巨噬细胞去除手册

中文名：体内巨噬细胞清除

产品性状：悬浊液 使用前请先摇一下

产品性质：

1ml脂质体体悬液中所含的氯磷酸大约为5mg。所用的磷酸盐缓冲液为10 mM Na₂HPO₄，10 mM NaH₂PO₄，140 mM NaCl。

脂质体体内注射：

隔日尾静脉注射200μl clodronate liposome，根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化或流式检测巨噬细胞去除效率。

尾静脉注射方法：

（1）将小鼠放在倒扣的饭盒内，从孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉，2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面，3条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉；

（2）将纱布浸泡于约70度的温水中，拿出后包裹尾巴，以达到使尾部血管扩张及软化表皮角质的目的；

（3）行尾部静脉注射时，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出约2cm一段，使皮肤紧张，静脉更为充盈，右手持1ml针头注射器，使针头与静脉平行(小于30°角)，从尾巴的下1/4处进针，开始注入药物时应缓慢，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，可注入药物。

（4）有的实验需连日反复尾静脉注射给药，注射部位应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部移动，更换血管位置注射给药。拔出针头后，用棉球按住注射部位轻压1-2min，止血。

FAQ:

Q:收到Clodronate liposomes后该如何操作？

A:收到氯磷酸脂质体后，如果不能马上使用，需要放置在4℃冰箱。禁止冻存！使用时作为原液使用，不能进行稀释。脂质体很容易发生沉淀，建议使用之前轻轻混匀，另外4℃的氯磷酸脂质体不能马上使用，需要恢复到室温才能进行注射。

Q: Clodronate liposomes能否用于体外巨噬细胞清除？

A:产品可以用于体外巨噬细胞的清除，但是这种方法比较适合体内实验。主要是由于在体外培养过程中，从死亡细胞释放的氯磷酸或者是从脂质体中“渗漏”出来氯磷酸，会一直存在于培养基中，但是在体内，氯磷酸的半衰期很短，很快就会被肾脏清除。虽然游离的氯磷酸不会进入细胞也不会进入脂质体，但是一旦他们在培养基中积累就会慢慢地进入细胞中。

Q:在静脉注射Clodronate liposomes后动物很快就死亡了，是什么原因？

A:一方面有可能是动物注射了不均一的脂质体悬液。建议在使用之前轻轻摇晃混匀。脂质体在体外一段时间后会发生沉降。如果在很长一段时间内需要一次注射多只动物，那么脂质体便会在注射器中发生沉淀，形成不均一悬液，这样一来，*只注射的计量与zui后一只注射的计量就会发生明显的变化。另外一方面有可能是脂质体刚从冰箱取出后，没有恢复到室温。

Q:动物在注射Clodronate liposomes后几天就死亡了？

A：这个可能是受到细菌的污染，体内清除巨噬细胞后会增加例如病毒粒子，细菌或者酵母感染的几率。

Q:静脉注射Clodronate liposomes后大鼠脾脏/肝脏中的ED1+细胞并没有*消失？

A：大鼠中成熟的巨噬细胞呈现ED1和ED2双阳性，但是有一些没有吞噬功能的或者吞噬作用小的前体细胞也是ED1+，但是呈现ED2-。因此，所有ED2+的细胞都可以被*清除，但是ED1+的细胞却只能被部分清除，清除的比率取决于前体/成熟巨噬细胞的比例。

Q: Clodronate liposomes没有达到期望的效果？

A：氯磷酸脂质体都是大批量的生产，每批次都会对氯磷酸的浓度以及一些可能的污染物进行检测，确保无误后才会销售给客户。另外，脂质体容易收到温度的影响。正确的运输和储存方式是4~8℃，悬液既不能被冻存，也不能被加热超过30℃。自收到货物起，需要在3个月内使用完，不然有可能会影响使用的效果。

Q:在静脉注射时，能不能增加注射的体积？

A：静脉注射时需要依据动物的体重，不能超过0.1ml/10mg，但是进行腹腔注射可以适当的增加注射的体积。皮下注射需要根据注射位点的容量进行决定。

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Clophosome-氯弗松（Clodronate Liposomes-氯磷酸二钠脂质体）

本公司系列产品Clophosome（氯弗松）和Clophosome-A（阴离子氯弗松）是目前市场上的巨噬细胞耗竭氯磷酸二钠脂质体。此组产品具有活性高，有效期长，使用方便，无菌五毒等诸多优越性能。该剂型具有高浓度，高包封率，不粘稠，无沉淀，易于注射。尤其是优化后的配方保证此产品即使在冰箱中储存数月后人能保持其高活性和均匀无沉淀状态。我们提供6个月产品质期比其他厂家的同类产品高出至少一倍。该组产品使用于多种给药途径，包括静脉注射，腹腔注射，皮下注射，气管给药和直接注射等等。在单次静脉注射或腹腔注射0.2毫升Clophosome后在24小时起脾脏和肝脏巨噬细胞耗竭可持续一周保持在80%以上。如果每4天注射一次，巨噬细胞耗竭可持续数周之久。我们公司*转型产品，Clophosome-A，除保持了Clophosome所有有点之外更使得单次注射后巨噬细胞耗竭率高达90%以上。极受广大科研用户欢迎。此组产品是免疫学，肿瘤学和其他生物学领域*的科研工具。

上海金畔生物科技有限公司

巨噬细胞去除实验

  去除巨噬细胞是研究巨噬细胞功能的重要方法。巨噬细胞可吞噬 clodronate Liposome， 在溶酶体的作用下，clodronate 可释放出来，当其达到一定浓度时，可引起巨噬细胞的凋亡， 从而去除巨噬细胞。clodronate Liposome 可局部注射去除注射部位临近的巨噬细胞，如肺、 膝关节、肿瘤局部和脑等；也可尾静脉或腹腔注射去除循环途径中的单核巨噬细胞，如肝脏 和脾脏中的巨噬细胞。
1. 脂质体的准备 可以自己制备或者购买商品话的脂质体 荷兰clodronaiposomes和美国Formumax Scientific公司都可以提供现成的商品化的高质量clodronate Liposome 具体信息如下
 
 
货号 品名 包装 价格 品牌   
F70101C-N Clodronate Liposomes 不含对照 去除率85% 2ml 2985 FormuMax   
F70101C-N Clodronate Liposomes 不含对照 去除率85% 10ml 10485 FormuMax   
F70101-N Control Liposomes 对照 2ml 1485 FormuMax   
F70101-N Control Liposomes 对照 10ml 5235 FormuMax   
F70101C-NC Control Liposomes 含对照 去除率85% 2ml 3585 FormuMax   
F70101C-NC Control Liposomes 含对照 去除率85% 10ml 12585 FormuMax   
F70101C-A Clodronate Liposomes 不含对照 去除率95% 2ml 4485 FormuMax   
F70101C-A Clodronate Liposomes 不含对照 去除率95% 10ml 15735 FormuMax   
F70101C-AC Clodronate Liposomes 含对照 去除率95% 2ml 5235 FormuMax   
F70101C-AC Clodronate Liposomes 含对照 去除率95% 10ml 15735 FormuMax   
Clodronate  Clodronate Liposomes and PBS Liposomes per 10ml 10ml 4500 clodronaiposomes 

2. 脂质体的体内注射 隔日尾静脉注射 200ul clodronate liposome，根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化 或流式检测巨噬细胞的去除效率。
尾静脉注射方法： 尾静脉注射方法：
 1. 将小鼠放在倒扣的饭盒内，从孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉，2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面，3 条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉；
2. 将纱布浸泡于约 70 度的温水中，拿出后包裹尾巴，以达到使尾部血管扩张及软化表皮 角质的目的；
3. 行尾部静脉注射时，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出约 2cm 一段，使皮肤紧张， 静脉更为充盈，右手持 1ml 针头注射器，使针头与静脉平行(小于 30°角)，从尾巴的下 1/4 处进针，开始注入药物时应缓慢，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明 已刺入血管，可注入药物。
4. 有的实验需连日反复尾静脉注射给药，注射部位应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部 移动，更换血管位置注射给药。拔出针头后，用棉球按住注射部位轻压 1-2min，止血。

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 去除巨噬细胞是研究巨噬细胞功能的重要方法。巨噬细胞可吞噬clodronate Liposome，在溶酶体的作用下，clodronate可释放出来，当其达到一定浓度时，可引起巨噬细胞的凋亡，从而去除巨噬细胞。clodronate Liposome可局部注射去除注射部位临近的巨噬细胞，如肺、膝关节、肿瘤局部和脑等；也可尾静脉或腹腔注射去除循环途径中的单核巨噬细胞，如肝脏和脾脏中的巨噬细胞。

1.       脂质体的准备

美国的FormuMax Scientific可以提供多种clodronate Liposome 具体产品可以上http://www.liposomeexpert.com查询，他们中国代理商是上海金畔生物科技有限公司

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2.       脂质体的体内注射

隔日尾静脉注射200ul clodronate liposome，根据实验要求制定注射日程。通过免疫组化或流式检测巨噬细胞的去除效率。

尾静脉注射方法：

1.       将小鼠放在倒扣的饭盒内，从孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉，2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面，3条静脉呈品字型分布,一般采用左右两侧的静脉；

2.       将纱布浸泡于约70度的温水中，拿出后包裹尾巴，以达到使尾部血管扩张及软化表皮角质的目的；

3.       行尾部静脉注射时，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出约2cm一段，使皮肤紧张，静脉更为充盈，右手持1ml针头注射器，使针头与静脉平行（小于30°角），从尾巴的下1/4处进针，开始注入药物时应缓慢，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，可注入药物。

有的实验需连日反复尾静脉注射给药，注射部位应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部移动，更换血管位置注射给药。拔出针头后，用棉球按住注射部位轻压1-2min，止血。