EZ Trans细胞转染液-说明书

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EZ Trans细胞转染液

C4058L1080

1mL

4

200

EZ Trans细胞转染液

C4058L1082

50mL

4

1800

EZ Trans细胞转染液

C4058L1084

500mL

4

3500

产品描述:

细胞转染液(核心成分为线性聚乙烯亚胺,也称作LPEI),是新一代的转染试剂,带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团 形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过胞吞作用进入细胞。除了具有阳离子脂质体(如:Lipo2000,3000)的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内,转染效率高,细胞毒性低等特点。

EZ Trans是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体。其转染性能好于树枝状聚合物,而且它的细胞毒性低。

使用方法:

瞬时转染方法

1. 接种细胞:转染前一天,用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、EZ Trans 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据下表所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释EZ Trans 试剂。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的EZ Trans转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞:直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后,添加1/2体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果:在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后zui快 7h 即可检测到转入基因的表达。请自行确定检测时间。?

稳定转染方法

1. 接种细胞:转染前一天,用胰酶消化细胞并计数。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,总体积如表 1 所示,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的EZ Trans转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞:直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果:在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后zui快 7h 即可检测到转入基因的表达。

5.转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍以上),在 CO2培养箱中 37℃孵育隔天。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

运输与保存方法:

常温运输,4℃保存,保质期12个月。

使用注意事项:

质粒质量:请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过 260 nm 光吸收测定 DNA 浓度,260 nm / 280 nm 比值确定 DNA 纯度(比值应该在 1.8~2.0 的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。?

特别提醒:

1. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为 70~80%。

2. 对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。

3. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。

4. 对大多数细胞来而言,每 1 μg DNA 使用 3.0 μLEndoFectinTM 试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 体积线性PEI转染试剂进行优化。

附:几种细胞转染方法比较

几种细胞转染方法(试剂)特点比较表

转染方法

原理

主要应用

特点

阳离子聚合物
EZ Trans

带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团 形成带正电的 复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过胞吞作用进入细胞。

稳定转染

瞬时转染

所有细胞

除了具有阳离子脂质体的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内,转染效率高,细胞毒性低等特点,是新一代的转染试剂。

阳离子脂质体法

带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物,然后脂质体上剩余的电核与细胞膜上的唾液酸残基的负电 核结合;另一种解释是通过细胞是内吞作用而被进入细胞。(若DNA浓度过高,中和脂质体表面电核,而降低了与细胞的结合能力)

稳定转染

瞬时转染

所有细胞

使用方法简单,可携带大片段DNA,通用于各种类型的裸露DNA或RNA,能转 染各种类型的细胞,没有免疫原性。虽在体外基因转染 中有很高的效率,但在体 内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,这在很大程度上限制了 其应用

DEAE-葡聚糖法

带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞

瞬时转染

相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副 作用,转染时需除血清且一 般只用于BSC-1,CV-1,COS 细胞系

磷酸钙法

磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞

稳定转染

染瞬转染

不适用于原代细胞(所需的DNA浓度较高),操作简 便但重复性差,有些细胞不 适用  细胞建议用CSCL梯度离心,转染是拷贝数较多

逆转录病毒(RNA)

通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受 体相互作用而 进入宿主细胞,之后反转入酶 启动合成DNA并随机整合到宿主基因组中

稳定转染

特定宿主细胞

可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等,但携 带基因不能太大(<8kb), 细胞需处分裂期,需考虑安 全因素

腺病毒

(双链 DNA)

先和细胞表面 的受体结合,继 而在αv整合 素介导下被细 胞内吞

瞬时转染

特定宿主细胞

可用于难转染的细胞,需考虑安全因素

Biolistic颗粒传递法

(基因枪粒子轰击法)

将DNA用显微重金属颗粒沉 淀,再将包被好 的颗粒用弹道 装置投射入细 胞,DNA在胞内逐步释放,表达

瞬时性转染

稳定转染

可用于:人的表皮细胞, 纤维原细胞,淋巴细胞系以 及原代细胞

显微注射法

用显微操作将 DNA直接注入靶 细胞核

稳定转染

瞬时转染

转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的 胚胎细胞

电穿孔法

高脉冲电压破 坏细胞膜电位,DNA通过膜上形 成的小孔导入

稳定转染

瞬时转染

所有细胞

适用性广,除了质粒外,还可转染大的基因组 (>65kb)但细胞致死率高, DNA和细胞用量大,  需根 据不同细胞类型优化电穿 孔实验条件,拷贝数较少 1-20

 

HE染液说明书

HE染液说明书

 

 

产品描述

HE染色,即苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色,是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用广泛的技术方法。苏木素染液为碱性,主要使细胞核内的染色质、胞质内的核酸着蓝色至蓝紫色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色可用于观察比较正常组织与病变组织的形态结构,可初步确定或鉴别病变组织、细胞中出现的异常物质。经本产品HE染液染色的组织或细胞,细胞核呈蓝色至蓝紫色,细胞浆呈红色,胞浆与胞核对比鲜明。

产品组分

组成

Component

78GD10081-100mL

78GD10081-500ML

苏木素染液

100 mL

500 mL

伊红染液(醇溶)

100 mL

500 mL

 

使用方法

使用方法

1. 样本前处理

(1) 对于石蜡切片:切片依次经二甲苯脱蜡10 min,更换新鲜的二甲苯脱蜡10 min,无水乙醇 5min,新鲜无水乙醇5 min,90%乙醇5 min,75%乙醇5 min,自来水洗。

(2) 对于冰冻切片:-20℃保存的冰冻切片需静置5-10 min恢复至室温。如需固定,则经所需固定液室温后自来水洗。

2. HE染色

(1) 苏木素染色:上述处理好的切片,进入苏木素染液染色3-5 min,自来水洗;

(2) 分化:切片经苏木素分化液2-5 s,自来水流水充分冲洗;

(3) 返蓝:苏木素返蓝液返蓝2-5 s,自来水流水充分冲洗;

(4) 伊红染色:切片依次经85%、95%梯度乙醇脱水,各5 min。然后进入伊红染液(醇溶)中染色5 min,经两次无水乙醇脱水各5 min;

(5) 透明:切片再经新鲜无水乙醇脱水5 min,二甲苯透明5 min,更换新鲜的二甲苯再透明5 min。

(6) 封片:滴加中性树胶进行封片。

注意事项

1. 染色后用特定溶液将组织中过多结合的染液脱去,这个过程称为分化作用,所用溶液称为分化液。在HE染色种常用低浓度盐酸作为分化液,因为酸能破坏苏木素的醌型结构结构,使色素与组织分离而褪色。组织在经苏木素染色后,必须经过分化去除组织中过多结合及非特异性吸附的染料,才能进行伊红染色,确保细胞核与胞浆显色分明。可使用78NB10002苏木素分化液。分化过程中,根据组织切片厚度、组织类型等结合镜下观察适当调整分化时间。

 

2. HE染色中苏木素染色后的返蓝很重要。苏木素在酸性条件下为离子状态,呈红色;在碱性条件下呈蓝色。组织切片经酸性分化液分化后呈红色或粉红色,需立即水洗终止分化,再用弱碱性溶液使苏木素,这个过程就是返蓝作用。如果没有专用的返蓝液,用温水浸洗也能使细胞核返蓝,只是所需时间略长。推荐78NB10003苏木素返蓝液。

3. 苏木素及伊红染色程度可以根据染色需要进行调整染色时间。

4. 苏木素染液可重复使用多次,每次用完后需密封保存,防止有效成分挥发。当组织或细胞着色明显偏浅或颜色异常时请更换新的染液。

5. 用于染色后脱水的无水乙醇纯度需大于99.9%。如果乙醇含水,伊红会褪色导致染色不均匀。

6. 伊红染液(醇溶)可反复使用数次,当组织着色明显偏浅时建议更换新的染液。

7. 操作时请穿实验服,佩戴一次性手套。

 

快速瑞氏-姬姆萨染液 标准化组织学染色方法|Fast Wright's-Giemsa Stain

快速瑞氏-姬姆萨染液 标准化组织学染色方法|Fast Wright's-Giemsa Stain

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

快速瑞氏-姬姆萨染色(Wright's-Giemsa Stain)是一种标准化组织学染色方法,通过对染色体染色的原理在形态学上区分不同的细胞类型如血小板、红细胞、白细胞和其他细胞。本品特别设计适用于血液和骨髓涂片染色。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

60529JP01(150 mL)

60529JP02(300 mL)

60529-A

瑞氏-姬姆萨染液一

50 mL

100 mL

60529-B

瑞氏-姬姆萨染液二

50 mL×2

100 mL×2

 

运输与保存方法

室温运输;室温保存,有效期一年。

 

注意事项

1)推片:取全血3 μL左右置载玻片上,将推玻片保持与载玻片30度角,置于血滴正前方,稍往后移与血滴接触,即可见血液沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动,至血液铺完血膜为止。

2)涂片时不要太厚也不要太薄。太厚红细胞重叠并易皱,太薄时不易找到白细胞。

3)用蜡笔在血膜两头划线,平放于染色架上。血膜要干透后才能染色,否则染色时血膜易脱落。

4)染液一及染液二不能过少,以防很快蒸发引起染液沉淀。染液一不可少于400 μL,染液二是染液一的2倍。滴加染液一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气,使染液充分混合。

5)镜检时如果红细胞偏蓝,请放在蒸馏水中1~3 min,直至红润为止。

6)染色过淡,可复染。染色过深,可用水冲洗或浸泡,还可用75%乙醇脱色3~5 s。

7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套。
8)本产品仅作科研用途!

 

操作步骤

1)平置血涂片于染色架上,滴加染液一3~5滴,使其迅速盖满血膜,染色1 min左右,以固定血片。

2)不要倒掉试剂一,直接滴加染液二610滴,轻摇玻片或用洗耳球对准血涂片吹气使染液充分混合,染色58 min

3)水洗30 s,待干后镜检。

 

染色结果:

1)红细胞呈浅红色,中央稍淡而略有蝶形态。

2)白细胞系统清晰易分,细胞膜清晰呈紫黑色,细胞核着色呈深浅不同的紫红色,胞浆浅红色。胞浆中各种颗粒区分明显。

其中:

I)中性粒细胞胞浆中颗粒呈淡紫红色、嗜酸粒细胞胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。

II)单核细胞的胞浆呈灰蓝色,胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。

Ⅲ)淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Hematoxylin stain solution 苏木素染色液

60502JP50/60/76

50 ml/100 ml/500 ml

Hematoxylin and Eosin Staining Kit 苏木素伊红(H&E)染色试剂盒

60524JP60

2×100 ml

HB190418

 

 

 

Q:请问瑞氏-吉姆萨染色,染色液1是不是固定液?染色之前我要不要自己用固定液固定啊?

A:涂片不需要固定,细胞爬片均是需要固定15min之后再进行染色。

Q:我们有肺泡灌洗液细胞分类计数的染色试剂盒嘛

A:快速瑞氏-姬姆萨染液

Q:瑞氏-姬姆萨染液染色结果判读?

A:①红细胞呈橘红色圆盘状、无细胞核;

②白细胞胞核呈紫红色,染色质清楚,粗细松紧可辨;

③血小板为不规则细胞质小块、周边均匀呈浅蓝色,中央为细小的紫红色颗粒;

④中性粒细胞胞核呈紫蓝色,颗粒呈浅红色,形态多样;

⑤嗜酸粒细胞胞核呈紫蓝色,颗粒呈橘红色;

⑥嗜碱粒细胞胞核呈紫蓝色;淋巴细胞胞核呈蓝灰色,胞质呈淡蓝色;

⑦单核细胞胞核呈紫蓝色,胞质呈灰蓝色。

⑧淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。

[1] Wang M, Xin H, Tang W, et al. AMPK Serves as a Therapeutic Target Against Anemia of Inflammation. Antioxid Redox Signal. 2017;27(5):251-268. doi:10.1089/ars.2016.6846(IF:6.337)
[2] Huang JL, Fan RZ, Zou YH, Zhang L, Yin S, Tang GH. Salviplenoid A from Salvia plebeia attenuates acute lung inflammation via modulating NF-κB and Nrf2 signaling pathways. Phytother Res. 2021;35(3):1559-1571. doi:10.1002/ptr.6922(IF:5.882)
[3] Wang M, Tang W, Xin H, Zhu YZ. S-Propargyl-Cysteine, a Novel Hydrogen Sulfide Donor, Inhibits Inflammatory Hepcidin and Relieves Anemia of Inflammation by Inhibiting IL-6/STAT3 Pathway. PLoS One. 2016;11(9):e0163289. Published 2016 Sep 20. doi:10.1371/journal.pone.0163289(IF:3.057)
[4] Dong W, Lin Y, Cao Y, Liu Y, Xie X, Gu W. Luteolin induces myelodysplastic syndrome‑derived cell apoptosis via the p53‑dependent mitochondrial signaling pathway mediated by reactive oxygen species. Int J Mol Med. 2018;42(2):1106-1115. doi:10.3892/ijmm.2018.3696(IF:2.784)

 

快速瑞氏-姬姆萨染色(Wright's-Giemsa Stain)是一种标准化组织学染色方法,通过对染色体染色的原理在形态学上区分不同的细胞类型如血小板、红细胞、白细胞和其他细胞。本品特别设计适用于血液和骨髓涂片染色。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

60529JP01(150 mL)

60529JP02(300 mL)

60529-A

瑞氏-姬姆萨染液一

50 mL

100 mL

60529-B

瑞氏-姬姆萨染液二

50 mL×2

100 mL×2

 

运输与保存方法

室温运输;室温保存,有效期一年。

 

注意事项

1)推片:取全血3 μL左右置载玻片上,将推玻片保持与载玻片30度角,置于血滴正前方,稍往后移与血滴接触,即可见血液沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动,至血液铺完血膜为止。

2)涂片时不要太厚也不要太薄。太厚红细胞重叠并易皱,太薄时不易找到白细胞。

3)用蜡笔在血膜两头划线,平放于染色架上。血膜要干透后才能染色,否则染色时血膜易脱落。

4)染液一及染液二不能过少,以防很快蒸发引起染液沉淀。染液一不可少于400 μL,染液二是染液一的2倍。滴加染液一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气,使染液充分混合。

5)镜检时如果红细胞偏蓝,请放在蒸馏水中1~3 min,直至红润为止。

6)染色过淡,可复染。染色过深,可用水冲洗或浸泡,还可用75%乙醇脱色3~5 s。

7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套。
8)本产品仅作科研用途!

 

操作步骤

1)平置血涂片于染色架上,滴加染液一3~5滴,使其迅速盖满血膜,染色1 min左右,以固定血片。

2)不要倒掉试剂一,直接滴加染液二610滴,轻摇玻片或用洗耳球对准血涂片吹气使染液充分混合,染色58 min

3)水洗30 s,待干后镜检。

 

染色结果:

1)红细胞呈浅红色,中央稍淡而略有蝶形态。

2)白细胞系统清晰易分,细胞膜清晰呈紫黑色,细胞核着色呈深浅不同的紫红色,胞浆浅红色。胞浆中各种颗粒区分明显。

其中:

I)中性粒细胞胞浆中颗粒呈淡紫红色、嗜酸粒细胞胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。

II)单核细胞的胞浆呈灰蓝色,胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。

Ⅲ)淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。

 

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规格

Hematoxylin stain solution 苏木素染色液

60502JP50/60/76

50 ml/100 ml/500 ml

Hematoxylin and Eosin Staining Kit 苏木素伊红(H&E)染色试剂盒

60524JP60

2×100 ml

HB190418

 

 

 

Q:请问瑞氏-吉姆萨染色,染色液1是不是固定液?染色之前我要不要自己用固定液固定啊?

A:涂片不需要固定,细胞爬片均是需要固定15min之后再进行染色。

Q:我们有肺泡灌洗液细胞分类计数的染色试剂盒嘛

A:快速瑞氏-姬姆萨染液

Q:瑞氏-姬姆萨染液染色结果判读?

A:①红细胞呈橘红色圆盘状、无细胞核;

②白细胞胞核呈紫红色,染色质清楚,粗细松紧可辨;

③血小板为不规则细胞质小块、周边均匀呈浅蓝色,中央为细小的紫红色颗粒;

④中性粒细胞胞核呈紫蓝色,颗粒呈浅红色,形态多样;

⑤嗜酸粒细胞胞核呈紫蓝色,颗粒呈橘红色;

⑥嗜碱粒细胞胞核呈紫蓝色;淋巴细胞胞核呈蓝灰色,胞质呈淡蓝色;

⑦单核细胞胞核呈紫蓝色,胞质呈灰蓝色。

⑧淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。

[1] Wang M, Xin H, Tang W, et al. AMPK Serves as a Therapeutic Target Against Anemia of Inflammation. Antioxid Redox Signal. 2017;27(5):251-268. doi:10.1089/ars.2016.6846(IF:6.337)
[2] Huang JL, Fan RZ, Zou YH, Zhang L, Yin S, Tang GH. Salviplenoid A from Salvia plebeia attenuates acute lung inflammation via modulating NF-κB and Nrf2 signaling pathways. Phytother Res. 2021;35(3):1559-1571. doi:10.1002/ptr.6922(IF:5.882)
[3] Wang M, Tang W, Xin H, Zhu YZ. S-Propargyl-Cysteine, a Novel Hydrogen Sulfide Donor, Inhibits Inflammatory Hepcidin and Relieves Anemia of Inflammation by Inhibiting IL-6/STAT3 Pathway. PLoS One. 2016;11(9):e0163289. Published 2016 Sep 20. doi:10.1371/journal.pone.0163289(IF:3.057)
[4] Dong W, Lin Y, Cao Y, Liu Y, Xie X, Gu W. Luteolin induces myelodysplastic syndrome‑derived cell apoptosis via the p53‑dependent mitochondrial signaling pathway mediated by reactive oxygen species. Int J Mol Med. 2018;42(2):1106-1115. doi:10.3892/ijmm.2018.3696(IF:2.784)