SphereOTM技术说明

SphereOTM技术说明STN-21

SPHEROTM Technical Note STN-21 Rev A 050520

SPHEROTM STREPTAVIDIN PARTICLES USES AND PROTOCOLS

SPHEROTM链霉亲和素颗粒的用途和协议

链霉亲和素
链霉亲和素是一种蛋白质(分子量约66000),由四个相同的亚单位组成,每个亚单位都含有生物素的高亲和力结合位点(KD=10-15)
M) 。它与抗生物素蛋白具有相同的生物素结合特性,但观察到的非特异性结合较少。它已被用于免疫分析和基因组分析
用于目标检测的分析。
道德原则
Spherotech链霉亲和素珠表面设计为简单有效方法的基质,例如:
•用于分离生物素化化合物(如蛋白质、免疫球蛋白、糖、凝集素或DNA/RNA和microRNA)的蛋白质包覆珠
•磁性链霉亲和素包衣珠可用作免疫分析和基因组分析的基质
•荧光标记的链霉亲和素小颗粒可用作检测探针。

使用说明
Spherotech链霉亲和素颗粒的制备
使用前应清洗颗粒,以去除0.02%的NaN3
作为防腐剂添加的。通过使用
较大颗粒的离心。
1.轻轻摇动小瓶,以获得均匀的悬浮液。
2.向管中添加适量的颗粒(见下文“结合能力”一节)。
3.将试管置于1.5K的离心机中20分钟。
4.用移液管抽吸上清液。避免用移液管端接触颗粒颗粒。
5.添加推荐的缓冲区。使用与上述步骤2中相同的体积,然后轻轻地重新使用(不要使珠子产生漩涡)。
6.重复步骤3至5,最后一次清洗后,添加适当体积的推荐缓冲液,以获得适当的工作温度
颗粒浓度。

用于RNA操作的Spherotech链霉亲和素颗粒的制备。
注:Spherotech链霉亲和素不以无核糖核酸酶溶液提供。
1.向溶液a和溶液B中添加DEPC至0.1%(1ml/L)的最终浓度(见下文缓冲液和溶液部分)。
2.用力摇晃。
3.在室温下培养1小时,并对溶液进行高压灭菌。
4.用相同体积的溶液A冲洗颗粒两次,持续1-3分钟。
5.用相同体积的溶液B清洗颗粒一次。
6.将颗粒重新悬浮在溶液B中。
生物素化程序
生物素化核酸、蛋白质和肽很容易与Spherotech链霉亲和素磁性颗粒结合,用于分离实验。遵循
在结合过程中,由于Spherotech磁粉的*磁性,生物素化产物易于操作。这个
当粒子置于磁场中时,其磁性能简化实验过程中的操作,如更换缓冲液。
生物素/链霉亲和素连接系统(KD=10-15 M)的结合导致隔离的*非共价相互作用。
笔记:
•所有生物素试剂应包含一个间隔臂,长度至少为6个C原子,以减少空间位阻。
•样品中的游离生物素会降低Spherotech链霉亲和素颗粒的结合能力。一种可一次性使用的装有液体的柱
Sephadex®将从样品中去除未结合的生物素。
•生物素化寡核苷酸应通过反相高效液相色谱法纯化,以获得最佳结合效率。
•建议在寡核苷酸引物的5′端进行特异性生物素化,以保持3′端游离延伸。

寡核苷酸引物的生物素化。
a) 生物素化寡核苷酸可从寡核苷酸合成公司购买。
b) 合成反应中的生物素磷酰胺允许生物素在5'-端发生,对标记的寡核苷酸的特异性或熔化温度没有影响。
c) 通过化学掺入5'-或3'-氨基修饰的寡核苷酸进行生物素化,将导致生物素酯的所有伯胺基团
寡核苷酸。建议在DNA合成过程中直接将低聚物的5'端或3'端加入生物素。
2.生物素化引物的纯化。
a) 生物素化寡核苷酸最好通过反相HPLC从未结合的生物素中纯化,这一点非常重要,因为游离生物素
将占据珠子上的结合位点,并降低生物素化PCR产物的结合能力。这一净化步骤也确保了全长
标记水平接近100%的脱氧核苷酸。
b) 生物素化寡核苷酸的HPLC纯化是将全长生物素化寡核苷酸装载到链霉亲和素包衣珠上所必需的。
NAP柱纯化的寡核苷酸影响装载过程。
3.已合成寡核苷酸的生物素化。
Photobiotin®标记系统可将生物素引入已合成的低聚物中。生物素随机并入寡核苷酸中。
4.较大DNA的片段的生物素化。
a) 建议在使用生物素磷酰胺进行DNA合成期间,在低聚物的5'端直接加入生物素。a)使用带有生物素化引物的PCR进行末端标记。
b) 酶法结合生物素dUTP标签。生物素dUTP标签可通过使用Klenow DNA聚合酶、缺口翻译或混合引物标记的末端标记,以酶法并入双链DNA的片段。
c) 光生物素化。生物素的光活化形式可以在紫外光下随机并入DNA的片段。
5.使用可切割试剂进行生物素化。
a) 生物素dUTP类似物与可切割连接物的酶结合。生物素与含有二硫化物的连接臂的结合
该键允许DNA的片段的简单解离,因为二硫键很容易被二硫苏糖醇(DTT)切割。这种试剂
通过末端标记、缺口翻译或混合引物标记将酶结合到DNA的片段中。建议使用生物素-21 SS dUTP。
b) NHS生物素鸟苷类似物的化学掺入。亚氨基生物素的掺入允许结合核酸的解离
pH值发生简单变化的酸片段。链霉亲和素/亚胺生物素复合物在pH 4.0下解离。在pH值为9.5或更高时,亚胺生物素将与Spherotech链霉亲和素颗粒紧密结合。释放的亚胺生物素可重新固定在Spherotech链霉亲和素颗粒上。

​T-Store技术信息

Life Science Production (LSP) 是英国的优质定制生物和体外产品供应商之一。

T-Store技术信息
概述
T-STORE®是一种无菌、化学定义和优化的培养基,旨在提供稳定的
哺乳动物组织样本和细胞的储存和运输环境。该产品旨在保持组织样本的完整性,从而减少坏死和凋亡。
T-STORE®采用坚固的缓冲系统,可在较宽的温度范围(+2°C至+37°C)内使用。此外,它被设计为与人血清和间质液等渗、等渗和等离子,创造一个适合在需要时将孤立的组织和细胞维持数小时或数天的稳态环境。
使用T-STORE®的优势•
T-STORE®是一种“即用”运输和储存介质,适合收集多种细胞和组织。•
T-STORE®为时间要求很高的流程提供了灵活性。•
T-STORE®可在亚常温(非冷冻)和/或常温下使用。•
T-STORE®在+2°C至+37°C的温度范围内提供稳定的pH缓冲,pH值为7.20至7.45。

•T-STORE®可在有氧或厌氧条件下使用。
•T-STORE®不含氙气,即不含血清和动物/人类蛋白质。
•内毒素水平符合欧盟标准(≤ 1.0 EU/mL)T-STORE®不含溶剂,即不含二甲基亚砜。

应用
分析前组织样品的储存和运输分离/分离或富集后细胞的储存,再进一步分析组织
T-STORE®模拟间质液的基本成分,这意味着在储存和运输过程中,组织的酸碱(pH)平衡得以维持,使组织在取出后能成功使用长达72小时。存储在T-STORE®中可使组织样本保留遗传和组织学特征长达72小时。
虽然其他组织保存解决方案是“组织特异性”的,但T-STORE®可用于各种类型的正常和恶性组织,是储存和运输“新鲜”样本进行进一步处理的理想选择。

 

T-STORE®提供了一种理想的液体成分,可在体外保持人体细胞的酸碱平衡和完整性。这种配方的*特性有助于线粒体代谢生成三磷酸腺苷(ATP)。
T-STORE®适用于多种干细胞和外周血细胞类型,无需添加破坏性化合物,可在“冷”(低温)、亚常温(+15°C至+25°C)和常温下使用。该产品还可能用于细胞培养生物反应器。

使用T-STORE®
T-STORE®组织样本的采购是为了使用neat,无需进一步稀释。还有其他抗生素制剂,包括两性霉素和氯霉素、两性霉素和纳米霉素。作为制造商,我们还可以提供T-STORE®
根据客户的规格定制添加剂。请看桌子
2.产品演示。
切除后,组织样本应立即*浸入T-STORE中。T-STORE®所需的容量应由用户确定,因为样品和下游应用的大小可能会影响需求。作为进一步优化的起点,我们建议
使用无顶空的无菌防漏容器,在T-STORE®中*浸没。建议使用过量的T-STORE®与组织重量/大小比,以确保成功储存。
使用T-STORE®在环境温度下储存电池
储存前,细胞系应在推荐的条件下培养。
1.分离生长活跃的贴壁细胞或直接收获悬浮细胞,计算细胞数量和存活率。
2.在室温下,将颗粒细胞置于180 x g条件下5分钟,并丢弃上清液。将颗粒重新悬浮在3 mL T-STORE®中,并像之前一样重新添加颗粒。丢弃上清液。
3.将细胞颗粒重新悬浮在2mL T-STORE中,并转移至2mL冷冻管(或等效物)。
4.试管在室温下可在黑暗中储存72小时。坚固的细胞类型可储存96小时。
5.为了恢复细胞,在转移到包含完整生长培养基的适当容器中之前,轻轻地重新悬浮细胞(恢复前无需移除T-STORE®)。在最佳条件下培养细胞(例如加湿,37℃下5%CO2培养箱)。
6.细胞应在48小时内*恢复。



Product Code Product Description
Pack Size
T-STORE-X
T-STORE® Tissue Storage and Transportation Medium
50mL, 125mL,
500mL, 1 L
T-STORE-B-AA T-STORE® Tissue Storage and Transportation Medium
with Antibiotic (Amphotericin B and Chloramphenicol)
100mL
T-STORE-B-AN T-STORE® Tissue Storage and Transportation Medium
with Antibiotic (Amphotericin B and Nanomycopulitin)
100mL
T-STORE-X-CUS T-STORE® Tissue Storage and Transportation Medium
Available on request

TriLink L-7606安全技术表

TriLink L-7606安全技术表

产品名称: CleanCap™Cas9 mRNA

CleanCap™CRISPR 相关蛋白 9 mRNA

产品编号: L-7606

CAS 登记号: 不适用。

 

1.1 用途

推荐用途: 实验室化学品,物质生产。不建议使用: 无可用信息

1. 物理和化学特性

1.1 基本理化性质信息

物理状态: 液体

外观: 无色

气味: 轻度

pH: 参见trilinkbiotech.com具体信息。熔点/凝固点: 无可用信息

沸点/沸程: 没有可用的闪点信息: 无可用信息

蒸发率: 没有可燃性信息(固体、气体): 无可用信息

易燃性上限/下限:

无可用信息

 

蒸汽压: 无可用信息

蒸汽密度: 无可用信息

相对密度: 无可用信息

比密度: 无可用信息

水溶性: 没有可用的分配系数信息: 自燃温度:无可用信息分解温度:无可用信息粘度: 无可用信息

氧化特性: 无可用信息

2. 稳定性和反应性

  • 反应性

无可用信息。

2.2 化学稳定性

在正常条件下稳定。

2.3 危险反应的可能性

可与氧化剂发生快速反应,有爆炸危险。

2.4应避免的条件

不相容材料。火源。加热。

2.5 不相容材料

强氧化剂。

2.6 有害分解产物

热分解可导致释放刺激性和毒性气体和蒸汽。一氧化碳。二氧化碳 (CO2)。

3. 毒理学信息

  • 可能的暴露途径信息
  •  
  • 吸入 避免吸入蒸汽或雾气。可能引起呼吸道刺激。

眼睛接触 发红。可能引起轻微刺激。

皮肤接触 长期接触可能引金畔红和刺激。反复暴露可能导致皮肤干燥或开裂。

摄入 可能引起困倦或头晕。摄入引起上消化道和呼吸道烧伤。症状包括烧灼感、咳嗽、喘息、呼吸急促、头痛、恶心和呕吐。

 

3.2 毒理学效应信息

症状 无可用信息。

 

3.3 短期和长期暴露的延迟和即刻效应以及慢性效应

皮肤腐蚀/刺激: 轻度严重眼损伤/眼 轻度刺激:

皮肤或呼吸道致敏:无可用的生殖细胞致突变性信息: 无可用信息致癌性: 无可用生殖毒性信息: 无可用信息发育毒性: 无可用信息致畸性: 无可用 STOT– 单次暴露信息: 无可用信息 STOT– 重复暴露:无可用信息

靶器官: 肾脏、眼睛、皮肤、呼吸系统

慢性毒性: 无可用信息

亚慢性毒性: 无可用的神经系统影响信息: 没有可用的吸入危害信息: 无可用信息其他不良反应: 无可用信息

 

INCYTO C-WellTM技术指南

上海金畔生物INCYTO C-WellTM技术指南

使用INCYTO C-WellTM的通用、高通量和大小可控的细胞球体培养方案

一般信息

本指南的目的:

C-WellTM技术指南包含有关C-WellTM细胞球体培养平台的信息。本指南提供了球体形成和试剂制备的完整方案。

储存和有效期:

室温下储存时,C-WellTM的有效期为36个月。

不要重复使用,否则会遇到以下问题:污染、细胞球体形成失败和富含蛋白质的表面。

请勿将C-WellTM储存在紫外线辐射环境中。

预期用途:

仅供研究使用。不适用于人类或动物的诊断或治疗用途。

 

C孔描述TM

C-WellTM:

C-WellTM是一个革命性的细胞球体培养平台,以高通量的方式生成各种类型的尺寸控制的细胞球体。使用培养细胞球体的技术是一种悬滴法。

每个悬滴中的环境聚集细胞,然后形成单个球体。但悬滴法有几个局限性。悬滴法的主要局限性是:“劳动强度”、“低通量”、“培养时间相对较短”、“无法获得额外的新鲜生长培养基”和“细胞球体大小不均匀”。

与悬滴法相比,C-WellTM具有以下优势

任何其他商业化球体培养平台:“由于易于获得培养基更换,延长培养期10-30天”、“通过控制细胞接种密度,某些应用的培养期极短,为2-3天”、“无直接细胞-细胞接触的共培养准备系统,例如Transwell小室”、“生成尺寸受控的细胞球体”、“由于无剪切应力结构,易于改变装置中的生长培养基”、“适用于各种细胞类型”和“无限通量(一个装置可获得361个细胞球体)”。

 

方法

使用C孔制备用于细胞球体培养的试剂和材料TM

  • 靶细胞生长培养基
  • 胰蛋白酶/EDTA或ACCUTASETM
  • 台盼蓝
  • 磷酸盐缓冲液(PBS)1X
  • 70%乙醇
  • 100%乙醇
  • 去离子水(DDW),可选
  • 牛血清白蛋白(BSA)4%溶液,可选

使用C孔制备细胞球体培养设备TM

  • C-WellTM
  • 锥形管(15 mL或50 mL)
  • T75烧瓶或细胞培养皿
  • 细胞过滤器(100 μm孔径)
  • 皮氏培养皿(60 mm或100 mm,未处理)
  • 血细胞计数器(例如DHC-N01、INCYTO)
  • 移液器和吸头(1 mL和200 μL)
  • 血清移液器及吸头(10 mL)
  • 洁净工作台
  • CO2培养箱
  • 相差显微镜检查
  • 吸引器
  • 离心机
  • 酒精灯

A. C孔预处理TM 细胞接种前

  1. 将生长培养基、1X PBS(或DDW)和100%乙醇加热至室温。

生长培养基的推荐近似体积为14 mL/1器械,1X PBS为24 mL/1器械,100%乙醇为8 mL/1器械。

  1. 在超净工作台中拆除C-WellTM的包装。
  2. 使用无菌镊子,从一个外缘朝向另一个外缘将C-WellTM置于60 mm培养皿上,以防止C-WellTM和培养皿之间产生气泡。
  3. 向制备的平皿中加入8 mL 100%乙醇。
  4. 用1 mL移液器反复移液,轻轻去除微孔中的气泡。
  5. 在培养皿一角抽吸100%乙醇。请勿在每个微孔中抽吸溶液。
  6. 向培养皿中加入8 mL 1X PBS,再次去除气泡。
  7. 在培养皿一角抽吸1X PBS。请勿在每个微孔中抽吸溶液。
  8. 重复上述7、8步两次。
  9. 向培养皿中加入7 mL生长培养基,并充分去除气泡。
  10. 将培养皿置于培养箱中至少24小时。
  11. 用1 mL移液器反复移液,轻轻去除微孔中的气泡。
  12. 在培养皿一角吸出生长培养基,并在细胞接种前加入7 mL新鲜生长培养基。

B-1.靶细胞单细胞悬液的制备(贴壁细胞用)

  1. 将生长培养基和适当浓度的胰蛋白酶/EDTA溶液预热至37 ℃。
  2. 加入10 mL 1X PBS,轻轻清洗细胞培养瓶(T75)或培养皿(100 mm)。
  3. 吸取1X PBS溶液。
  4. 加入2 mL胰蛋白酶/EDTA溶液,并将烧瓶置于37℃CO2培养箱中1 ~ 2 min(取决于细胞类型)。
  5. 轻轻敲击烧瓶,观察细胞。大部分细胞应分离
  6. 用4 mL生长培养基或适当的中和溶液中和胰蛋白酶/EDTA处理的细胞悬液。
  7. 通过反复移液*分离细胞。
  8. 用血细胞计数器计数细胞数量(例如INCYTO C-Chip、DHC-N01)
  9. 在适当离心力下离心细胞悬液。
  10. 通过抽吸去除上清液。
  11. 将细胞团块重悬于生长培养基中。细胞悬液的终接种密度和终体积应分别为0.1 ~ 0.5 × 106个/mL和7 mL。这些值因细胞类型而异。

 

B-2.靶细胞单细胞悬液的制备(用于悬浮细胞)

  1. 将生长培养基和适当浓度的胰蛋白酶/EDTA溶液(可选)加热至37 ℃。
  2. 通过反复移液使细胞悬液均质化并解聚。
  3. 用血细胞计数器计数细胞数量(例如INCYTO C-Chip、DHC-N01)
  4. 在适当离心力下离心细胞悬液。
  5. 通过抽吸去除上清液。
  6. (可选)加入1 ~ 2 mL胰蛋白酶/EDTA溶液,置于37 °C CO2培养箱中1 ~ 2 min(细胞类型不同)。
  7. (可选)用2 ~ 4 mL生长培养基或适当的中和溶液中和胰蛋白酶/EDTA处理的细胞悬液(因细胞类型而异)。
  8. (可选)在适当离心力下离心细胞悬液。
  9. (可选)通过抽吸去除上清液。
  10. 将细胞团块重悬于生长培养基中。细胞悬液的终接种密度和终体积应分别为0.1 ~ 0.5 × 106个/mL和7 mL。这些值因细胞类型而异。

 

  1. 使用C-Well形成细胞球体TM
    1. 将生长培养基加热至37 ℃。
    2. 用1 mL移液器反复移液,轻轻去除微孔中的气泡。
    3. 吸出培养皿一角的生长培养基,加入7 mL细胞接种密度为0.1 ~ 0.5 × 106个/mL的细胞悬液
    4. 10 ~ 15 min后(因细胞类型而异),轻轻吸出细胞悬液,除去上清液细胞。
    5. 在培养皿一角加入7 mL生长培养基。
    6. 吸出混悬液,并在培养皿一角加入7 mL生长培养基。重复该步骤两次。确保该步骤结束时没有悬浮细胞是非常重要的。如果不是,这些悬浮细胞可能阻碍细胞球体的形成。
    7. 培养皿置37 °C CO2培养箱中孵育24小时。
    8. 每24小时更换一次培养皿中的生长培养基。
 
 

图1 MCF7球体的培养条件。细胞接种密度和清洗时间因细胞类型而异。应通过预实验确定适当的接种密度和洗涤时间。


 

 

图2 MCF7球体的形成。

 

 

 

图3 A549球体的形成。

 

 

图4 HepG2球体的形成。

 

 

图5小鼠神经干细胞(mNSC)球体的形成。与其他传统的球体培养方法相比,C-WellTM可以生成尺寸控制、形状均匀的细胞球体。

  1. 从C孔中分离细胞球体TM
    1. 将生长培养基加热至37 ℃。
    2. 用移液器直接吸取(带1 mL吸头)生长培养基至C-WellTM上。
    3. 重复上述步骤2,直至收集到大部分细胞球体。
    4. 轻轻移取细胞球体溶液。
    5. 将溶液添加到细胞过滤器的一个表面(顶部)。
    6. 翻转滤网,并将生长培养基添加到滤网的另一面(底部)。
    7. 将细胞球体铺板于未经处理的培养皿中。

Abraxis磁珠技术信息

Abraxis磁珠技术信息

Abraxis磁珠是超顺磁性的,不聚集氧化铁颗粒(或“微球”)样品准备,或捕获/净化目标,如蛋白质,抗体,dna/rna,和。 大肠杆菌。Abramag的设计在手动和自动化生物医学和研究应用中都具有更快的结合动力学,具有很高的灵敏度和选择性。

与常规方法(柱法、离心法)相比,具有多种优点。

 

的表现-我们设计他们来匹配或超过竞争对手。

 

优越的容量和产量-高结合能力的快速和有效的目标纯化。

 

优良的纯度稳定,预堵塞珠提供清洁的净化,即使从复杂的样品.

 

可定制-自定义珠和耦合服务提供

 

 

磁珠

 

 

 

用于捕获或纯化诸如蛋白质,抗原,抗体,DNA / RNA(直接或通过ChIP,RIP或CLIP),细胞等靶标的超顺磁性颗粒(或“微球体”)

 

AbraMag ®磁珠超顺磁性,非聚集的铁氧化物颗粒(或“微球”),用于样品制备,或用于捕获/纯化(SPRI ™:固相可逆固定)靶例如蛋白质,抗体, DNA / RNA(直接,或通过ChIP,RIP或CLIP),外泌体和大肠杆菌。AbraMag的设计可在手动和自动生物医学和研究应用中实现更快的结合动力学,高灵敏度和选择性。

 

比主要竞争对手更高的产量,纯度,质量和价值。

 

● 多重优势 – 超过传统方法(色谱柱,离心)。

● 的性能 – 我们设计它们以匹配或超越竞争对手。

● 的容量和产量 – 高结合能力,可快速有效地进行目标纯化。

● 的纯度 – 稳定的预先封闭的颗粒即使是复杂的样品也能提供清洁的净化。

● 可定制 – 提供定制珠子和连接服务。

 

磁选机

反-E。大肠杆菌磁珠(IMS)

即用型磁珠,25 mg / ml(2.5%)

具有游离胺或羧基的磁性颗粒,可使用简单的步骤(提供)与您的抗体或其他配体偶联。

胺 – PN 544080(2 ml),PN 544081(5 ml)

羧基 – PN 544085(2 ml),PN 544086(5 ml)。

Protein A / Protein G Magnetic Beads,5 mg / ml

Protein A Magnetic Beads – PN 544030(2 ml),PN 544031(5 ml)

蛋白A磁珠纯化试剂盒 – PN 555000(20个样品)

蛋白G磁珠 – PN 544040(2 ml),PN 544041(5 ml)

蛋白G磁珠纯化试剂盒 – PN 555010(20个样品)

抗IgG磁珠,5 mg / ml

抗小鼠IgG磁珠 – PN 544020(4 ml),PN 544021(20 ml)

抗兔IgG磁珠 – PN 544010(4 ml), PN 544011(20 ml)

抗人IgG磁珠 – PN 544060(4 ml),PN 544061(20 ml)

Streptavidin / Biotin Magnetic Beads,5 mg / ml

Streptavidin Magnetic Beads – PN 544050(2 ml),PN 544051(5 ml)

生物素磁珠 – PN 544000(2 ml),PN 544001(5 ml)

 

DNA / RNA纯化磁珠

新 DNA尺寸选择/ PCR纯化磁珠

AbraMag ® DNA尺寸选择和PCR纯化磁珠被设计成净化所需大小的DNA片段。

●为了替代AMPure ® XP / SPRIselect ®和血清弹匣 ™ Speedbeads ™的性能相当,但更好的价值(参见比较数据)。

●去除污染物:引物,引物二聚体,dNTP,盐等。

●尺寸截止范围> 50至> 800 bp(尺寸选择)或> 100bp(PCR纯化)

●处理时间短:无离心或过滤

●管或微孔板格式

●适合手动或自动过程

DNA大小选择Magnetic Beads PN 544100(5 ml),544103(60 ml),544106(450 ml)

PCR Clean-Up Magnetic Beads PN 555030(5 ml),555035( 60 ml),555040(450 ml)

DNA纯化磁珠,12毫克/毫升

AbraMag ® DNA纯化磁珠结合在高容量DNA(基因组,质粒等)。将它们插入您当前的磁珠DNA纯化方案中,以获得更高的产量,纯度和价值。珠子的表现始终优于竞争对手的珠子(参见比较数据)。

PN 544090(1ml)

基因组DNA纯化试剂盒,磁珠

的AbraMag ®基因组DNA磁性纯化试剂盒被设计为从不同的生物样品纯化的基因组DNA,得到DNA的高收率和低RNA,蛋白质,核酸酶,和其它细胞污染物。

PN 555020(100个样本)

mRNA纯化磁珠,为5mg / ml的

AbraMag ® mRNA纯化磁珠加上寡(dT)25,在高容量结合多聚腺苷酸化的mRNA和mRNA的洗脱基本上不含核糖体RNA。将珠子插入您当前的磁珠mRNA纯化方案中,以获得更高的产量,纯度和价值。

PN 544075(2ml)

mRNA纯化试剂盒,磁珠

的AbraMag ® mRNA的磁性纯化试剂盒被设计为从总RNA纯化的mRNA,使多聚腺苷酸化的信使RNA的高产量,同时留下核糖体RNA(rRNA基因)和其他RNA后面。

PN 555025(10个样本)

 

 

 

 

 

 

Abraxis中国代理, Abraxis上海代理, Abraxis北京代理,Abraxis广东代理, Abraxis江苏代理Abraxis湖北代理,Abraxis天津代理, Abraxis黑龙江代理, Abraxis内蒙古代理, Abraxis吉林代理, Abraxis福建代理,  Abraxis江苏代理, Abraxis浙江代理,  Abraxis四川代理,Abraxis代理,Abraxis湖南代理

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2:产品种类齐全,经营超过700多品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

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6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发,欢迎合作。

TGR CaptSure技术

细胞模型包括:

  • A431
  • C2C12
  • CHO
  • HEK 293
  • Hela
  • Jurkat
  • MCF7
  • TF-1
  • THP-1
  • U-2 OS

 

TGR BioSciences Pty Ltd(TGR)是一家位于澳大利亚阿德莱德的私营公司。TGR成立于2001年,致力于为基于细胞的研究应用提供创新解决方案。我们的科学家拥有细胞生物学,生物化学和免疫测定设计方面的专业知识,并开发出高质量的产品和服务,这些产品和服务已成功应用于世界各地的药物发现计划。

TGR在其研发方面投入了大量资金,我们通过不断提供新的细胞检测方法来支持客户的研究工作,以检测疾病所依赖的细胞过程。TGR致力于营造持续学习和改进的氛围,以及高质量的技术支持,为我们的客户提供性能的产品。

为此,TGR凭借其获得专的CaptSure™技术为其核心产品奠定了基础。这种创新的抗体固定系统提供了更快速,更简单的免疫测定,以及显着降低制造成本的好处。此外,我们开发了CaptSure™Multiplex,用于分析单个样品中的多个目标。除了在自己的产品中使用CaptSure™之外,TGR还与其他公司合作,根据许可安排访问该技术。

我们的旗舰免疫检测系列SureFire®是一系列用于分析细胞磷蛋白的检测试剂盒,由我们位于阿德莱德的工厂生产。SureFire和SureFire Ultra试剂盒通过PerkinElmer,Inc。(美国)分销,PerkinElmer,Inc。是实验室试剂的市场领者。SureFire和SureFire Ultra检测器目前提供100多种SureFire试剂盒,可提供的工具箱,用于以均质形式测量内源性信号蛋白。

TGR的ELISAONE™是一种高灵敏度的免疫分析技术,无需标准ELISA应用所需的所有处理步骤即可提供快速结果。ELISAONE还为该平台带来了灵活性,允许用户使用标准读板器在单个96孔板上测量多个靶标。ELISAONE代表ELISA技术的下一代产品,现已通过我们的分销合作伙伴在美国和加拿大销售。

CaptSure™ Technology

Capt Sure ™技术

下一代免疫分析技术

与生命科学和诊断公司合作,推动创新和健康成果

生物测试市场正在开发易于执行的分析,但也更灵活,数据丰富。制造商还希望降低成本并轻松过渡到新技术格式。

TGR BioSciences开发并获得了下一代免疫分析技术Capt Sure ™的专项 技术,该技术大大降低了制造成本,同时提高了分析速度,并广泛应用于不同形式的免疫分析系统,如ELISA,珠子和微流体。

Capt Sure ™由Capt Sure ™配体组成,这是一种特异于非生物肽的单克隆抗体。该Capt Sure TM肽与免疫测定抗体对的一抗共价连接。将Capt Sure TM配体固定在测定表面上,无论是ELISA测定板孔,珠子还是微流体通道。第二测定抗体用标准测定技术报告,例如酶,荧光团或α珠。Capt Sure ™系统意味着任何Capt Sure ™涂层表面均可与任何Capt Sure ™标记的抗体结合。因此,任何井或珠子都可以测量由Capt Sure定义的任何目标™标记抗体呈现给它。例如,96孔测定板的任何孔可以在单个板上测量多达96个不同的靶。

该技术用于TGR自己的检测系统(SureFire®Ultra™和ELISA-One™),近已获得三家检测制造商的许可,并且可供其他公司使用,这些公司希望在此竞争性检测中为自己的产品提供这些优势。市场。

 

对于其他免疫测定形式的制造商:

Capt Sure ™系统已通过TGR在Alpha(PerkinElmer)分析中的SureFire Ultra验证。另外,TGR还开发了基于磁珠的测定和其他测定系统。这些系统中的每一个都受益于上述属性,包括降低测定的制造成本。

Capt Sure ™多路复用技术

为了将Capt Sure ™ 的优势转化为检测单个样品中的多种分析物,TGR通过开发多种新的Capt Sure ™抗肽抗体扩展了其平台。Capt Sure ™Multiplex系统中的每种单克隆Capt Sure ™抗体结合与所选择的主要测定抗体共价连接的特定肽。这允许对所选测定靶标进行差异性免疫捕获,从而提供与通用测定系统益处的多重化。

例如,将Capt Sure TM Multiplex实施到基于珠子的免疫测定系统是通过使用相同的通用Capt Sure TM-抗体包被的珠子来实现的,用于每个样品多重化多个靶标。每个珠子将与Capt Sure TM肽的抗体 – 靶复合物结合在该靶标的抗体上。因此,在并排样品中,由于样品与不同的肽标记的测定抗体一起温育,相同的珠子可以测定不同的多重分析物。这样,不仅可以使相同的珠子复用,而且如果需要,它们可以在每个客户端样本中复用不同的目标。

由于通过涂层用不同的Capt Sure TM抗体提供的每个系统的通用固定,一个系统中的肽标记的测定抗体也可以容易地移植到*不同的系统,例如从珠子到板或流体。这在下图中示意性地示出。

这避免了每个珠子或板等的昂贵涂层,其中针对每个靶标具有测定特异性抗体,并且大大降低了持续的库存和QC成本。同样,相同的抗体库存可以跨平台使用,使CaptSure™Multiplex系统成为当今通用的分析技术。

 

 

 

 

利用Capt Sure ™的ELISA技术

通过更有效的抗体递送方法进一步推动TGR的免疫测定分析技术。与标准免疫测定不同,其中抗体固定在测定表面上,在Capt Sure TM系统中,测定抗体与溶液中的分析物结合,然后通过Capt Sure TM标签固定在表面上。与其他技术相比,这可以转化为更,更快速,更简单的检测方案。

在ELISAs的情况下,简单的一步抗体结合,而不是标准ELISA测定中的两个顺序结合事件,将ELISA转化为简单的一步形式,其也可以是双重的,并且可能是多重的。

使用Capt Sure ™的一次洗涤ELISA分析格式

 

TGR的Capt Sure ™技术是ELISA检测的量子进步。将两种测定抗体一次加入分析物中,并且在单次洗涤步骤后,加入HRP底物以产生信号。因此,分析是简单的一步程序,使它们更快更容易实施。重要的是,制造成本大大降低,因为仅需要单个测定板(用Capt Sure TM抗体试剂涂覆)而不是每个靶标的不同板,并且该系统还需要更少的测定抗体。

Capt Sure ™ELISA平台的优点

对于ELISA制造商:

  • 低COG和QC
  • 所有试剂盒的一个ELISA测定板:较少的制造和批量QC
  • 抗体使用率低:100-500 ng / mL(1-5μg抗体/试剂盒)
  • 简单的共轭协议:可扩展,只需少的处理
  • 保质期长:大多数组件+ 2年
  • 准备就绪:可立即移植匹配的抗体对
  • 大型安装标准板读取器:允许快速的市场吸收
  • duoplexing的潜力:每孔测量2个目标

对于终用户:

  • 简单的一次洗涤ELISA测定
  • 快速结果 – 分析在1小时内完成
  • 测定板的每个孔可以测量不同的目标
  • 使用标准读板器 – 无需设备费用

ELISA Duoplex:使用Capt Sure ™ 以1洗涤ELISA形式引入多靶免疫测定

TGR的Capt Sure ™技术还可在同一ELISA检测中检测2种不同的靶标。与标准的Capt Sure ™ELISA检测相似,Capt Sure ™Duoplex ELISA检测需要大约1小时才能完成,并且具有简单和易用性相同的优点:

  • 加入样品和抗体混合物(孵育1小时)
  • 添加基质混合物并开发(两个目标同时开发)

Capt Sure ™技术允许在测定过程中同时形成和固定2个独立的免疫复合物,从而提高了生产力。通过相同的机制将两种分析物免疫复合物从溶液中固定 – 两种主要测定抗体都用Capt Sure TM标记物标记 – 但检测抗体是差异标记的。

Capt Sure ™Duoplex ELISA检测显示与单靶检测相似的性能,预计可用于:

  • 测量翻译后修饰。
  • 测量两种分析物的相对水平 – 例如一种分析物相对于第二种分析物的比例。
  • '或/或'检测 – 2个潜在标记中的任何一个都是指示性的。
  • 通过测量2种分析物可提高生产率的常规应用。

可以使用两种常规Duoplex配置,详见以下示例:

3种用于检测翻译后修饰的抗体系统

4种抗体系统,用于检测每个孔中的2种独立蛋白质

Capt Sure™ ELISA检测性能

TGR的Capt Sure ™技术允许将常规多培养/多次洗涤ELISA转换为单一孵育和洗涤步骤。通过将溶液中的所有测定反应物与分析物组合,并允许反应物同时发生平衡结合,提供了这种改进。换句话说,在相同温育期间,分析物在溶液中被初级测定抗体和检测抗体结合。同时,反应物通过Capt Sure TM固定标签与固相结合。后,在单次温育和洗涤步骤后,仅检测携带所有反应物(即一抗 – 分析物 – 检测抗体)的免疫复合物。

其他溶液相结合形式通常使用生物素或其他机制来固定免疫复合物。这些可以限制可以与测定一起使用的样品类型。相比之下,Capt Sure ™ELISA格式专门设计用于大多数样品基质而不会产生干扰:

 

典型的Capt Sure ™ELISA测定法与免疫测定反应物进行单次孵育,这需要大约一小时才能完成,而不会影响测定灵敏度或质量。相比之下,传统的ELISA检测方法通常需要3次单独孵育,通常需要3-5小时或更长时间:

 

灵敏度与Western印迹相当,只有一小部分时间和处理:

 

 

 

 

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2:产品种类齐全,经营超过700多品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

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5:多年积累良好的信誉,大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、国药、fisher等知药企。

6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批发,欢迎合作。

 

 

INCYTO C-WellTM技术指南

 

INCYTO

 

C-WellTM:

C-WellTM是一个革命性的细胞球体培养平台,以高通量的方式生成各种类型的尺寸控制的细胞球体。使用培养细胞球体的技术是一种悬滴法。

每个悬滴中的环境聚集细胞,然后形成单个球体。但悬滴法有几个局限性。悬滴法的主要局限性是:“劳动强度”、“低通量”、“培养时间相对较短”、“无法获得额外的新鲜生长培养基”和“细胞球体大小不均匀”。

与悬滴法相比,C-WellTM具有以下优势

任何其他商业化球体培养平台:“由于易于获得培养基更换,延长培养期10-30天”、“通过控制细胞接种密度,某些应用的培养期极短,为2-3天”、“无直接细胞-细胞接触的共培养准备系统,例如Transwell小室”、“生成尺寸受控的细胞球体”、“由于无剪切应力结构,易于改变装置中的生长培养基”、“适用于各种细胞类型”和“无限通量(一个装置可获得361个细胞球体)”。

 

cytodelics-临床采样技术专家

cytodelics是一家初创公司,产品主要包括:干燥储存缓冲液、PBMC固定试剂盒、全血刺激缓冲液(WB-STIM)、全血细胞稳定剂、全血修复/解试剂盒。cytodelics的使命是将临床采样技术带入21世纪,在样品处理链的各个阶段为客户提供帮助的工具改进的血液样本制备解决方案使血液采样比旧方法更容易、更便宜,并提高了数据质量。

主要产品线

一、干燥储存缓冲液

Cytodelics干储存缓冲液可以将细胞保存在干燥状态,以便在室温下储存和运输。与Cytodelics全血修复/溶解试剂盒或Cytodelicis PBMC固定试剂盒一起使用,其中细胞首先被固定,然后转移到载玻片上并干燥。随后可以对细胞进行再水化,并用流式细胞术或质谱细胞术进行分析。

 

特点和优势

稳定廉价的固定细胞存储

大幅降低运输成本,消除冷运过程中损坏样品的风险

适合出于计划原因或机器故障期间存储抗体染色的样本

用于与Cytodelics全血修复/溶解试剂盒配合使用

产品信息

产品名称

货号

规格

Dry Storage Buffer (drySTR)

DSTR001-100

100 mL

Dry Storage Buffer (drySTR)

DSTR001-25

25 mL

Dry Storage Buffer (drySTR)

DSTR001-5

5 mL

 

二、PBMC固定试剂盒

Cytodelics PBMC固定试剂盒用于固定纯化的细胞,如PBMC、其他纯化的原代细胞和细胞系。

 

特点和优势

一种温和的固定缓冲液,可保持PBMC的激活状态和磷酸化状态

与一系列其他原代细胞类型和细胞系兼容

优化单细胞蛋白质组学技术,如流式细胞术和质谱细胞术

细胞可以立即分析,也可以冷冻以备日后分析

产品信息

产品名称

货号

规格

PBMC Fixation Kit

PF002-800

固定8×109 cells

PBMC Fixation Kit

PF002-400

固定4×109 cells

PBMC Fixation Kit

PF002-200

固定2×109 cells

 

三、全血刺激缓冲液Whole Blood Stimulation Buffer (WB-STIM)

Cytodelics全血刺激缓冲液(WB-STIM)是一种专为全血设计的定制细胞培养缓冲液。向血液中添加细胞因子或微生物成分等刺激物是对免疫细胞功能的常见测试。然而,在许多情况下,免疫细胞会迅速消耗血液样本中所有剩余的营养物质,导致细胞死亡和样本质量差。Cytodelics WB-STIM旨在复制生理条件,并在长时间的刺激中保持营养水平。Cytodelics WB-STIMCytodelicis全血细胞稳定剂和全血修复/溶解试剂盒兼容。

 

特点和优势

可以在生理条件下长期(>24小时)刺激全血

可以与几乎任何xing奋剂结合使用

可以与xing奋剂预混并冷冻

可以与Cytodelics全血细胞稳定剂一起进行简单的现场刺激和保存。

产品信息

产品名称

货号

规格

Whole Blood Stimulation Buffer (WB-STIM)

WBST001-500

500 mL

Whole Blood Stimulation Buffer (WB-STIM)

WBST001-100

100 mL

Whole Blood Stimulation Buffer (WB-STIM)

WBST001-20

20 mL

 

四、全血细胞稳定剂Whole Blood Cell Stabilizer

Cytodelics全血细胞稳定剂(WBCS)是一种单组分溶液,用于保存细胞蛋白质,以备日后通过流式细胞术和质谱细胞术进行分析。它只需要一个混合步骤,之后血液可以冷冻保存几年。与全血修复/溶解试剂盒一起使用。

 

特点和优势

快速简单地保存血液样品

可以在-20°C-80°C下储存至少两年

可以接近100%保存所有白细胞(包括中性粒细胞)

有多种规格

产品信息

产品名称

货号

规格

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS002-100

100 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Murine)

mWBCS002-100

100 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T001

0,10 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T002

0,20 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T003

0,30 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T004

0,40 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T005

0,50 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T006

0,60 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T007

0,70 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T008

0,80 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T009

0,90 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T010

1,00 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T015

1,50 mL

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS001-T020

2,00 mL

 

五、全血修复/溶解试剂盒Whole Blood Fix/Lyse Kit

Cytodelics全血固定/溶解WBFL)试剂盒是我们临床血液采样产品系列的核心。Cytodelics WBFL试剂盒包括处理血液样本所需的所有成分,以便日后通过流式细胞术和质谱细胞术等单细胞蛋白质组学方法使用。可用于使用Cytodelics全血细胞稳定剂保存的血液样本,也可直接用于新鲜血液样本。更多信息可在以下规范下找到。

 

特点和优势

快速温和的红细胞裂解为流式细胞术和质谱细胞术的应用做准备

温和的固定可以保持单个细胞的激活状态和磷酸化状态

可以保留接近100%所有白细胞(包括中性粒细胞)

固定/解的样品可以直接分析或冷冻以备日后分析

可与Cytodelics全血细胞稳定剂相结合,用于临床样本的完整采集和处理方案

产品信息

产品名称

货号

规格

Whole Blood Fix/Lyse Kit

WBFL002-1000

100 mL

Whole Blood Fix/Lyse Kit

WBST001-500

50 mL

Whole Blood Fix/Lyse Kit

WBST001-200

20 mL

 

 

作为cytodelics在中国区域代理,上海金畔生物科技有限公司将为中国客户提供全面的cytodelics的产品。欢迎大家随时联系我们!!!

cytodelics热卖产品

品牌

产品名称

货号

规格

cytodelics

Cryogenic tubes pre-filled with Cytodelics STABILISER (100 µL)

hWBCS001-T001

100 mL

cytodelics

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Murine)

mWBCS002-100

100 mL

cytodelics

Whole Blood Cell Stabiliser Bulk (Human)

hWBCS002-100

100 mL

cytodelics

Whole blood processing kit / Gen2 50 mL

hC002-500

kit

cytodelics

Whole blood processing kit / Gen 2 100ml

hC002-1000

kit

cytodelics

Whole blood processing kit / Gen 2 20ml

hC002-200

kit

胶体金技术介绍

 

金免疫技术的特点是以胶体金作为标记物。这一技术在70年代初期由FaulkTaylor始创,zui初用于免疫电镜技术。迄今为止,金标记仍主要用于免疫组织化学中。在免疫测定中,金标记常与膜载体配合,形成特定的测定模式,典型的如斑点免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等,已是目前应用广泛的简便、快速检验方法。

*节免疫胶体金的制备
一、胶体金的特性和制备
(一)胶体金的结构
胶体金(colloidalgold)也称金溶胶(goldsol),是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核(原子金Au)及包围在外的双离子层构成,紧连在金核表面的是内层负离子(AuC12-),外层离子层H+则分散在胶体间溶液中,以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。胶体金颗粒的基础金核并非是理想的圆球核,较小的胶体金颗粒基本是圆球形的,较大的胶体金颗粒(一般指大于30nm以上的)多呈椭圆形。在电子显微镜下可观察胶体金的颗粒形态。
(二)胶体金的特性
1
.胶体性质胶体金颗粒大小多在1100nm,微小金颗粒稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮在液体中,成为胶体金溶液。胶体金因而具有胶体的多种特性,特别是对电解质的敏感性。电解质能破坏胶体金颗粒的外周永水化层,从而打破胶体的稳定状态,使分散的单一金颗粒凝聚成大颗粒,而从液体中沉淀下来。某些蛋白质等大分子物质有保护胶体金、加强其稳定性的作用。
2
.呈色性微小颗粒胶体呈红色,但不同大小的胶体呈色有一定的差别。zui小的胶体金(25nm)是橙黄色的,中等大小的胶体金(1020nm)是酒红色的,较大颗粒的胶体金(3080nm)则是紫红色的。根据这一特点,用肉眼观察胶体金的颜色可粗略估计金颗粒的大小。
3
.光吸收性胶体金在可见光范围内有一单一光吸收峰,这个光吸收峰的波长(λmax)在510550nm范围内,随胶体金颗粒大小而变化,大颗粒胶体金的λmax偏向长波长,反之,小颗粒胶体金的λmax则偏于短波长,表19-1所列为部分胶体金的λmax
(三)胶体金的制备
1
.制备方法胶体金的制备多采用还原法。氯金酸(HauC14)是主要还原材料,常用还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。根据还原剂类型以及还原作用的强弱,可以制备0.8nm150nm不等的胶体金。zui常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。具体操作方法如下:
1)将HauC14先配制成0.01%水溶液,取100ml加热至沸。
2)搅动下准确加入一定量的1%柠檬酸三钠(Na3C6H5O7•2H2O)水溶液。
3)继续加热煮沸15min。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶液在柠檬酸钠加入后很快变灰色,续而转成黑色,随后逐渐稳定成红色。全过程约23min
4)冷却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。
用此法可制备16147nm粒径的胶体金。金颗粒的大小取决于制备时加入的柠檬酸三钠的量。表19-1列举制备4种不同粒径胶体金时柠檬酸三钠的用量。
19-1 四种粒径胶体金的制备及特性
胶体金粒径(nm 1%柠檬酸三钠加入量(ml*胶体金特性
呈色 λmax
16 2.00
橙色 518nm
24.5 1.50
橙红 522nm
41 1.00
红色 525nm
71.5 0.70
紫色 535nm

*还原100ml0.01HauC14所需量
2
.注意事项
1)氯金酸易潮解,应干燥、避光保存。
2)氯金酸对金属有强烈的腐蚀性,因此在配制氯金酸水溶液时,不应使用金属药匙称量氯金酸。
3)用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三蒸馏水,或者是高质量的去离子水。
4)是以制备胶体金的玻璃容器必须是清洁的,用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。是经硅化处理的,硅化方法可用5%二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡数分钟,用蒸馏水冲净后干燥备用。
5)胶体金的鉴定和保存:胶体金的制备并不难,但要制好高质量的胶体金却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以检定,主要检查指标有颗粒大小,粒径的均一程度及有无凝集颗粒等。
肉眼观察是zui基本也是zui简单和方便的检定方法,但需要一定的经验。良好的胶体金应该是清亮透明的,若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物,提示此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。在日光下仔细观察比较胶体金的颜色,可以粗略估计制得的金颗粒的大小。当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的粒径。结制备的胶体金作电镜观察,并选一些代表性的作显微摄影,可以比较地测定胶体金的平均粒径。
胶体金在洁净的玻璃器皿中可较长时间保存,加入少许防腐剂(如0.02NaN3)可有利于保存。保存不当时会有细菌生长或有凝集颗粒形成。少量凝集颗粒并不影响以后胶体金的标记,使用时为提高标记效率可先低速离心去除凝集颗粒。
二、免疫金的特性和制备
(一)免疫金的特性
胶体金可以和蛋白质等各种大分子物质结合,在免疫组织化学技术中,习惯上将胶体金结合蛋白质的复合物称为金探针。用于免疫测定时胶体金多与免疫活性物质(抗原或抗体)结合,这类胶体金结合物常称为免疫金复合物,或简称免疫金(immunogold)。
胶体金与蛋白质结合的机制尚有十分清楚,一般认为是物理吸附性的。胶体金颗粒带有一层表面阴性电荷,与蛋白质表面的阳性电荷通过静电感应相附。因此环境pH和离子强度是影响吸附的主要因素,其他如胶体金颗粒的大小、蛋白质的分子量及蛋白质浓度等也会影响蛋白质的吸附。
(二)免疫金的制备
1
.用0.2mol/LK2CO30.1mol/LHC1调节胶体金溶液的pH至选定值。原则上可选择待标记蛋白质等电点,也可略为偏碱。但通常zui适反应pH往往需经多次试验才能确定。在调节胶体金的pH值时应注意,胶体金会阻塞pH计的电极,不可直接将电极插入胶体金溶液中,宜先用终浓度为0.15的聚乙二醇(PEG20000)稳定胶体金后,再胶体金的pH值。
2
.将1/10体积的合适浓度的蛋白质溶液加于胶体金溶液中,放置室温反应25min。由于盐类成分能影响胶体金对蛋白质的吸附,并可使胶体金聚沉,因此待标记蛋白质溶液若含有较高的离子浓度,应在标记前先对低离子强度的蒸馏水透析去盐。
3
.加入浓度为0.2%的PEGBSA以饱和游离的胶体金。
4
.离心分离,去除上清液中未结合的蛋白质。离心条件视胶体金颗粒的粒径而异:对5nm金颗粒可选用40000r/min离心1h8nm金颗粒用25000r/min离心45min14nm金颗粒用25000r/min离心30min40nm金颗粒用15000r/min离心30min
5
.轻吸上清液。沉淀用含PEGBSA的缓冲液悬浮,恢复原体积后再离心。如此洗涤24次。以*除去未结合的蛋白质。
6
.免疫金复合物zui终用稀释液配制成工作浓度保存。稀释液通常是加入稳定剂的缓冲液。缓冲溶液常用中性的PBSTris缓冲液。
多种蛋白质、葡聚糖、PEG2000、明胶等均为良好的高分子稳定剂,PEGBSA是zui常用的稳定剂。稳定剂有两大作用:一为保护胶体金的稳定性,使之便于长期保存;二为防止或减少免疫金复合物的非特异性吸附反应。稳定剂的合理选择是十分重要的,不适当的稳定剂有时也会导致非特异性反应。

第二节
一、        胶体金
即金的水溶液,它也具有一般溶胶的特性。分散体系的分类:体系就是一定空间范围内作为我们研究对象的物质,某一种或几种物质分散到另一种物质中所组成的体系叫做分散体系。被分散相质点的大小而改变,因此,按分散相质点的大小不同,可将分散体系分为三类。
(一)离子分散体系
指分数散相以小分子或离子状态分散着。这种溶液具有高度稳定性,无论放置多久,分散相颗粒都不会因重力而下沉,不会从溶液中分离出来
(二)胶体分散体系
是指分散相颗粒在1100nm之间的分散体系叫做胶体分散系。胶体溶液外观透明不浑浊,在普通显微镜下看不见它的分散相粒子,不易受重力影响与分散介质分离沉降,但其中的溶胶粒子有聚结变大的倾向,即具有聚结不稳定性。
(三)粗分散体系
分散相颗粒是由许多分子组成,因粒子较大,用肉眼或显微镜即可看见,不稳定,极易因重力而自动沉降,外观浑浊不透明。
二、胶体金的一般性状
(一)胶体金的颜色
溶胶的颜色决定于分散相物质的颜色、分散相物质的散度和入射光线和种类,是散射光还是透射光,粒子越小,分散度越高,则散射光的波长越短,对同一种物质的水溶胶来说,粒子大小不同,颜色亦不同,胶体金颗粒在520nm之间,吸收波长520nm,呈葡萄酒红色,2040•nm之间吸收波长530nm,液体为深红色,60nm的金溶液主要吸收波长600nm,金溶液呈兰紫色,若离心去掉较大的金颗粒,溶胶呈红色。
(二)胶体金的稳定性
溶胶的稳定性介于小分子离子溶液和粗分散系之间,溶胶的颗粒作布朗运动,不易受重力影响下沉。然而溶胶又是不稳定体系,它的胶粒溶剂化作用很弱,总表面积较大,当胶粒相互碰撞时,有自动合并为较大、较重的颗粒倾向。胶体颗粒变大以致超出胶体范围而从介质中沉淀出来的现象叫聚沉。影响溶胶稳定性的主要原因有三点:胶粒间的相互吸引力。当胶粒相距很近时,这种吸引力可能导致胶粒合并变大。胶粒及其溶剂化层(溶剂是水就是水化层)的带电情况。一种溶胶的各个胶粒都带有相同的电荷。同性电荷相斥,双电层愈厚,胶粒带电量愈大,排斥力愈大,愈能阻止胶粒合并聚结,溶胶愈稳定。胶体界面的溶剂膜,当二固体间夹有一厚层液体时,这层液体膜有一个反抗二固体接近的排斥力。两个胶粒要进一步接近,只有克服它们之间的溶剂化膜的斥力才有可能,因此溶剂膜的斥力是使溶胶稳定的原因之一。
(三)溶胶的聚沉现象
胶粒之间存在吸引力与排斥力这对矛盾,在溶胶颗粒带电及溶剂化的情况下,排斥力成为矛盾的主要方面,溶胶稳定而不聚沉。因为某种原因使溶胶颗粒带电量减到很小甚至中和;其所带电荷并能去溶剂化膜,胶粒之间可在更近的距离互相接近,引力成为主要矛盾,引力超过斥力时胶粒便聚结发生聚沉。引起溶胶聚沉的原因有:
1
.少量电介质对溶胶的聚沉作用 少量电介质即可使溶胶聚沉,但各种电介质的聚沉能力可用聚沉值来表示,聚沉值愈小,聚沉能力愈大,聚沉值从实验中得出如下的离子价规则:电介质负离子对带正电的溶胶起主要聚沉作用,正离子对带负电的溶胶起主要聚沉作用。同价离子聚沉能力几乎相等,不同价离子的聚沉能力随离子价的增加而显著增加。电介质为什么能使溶胶聚沉呢?这是由于电介质与胶粒带相反电荷的离子的作用,中和了胶粒所带的一部分电荷,使胶粒电荷量减少,扩散层缩小,溶剂化层变薄,而当双电层厚度缩至很小的溶剂化层变得很薄时,两个胶粒间便可以更加接近即不产生斥力,两个胶粒间因引力加大而合并的趋势增强,甚至引力占优势以致使胶粒聚结而发生聚沉。胶粒的双电层结构见图5
2
.温度对溶胶稳定性的影响一般影响不大,当温度升高时,吸附能力减弱,溶剂化程度降低,溶剂化层变薄,胶粒聚结,不稳定性增加。
3
.浓度对溶胶的稳定性的影响浓度增大时,粒子间距离缩小,引力增加,容易聚结而发生聚沉,所以制备比较稳定的溶胶,要有一定的合适浓度。

第三节胶体金的制备技术
胶体金溶液的制备有许多种方法,其中zui常用的是化学还原法,基本的原理是向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子变成金原子。目前常用的还原剂有:白磷、乙醇、过氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等,下面分别介绍制备不同大小颗粒的胶体金溶液。

一、制备胶体金的
(一)玻璃器皿的清洁
制备胶体金的成功与失败除试剂因素以外玻璃器皿清洁是非常关键的一步。如果玻璃器皿内不干净或者有灰尘落入就会干扰胶体金颗粒的生成,形成的颗粒大小不一,颜色微红、无色或混浊不透明。我们的经验是制备胶体金的所有玻璃器皿先用自来水把玻璃器皿上的灰尘流水冲洗干净,加入清洁液(重铬酸钾1000g,加入浓硫酸2500ml,加蒸馏水至10000ml)浸泡24h,自来水洗净清洁液,然后每个玻璃器皿用洗洁剂洗34次,自来水冲洗掉洗洁剂,用蒸馏水洗34次,再用双蒸水把每个器皿洗34次,烤箱干燥后备用。通过此方法的处理玻璃器皿不需要硅化处理,而直接制备胶体金。也可用已经制备的胶体金溶液,用同等大不颗粒的金溶液去包被所用的玻璃器皿的表面,然后弃去,再用双蒸水洗净,即可使用,这样效果更好,因为减少了金颗粒的吸附作用。
(二)试剂的配制要求
1)所有配制试剂的容器均按以上要求酸处理洗净,配制试剂用双蒸馏水或三蒸馏水。
2)氯化金(HauCl4水溶液的配制:将lg的氯化金一次溶解于双蒸水中配成1%的水溶液。放在4”c冰箱内保存长达几个月至1年左右,仍保持稳定。
3)白磷或黄磷乙—-溶液的配制:白磷在空气中易燃烧,要格外小心操作。把白磷在双蒸水中切成小块,放在滤纸上吸于水份后,迅速放入已准备好的乙——中去,轻轻摇动,等*溶解后即得饱和溶液。储藏于棕色密闭瓶内,放在阴凉处保存。
二、制备胶体金的方法和步骤
(一)白磷还原法
1
.白磷还原法(Z Sigmondy 1905年)
1)取1%HAuCl4水溶液1ml,加双蒸水99ml配成0.01%HAuCl4水溶液。
2)用0.2mol/L K2CO3pH7.2
3)加热煮沸腾,迅速加入0.5ml
20%
白磷的饱和乙——溶液,振荡数分钟至溶液呈现橙红色时即成。胶体金的颗粒直径为3nm左右,大小较均匀。
2
.白磷还原法(Z Sigmondy 1905Z Sigmondy Thiessen 1925
1)取0.6%HAuCl4水溶液2.5ml,加双蒸水120ml
2)用0.2mol/L K2CO3,pH至中性。
3)加入1/5饱和度的白磷乙——溶液1ml1份白磷4份乙——),在室温振荡约15min,溶液呈红褐色,再加热至典型的葡萄酒红色,加热可使乙——蒸发,胶体金液体内过量的白磷通入空气后被氧化,此方法获得胶体金颗粒的直径在512nm之间。
3
.白磷还原法的改良法(Henegouwen 1986
1)取20%饱和度白磷乙——溶液0.5ml,加双蒸水60ml
2)用1%HAuCl4水溶液0.75ml, 0.1mol/L K2CO30.6ml, 振荡变成棕红色。
3)加热煮沸,至溶液变成透明红色。
使用上述方法增加还原次数使金颗粒直径不断增大,二者之间的关系见表5-1
5-1 胶体金颗粒大小与还原次数之间的关系
还原次数颗粒直径(nm)正负误差
15.60.9
26.70.9
37.90.9
49.81.3
5121.0

此方法主要优点是简化了制备不同大小的颗粒胶体金的手续和其它试剂的配制,经济、操作简单。另外,在多次还原过程中氯化金不再形成新的金颗粒,只是在原先金粒子基础上使它的直径变大。*次金颗粒起着晶核的作用。由于这一特点,制备的金颗粒相对均匀一致。
(二)抗体血酸还原法(Stathis and Fabrikanos 1958
1)将在4预冷的1%HAuCl4水溶液1ml,0.2mol/L K2CO31.5ml、双蒸水25ml混匀。
2)在搅拌下加入1ml 0.7%抗坏血酸水溶液,立即呈现紫红色。
3)加双蒸水至100ml,加热至溶液变为透明红色为止。胶体金颗粒直径为813nm
(三)柠檬酸三钠还原法(Frens 1973
此方法是由Frens1973年创立的,制备程序很简单,胶体金的颗粒大小较一致,广为采用。该法一般先将0.01%HAuCl4溶液加热至沸腾,迅速加入一定量1%柠檬酸三钠水溶液,开始有些蓝色,然后浅蓝、蓝色,再加热出现红色,煮沸710min出现透明的橙红色。各种颗粒的胶体金制备详见表5-2
5-2 柠檬酸三钠用量与胶体金颗粒直径的关系
0.01%
HAuCl4ml1%柠檬酸三钠(ml)直径(ml
1005.010.0
1004.015.0
1001.525.0
1001.050.0
1000.7560.0
1000.6070.0
1000.4298.0
1000.32147.0
1000.25160

按照Frens法还可以制备出其它不同颗粒大小的胶体金出来。许多研究证明用该法制备胶体金时金颗粒的大小是柠檬酸三钠用量的函数,基本的规律是柠檬酸三钠用量多,胶体金颗粒直径小,柠檬酸三钠用量越少,腔体金颗粒直径越大。
(四)鞣酸?柠檬酸三钠还原法(SlotGueeze1985年)
该法是以1982Muhlpfordt法为基础,1985SlotGeuze对该法进行了改良,特点是通过改变鞣酸的用量制备出多种颗粒直径的胶体金,而且颗粒的直径均匀一致,很适合于双标及多标研究。制备3nm5nm10nm15nm的胶体金颗粒见表5-3
5-3 鞣酸?柠檬酸三钠还原法
A
B
直径(nm1%柠檬酸钠(ml0.1mol/L
K2CO3ml1%
鞣酸(mlH2Oml1%HAuCl4mlH2Oml
3.340.2411.8179
540.20.715.1179
1040.0250.115.875179
1540.00250.0115.987179

操作步骤:
1)根据所需要的胶体金颗粒分别配制A液和B液。
2)将配制好的AB两液在水浴内加热到60,并通过控温装置使温度保持稳定。
3)在电磁搅拌器上搅拌A液迅速加入B液,继续加热直至胶体金变成葡萄酒色,时间大约710min。在AB两液混合后可见溶液立即变成蓝色,大约13 min就变成红色。
用鞣酸?柠檬酸三钠还原法,柠檬酸三钠主要为还原剂,而鞣酸则有双重作用,一是还原作用,二是保护作用,控制晶核的形成过程,也就是说鞣酸的用量多少决定胶体金颗粒的大小形成,因此改变鞣酸的用量就可以改变胶体金的颗粒大小,达到制备不同直径颗粒的胶体金之目的。
(五)乙醇超声波还原法(Baigent and Muller 1980
11%HAuCl4水溶浓0.2ml加入100ml双蒸水。
2)用0.2molK2CO3pH至中性,再加入1ml乙醇。
3)用20KC125w超声波探头浸入溶液内进行超声振荡,由此法制得的胶体金颗粒为610nm
(六)硼氢化钠还原法(Tschopp et al 1982
1)将预冷在440ml双蒸水中加入0.6ml 1%HAuCl4
2)再加入0.2molK2CO30.2ml
3)在搅拌下,迅速加入新鲜配制的硼氢化钠水溶液(0.5mg/ml0.4ml,一般重复加入35次,直至溶液的兰紫色变为橙红色为至。然后再搅拌5min,获得的金颗粒直径在25nm之间。
(七)放射性胶体金的制备方法(Kent and Allen 1981
1)取0.01% HAuCl4 上水溶液100ml,加热至沸腾。
2)加入40μl19u
3)迅速加入4ml1% 柠檬酸三钠水溶液,57min出现透明的橙红色。
4)其含量为I×106脉冲数/min
(八)微波制备液体金方法。

第四节胶体金的质量鉴定

胶体金制备完毕后须经电镜下质量鉴定才能应用
一、胶体金颗粒直径测定
用预先处理好的覆有Formvar膜的镍网浸入胶体金溶液内,取现放在空气中干燥或37烤箱烤干。然后在透射电镜下观察,主要观察金颗粒的大小,符合不符合所需要的颗粒直径,金颗粒是否均匀一致,有无椭圆形及多角形金颗粒存在。理想的金颗粒是大小基本相等,均匀一致,无椭圆形及多角形的金颗粒存在,还可以拍片放大后测量金颗粒直径的大小。
二、胶体金金颗粒均匀度测定
一般需测量100个以上的胶体金颗粒,然后用统计学处理,计算胶体金颗粒的平均直径及标准差,前者反映颗粒的大小,后者说明颗粒是否均匀一致。
三、影响胶体金颗粒大小的因素
如果有较多的大小不等的金颗粒及有椭圆形,三角形金颗粒存在应重新制备。一般造成这种情况的主要原因是在加还原剂的时候不是迅速一次加入,而是多次加入。再者搅拌不均匀,速度太慢没有搅拌起来,造成了颗粒大小不等。制备量的多少,容器的大小,加热的时间等也影响胶体金颗粒的大小。制备了合格的胶体金以后,放在室温或4保存。避免低温冻存,因为冻存可导致胶体金凝集,破坏了胶体状态。胶体金在室温避光无灰尘的环境中可放置3个月左右。冰箱内半年左右。根据胶体金的性质,有不稳定和聚沉的可能性,因此,制备完毕后在20天以内进行标记。

第五节胶体金标记物的制备

     胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却zui大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带正电荷,胶体金带负电荷,二者极易静电结合形成大的聚合物。如果pH高于蛋白质等电点时,蛋白质带负电荷,与金颗粒的负电荷相互排斥而不能互相结合。为防止蛋白质与胶体金的聚合与沉淀,常用牛血清白蛋白,卵白蛋白,聚乙二醇或明胶作稳定剂。用Sephacryb
S?400
(丙烯葡聚糖S?400 )层析分离纯化胶体金蛋白标记物只适用于以BSA作稳定剂者。
一、待标记蛋白质的准备
1)透析除盐:蛋白质溶液内应除去多余的电解质,不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位,影响蛋白质的吸附,因此,标记之前必须*除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水(0.005mol/L NaCl , pH7.0)透析。
2)去除蛋白质中的沉淀:长期低温保存的蛋白质或4较长时间保存的抗体,特别是在浓度高于2mg/ml的情况下,很容易形成聚合物,聚合物对标记过程及免疫金探针的稳定性有一定影响,因此,标记之前须离心以除去这些聚合物。一般以100000r/min 4离心60min取上清液,调整蛋白质浓度至1mg./ml即可用于标记。
二、胶体金pH值的调整
胶体金与蛋白质的结合成功与否,取决于pH值,一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合,因此,标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3,需要降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头,因此,一般用精密的pH试纸测定其pH即可。
几种常用的蛋白质标记时胶体金所用的pH值见表5-4
5-4 常用几种蛋白质标记时胶体金所用的pH值如下
蛋白质pH
抗体(γ球蛋白)9.0
亲合层析的IgG7.6
单克隆抗体8.2
F
ab‘)27.2
SPA(
葡萄球菌蛋白)6.0
蓖麻子植物凝血素8.0
蓖麻子植物凝血素8.0
花生凝集素6.3
Helix pomatia lectin7.4
大豆凝集素6.1
Lens Culinaris lectin6.9
Lotus Tetragonolobus lectin6.3
荆豆凝集素6.3
Bandeirae simplicifolia lectin6.2
过氧化物酶8.0
类卵粘蛋白4.8
血浆铜兰蛋白7.0
α-
胎球蛋白6.5
小牛血清白蛋白6.5
牛血清白蛋白5.5
牛血球白蛋白结合肽4.5
牛血清白蛋白结合胰岛素5.3
霍乱毒素6.9
破伤风毒素6.9
DNAase6.0
RNAase9.0
低密度脂蛋白5.5
α2-
巨球蛋白6.0
抗生物素蛋白(亲合素)10.0
链霉抗生物素蛋白6.6
麦胚凝集素9.9

三、待标记蛋白质zui适稳定量的测定
1)光电比色法:制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液(1ml),分别加入5ml胶体金中,迅速混匀,然后,各加入1ml 10% NaCl溶液,摇匀,静置5min后测各管。根据胶体金颗粒的大小,OD520580nm之间测定,以OD值为纵坐标,蛋白质用量为横坐标作一曲线,取曲线zui先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为zui适稳定量。图5.210nm的胶体金溶液中蛋白质的zui适稳定量为45μg/ml
2)目测法:以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量比例,将标记的蛋白质逐级稀释后(由5μg45μg另设对照管),各取等体积顺序加入一系列装有1ml胶体金的试管中,5min后,在上述各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠,依表5-5顺序进行。
5-5 具体的做法是按表内进行
管数12345678910
胶体金(ml1111111111
蛋白质(μg510152025303540450
10%NaCl(ml)0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1
当分别加入0.1ml 10%氯化钠后、混匀静置2h以上观察结果。
没有加入蛋白质的管为对照管。
小于5nm颗粒的胶体金溶液,每个管内应加入5μl33%的双氧水,否则有不变蓝色及聚沉现象。未加蛋白及加入蛋白量不足以稳定胶体金的试管,即呈现由红变蓝的聚沉现象,而加入蛋白量达到或超过zui低稳定量的试管则胶体金的红颜色不变。其中含蛋白量zui低的试管即含稳定1ml胶体金的必须蛋白量。在此基础上再加上20%即为稳定所需蛋白质的实际用量。
四、蛋白质的胶体金标记
当蛋白质的zui适稳定量及标记的*pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下:
1)根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。
2)在电磁搅拌下,将蛋白质溶液加入胶体金溶液中(pH已调至PI超过0.5pH),加入蛋白质时应逐滴加入,1mg的蛋白质大约5min加完。
3)在磁性搅拌下加入5%的牛血清白蛋白(BSA)使其终浓度为1%,或加入3%聚乙二醇(PEG MW20000)使其终浓度为0.05%,
我们对比了BSAPEG稳定胶体金的效果,BSA稳定的标记胶体金,放在42年半仍然保持良好性能,而用PEG稳定的标记胶体金放在41年左右就有分层现象,而且染色*下降。因此,我们认为还是用BSA作稳定剂。
4)将标记好的胶体金装入透析袋中,两头扎紧,放入蔗糖或硅胶中浓缩,浓缩到原体积的1/10量,浓缩完毕后纯化。离心法纯化时,不要浓缩。
五、胶体金标记蛋白质的纯化
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理以后才能用于免疫细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质,未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。
(一)调整与超速离心法
1)将标记的大于10nm的胶体金溶液选用15000r/min 4离心15min,吸出上清,弃去沉淀,以去除大的聚合物。
2)一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心,小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心,在4离心1h左右,弃上清,将沉淀以原体积的0.02mol./L
TBSpH8.2
(内含1%BSA0.05%叠氮钠)溶解,重复离心23次,沉淀溶于原体积的1/10TBS中。4保存备用。为了得到颗粒均匀一致的免疫金试剂,上述粗提制剂可用10%30%蔗糖或甘油溶液作密度梯度离心,分带收集不同大小颗粒的胶体金标记蛋白制剂。
几种免疫金探针离心所用转速(见表5-6),离心纯化时所用转速见表5-7,胶体金的OD值见表5-8
5-6 几种免疫金探针离心时所用转速参考表
胶体金颗粒直径(nm)蛋白质时间(min)转速(r
3.0GAR IgG6030000
5.0GAR IgG5025000
10.0RAM IgG5019000
15.0SPA4017000
15.0ALcc IgG4017000
20.0SPA4013000
25.0SPA3512000

说明:GAR IgG=羊抗兔IgGRAM IgG=兔抗鼠IgGALcc IgG=抗肝细胞癌IgG; SPA=葡萄球菌A蛋白
5-7 几种免疫金探针离心纯化时所用转速
胶体金颗粒(nmpH蛋白质转速(xg)时间(min
59.0
羊抗人IgG4500045
108.2
抗胃癌单克隆抗体4500030
156.5
链霉亲和素1200045
206.0SPA1200030

将纯化好的胶体金用0.02mol/L TBS缓冲液作120稀释,用520nmOD值。
5-8 不同大小胶体金的OD
胶体金颗粒大小(nmOD520nm
52.5
102.5
153.5
205.0
(二)凝胶过滤法
为纯化免疫金探针的方法,其特点是简便,过滤的胶体金颗粒比较均匀,不容易凝集,而离心方法转速高,时间长,胶体金颗粒沉淀容易凝集,用凝胶过滤克服了这一弱点。选用本方法时胶体金溶液必须用牛血清白蛋白作稳定剂。具体操作过程如下:
1)将浓缩好的胶体金以1500r/min离心去掉大的聚合物。吸出上清待过柱。
2)柱高34cm,直径1cm,加样体积为柱床体积的1/10
3)丙烯葡聚糖S-400Sephacryls?400 , Pharmacia, Sweden)装柱后用0.02mol/L pH8.2
TBS
平衡层析柱(pH7.4者用于标记的SPA),平衡好后,吸取上清胶体金液体加入层析柱内,加样时请注意不要破坏S?400的界面。
4)用0.02mol/L pH8.2
TBS
洗脱,先行滤出的液体有少量微黄不透亮的液体,紧接着是浓度高红色而透亮的胶体金,注意颜色的变化,如红色变淡,变黄立刻停止收集。如Sephacryls?400没有,也可以用Sepharose ?4B6B代替(Pharmacia, Sweden)也能收到较好的效果。
六、免疫金探针的鉴定
1)用有Formvar
膜的镍网沾取金标蛋白溶液,空气中干燥后醋酸铀复染,在TEM下观察,可见金颗粒周围有一明显的空晕,表示颗粒表面吸附有蛋白质分子。
2)纯化后免疫金探针是否保持很好的生物学活性是判断其质量好坏的主要指标,因此,在使用之前必须对它的特异性,敏感性进行鉴定。鉴定举例,用阳性抗原片,脱蜡至水,胰蛋白酶消化,加*抗体(多克隆或单克隆),一般过夜再加标记抗同一抗特异性抗体结合的胶体金溶液(多克隆或单克隆抗体标记的胶体金)详细方法步骤见后IgGS法,一般做121418116,稀释SPA-金,做110120140180稀释,3745min,冲洗,显色,观察结果,染色效价以阳性结果明确,背景浅的稀释度为标准。免疫细胞化学染色试验可以较全面地反应免疫金探针的质量。

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GLK3.40 BBI GoldLink™Kit 1次反应 40nm  1ml 6900 BBInternational
EM. BSA5  胶体金标记牛血清白蛋白5nm 0.25ml 1660 BBInternational
EM. BSA10  胶体金标记牛血清白蛋白10nm 0.25ml 1660 BBInternational
EM. CGC5  胶体金标记阳离子胶体金 5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. CGC10 胶体金标记阳离子胶体金 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. CGC15 胶体金标记阳离子胶体金 15nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. CGC20 胶体金标记阳离子胶体金 20nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAF10 胶体金标记羊抗小鼠 IgG & IgM 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAG5 胶体金标记羊抗豚鼠IgG 5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAG10 胶体金标记羊抗豚鼠IgG 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAM2 胶体金标记羊抗小鼠 IgG Fc (Gamma) Specific 2nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAM5 胶体金标记羊抗小鼠 IgG Fc (Gamma) Specific 5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAM10 胶体金标记羊抗小鼠 IgG Fc (Gamma) Specific 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAR2 胶体金标记羊抗兔IgG 2nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAR5 胶体金标记羊抗兔IgG 5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAR10 胶体金标记羊抗兔IgG 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAR15 胶体金标记羊抗兔IgG 15nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAR20 胶体金标记羊抗兔IgG 20nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAR30 胶体金标记羊抗兔IgG 30nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAR40 胶体金标记羊抗兔IgG 40nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GAT10 胶体金标记羊抗Rat IgG 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GFAR5 胶体金标记羊抗兔IgG 5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GFAR10 胶体金标记羊抗兔IgG 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GMHL5 胶体金标记羊抗小鼠 IgG (H+L) 5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GMHL10 胶体金标记羊抗小鼠 IgG (H+L) 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GMHL15 胶体金标记羊抗小鼠 IgG (H+L) 15nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. GMHL20 胶体金标记羊抗小鼠 IgG (H+L) 20nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. PAG5 胶体金标记蛋白A 5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. PAG10 胶体金标记蛋白A 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. PAG15 胶体金标记蛋白A 15nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. PAG20 胶体金标记蛋白A 20nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. RAG5 胶体金标记兔抗羊IgG 5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. RAG10 胶体金标记兔抗羊IgG 10nm 0.25ml 2100 BBInternational
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EM. RAG20 胶体金标记兔抗羊IgG 20nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. STP2 胶体金标记链霉亲和素2nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. STP5 胶体金标记链霉亲和素5nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. STP10 胶体金标记链霉亲和素10nm 0.25ml 2100 BBInternational
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EM.STP20 胶体金标记链霉亲和素20nm 0.25ml 2100 BBInternational
EM. BSA5  胶体金标记牛血清白蛋白5nm 1ml 3580 BBInternational
EM. BSA10  胶体金标记牛血清白蛋白10nm 1ml 3580 BBInternational
EM. CGC5  胶体金标记阳离子胶体金 5nm 1ml 5080 BBInternational
EM. CGC10 胶体金标记阳离子胶体金 10nm 1ml 5080 BBInternational
EM. CGC15 胶体金标记阳离子胶体金 15nm 1ml 5080 BBInternational
EM. CGC20 胶体金标记阳离子胶体金 20nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GAF10 胶体金标记羊抗小鼠 IgG & IgM 10nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GAG5 胶体金标记羊抗豚鼠IgG 5nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GAG10 胶体金标记羊抗豚鼠IgG 10nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GAM2 胶体金标记羊抗小鼠 IgG Fc (Gamma) Specific 2nm 1ml 5080 BBInternational
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EM. GAR2 胶体金标记羊抗兔IgG 2nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GAR5 胶体金标记羊抗兔IgG 5nm 1ml 5080 BBInternational
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EM. GAT10 胶体金标记羊抗Rat IgG 10nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GFAR5 胶体金标记羊抗兔IgG 5nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GFAR10 胶体金标记羊抗兔IgG 10nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GMHL5 胶体金标记羊抗小鼠 IgG (H+L) 5nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GMHL10 胶体金标记羊抗小鼠 IgG (H+L) 10nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GMHL15 胶体金标记羊抗小鼠 IgG (H+L) 15nm 1ml 5080 BBInternational
EM. GMHL20 胶体金标记羊抗小鼠 IgG (H+L) 20nm 1ml 5080 BBInternational
EM. PAG5 胶体金标记蛋白A 5nm 1ml 5080 BBInternational
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EMSC60 胶体银 60nm 500ML 10340 BBInternational
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GCIKITLIFE 胶体金5nm/10nm/20nm/40nm  20 ml of each 3220 BBInternational
GCIKITDIAG 胶体金20nm/40nm/60nm/80nm  20 ml of each 3220 BBInternational
GCKITDIAGPLUS 胶体金20nm/40nm/60nm/80nm  100 ml of each 9400 BBInternational
EMGC2 胶体金2nm 20ml 1340 BBInternational
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