mdbioproducts常见实验室应用程序的故障排除

发表于2024年9月1日由上海金畔生物科技有限公司

一般实验室技术

洗涤技巧：

多通道移液器或喷瓶

确保移液器的每个尖头都正确分配或喷射瓶有足够的压力。清空孔中的内容物并用指示的洗涤缓冲液体积填充孔。倒出孔，倒置并在干净的纸巾上吸干。如插入所示重复此过程。最后一次倾析后，倒置去除任何剩余的洗涤缓冲液，并将其吸干在干净的纸巾上。不要让孔静置，按照插图中的指示进行下一步。注意：如果在倾析时条带变得松散，则在清洗和在干净的水槽中滗析之前对条带进行编号非常有用。

歧管分配器或自动清洗机

确保有适当的真空供应。检查所有插管或插脚是否正确分配和抽吸。通过抽吸或倾析清空孔。将每个孔填充到插入物中指示的适当体积。*吸出孔。去除缓冲液后，让抽吸装置留在孔中，不要过度抽吸孔。如插入物所示重复此过程，不要让孔在最后一次抽吸后保持干燥。

移液技术：

确保您使用的移液器已校准，并且移液器吸头正确且牢固地固定在移液器上。将移液器设置到所需的体积并用样品或试剂预冲洗。缓慢向上吸取试剂，使移液器缓慢返回向上位置。稍等片刻，让试剂在吸头中达到体积平衡。将试剂缓慢分配到第一次停止，然后轻轻分配到第二次停止。将移液器保持在此位置，直到将其从储液器或孔中取出，以避免将试剂吸回。当您取下移液器时，将吸头向上拉到容器或孔的一侧，以释放可能在吸头外侧的任何液体。

ELISA 故障排除

许多因素会影响 ELISA 的性能。

在开始之前仔细阅读说明。这将有助于避免不必要的错误。
使用良好的实验室规范和校准设备。
使用干净的容器和干净的实验室空间，并在每种试剂之间更换移液器吸头。
重复运行所有标准和样品，因为这将提高准确性。

精度差：

清洗不*：确保仪器工作正常，并且抽吸后孔看起来是干的。
试剂混合不均：确保试剂充分混合。
污染：确保使用干净的容器并在每种试剂之间更换移液器吸头。
移液错误：使用良好的实验室技术并确保正确校准移液器。

标准曲线：

标准品制备不当：确保正确配制标准品并遵守稀释说明。
清洗不*：确保仪器工作正常，并且抽吸后孔看起来是干的。
添加到孔中的体积不等：检查移液器是否已校准以及移液器吸头是否正确就位。
确保从净 OD 中减去空白和 NSB 值。

高背景：

确保正确洗涤板。回顾上面的洗涤技术。
遵守所有孵化时间和温度。高背景可能是由于孵育时间过长或在高于推荐温度的情况下孵育造成的。

漂移

使用前将所有试剂置于室温。
在运行检测之前或按照试剂盒说明书中的指示准备试剂。
避免中断检测设置。

边缘效果

在环境条件下孵育板时，请注意温度变化或通风区域。将印版放在空调或暖气通风口下可能会导致颜色不均匀。

色彩发展

确保所有试剂以正确的体积和正确的时间添加到检测中。坚持正确的孵化时间。
除非试剂盒插页中另有说明，否则在加入终止溶液后立即读取板。
底物是否正确准备和添加

数据缩减

如需有关生成标准曲线的帮助，

IHC 故障排除

无染色

问题		可能的解决方案）
一抗和二抗可能不匹配。		建议二抗针对产生一抗的物种（例如，如果一抗是在小鼠中产生的，则使用抗小鼠二抗）。
该抗体可能不适用于以天然（非变性）形式显示蛋白质的 IHC 程序。		在非变性和变性蛋白质印迹上测试抗体，以确保抗体识别非变性抗原。
二抗未避光保存。		建议避免将二抗暴露在光线下。
没有足够的一抗与目标蛋白质结合。		减少抗体稀释。在 4°C 下孵育更长时间。
感兴趣的蛋白质并不大量存在于组织中。		运行阳性对照。利用放大步骤可以帮助放大信号。使用较低稀释度的一抗。
目标蛋白是核蛋白，抗体不能穿透细胞核。		为了促进细胞核的渗透，在封闭缓冲液和抗体稀释缓冲液中加入透化剂。
脱蜡可能不够		将切片脱蜡时间更长。使用新鲜制备的二甲苯。
福尔马林和多聚甲醛等固定剂可能会改变抗体识别的表位。		使用抗原修复方法揭露表位。修复时间更短。
PBS 缓冲液可能被细菌污染，这些细菌已经破坏了目标蛋白质。		在 PBS 抗体储存缓冲液中使用防腐剂，如 0.01% 叠氮化物。使用新鲜的无菌 PBS。

高背景

问题		可能的解决方案）
非特异性结合的阻断可能是不够的。		将切片的封闭潜伏期延长至 30 分钟，将细胞培养延长至 1 小时。使用封闭剂，例如 10% 正常血清用于切片，1-5% BSA 用于细胞培养。
一抗浓度可能太高。		将抗体滴定至更佳浓度，使用更多稀释液孵育更长时间。这将提供更慢但更具体的绑定。
二抗可能非特异性结合。		在没有一抗的情况下运行二级对照。
孵化温度可能太高。		在 4°C 下孵育组织切片或细胞。
组织未充分洗涤。		在所有步骤之间用 PBS *清洗
内源性过氧化物酶是有活性的。		使用酶抑制剂，如碱性磷酸酶的左旋咪唑 (2 mM) 或过氧化物酶的 H2O2 (0.3% v/v)。
福尔马林和多聚甲醛等固定剂太强，可能已经改变了抗体识别的表位。		改变抗原修复方法。减少抗原暴露溶液的孵育时间。
应用了过多的基材。		减少底物孵育时间。
色原与细胞中存在的 PBS 发生反应。		在与底物一起孵育之前，使用 Tris 缓冲液清洗切片。
透化已经损坏了膜并去除了膜蛋白。		从缓冲液中去除通透剂。

非特异性染色

问题		可能的解决方案）
一抗或二抗的浓度可能太高。尝试降低抗体浓度和/或潜伏期。		将信号强度与不表达目标的细胞进行比较。
一抗是针对与染色组织相同的物种产生的（例如在大鼠组织上测试的大鼠一抗）。		当应用二抗时，它会与所有组织结合，因为它也是针对该物种产生的。使用针对与您的组织不同的物种产生的一抗/二抗。
内源性过氧化物酶是有活性的。		使用酶抑制剂，如碱性磷酸酶的左旋咪唑 (2 mM) 或过氧化物酶的 H2O2 (0.3% v/v)。
切片/细胞已变干。		将组织切片和细胞保持在高湿度下，不要让它们变干。

ESI BIO VascuNet故障排除指南

发表于2024年7月14日由上海金畔生物科技有限公司

ESI BIO的使命是成为客户信赖的合作伙伴，将科学发现转化为诊所。我们通过提供突破性的干细胞技术作为研究级和治疗级产品来实现这一目标，从研究到诊所的照明，以帮助我们的客户实现他们治疗疾病的目标。

ESI BIO建立在丰富的创新和科学的基础之上。我们于2000年在新加坡成立了ES Cell International，在那里我们通过制造个可翻译的临床级胚胎干细胞系来创建历史，以便分发给研究界。

ESIBIO现在开展业务Alameda CA. 我们是BioTime，Inc。拥有的以干细胞为基础的子公司的骄傲家族的成员，我们从中受益于的科学，知识产权和干细胞技术的深层来源。

ESI BIO EM2202 VascuNet™故障排除指南

VascuNet™ Pericyte Co-Culture Assay

VascuNet™Pericyte Co-Culture Assay将HUVEC和周细胞结合在一个96孔板测定形式的共培养系统中。组分包括细胞，阴性对照，生长和含有补充剂的测定培养基。

SKU： EM2202

更临床相关的共培养测定

VascuNet™Pericyte Co-Culture Assay是一种新型血管生成模型，包括HUVEC和周细胞（PC-Ms），用于研究药物和治疗化合物对96孔板血管形成的影响。PC-M细胞源自使用ESI-017人胚胎干细胞系的专有分化方法。细胞和培养基成分经过严格的质量筛选，以确保重现性。网络维持长达四到六天，允许更广泛和临床相关的模型系统，用于研究化合物对管形成的影响。

特征

· VascuNet管网比其他系统更接近体内血管

· 允许对已建立的血管上的促血管生成化合物和抗血管生成化合物进行长期体外分析

· 周细胞是hESC衍生的，确保易于扩增和可重复的结果

由BioTime，Inc。的子公司ReCyte Therapeutics Inc开发

格式	96孔板
样本类型	小分子，重组蛋白，DNA / RNA构建体或条件培养基
分析时间	管网维持至少4天。
储存和稳定性	根据指示储存，所有套件组件在收到之日起至少可保存3个月。
组件	有关套件组件的完整列表，请下载EM-2202技术数据表
应用	筛选和评估促血管生成化合物或抗血管生成化合物
技术文件	产品支持 VascuNet™Pericyte共培养分析方案 VascuNet™故障排除指南 EM-2202技术数据表小册子 VascuNet™Pericyte共培养分析产品说明书
参考	Gerhardt，H。和Betsholtz，C。（2003）血管生成中的内皮 – 周细胞相互作用。Cell Tissue Res 314：15-23。汉密尔顿，NB，等。（2010）Pericyte介导的毛细血管直径调节：健康和疾病中神经的血管耦合的一个组成部分。Front Neuroenergetics 2：5。Stratman ，AN，et al。（2009）血管生成管组装期间的周细胞募集刺激内皮基底膜基质形成。血液114：5091-5101。 von Tell，D.，et al。（2006）周细胞和血管稳定性。Exp Cell Res 312：623-629。

ESI BIO产品目录：

货号	品名	规格	品牌
GS310	HyStem® Hydrogel Kit	2.5 mL	ESIBIO
GS311	HyStem® Hydrogel Kit	7.5 mL	ESIBIO
GS1004	HyStem® Hydrogel Kit	12.5 mL	ESIBIO
GS310P	HyStem® Hydrogel Kit w/ PEGSSDA	2.5 mL	ESIBIO
GS311P	HyStem® Hydrogel Kit w/ PEGSSDA	7.5 mL	ESIBIO
GS312	HyStem®-C Hydrogel Kit	2.5 mL	ESIBIO
GS313	HyStem®-C Hydrogel Kit	7.5 mL	ESIBIO
GS1005	HyStem®-C Hydrogel Kit	12.5 mL	ESIBIO
GS312P	HyStem®-C Hydrogel Kit w/ PEGSSDA	2.5 mL	ESIBIO
GS313P	HyStem®-C Hydrogel Kit w/ PEGSSDA	7.5 mL	ESIBIO
GS314	HyStem®-HP Hydrogel Kit	2.5 mL	ESIBIO
GS315	HyStem®-HP Hydrogel Kit	7.5 mL	ESIBIO
GS1006	HyStem®-HP Hydrogel Kit	12.5 mL	ESIBIO
GS314P	HyStem®-HP Hydrogel Kit w/ PEGSSDA	2.5 mL	ESIBIO
GS315P	HyStem®-HP Hydrogel Kit w/ PEGSSDA	7.5 mL	ESIBIO
GS1007	HyStem® Hydrogel UV QuickSet Kit	2.5 mL	ESIBIO
GS1008	HyStem® Hydrogel UV QuickSet Kit	7.5 mL	ESIBIO
GS450	PEGgel Kit	1 mL	ESIBIO
GS240	DG Water	10 mL	ESIBIO
GS241	DG Water	20 mL	ESIBIO
GS3007	Extralink® Vial	0.5 mL	ESIBIO
GS3006	Extralink® Vial	2.5 mL	ESIBIO
GS3009	Extralink® Lite Vial	0.5 mL	ESIBIO
GS3008	Extralink® Lite Vial	2.5 mL	ESIBIO
5050	Fibronectin	1 mg	ESIBIO
GS231	Gelin-S® Thiol-modified Gelatin	1 mL	ESIBIO
GS230	Gelin-S® Thiol-modified Gelatin	5 mL	ESIBIO
GS222	Glycosil® Hyaluronic Acid	1 mL	ESIBIO
GS220	Glycosil® Hyaluronic Acid	5 mL	ESIBIO
GS217	Heprasil® Hyaluronic Acid	1 mL	ESIBIO
GS215	Heprasil® Hyaluronic Acid	5 mL	ESIBIO
5010-D	Nutragen® Bovine Collagen	50 mL	ESIBIO
GS711	PEGDA	1 mL	ESIBIO
GS700	PEGDA	1 g	ESIBIO
GS705	PEGDA	5 g	ESIBIO
GS755	PEGSSDA	0.5 mL	ESIBIO
5020	PEPTITE-2000® RGD Peptide	5 mg	ESIBIO
5005-B	PureCol® Collagen	100 mL	ESIBIO
5007-A	VitroCol® Collagen	20 mL	ESIBIO
5051	Vitronectin	0.1 mg	ESIBIO
EM2203	ExoSense™ CD63 Exosome ELISA Kit	96 assays	ESIBIO
EM2202	VascuNet™ CoCulture Assay Kit	1 Kit	ESIBIO
ST11006	BioLiteTM SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11008	BioLiteTM TRA-1-81 (DyLight 488) anti-Human Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11023	Nestin anti-Human Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11003	Oct4 anti-Human/Mouse Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11001	Sox2 anti-Human/Mouse Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11013	SSEA-1 anti-Human/Mouse Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11014	SSEA-3 anti-Human/Mouse Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11015	SSEA-4 anti-Human Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11018	TRA-1-60 (PE) anti-Human Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11016	TRA-1-60 anti-Human Antibody	100 µL	ESIBIO
ST11017	TRA-1-81 anti-Human Antibody	100 µL	ESIBIO
ST12007	LIF, Mouse Recombinant	10 µg	ESIBIO
ST12008	LIF, Mouse Recombinant	100 µg	ESIBIO
ES-84	PureStem® 4D20.8, NCr-fac Progenitor	ea	ESIBIO
ES-98	PureStem® E15, Meso-prx/latp Progenitor	ea	ESIBIO
ES-283	PureStem® 7PEND24, NCr-fac Progenitor	ea	ESIBIO
ES-278	PureStem® 7SMOO32, NCr-fac Progenitor	ea	ESIBIO
ES-250	PureStem® SK11, NCr-fac Progenitor	ea	ESIBIO
ES-268	PureStem® MEL2, NCr-fac Progenitor	ea	ESIBIO
ES-256	PureStem® SM30, NCr-fac Progenitor	ea	ESIBIO
ES-335	PureStem® ES-335 Meso-latp Progenitor	ea	ESIBIO
ES-100	PureStem® E72 BETATROPHIN+ Progenitor	ea	ESIBIO
ES-1001	PureStem® ES-1001 GDF11+ Progenitor	ea	ESIBIO
ES-184	PureStem® EN7 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-101	PureStem® ES-101 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-139	PureStem® ES-139 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-154	PureStem® ES-154 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-198	PureStem® ES-198 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-199	PureStem® ES-199 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-209	PureStem® ES-209, Meso-prx/latp Progenitor	ea	ESIBIO
ES-210	PureStem® ES-210, Ecto-ntu Progenitor	ea	ESIBIO
ES-236	PureStem® ES-236 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-170	PureStem® E44 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-196	PureStem® W10 Progenitor	ea	ESIBIO
ES-194	PureStem® Z11, Meso Progenitor	ea	ESIBIO
EM-1001	PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k01	500 mL	ESIBIO
EM-1002	PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k02	500 mL	ESIBIO
EM-1003	PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k03	500 mL	ESIBIO
EM-1004	PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k04	500 mL	ESIBIO
EM-1005	PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k05	500 mL	ESIBIO
EM-1006	PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k06	500 mL	ESIBIO
EM-1007	PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k07	500 mL	ESIBIO
EM-1008	PureStem® Progenitor Growth Media, EPM k08	500 mL	ESIBIO
EM-2002	HyStem®-4D Chondrogenesis Differentiation Kit	1 Kit	ESIBIO
EM-2007	HyStem®-4D Differentiation Kit	1 Kit	ESIBIO
EM-2001	PureStem® Chondrogenesis Differentiation Kit	1 Kit	ESIBIO
EM-2006	PureStem® Choroid Plexus Differentiation Kit	1 Kit	ESIBIO
EM-2003	PureStem® Osteogenesis Differentiation Kit 01	1 Kit	ESIBIO
EM-2004	PureStem® Osteogenesis Differentiation Kit 02	1 Kit	ESIBIO
ST10035	LY411575	5 mg	ESIBIO
ST10008	PD0325901	2 mg	ESIBIO
ST10009	PD0325901	10 mg	ESIBIO
ST10010	PD0325901	415 µL, 10 mM	ESIBIO
ST10034	PD173074	2 mg	ESIBIO
ST10021	RepSox	5 mg	ESIBIO
ST10027	RG108	5 mg	ESIBIO
ST10024	SB203580	2 mg	ESIBIO
ST10012	SB431542	5 mg	ESIBIO
ST10013	SB431542	10 mg	ESIBIO
ST10014	SB431542	1.3 mL, 10 mM	ESIBIO
ST10025	SP600125	5 mg	ESIBIO
ST10015	Thiazovivin	2 mg	ESIBIO
ST10017	XAV939	2 mg	ESIBIO
ST10018	Y27632	2 mg	ESIBIO
ST10019	Y27632	10 mg	ESIBIO
ST10020	Y27632	625 µL, 10 mM	ESIBIO

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1：强大的进口辐射能力，血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2：产品种类齐全，经营超过700多品牌，基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3：提供加急服务，货品一般1-2周到货。

4：富有竞争力的价格优势，绝大部分价格有优势。

5：多年积累良好的信誉，大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、国药、fisher等知药企。

6：我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7：我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发，欢迎合作。

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一般实验室技术

多通道移液器或喷瓶

歧管分配器或自动清洗机

精度差：

标准曲线：

高背景：

漂移

边缘效果

色彩发展

ESI BIO VascuNet故障排除指南

VascuNet™ Pericyte Co-Culture Assay