操作方法

一、样品预处理：

1、离心机在使用前先于 4℃预冷 10 min；

2、取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于 2-8℃条件下进行解冻待完全融化后置于冰上待用；如果是新鲜样品，置于冰上待用；

3、将样品按照 500 μL /管进行分装，不足部分用 1×PBS补足至500μL（单管处理体积）。

二、去除杂蛋白

1、取出Solution P1 放冰箱预冷10min ，置于冰上预冷；

2、在 500 μL 血液样品中 加入400μL 预冷的 Solution P1，立即将离心管盖紧，通过涡旋振荡器充分混匀 30s;

3、将混匀后的样品于 4℃以 12000 rpm 离心 20 min，杂蛋白沉淀后，取上清液转移至新的1.5mL离心管中；

三、外泌体提取

1、在上清液中加入 120 μL 的 Solution P2，离心管盖紧，通过涡旋振荡器充分混匀 2 min；再放置于室温下静置 5 min；

2、将装有混合液的离心管于 4℃以 12000 rpm 离心 15 min，弃上清；

3、重复步骤2（注：尽可能吸净上清液），并将 1.5 mL 离心管于室温下敞口静置 10 min；

4、取 200 μL 的 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中；

5、将含有重悬液的 1.5 mL离心管于 4℃以 12000 rpm 离心 5 min，保留上清液，该上清液中富含外泌体颗粒；（注：此时可能有较多沉淀，为正常现象）

四、纯化外泌体

1、将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Column（纯化柱）上室中，于 4℃以 5600 rpm 离心 20 min，离心后收集纯化柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒；（注：纯化柱不可重复使用）。

2、纯化后的外泌体以50-100 μL 进行分装保存于-80℃低温冰箱中，以备后继实验使用。

五、外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

HB230210

Q:  41216和41206有什么区别？

A:  41206是旧版，41216是新版。新版多加了除杂蛋白的试剂solution P2，除杂蛋白的效果会好很多。结果上来说，同样的样品新版提取的蛋白浓度会低一些，但是纯度会高一些。老客户一直在用41206就继续推荐41206，新客户推荐41216。两款试剂盒都是共沉淀法，做蛋白质组学推荐41216新款试剂盒。新款试剂盒对杂蛋白的效果更好，对下游实验的影响也小。

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构，存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。该血清/血浆外泌体快速提取纯化试剂盒，组分经过优化处理，适用于血清/血浆中的外泌体提取，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒。本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

收到产品后将试剂分开储存，使用前请充分混匀。

Solution P1：室温运输，打开试剂盒后储存于-25~-15℃条件下（常规冰箱冷冻层）；

Solution P2：室温保存；

Exosome Purification Column：室温保存。 

注意事项

1、使用前请将外泌体抽提试剂（41216-A）充分混匀。

2、产品只针对血清/血浆样本，不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，

请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅作科研用途！