美国POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生产和经营LIFE SCIENCES生命科学（胶体金,不含甲醛的甲醇等），病理学和显镜学 微球和粒子和磁珠各种单体和聚体等产品。polysciences公司是世界上zui大zui全的多聚化合物供应商,同时是世界*的免疫学,组织化学试剂耗材供应商.
上海金畔生物polysciences 23966大量现货供应
转染试剂线性PEI溶液的配制（1mg/ml）
聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。PEI，可用作转染试剂，它可以缩聚DNA分子形成颗粒并转染真核细胞。有实验证明，分子量为25000的线性PEI即Polysciences 23966转染效率zui高。
下面将主要介绍polysciences 线性PEI(#23966)的产品特性及其溶液的配制过程。
1. 产品特性:
产品名称：线性聚乙烯亚胺(PEI)
|
CAS号 |
9002-98-6，26913-06-4 |
分子式 |
(CH2CH2NH)n |
分子量 |
25000 |
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熔点 |
73-75°C |
外观 |
白色或黄色固体 |
结构式 |
|
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溶解性 |
溶于热水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；不溶于：苯，aether和丙酮 |
储存 |
室温 |
2. 溶液配制
此指导说明书是经polysciences公司研究，测试及其客户反馈的后编写的。下面推荐一种简单适用而的方法，讲述如何配制浓度为1mg/mL的转染试剂的配制。
材料：
1g #23966、1L 纯水（Milli-Q®纯水，注射用水（WFI），或类似的生物级水）、12 M盐酸、10 M氢氧化钠、一次性0.1-0.2µm PES真空无菌过滤器、无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶。
器材：
1 L 玻璃烧杯、1 L玻璃量筒、核准pH计、2支1 mL塑料移液管、托盘、聚四氟乙烯（PTFE）搅拌棒、真空泵
配制过程：
1g #23966——900mL水溶解——搅拌、加热（60-80°C）——加HCl调pH到2.0左右——盖上烧杯，搅拌3h（直至粉末*溶解）——冷却至室温——加NaOH调pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水补足至1L——真空过滤消毒——分装，-20°C保存。
备注：加热或加酸都有助于PEI溶解。当然酸可能不用加那么多，详细用量可试加一点搅拌看看，足够溶解就行，不一定需要加到pH那么低。
试剂储存：
冷冻部分溶液可在-20°C保存长达一年；部分解冻的溶液可在4°C保存2周，不可反复冻融。
粉末储存：
未开封的粉末有效期两年。可在室温下保存直至使用。
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转染操作流程：(瞬时转染方法) 转染效率（部分数据参考，本数据来源于网络，不作为售后投诉依据）
1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化细
胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置
入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其
升至室温。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适
量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性 PEI 转
染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性 PEI 转染试剂滴
加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以
形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14
mL 离心管。
3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI 复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在
无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴 DNA-PEI 复
合物。转染 3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转
染后快 的话7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合检测时间。
细胞种类 中文名称 PEI 转染效率
HEK293 人胚肾细胞 90%-95%
293-T 人胚肾细胞 90%-95%
CHO-K1 仓鼠卵巢细胞 80%-90%
U251 人源神经胶质瘤细胞 80%-90%
Hela 人源宫颈癌细胞 70%-80%
COS7 猴 SV40 转化肾细胞 70%-80%
HepG2 人源肝癌细胞 70%-80%
NIH/3T3 小鼠胚胎成纤维细胞 60%-70%
胶质瘤干细胞 人源胶质瘤干细胞 60%-70%
Patu8988 人源胰腺癌细胞 60%-70%
U2OS 人源骨肉瘤细胞 60%-70%
转染试剂和 DNA 配比数据
细胞型号 培养基 每孔细胞数 DNA 的量 转染试剂量 和培养基混合 4-6h
293H DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293FT DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293E DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
293F DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS
COS7 DMEM 1.5×10
4
0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS
hela DMEM 2×10
4
0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS
Caco2 MEM 3.5×10
4
0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS
BHK21 MEM 2×10
4
0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS
CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10
4
0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS
RAW264.7 DMEM 3×10
4
0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS
MCF7
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium
pyruvat
2×10
4
0.1µg 0.25µL
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium
pyruvat+10%FBS
SW480 IMDM 3×10
4
0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS
MDCK DMEM 4×10
4
0.6µg 1µL DMEM+10%FBS
CHO-K1 IMDM+Pro 3×10
4
0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS
HepG2 DMEM 3×10
4
0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS
A549 DMEM 2×10
4
0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS
NIH/3T3 DMEM 1.5×10
4
0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS
vero DMEM 3×10
4
0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS
sf9 SIM SF 5×10
4
0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS