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君研生物细胞残留DNA检测试剂盒简介

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君研生物细胞残留DNA检测试剂盒简介

Hela细胞残留DNA（qPCR）检测试剂盒(H0311A-100)

货 号：H0311A-100

规 格：100 R

保 质 期：一年

储存条件：-20℃

Hela细胞残留DNA检测试剂盒(H0311A-100)

产品介绍

       Hela细胞被广泛用于蛋白表达以及rAAV生产，其残留DNA会作为杂质存在于半成品、中间品以及成品中。由于DNA的稳定性，容易在生产过程中产生残留，而这些生物制品应用到人类疾病治疗时，会带来不可控危险因素。因此核酸残留一项是各类质控标准必检项， 必须遵循WHO、FDA以及我国NMPA监管条例，确保核酸残留在安全可控范围内。

       君研生物自主研发的Hela细胞残留DNA检测试剂盒专一性强，能快速、特异地检测半成品、中间品以及成品中Hela细胞DNA残留。


优势特点

  • 精密度高：低浓度重复性CV值<20%；中高浓度重复性CV值<15%

  • 线性标准：依据国家对此类标准曲线方法建立的基本要求，各项指标全，标准高，结果稳定可靠

  • 快速高效：检测快速，一小时即可出结果

性能指标

标曲线性范围

30 fg/µL-300 pg/µL

参考品

准确可靠

定量限

30 fg/µL

检测原理

荧光探针qPCR法

荧光基团

FAM

适用仪器

适用于多款国产和进口定量PCR仪

DNA残留检测试剂盒

发表于由

DNA残留检测试剂盒

简要描述：对所使用的疫苗，我们Z关心的是疫苗的效果和其安全性。

详细介绍

产品咨询

疫苗DNA残留对人体的潜在危害

对所使用的疫苗，我们zui关心的是疫苗的效果和其安全性。现在很多疫苗是细胞培养疫苗，比如重组（CHO细胞）乙肝疫苗，Vero细胞狂犬病疫苗等大多数疫苗都是用细胞培养的方法生产，而对疫苗的纯化是关键问题，我们要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。就以疫苗DNA残留为例，疫苗DNA残留可能造成插入突变﹑导致抑癌基因失活﹑癌基因被激活等，zui终造成疫苗使用者致癌。

 

疫苗DNA残留的相关法规

由于有如此潜在的危险性，所以许多机构对疫苗DNA残留制定了相关标准，1986年世界卫生组织规定用细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过100 pg /支 ，而在1998年世界卫生组织认为细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过10 ng /支，而在1997年美国药品食品卫生监督局规定在美国使用的细胞系疫苗DNA残留不能超过10 pg /支，中国规定的细胞系疫苗DNA残留不能超过100 pg /支。

所以在疫苗生产中要随时对DNA残留进行检测，以便知道每个过程除掉DNA残留的能力。在每一批产品中我们必须检测DNA残留，所以我们必须运用敏感且行之有效的对DNA残留定量的检测方法。通常规定每支疫苗DNA残留不能超过100 pg，也就大约等同于17个甚至更少CHO细胞基因组DNA的含量，对如此微量的DNA残留进行检测，所用的技术方法就必须相当敏感和稳定，现在对DNA残留定量的方法主要有以下三种：
1、分子杂交技术检测DNA残留
2、基于DNA结合蛋白的方法（Threshold® immunoassay）检测DNA残留
3、实时定量PCR法检测DNA残留

 

分子杂交技术检测DNA残留的原理和方法

分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝-酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备，例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛（Dig）等。由于地高辛标记核酸探针，操作方便、灵敏度高，已标记的探针在4℃贮存可达两年之久，方便随时应用，所以现在常采用地高辛标记核酸探针，用光标记法将光敏Dig标记到探针上，制成光敏-Dig-核酸探针，再与固定在硝–酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交，使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合，zui后可用不同的检测方式进行检测，发光检测和显色检测均可，灵敏度可达10pg以下（表 1  三种DNA残留检测方法的比较）。

 

基于DNA结合蛋白的方法（Threshold® Immunoassay）检测DNA残留的原理和方法

Threshold® Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白，单链DNA（ssDNA）结合蛋白（SSB）和抗ssDNA 的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的单抗与变性的宿主细胞DNA结合zui终形成复合物，通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝–酸纤维素膜，在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉，zui后放于有尿素溶液的读数仪，尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 导致PH值发生变化，读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量，从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

实时定量PCR法检测DNA残留的原理和方法

荧光定量PCR是基于PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，产物的增加可以通过荧光信号指示，通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量，通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度，从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

三种检测DNA残留方法的比较

3种方法用来检测疫苗DNA残留都要对样品进行相应的处理，这对zui终的结果的准确性至关重要。而杂交相对对样品DNA的损失小，而用Q-PCR需要提取样品的DNA，损失较大。在我们选择那种方法时我们要考虑它的稳定性，敏感性，成本等以至找到*的性价比的方法（表 1），从表1 我们不难发现使用分子杂交的方法是一种比较可行经济实用的方法，目前国内也主要是用此方法。

表 1  三种DNA残留检测方法的比较

 

Hybridization

Threshold® Immunoassay

Q-PCR

特异性

物种特异性

无特异性

序列特异性

检测的zui小序列长度（bp）

50

600

150

抗干扰性和稳定性

++

+

+

所需时间（h）

48

6

2

敏感性（pg）

10

6

<1

初期花费（$）

1200

>40000

>70000

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II试剂盒产品简介

产品中文名称：高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II

罗氏应用科学部（Roche Applied Science）是zui早致力于向用户提供非放射标记技术的公司之一，让更多的科研工作者们可以避免使用危险的放射性同位素。DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II（第二代）是由罗氏公司研发，并且是在DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I（*代）的基础上优化升级的，具有更高的准确性、更好的灵敏度、操作时间更短等特点。自1995年地高辛产品上市以来，尽管有定量PCR技术的应用，DIG系统仍然是非放射性高效标记—检测技术的*，被广泛地应用各种膜杂交及原位杂交技术中。

 

高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II 图片

 

欲了解详细信息请咨询 

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II检测原理

该产品是用地高辛（地高辛：英文名Digoxigenin，简称DIG；又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子）标记的DNA探针，应用于分子杂交和随后的化学发光检测。检测主要分三阶段进行：1. DNA标记：根据随机引物标记技术，生成DIG地高辛标记的DNA探针。 2. 杂交：按照标准杂交方法进行，将地高辛标记的DNA探针用于核酸点杂交，可选择带正电的尼龙膜或纯硝–酸纤维素膜作为杂交膜。 3. 免疫学检测：首先将标记有AP的地高辛抗体与杂交探针免疫结合；然后在477 nm波长下，通过检测碱性磷酸酶与CSPD底物产生的化学发光反应的数值，从而达到免疫检测的目的。

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II的显著特点

★ Accurate and fast—–使用预混合的高效地高辛（DIG）标记的随机引物可以缩短标记DNA探针的操作时间，提高标记物的产量。
★ Sensitive—–在人类DNA的复合物和植物基因组中，可以检测到单个拷贝的基因。
★ Time-saving—–地高辛（DIG）标记的探针可以储存一年以上，杂交液可以反复使用3～5次（具体要根据每次杂交过程中标记探针产生信号的强弱来确定）。

 

起福生物为您提供配套的产品

生物制品加工过程中培养物残留的污染物（Bioprocess Contaminant, BC）ELISA检测试剂盒

宿主细胞蛋白（Host Cell Protein, HCP）残留检测ELISA试剂盒

例如： Vero Cell HCP ELISA Kit
           CHO HCP ELISA Kit, 3G
           Pichia pastoris HCP ELISA Kit 
           E.coli HCP ELISA Kit
           Human Erythropoietin（EPO） Quantikine IVD ELISA Kit 

           更多相关产品请点击查看>>> Cygnus Biotech ELISA Kits

 

           尼龙膜
           PVDF膜
           硝–酸纤维素膜
           鱼精DNA
           蛋白酶K

 

11745832910

Product Quantity  Cat. No.
Qubit® 2.0 Fluorometer Each Q32866
Qubit® Quantitation Starter Kit Each Q32871
Qubit® Quantitation Lab Starter Kit Each Q32872
Qubit® dsDNA BR Assay Kit 100 assays, 2–1000 ng
500 assays, 2–1000 ng		 Q32850
Q32853
Qubit® dsDNA HS Assay Kit 100 assays, 0.2–100 ng
500 assays, 0.2–100 ng		 Q32851
Q32854
Qubit® ssDNA Assay Kit 100 assays, 1–200 ng Q10212
Qubit® RNA Assay Kit 100 assays, 5–100 ng
500 assays, 5–100 ng		 Q32852
Q32855
Qubit® RNA BR Assay Kit 100 assays, 20–1000 ng
500 assays, 20–1000 ng		 Q10210
Q10211
Qubit® Protein Assay Kit 100 assays, 0.25–5 μg
500 assays, 0.25–5 μg		 Q33211
Q33212
Qubit® Assay Tubes Set of 500 Q32856

 

疫苗生产中DNA残留检测试剂盒

发表于由

疫苗生产中DNA残留检测试剂盒

简要描述：产品是用地高辛（地高辛：英文名Digoxigenin，简称DIG；又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子）标记的DNA探针，应用于分子杂交和随后的化学发光检测。检测主要分三阶段进行：1. DNA标记：根据随机引物标记技术，生成DIG地高辛标记的DNA探针。

详细介绍

产品咨询

疫苗DNA残留对人体的潜在危害

对所使用的疫苗，我们zui关心的是疫苗的效果和其安全性。现在很多疫苗是细胞培养疫苗，比如重组（CHO细胞）乙肝疫苗，Vero细胞狂犬病疫苗等大多数疫苗都是用细胞培养的方法生产，而对疫苗的纯化是关键问题，我们要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。就以疫苗DNA残留为例，疫苗DNA残留可能造成插入突变﹑导致抑癌基因失活﹑癌基因被激活等，zui终造成疫苗使用者致癌。

 

疫苗DNA残留的相关法规

由于有如此潜在的危险性，所以许多机构对疫苗DNA残留制定了相关标准，1986年世界卫生组织规定用细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过100 pg /支 ，而在1998年世界卫生组织认为细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过10 ng /支，而在1997年美国药品食品卫生监督局规定在美国使用的细胞系疫苗DNA残留不能超过10 pg /支，中国规定的细胞系疫苗DNA残留不能超过100 pg /支。

所以在疫苗生产中要随时对DNA残留进行检测，以便知道每个过程除掉DNA残留的能力。在每一批产品中我们必须检测DNA残留，所以我们必须运用敏感且行之有效的对DNA残留定量的检测方法。通常规定每支疫苗DNA残留不能超过100 pg，也就大约等同于17个甚至更少CHO细胞基因组DNA的含量，对如此微量的DNA残留进行检测，所用的技术方法就必须相当敏感和稳定，现在对DNA残留定量的方法主要有以下三种：
1、分子杂交技术检测DNA残留
2、基于DNA结合蛋白的方法（Threshold® immunoassay）检测DNA残留
3、实时定量PCR法检测DNA残留

 

分子杂交技术检测DNA残留的原理和方法

分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备，例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛（Dig）等。由于地高辛标记核酸探针，操作方便、灵敏度高，已标记的探针在4℃贮存可达两年之久，方便随时应用，所以现在常采用地高辛标记核酸探针，用光标记法将光敏Dig标记到探针上，制成光敏-Dig-核酸探针，再与固定在膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交，使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合，zui后可用不同的检测方式进行检测，发光检测和显色检测均可，灵敏度可达10pg以下（表 1  三种DNA残留检测方法的比较）。

 

基于DNA结合蛋白的方法（Threshold® Immunoassay）检测DNA残留的原理和方法

Threshold® Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白，单链DNA（ssDNA）结合蛋白（SSB）和抗ssDNA 的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的单抗与变性的宿主细胞DNA结合zui终形成复合物，通过亲合素将此复合物连接到生物素—纤维素膜，在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉，zui后放于有尿素溶液的读数仪，尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 导致PH值发生变化，读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量，从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

实时定量PCR法检测DNA残留的原理和方法

荧光定量PCR是基于PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，产物的增加可以通过荧光信号指示，通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量，通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度，从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

三种检测DNA残留方法的比较

3种方法用来检测疫苗DNA残留都要对样品进行相应的处理，这对zui终的结果的准确性至关重要。而杂交相对对样品DNA的损失小，而用Q-PCR需要提取样品的DNA，损失较大。在我们选择那种方法时我们要考虑它的稳定性，敏感性，成本等以至找到*的性价比的方法（表 1），从表1 我们不难发现使用分子杂交的方法是一种比较可行经济实用的方法，目前国内也主要是用此方法。

表 1  三种DNA残留检测方法的比较

 

Hybridization

Threshold® Immunoassay

Q-PCR

特异性

物种特异性

无特异性

序列特异性

检测的zui小序列长度（bp）

50

600

150

抗干扰性和稳定性

++

+

+

所需时间（h）

48

6

2

敏感性（pg）

10

6

<1

初期花费（$）

1200

>40000

>70000

HBS-3096A兽药残留检测仪器

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HBS-3096A兽药残留检测仪器

HBS-3096A兽药残留检测仪器采用酶联免疫（ELISA）检测技术，适用标准48T或96T检测试剂盒进行定性或定量检测。兽药残留，是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品（如鸡蛋、奶品、肉品，蜂蜜等）中原型药物或其代谢产物，包括与兽药有关的杂质的残留。

HBS-3096A兽药残留检测仪器

产品简介

 HBS-3096A兽药残留速测仪采用酶联免疫（ELISA）检测技术，适用标准48T或96T检测试剂盒进行定性或定量检测。兽药残留，是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品(如鸡蛋、奶品、肉品，蜂蜜等)中原型药物或其代谢产物，包括与兽药有关的杂质的残留，包括磺胺类、硝基呋喃类、氨基糖苷类、四环素类以及一些非法添加物，如三聚氰胺、克伦特罗、莱克多巴胺、孔雀石绿等。

产品特点

工业级彩色液晶显示、触摸屏操作

八通道光纤测量系统、进口探测器

三种线性振板功能、速度时间可调

超宽电压输入设计、全球电压适用

特有的开放式Cut-Off判断公式、设您所设

终点法、两点法、动力学、单/双波长测试模式

专用兽药残留计算方法、适用于禽畜、蛋类、肉品、奶品等药物残留的检测HBS-6096全系列产品，适用德铁公司三年质保服务标准

主要技术参数

光      源：进口卤钨灯、节能设计

测量通道：垂直8光路通道

波长范围：400-800nm

滤 光 片 ：标配405、450、492、630nm四片标准滤光片，其它波长可选配，最多可装载15片滤光片

读数范围：0.000-4.000Abs

线性范围：0.000-3.000Abs

重 复 性 ：CV≤0.3%

稳 定 性 ：≤±0.003Abs示值误差：≤±0.01Abs波长误差：≤±2nm分 辨 率 ：0.001Abs（显示、打印）、内部运算0.0001Abs振板功能：振板强度（由弱到强）3级可选，振板时间0 – 255秒可调，误差±2秒显示输入：8吋彩色液晶显示、触摸屏输入电源输入：宽电压设计 AC100V-240V  50-60Hz产品质量：约11Kg

外形尺寸：433mm(L)*320mm(W)*308mm(H)


注：产品规格、参数如有变化，恕不另行通知。


产品常见应用

激素及代谢产物检测（兽药残留）
1 克伦特罗(Clenbuterol)，俗称瘦肉精。因其能改善脂肪型动物的肉与脂肪的比例，并能加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，克伦特罗可以残留在动物的体内。对人有严重的副作用，轻则导致心跳及心律不正常，重则可引发心脏病。
2 莱克多巴胺（Ractopamine）它可以加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率。
4 (19-Nortestosterone)为一种蛋白质同化类.有促进蛋白质合成，减少蛋白质分解，刺激骨髓造血，加速骨生长等作用。有引起性功能紊乱，肝肾功能损害，甚至于诱发肿瘤等潜在危害。
4. 抗生素检测（兽药残留）
8 磺胺类（三合一，五合一）：适用于治疗溶血性链球菌、脑膜炎球菌、肺炎球菌等感染疾病，药效持久。用作饲料添加剂，用于防治葡萄球菌及溶血性链球菌等的感染，即主要治疗禽霍乱、禽伤寒，鸡球虫病等。
9硝基呋喃类（Nitrofurans）药物是一种广谱抗生素，因价格较低且效果好，而广泛用于畜禽及水产养殖业，但由于硝基呋喃类药物及其代谢物对人体有致癌、致畸胎副作用,1995年起欧盟禁止硝基呋喃类药物在畜禽及水产动物食品中使用，并严格执行对水产中硝基呋喃的残留检测。
10孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，其既是杀真菌剂，又是染料。长期以来，渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。研究显示，孔雀石绿在鱼内残留时间太长，且其具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。

HBS-3096A兽药残留检测仪器

HBS-3096A兽药残留检测仪器

残留DNA提取试剂盒

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残留DNA提取试剂盒（碘化纳法） 

残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的碘化纳法，适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提 取。

残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA，回收率较高。

DNA的提取操作时间为60-90 min。

提取的DNA可以通过qPCR进行定量。

◆特点

● 遵照中国药典登载的碘化纳法

 ● 高回收率

● 单管操作（无需换管） ，耗时仅60-90 min

● 不需要苯酚和氯方等有机溶剂

● 兼容多种DNA *1 为使DNA检测方法与标准保持同步，中国药典（The Chinese Pharmacopoeia）宣布建立残留细胞 *1 DNA检测国家标准。碘化纳法将作为残留DNA提取方法，被新增至2020版的中国药典中。

◆原理 1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于碘化纳和N-月桂基肌氨酸钠； 2. 异丙醇与糖原选择性地共沉淀DNA。

 

◆使用方法

 

方法1 

应用实例 DNA spiking test（加标回收实验） 

 

DNA Extractor™ Kit可以高产量提取残留DNA，甚至少量残留DNA。 

 

上海金畔生物Ivy Fine Chemicals B48202现货

货号 品名 规格 品牌
B48202 100L Glycogen Solution;1 mL Detergent Combo Solution;25 mL Sodium Iodide Solution;30 mLWashing Buffer (No Ethanol)DNA提取器试剂盒  kit   Ivy Fine Chemicals

 

Ivy Fine Chemicals Corporation，

目录号B48202，50 次浸提，

4 ℃ 下可稳定储存 2 年

仅供实验室使用

 

溶液制备：

q 向清洗缓冲液中加入 70 mL 乙醇，

q 向碘化纳溶液中加入 50 L 糖原

q 向清洗缓冲液中加入 2 L 糖原

 

DNA 提取程序：

q 向 2 mL 微量离心管中加入 500 L 各样品或稀释液

q 向各试管中加入 20 L 清洁剂组合溶液，并轻轻涡旋

  • 选项：如果高浓度的蛋白质干扰 DNA 提取和随后的 DNA 分析，每个样品用 20 L 蛋白酶 K (10 mg/mL) 在 60 C 消化 20 min，然后在 95 C 灭活酶 5 min

q 向各微量离心管中加入 500 L 碘化纳溶液，轻轻涡旋

q 在 50 ℃ 下孵育 10 min

q 加入 900 L 异丙醇并涡旋。

q 室温下孵育 30 min

q 以 12000 rpm 离心 15 min

q 轻轻倒出或吸取上清液

q 加入 1.8 mL 洗涤缓冲液（含乙醇）并涡旋

q 以 12000 rpm 离心 10 min

q 轻轻倒出或吸取上清液

q 风干 DNA

q 加入 20-60 L 水，轻轻涡旋溶解 DNA

q 纯化的 DNA 可通过 PCR、real time PCR、限制性内切酶切、DNA 测序、Picogreen 荧光染色进行分析

流程图：