含哪些配件呢？

A：转印框、转印夹、冷却模块、大孔海绵

暂无内容

苯基琼脂糖FF(HS)|Phenyl(HS)强疏水层析介质

发表于2024年11月24日由上海金畔生物科技有限公司

苯基琼脂糖FF(HS)|Phenyl(HS)强疏水层析介质

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

本品Phenyl Agarose FF(HS)是一种高取代的芳香族疏水层析介质，它是在 6%的琼脂糖基架上偶联苯基而成的，结合载量较高，配基疏水性强，适合疏水性较弱的生物分子的分离纯化。

产品性质

基质	6%的高度交联的琼脂糖
粒径	45-165 µm
功能基团	苯基
载量	30 mg lgG 或 36 mg HSA/mL
建议流速	300-600 cm/h
pH范围	3-13
储存缓冲液	20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4-30℃保存，有效期4年。

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

1 缓冲液的准备

1）所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。

2）结合缓冲液通常选用含有高浓度盐的磷酸盐缓冲液，如20 mM PB，1.5 M (NH₄)₂SO₄，pH7.0。

3）洗脱缓冲液通常选用不含其他盐类的磷酸盐缓冲液，如50 mM PB，pH7.0，对于较难洗脱的物质可以采用纯水，或者在纯水中加入低浓度乙醇作为洗脱液。

注：需要根据后续的实验结果（目的物是否有沉淀、目的物的结合强弱、回收率、分离度等）对结合缓冲液中的盐的浓度和类型进行调整。

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。需要将样品的 pH 和电导率调整到与结合缓冲液一致。

3 样品纯化

2）将样品加到平衡好的Phenyl Agarose FF(HS)中，收集流出液。

3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

4 填料清洗

疏水层析填料每次使用后可以分别用2-3倍柱体积的30%异丙醇（70%乙醇）、3倍柱体积的纯化水冲洗层析柱，然后用至少3倍柱体积的平衡液进行平衡。

CIP（Cleaning In Place）清洗

1）先用2个柱体积的纯化水冲洗掉结合比较紧的蛋白。

2）对于强疏水性蛋白、沉淀蛋白的去除：先用2~3个柱体积1M NaOH清洗，然后立即用5~10个柱体积纯水冲洗。

3）脂蛋白和脂类物质的去除：先用5~10个柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，后用5~10个柱体积纯水冲洗。

4）也可将上述两种清洗条件结合进行清洗，即用含有1M NaOH的30%异丙醇溶液清洗。

HB220815

产品性质

基质	6%的高度交联的琼脂糖
粒径	45-165 µm
功能基团	苯基
载量	30 mg lgG 或 36 mg HSA/mL
建议流速	300-600 cm/h
pH范围	3-13
储存缓冲液	20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4-30℃保存，有效期4年。

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

1 缓冲液的准备

1）所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。

2）结合缓冲液通常选用含有高浓度盐的磷酸盐缓冲液，如20 mM PB，1.5 M (NH₄)₂SO₄，pH7.0。

3）洗脱缓冲液通常选用不含其他盐类的磷酸盐缓冲液，如50 mM PB，pH7.0，对于较难洗脱的物质可以采用纯水，或者在纯水中加入低浓度乙醇作为洗脱液。

注：需要根据后续的实验结果（目的物是否有沉淀、目的物的结合强弱、回收率、分离度等）对结合缓冲液中的盐的浓度和类型进行调整。

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。需要将样品的 pH 和电导率调整到与结合缓冲液一致。

3 样品纯化

2）将样品加到平衡好的Phenyl Agarose FF(HS)中，收集流出液。

3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

4 填料清洗

疏水层析填料每次使用后可以分别用2-3倍柱体积的30%异丙醇（70%乙醇）、3倍柱体积的纯化水冲洗层析柱，然后用至少3倍柱体积的平衡液进行平衡。

CIP（Cleaning In Place）清洗

1）先用2个柱体积的纯化水冲洗掉结合比较紧的蛋白。

2）对于强疏水性蛋白、沉淀蛋白的去除：先用2~3个柱体积1M NaOH清洗，然后立即用5~10个柱体积纯水冲洗。

3）脂蛋白和脂类物质的去除：先用5~10个柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，后用5~10个柱体积纯水冲洗。

4）也可将上述两种清洗条件结合进行清洗，即用含有1M NaOH的30%异丙醇溶液清洗。

HB220815

暂无内容