arcticzymes尿嘧啶-DNA糖基化酶

发表于2024年9月17日由上海金畔生物科技有限公司

arcticzymes尿嘧啶-DNA糖基化酶

Cod Uracil-DNA Glycosylase

鳕鱼尿嘧啶-DNA糖基化酶

来自Atlantic Cod的Cod Uracil-DNA糖基化酶（Cod UNG）是仅有可商购的UNG酶，其通过适度热处理*且不可逆地灭活。该酶在含有修饰的Cod UNG基因的重组大肠杆菌（ung-）菌株中产生。

Cod UNG酶的主要优点

热不稳定
在55°C时*不可逆地灭活
使用Cod UNG可在RT-PCR中实现污染控制
PCR后不会降解PCR产物。这使得PCR产物的下游使用成为可能
高纯度酶，无污染核酸酶测试

Product information	Article no.	Notes	Price
Cod UNG – Pack size: 100 U quantity	Pack size: 100 UConc.: 1U/µl	#70500-201	€92
Cod UNG Triton FREE – Pack size: 100 U quantity	Triton FREE Pack size: 100 UConc.: 1U/µl	#70501-201	€92
Cod UNG – Pack size: 1000 U quantity	Pack size: 1000 UConc.: 1U/µl	#70500-202	€390
Cod UNG Triton FREE – Pack size: 1000 U quantity	Triton FREE Pack size: 1000 UConc.: 1U/µl	#70501-202	€390
N/A	Pack size: 50 kUConc.: 50U/µl	#70500-150	REQUEST QUOTE
N/A	Pack size: 50 kUConc.: 1U/µl	#70500-151	REQUEST QUOTE
N/A	Glycerol-free Pack size: 5000 UConc.: 50U/µl	#70510-105	REQUEST QUOTE
N/A	Glycerol-free Pack size: 50 kUConc.: 50U/µl	#70510-150	REQUEST QUOTE
N/A	Pack size: 200 kUConc.: 50U/µl	#70500-160	REQUEST QUOTE

PCR携带预防

关于PCR预防的一般信息

PCR的高灵敏度，特别是qPCR，使得该方法易于污染，产生错误或不准确的结果。来自先前PCR的携带污染物被认为是假阳性结果的主要来源之一。由于气溶胶，污染移液管，表面，手套和试剂，污染物可能从先前的扩增反应中带走。

在扩增DNA和RNA时，有两种常见的策略可以防止污染物。一个是设置一个单独的实验室进行设置和放大，大限度地减少移液步骤的数量，并防止扩增后管子打开。然而，由于实际原因，这并不总是可行的。此外，它无法保证避免污染。

防止污染的另一种常见的策略是在PCR扩增期间用dUTP部分或*替代dTTP，从而产生含有尿嘧啶的DNA。在开始PCR之前，用尿嘧啶-DNA糖基化酶（UNG）处理PCR混合物。在初的变性步骤期间，温度升高至95℃，导致脱嘧啶位点的裂解和携带DNA的片段化。由于模板含有胸苷，因此不受UNG处理的影响。所有PCR都是用dUTP替代dTTP进行的先决条件。

使用我们的Cod UNG的好处是它在55˚C时不可逆转地灭活。Cod UNG是仅有兼容一步式RT-qPCR的UNG！

RT-qPCR中的PCR预防

Cod UNG是仅有兼容一步式RT-qPCR的UNG

在逆转录酶qPCR（RT-qPCR）中，RNA是初始模板。然而，污染物的问题在这里可能与常规PCR一样多。逆转录后，cDNA是PCR的模板。如果您的样品被先前PCR的PCR产物污染，则引物无法区分cDNA和DNA，从而导致错误结果。

在一步法RT-qPCR试剂盒中，将RNA加入含有逆转录酶和聚合酶的主混合物中，使cDNA合成和qPCR在同一试管中。 大肠杆菌 UNG / UDG的宜工作温度可达约。50˚C并且通常保持其活性达到约。70℃。该温度范围与一步法RT-qPCR方案中的残留预防不相容，因为 大肠杆菌 UNG / UDG将在逆转录期间去除掺入cDNA中的尿嘧啶，从而导致模板降解。

来自ArcticZymes的重组表达的Cod UNG初是从冷适应生物大西洋鳕鱼中分离的。Cod UNG在20˚C至40˚C的温度范围内具有高活性，在温度高于42˚C时会迅速失去活性，并且在55˚C时已经不可逆转地失活。由于Cod UNG的宜温度范围与大肠杆菌相比要低得多 UNG / UDG，Cod UNG兼容单管RT-qPCR。通过添加Cod UNG至终浓度0.01U /μl简单地进行残留预防，并在开始RT-qPCR之前在25℃引入5分钟的孵育步骤。或者，可以将浓度增加至0.04U /μl并省略预孵育步骤。Cod UNG将有效去除样品设置和循环仪升温过程中的残留污染。

在这里，我们显示Cod UNG可用于在含有dUTP而非dTTP的商业一步法RT-qPCR主混合物中进行残留物预防。用Cod UNG处理不影响靶cDNA，产生与未处理样品相同的Cq值。为了比较，用通用UNG处理导致显着的Cq延迟，证明与一步RT-qPCR不相容。

Cod UNG与一步式RT-qPCR兼容

图1. Cod UNG与一步法RT-qPCR中的通用UNG相比较。进行一步RT-qPCR，将Cod UNG和通用UNG与未处理的对照进行比较。用Cod UNG处理不影响靶cDNA，产生与未处理样品相同的Cq值。用通用UNG处理导致显着的Cq延迟，证明与一步RT-qPCR不相容。

Cod UNG有效去除残留的扩增子

图2. Cod UNG有效去除DNA。在进行一步RT-qPCR之前，将含有尿嘧啶的DNA的加标引入RNA样品中。没有引入预孵育步骤。用Cod UNG治疗成功地将加标的扩增子移除至检测限以下。

热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白，又称南极热敏UDG。该热敏UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶，产生的缺嘧啶位点，在高温或高 pH 下，极易水解断裂。该酶对RNA无活性，主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热，经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性，导致含有dU碱基的PCR产物的降解。而来源于嗜冷海洋细菌的热敏UDG在50℃ 5min即*失活，在进行PCR扩增前，在PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶（热敏性），25℃10min即可消除PCR产物的残留污染，由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶（热敏性）在PCR循环的94℃变性一步便可被灭活，因此不会影响新的含dU的PCR产物。

应用
去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基去除 PCR 残存污染
活性定义
在标准反应体系下，37°C每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量为一个活性单位。
反应buffer
Heatlabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的，但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。
酶保存液
20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
储存
-20℃可保存2年，避免反复冻融。
热失活
50℃，10min。

UDG(尿嘧啶-DNA糖基化酶) Uracil DNA Glycosylase

发表于2024年8月2日由上海金畔生物科技有限公司

UDG(尿嘧啶-DNA糖基化酶) Uracil DNA Glycosylase

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

UDG（尿嘧啶-DNA 糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
		14001ES60 (100 U)	14001ES76 (500 U)
14001	Uracil DNA Glycosylase (UDG), (1 U/μL)	100 μL	500 μL

产品应用

1.去除含dU的PCR产物气溶胶污染。

2.去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。

酶活定义

以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位(U)。

失活方式

95℃，5-10 min。

运输储存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期6个月。

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用实例

1. 按下列组份配制PCR反应液：

试剂	体积
10×PCR Buffer (Mg²⁺ Plus)	5 μL
25 mmol/L MgCl₂	3 μL
dUTP	0.6 mmol/L
dCTP / dGTP/ dATP	0.2 mmol/L each
模板DNA	Optional
引物1 (10 μmol/L)	2 μL
引物2 (10 μmol/L)	2 μL
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5 μL
UDG (1 U/μL)	1 μL
ddH₂O	To 50 μL

【注】：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mmol/L之间调整。可选择性掺入0.2 mmol/L dTTP。

2. PCR反应：

反应温度	反应时间	循环数	目的
25℃	10 min	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板预变性
95℃	10 sec	30-35	变性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec/kb		延伸
72℃	5 min	1	终延伸

【注】：25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。

HB221013

UDG（尿嘧啶-DNA 糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。

产品组分

编号	组分	产品编号/规格
		14001ES60 (100 U)	14001ES76 (500 U)
14001	Uracil DNA Glycosylase (UDG), (1 U/μL)	100 μL	500 μL

产品应用

1.去除含dU的PCR产物气溶胶污染。

2.去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。

酶活定义

以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位(U)。

失活方式

95℃，5-10 min。

运输储存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期6个月。

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用实例

1. 按下列组份配制PCR反应液：

试剂	体积
10×PCR Buffer (Mg²⁺ Plus)	5 μL
25 mmol/L MgCl₂	3 μL
dUTP	0.6 mmol/L
dCTP / dGTP/ dATP	0.2 mmol/L each
模板DNA	Optional
引物1 (10 μmol/L)	2 μL
引物2 (10 μmol/L)	2 μL
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5 μL
UDG (1 U/μL)	1 μL
ddH₂O	To 50 μL

【注】：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mmol/L之间调整。可选择性掺入0.2 mmol/L dTTP。

2. PCR反应：

反应温度	反应时间	循环数	目的
25℃	10 min	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板预变性
95℃	10 sec	30-35	变性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec/kb		延伸
72℃	5 min	1	终延伸

【注】：25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。

HB221013

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5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EDU)|5-ethynyl-2’-deoxyuridine(EDU)

发表于2024年7月28日由上海金畔生物科技有限公司

5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EDU)|5-ethynyl-2’-deoxyuridine(EDU)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

EdU可用于动物活体注射，对生物体无明显副作用且稳定性较好，可将目标组织制备为石蜡或冰冻组织切片后检测；EDU也适用于体外培养的细胞增殖检测，适用于小鼠，大鼠及其他动物模型的各种组织器官(血管除外)的EdU细胞增殖检测。

与BrdU检测方法相比，其化学反应检测方法反应快，效率高，反应时间仅需几分钟，无需DNA变性、蛋白酶处理、抗原抗体过夜孵育，能够更好地保护细胞形态，更简单、灵敏、快速、准确。EdU检测方法用量更少，只需十分之一的用量即可获得与BrdU检测试剂盒相同甚至更好的检测结果。

产品性质

中文别名（Chinese Synonym）	5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷
英文别名（English Synonym）	EdU;5-E-dU;Uridine,2;Aids072372;Aids-072372;5-Ethynyl-durd;5-Ethynyl-2'-dU;2'deoxyuridine, 5-ethynyl
CAS号（CAS NO.）	61135-33-9
分子式（Formula）	C₁₁H₁₂N₂O₅
分子量（Molecular Weight）	252.23
外观（Appearance）	粉末
熔点（Melting Point）	199 ℃
溶解性（Solubility）	溶于水
结构式（Structure）

运输和保存方法

冰袋运输。粉末在-20 ℃避光保存，1年有效。配置成溶液，–80 ℃避光保存，6个月有效；–20 ℃避光保存，1个月有效。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）该品对皮肤有不可逆损伤的可能性。使用时应穿防护服和戴手套。应避免吸入本品的粉尘。

3）本产品仅作科研用途！

操作步骤

1、EDU储存液配置（浓度:10 mM）

取5 mg的EdU粉末，加入到1.98 mL的蒸馏水中，涡旋震荡，充分混匀，此时浓度为10 mM（或者2.5 mg/mL）。然后分装保存在-20 ℃冰箱中，可稳定保存1个月。

2、EdU标记细胞

注意：EdU的标记浓度应根据所用的细胞类型做相应的优化选择，推荐客户以10 μM的EdU初始浓度进行摸索。细胞培养基、细胞生长密度及细胞类型和其他实验条件都有可能影响细胞的标记效果。预实验中我们建议客户设置一系列的EdU浓度梯度，以确定最佳的合适您的细胞的实验浓度。

2.1 以每孔4×10³~1×10⁵细胞接种于96孔板中，进行您所需要的药物处理或者其他刺激处理。

2.2 准备一份2×的EdU工作液：以完全培养基稀释10 mM的储液至合适的工作浓度。建议您以10 μM的初始工作浓度开始预实验。

2.3 预热2×的EdU工作液，加入等体积的培养基，使浓度变为1×(如：需要得到10 μM的终浓度，应以新鲜培养基等体积加入到20 μM的EdU工作液中)。

2.4 合适时间合适条件孵育细胞，EdU孵育细胞的时间可以直接用作测定细胞DNA合成的指标，时间点选择以及孵育时间的长度取决于细胞生长速率。通过短暂的EdU孵育进行的脉冲式标记细胞可以用于研究细胞周期动力学。

3、EdU检测

EdU检测需用到Yefluor 647 EdU Flow Cytometry Assay kit（货号：40277ES）、Yefluor 488 EdU Flow Cytometry Assay kit （货号：40278ES）等染色试剂盒，进行EDU检测。操作步骤请参考相关说明书。

活体标记

若要将EdU注射到小鼠等动物体内，进行荧光标记。建议EdU初始给药量为5mg/kg，稀释浓度为0.5~1 mg/mL。

表1: EdU注射液配置参考

EdU	0.1 mg	1 mg	2 mg	10 mg	50 mg	500 mg
PBS	100 μL	1 mL	2 mL	10 mL	50 mL	500 mL

注：1)可采用PBS或生理盐水稀释；
2)注射时可将EdU注射液进一步稀释，不会影响EdU的稳定性。

相关产品

产品名称	产品编号	规格
YF^®488 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（绿色荧光）	40278ES25	20 T
YF^®488 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（绿色荧光）	40278ES50	50 T
YF^®594 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（红色荧光）	40279ES25	20 T
YF^®594 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（红色荧光）	40279ES50	50 T
YF®647A Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（远红外色荧光）	40280ES25	20 T
YF®647A Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（远红外色荧光）	40280ES50	50 T
5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine (EdU) 5‐乙炔基‐2′脱氧尿嘧啶核苷	40284ES50	50 mg
	40284ES60	100 mg
	40284ES76	500 mg

HB210207

产品性质

中文别名（Chinese Synonym）	5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷
英文别名（English Synonym）	EdU;5-E-dU;Uridine,2;Aids072372;Aids-072372;5-Ethynyl-durd;5-Ethynyl-2'-dU;2'deoxyuridine, 5-ethynyl
CAS号（CAS NO.）	61135-33-9
分子式（Formula）	C₁₁H₁₂N₂O₅
分子量（Molecular Weight）	252.23
外观（Appearance）	粉末
熔点（Melting Point）	199 ℃
溶解性（Solubility）	溶于水
结构式（Structure）

运输和保存方法

冰袋运输。粉末在-20 ℃避光保存，1年有效。配置成溶液，–80 ℃避光保存，6个月有效；–20 ℃避光保存，1个月有效。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）该品对皮肤有不可逆损伤的可能性。使用时应穿防护服和戴手套。应避免吸入本品的粉尘。

3）本产品仅作科研用途！

操作步骤

1、EDU储存液配置（浓度:10 mM）

取5 mg的EdU粉末，加入到1.98 mL的蒸馏水中，涡旋震荡，充分混匀，此时浓度为10 mM（或者2.5 mg/mL）。然后分装保存在-20 ℃冰箱中，可稳定保存1个月。

2、EdU标记细胞

2.1 以每孔4×10³~1×10⁵细胞接种于96孔板中，进行您所需要的药物处理或者其他刺激处理。

2.2 准备一份2×的EdU工作液：以完全培养基稀释10 mM的储液至合适的工作浓度。建议您以10 μM的初始工作浓度开始预实验。

2.3 预热2×的EdU工作液，加入等体积的培养基，使浓度变为1×(如：需要得到10 μM的终浓度，应以新鲜培养基等体积加入到20 μM的EdU工作液中)。

3、EdU检测

活体标记

若要将EdU注射到小鼠等动物体内，进行荧光标记。建议EdU初始给药量为5mg/kg，稀释浓度为0.5~1 mg/mL。

表1: EdU注射液配置参考

EdU	0.1 mg	1 mg	2 mg	10 mg	50 mg	500 mg
PBS	100 μL	1 mL	2 mL	10 mL	50 mL	500 mL

注：1)可采用PBS或生理盐水稀释；
2)注射时可将EdU注射液进一步稀释，不会影响EdU的稳定性。

相关产品

产品名称	产品编号	规格
YF^®488 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（绿色荧光）	40278ES25	20 T
YF^®488 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（绿色荧光）	40278ES50	50 T
YF^®594 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（红色荧光）	40279ES25	20 T
YF^®594 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（红色荧光）	40279ES50	50 T
YF®647A Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（远红外色荧光）	40280ES25	20 T
YF®647A Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（远红外色荧光）	40280ES50	50 T
5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine (EdU) 5‐乙炔基‐2′脱氧尿嘧啶核苷	40284ES50	50 mg
	40284ES60	100 mg
	40284ES76	500 mg

HB210207

Q:EDU 储存液配置好以后可储存吗？

A:分装保存在-20 ℃冰箱中，可稳定保存 1 个月。

Q:EDU 注射液可以进一步稀释吗？有什么稀释比较好？

A:注射时可将EdU 注射液进一步稀释，可采用 PBS 或生理盐水稀释，不会影响 EdU 的稳定性。

[1] Huo Y, Yang J, Zheng J, et al. Increased SPON1 promotes pancreatic ductal adenocarcinoma progression by enhancing IL-6 trans-signalling. Cell Prolif. 2022;55(5):e13237. doi:10.1111/cpr.13237(IF:6.831)
[2] Liang Z, Liang Q, Zhang W, Zheng L, Shen X, Zhang Y. Promotional effects of HIF1α and KDM3A interaction on vascular smooth muscle cells in thoracic aortic dissection. Epigenomics. 2022;14(5):227-241. doi:10.2217/epi-2021-0147(IF:4.778)
[3] Peng S, Chen L, Yuan Z, Duan S. Suppression of MIR31HG affects the functional properties of thyroid cancer cells depending on the miR-761/MAPK1 axis. BMC Endocr Disord. 2022;22(1):107. Published 2022 Apr 20. doi:10.1186/s12902-022-00962-3(IF:2.763)

Uracil尿嘧啶(2,4-二羟基嘧啶) RNA碱基|CAS 66-22-8

发表于2024年7月16日由上海金畔生物科技有限公司

Uracil尿嘧啶(2,4-二羟基嘧啶) RNA碱基|CAS 66-22-8

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

尿嘧啶是组成RNA的四种碱基之一，是RNA特有的碱基，简写U。在DNA的转录时，取代 DNA 中的胸腺嘧啶，与腺嘌呤配对，将尿嘧啶甲基化即得胸腺嘧啶（T）。RNA与DNA之间的主要差异是糖成分的不同，RNA含有尿嘧啶，DNA含胸腺嘧啶。

产品性质

中文别名（Chinese Synonym）	2,4(1H,3H)-嘧啶二酮，2,4-二羟基嘧啶
英文别名（English Synonym）	2,4-Dihydroxypyrimidine
CAS 号（CAS NO.）	66-22-8
分子式（Molecular Formula）	C₄H₄N₂O₂
分子量（Molecular Weight）	112.09g/mol
外观（Appearance）	白色针状结晶
溶解性（Solubility）	易溶于热水，溶于碱溶液
纯度（Purity）	>98%
结构式（Structure）

运输与保存方法

产品室温保存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

相关产品

产品名称	货号	规格
Adenine 腺嘌呤	60601JP25/60	25 g/100 g
Adenine Hemisulfate Salt 硫酸腺嘌呤	60602JP25/60	25 g/100 g
Adenosine 5'-monophosphate(AMP) Disodium Salt 5’-单磷酸腺苷二钠盐	60603JP08/25	5 g/25 g
Adenosine 5'-diphosphate(ADP) Disodium Salt 5’-二磷酸腺苷二钠盐	60604JP03/08	1 g/5 g
Adenosine 5'-triphosphate(ATP）Disodium Salt 5’-三磷酸腺苷（ATP）二钠盐	60605JP03/08	1 g/5 g
Cytosine 胞嘧啶	60606JP25/60	25 g/100 g
Cytidine 胞嘧啶核苷	60607JP25/60	25 g/100 g
D-Ribose D-核糖	60608JP50/60	50 g/100 g
2'-C-Methylcytidine 2'-C-甲基胞嘧啶核苷	60610JP08/25/60	5 mg/25mg/100 mg
2-Deoxy-D-ribose 2-脱氧-D-核糖	60611JP08/25/60	5 g/25 g/100 g

HB181126

产品性质

中文别名（Chinese Synonym）	2,4(1H,3H)-嘧啶二酮，2,4-二羟基嘧啶
英文别名（English Synonym）	2,4-Dihydroxypyrimidine
CAS 号（CAS NO.）	66-22-8
分子式（Molecular Formula）	C₄H₄N₂O₂
分子量（Molecular Weight）	112.09g/mol
外观（Appearance）	白色针状结晶
溶解性（Solubility）	易溶于热水，溶于碱溶液
纯度（Purity）	>98%
结构式（Structure）

运输与保存方法

产品室温保存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

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产品名称	货号	规格
Adenine 腺嘌呤	60601JP25/60	25 g/100 g
Adenine Hemisulfate Salt 硫酸腺嘌呤	60602JP25/60	25 g/100 g
Adenosine 5'-monophosphate(AMP) Disodium Salt 5’-单磷酸腺苷二钠盐	60603JP08/25	5 g/25 g
Adenosine 5'-diphosphate(ADP) Disodium Salt 5’-二磷酸腺苷二钠盐	60604JP03/08	1 g/5 g
Adenosine 5'-triphosphate(ATP）Disodium Salt 5’-三磷酸腺苷（ATP）二钠盐	60605JP03/08	1 g/5 g
Cytosine 胞嘧啶	60606JP25/60	25 g/100 g
Cytidine 胞嘧啶核苷	60607JP25/60	25 g/100 g
D-Ribose D-核糖	60608JP50/60	50 g/100 g
2'-C-Methylcytidine 2'-C-甲基胞嘧啶核苷	60610JP08/25/60	5 mg/25mg/100 mg
2-Deoxy-D-ribose 2-脱氧-D-核糖	60611JP08/25/60	5 g/25 g/100 g

HB181126

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UCF.ME®热敏UDG(尿嘧啶-DNA糖基化酶) Uracil DNA Glycosylase,1 U/μL

发表于2024年7月1日由上海金畔生物科技有限公司

UCF.ME®热敏UDG(尿嘧啶-DNA糖基化酶) Uracil DNA Glycosylase,1 U/μL

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已发表文献

热敏UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶碱基与糖磷酸骨架间的N-糖苷键，释放游离的尿嘧啶。与普通UDG酶相比，热敏UDG可以避免常规UDG酶灭活后残留活性对含dU扩增产物的降解作用。本产品对温度敏感，55℃孵育5min或50℃孵育10min处理可完全失活。另外，UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile经过金畔生物UCF.ME®超低残留工艺处理，大肠宿主DNA残留极低，适合对病原微生物检测等领域的需求。

产品信息

货号	14466ES60 / 14466ES76 / 14466ES96
规格	100 U / 500 U / 10,000 U
活性定义	以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位（U）

组分信息

产品名称	14466ES60	14466ES76	14466ES96
UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL	100 μL	500 μL	10 mL

储存条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

使用说明

反应体系

组分	体积 (μL)	终浓度
10×PCR Buffer (Mg²⁺ Plus)	5	1×
25 mM MgCl₂	3	1.5 mM
dUTP (10 mM)	3*	0.6 mM
dCTP / dGTP/ dATP/ dTTP (10 mM each)	1	0.2 mM each
模板DNA	Optional	–
引物1 (10 μM)	2	0.4 μM
引物2 (10 μM)	2	0.4 μM
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5	0.05 U/μL
UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL	1	1 U/50 μL
ddH₂O	Up to 50

*根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mM 之间调整。可选择性掺入0.2 mM dTTP。

PCR反应：

反应温度	反应时间	循环数	目的
25℃	10 min*	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板预变性
95℃	10 sec	30-35	变性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec/kb		延伸
72℃	5 min	1	终延伸

*25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整

注意事项

1. 热敏UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性；

2. 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存；

3. 本产品仅做科研用途；

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Ver.CN20230601

产品信息

货号	14466ES60 / 14466ES76 / 14466ES96
规格	100 U / 500 U / 10,000 U
活性定义	以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位（U）

组分信息

产品名称	14466ES60	14466ES76	14466ES96
UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL	100 μL	500 μL	10 mL

储存条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

使用说明

反应体系

组分	体积 (μL)	终浓度
10×PCR Buffer (Mg²⁺ Plus)	5	1×
25 mM MgCl₂	3	1.5 mM
dUTP (10 mM)	3*	0.6 mM
dCTP / dGTP/ dATP/ dTTP (10 mM each)	1	0.2 mM each
模板DNA	Optional	–
引物1 (10 μM)	2	0.4 μM
引物2 (10 μM)	2	0.4 μM
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5	0.05 U/μL
UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL	1	1 U/50 μL
ddH₂O	Up to 50

*根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mM 之间调整。可选择性掺入0.2 mM dTTP。

PCR反应：

反应温度	反应时间	循环数	目的
25℃	10 min*	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板预变性
95℃	10 sec	30-35	变性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec/kb		延伸
72℃	5 min	1	终延伸

*25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整

注意事项

1. 热敏UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性；

2. 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存；

3. 本产品仅做科研用途；

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Ver.CN20230601

UCF.ME®热敏UDG(尿嘧啶-DNA糖基化酶) Uracil DNA Glycosylase,1 U/μL

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Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL) USER酶尿嘧啶特异性切除试剂

发表于2024年5月28日由上海金畔生物科技有限公司

Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL) USER酶尿嘧啶特异性切除试剂

产品说明书

FAQ

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已发表文献

Uracil-Specific Excision Reagent酶是尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)和DNA糖基化酶-裂解酶(Endo VIII)的混合酶，能在尿嘧啶位置产生单个核苷酸的缺口。UDG催化尿嘧啶碱基的切割，形成一个AP位点（脱碱基嘧啶位点），但保持磷酸二酯骨架结构完整。Endo VIII的裂解酶活力使脱碱基位点3′和5′端的磷酸二酯键断裂，释放无碱基的脱氧核糖。

产品信息

货号	14537ES50/14537ES72
规格	50 U/250 U
酶活	1 U/μL
失活条件	75℃孵育10min

组分信息

组分编号	组分名称	14537ES50	14537ES72
14537-A	Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL)	50 μL	250 μL
14537-B	10×Uracil-Specific Excision Reagent Reaction Buffer	1.25 mL	1.25 mL

储存条件

-85~-65℃保存，有效期1年。

使用说明

1) 反应体系：

组分	体积（μL）
10 ×Uracil-Specific Excision Reagent Reaction Buffer	2
dsDNA	X (10 pmol)
Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL)	1
ddH₂O	To 20

2) 反应条件：充分混匀，37℃反应30~60 min。

注意事项

1. 本产品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途。

Ver.CN20230915

产品信息

货号	14537ES50/14537ES72
规格	50 U/250 U
酶活	1 U/μL
失活条件	75℃孵育10min

组分信息

组分编号	组分名称	14537ES50	14537ES72
14537-A	Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL)	50 μL	250 μL
14537-B	10×Uracil-Specific Excision Reagent Reaction Buffer	1.25 mL	1.25 mL

储存条件

-85~-65℃保存，有效期1年。

使用说明

1) 反应体系：

组分	体积（μL）
10 ×Uracil-Specific Excision Reagent Reaction Buffer	2
dsDNA	X (10 pmol)
Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL)	1
ddH₂O	To 20

2) 反应条件：充分混匀，37℃反应30~60 min。

注意事项

1. 本产品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途。

Ver.CN20230915

Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL) USER酶尿嘧啶特异性切除试剂

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5-溴脱氧尿嘧啶核苷 Brdu溴化去氧尿苷|5-BrdU

发表于2024年3月22日由上海金畔生物科技有限公司

5-溴脱氧尿嘧啶核苷 Brdu溴化去氧尿苷|5-BrdU

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已发表文献

产品描述

目前常用的细胞增殖标记物有4种，DNA聚合酶α（DNA polymerase α），增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA），Ki-67和5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）。其中Brdu为组织细胞非内源性表达存在，应用相对较广。Brdu，也称为溴化去氧尿苷，一种合成的胸苷类似物，在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA中。从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂，凋亡等行为。在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载，然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记，ICC或IHC法染色法显示增殖细胞。另外，还能同时结合其它细胞标记物，双重染色，来判断增殖细胞的种类，增殖速度等，对研究细胞动力学有着重要意义。

产品性质

中文别名（Chinese Synonym）	5-溴-1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖)尿嘧啶；5-溴脱氧尿苷；溴化去氧尿苷；
英文别名（English Synonym）	Br-dU; BUdR; 5-BrdU; 5-Bromodeoxyuridine;
CAS号（CAS NO.）	59-14-3
分子式（Formula）	C₉H₁₁BrN₂O₅
分子量（Molecular Weight）	307.10
外观（Appearance）	白色或类白色粉末
熔点（Melting Point）	187-189℃
纯度（Purity, HPLC）	≥99%
溶解性（Solubility）	溶于1M 氢氧化铵（50 mg/mL），水（高达10 mg/mL）；溶于DMF，DMSO，水（加热）（50-100 mg/mL）
结构式（Structure）

运输和保存方法

冰袋运输。-25~-15℃干燥保存，有效期2年。

操作步骤

1. Brdu储存液的准备用1X DPBS充分溶解适量的Brdu配置10 mg/mL的母液，过滤除菌后，按照0.5 mL/管的量分装放在-20°C或者-80°C长期保存，避免反复冻融。Brdu储存液再融化后，4°C可稳定存放一周。

2. 体内Brdu标记

1）腹腔注射法（常用）：无菌的10 mg/mL（溶于DPBS）适合用于体内注射用。按照100-200 μL（1-2 mg） Brdu的量腹腔注射到小鼠体内。注意：最短在注射后0.5 h后在小肠，胸腺和骨髓瘤处就能检测到Brdu。而一般在注射后24 h内几乎所有组织都能检测到Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。

2）根据自身的实验体系，在合适的时间点处死动物，摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的IHC染色步骤。

3. 体外Brdu标记（培养原代细胞或者细胞系）

注：总的来说，10 μM Brdu（稀释于培养液）是一个比较合适的方法用来标记不同物种来源的原代细胞或细胞系。当然，建议针对具体的实验体系优化方法。

1）在96孔板上按标准步骤进行细胞培养，培养时间一般为1-72 h；

2）Brdu工作液的准备：用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 μL 1 mM Brdu溶液直接加入1 mL组织培养液即得到最终工作液。37°C温热。

3）按100 μL/孔Brdu工作液的量进行细胞标记，37°C孵育60 min~过夜。同时设置非Brdu标记的细胞作为阴性对照。注意：最佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如，对于快速增殖细胞（如HL-60）有效孵育时间为30-45 min；对于原代细胞（如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞）孵育时间可能需要24 h。细胞密度最好不要超过2×10⁶ cells/mL。

4）制备单细胞层玻片，使用以下任何一种方法：

a. 细胞离心涂片（cytospin）制备：使用细胞离心涂片机，将100 μL标记好的细胞（浓度为：1-2 x10⁶ cells/mL）直接离心到干净，无脂肪，poly-L-lysin包被的玻片上，风干。

b. 细胞涂片（cell-smear）制备：取一小滴标记好的细胞悬液于干净，无脂肪，poly-L-lysin包被玻片的一端，然后用第二个干净玻片将其均匀涂布成一薄层。室温风干。

5）将玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下固定20-30 min（也可选择4%多聚甲醛固定15min）。

6）PBS清洗细胞3次，每次5 min。

7）加入2M HCl中室温孵育30 min-60min。注意：DNA的变性对于Brdu染色的成功至关重要。

8）吸去HCl，PBS清洗2次，每次5 min。

9）用0.1M Na2B4O7 （等体积步骤7）2M HCl的量）室温浸泡15min，PBS浸洗玻片3次，每次10min （适当延长时间和加大体积，完全洗净）；

10）吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

11）吸水纸吸掉封闭液，勿清洗，滴加足量稀释好的一抗，并放入湿盒中，4℃孵育过夜；PBS清洗3次，每次5 min；

12）加入稀释好的荧光二抗，湿盒室温孵育1h；PBS清洗3次，每次5 min；

13）核复染：滴加DAPI，避光孵育5min-10min，PBS清洗3次，每次5 min；

14）用吸水纸吸干多余液体，用抗淬灭封片剂封片，于荧光显微镜下观察拍照

4. 体外Brdu标记（组织薄片）

1）Brdu工作液的准备：用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1 mM Brdu工作液。然后取10 -20 μL 1 mM Brdu溶液直接加入1 mL组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液（37°C温热）完全浸泡组织。

2）用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约1 mm厚，2 mm²大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片，利于维持组织的活力。

3）转移组织薄片至预装有10 mL Brdu标记液的15 mL离心管内。于37°，CO₂ 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变，取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的（常用的为2-4 h）。直接丢弃未用完的标记液。

4）37°C PBS清洗组织薄片，每次5 min。

5）使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）该品对肌体有不可逆损伤的可能性。使用时应穿防护服和戴手套。应避免吸入本品的粉尘。

3）本产品仅作科研用途！

HB230216

产品描述

产品性质

中文别名（Chinese Synonym）	5-溴-1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖)尿嘧啶；5-溴脱氧尿苷；溴化去氧尿苷；
英文别名（English Synonym）	Br-dU; BUdR; 5-BrdU; 5-Bromodeoxyuridine;
CAS号（CAS NO.）	59-14-3
分子式（Formula）	C₉H₁₁BrN₂O₅
分子量（Molecular Weight）	307.10
外观（Appearance）	白色或类白色粉末
熔点（Melting Point）	187-189℃
纯度（Purity, HPLC）	≥99%
溶解性（Solubility）	溶于1M 氢氧化铵（50 mg/mL），水（高达10 mg/mL）；溶于DMF，DMSO，水（加热）（50-100 mg/mL）
结构式（Structure）

运输和保存方法

冰袋运输。-25~-15℃干燥保存，有效期2年。

操作步骤

2. 体内Brdu标记

3. 体外Brdu标记（培养原代细胞或者细胞系）

1）在96孔板上按标准步骤进行细胞培养，培养时间一般为1-72 h；

4）制备单细胞层玻片，使用以下任何一种方法：

5）将玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下固定20-30 min（也可选择4%多聚甲醛固定15min）。

6）PBS清洗细胞3次，每次5 min。

7）加入2M HCl中室温孵育30 min-60min。注意：DNA的变性对于Brdu染色的成功至关重要。

8）吸去HCl，PBS清洗2次，每次5 min。

9）用0.1M Na2B4O7 （等体积步骤7）2M HCl的量）室温浸泡15min，PBS浸洗玻片3次，每次10min （适当延长时间和加大体积，完全洗净）；

10）吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

11）吸水纸吸掉封闭液，勿清洗，滴加足量稀释好的一抗，并放入湿盒中，4℃孵育过夜；PBS清洗3次，每次5 min；

12）加入稀释好的荧光二抗，湿盒室温孵育1h；PBS清洗3次，每次5 min；

13）核复染：滴加DAPI，避光孵育5min-10min，PBS清洗3次，每次5 min；

14）用吸水纸吸干多余液体，用抗淬灭封片剂封片，于荧光显微镜下观察拍照

4. 体外Brdu标记（组织薄片）

2）用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约1 mm厚，2 mm²大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片，利于维持组织的活力。

4）37°C PBS清洗组织薄片，每次5 min。

5）使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）该品对肌体有不可逆损伤的可能性。使用时应穿防护服和戴手套。应避免吸入本品的粉尘。

3）本产品仅作科研用途！

HB230216

Q:这个 BrdU 怎么用，需要 37℃加热吗？

A:需要 37℃加热

Q:冰冻切片的 BrdU 染色，不出结果，满片子都是非特异染色，胞浆着色？

A:可能是灌注时没有灌干净，红细胞留在组织里，最后就是掌握显色时间。

Q：用于动物和细胞上，然后一抗二抗染色无荧光信号？

A：封闭前需要使用2N盐酸处理1h，然后洗去盐酸，再加入等量的0.1M Na2B4O7 室温浸泡15min，洗去四硼酸钠。目的是：2N盐酸可以使DNA双链变性解开，暴露存在DNA双链中的抗原，即充分暴露BRDU； Na2B4O7 中和盐酸的酸化，若不进行中和会引起后期抗体效价下降，从而导致染色结果不好或者染不出来。

[1] Wang X, Wang HY, Hu GS, et al. DDB1 binds histone reader BRWD3 to activate the transcriptional cascade in adipogenesis and promote onset of obesity. Cell Rep. 2021;35(12):109281. doi:10.1016/j.celrep.2021.109281(IF:9.423)
[2] Cao Z, Xiao Q, Dai X, et al. circHIPK2-mediated σ-1R promotes endoplasmic reticulum stress in human pulmonary fibroblasts exposed to silica. Cell Death Dis. 2017;8(12):3212. Published 2017 Dec 13. doi:10.1038/s41419-017-0017-4(IF:5.965)
[3] Zhao SJ, Shen YF, Li Q, et al. SLIT2/ROBO1 axis contributes to the Warburg effect in osteosarcoma through activation of SRC/ERK/c-MYC/PFKFB2 pathway. Cell Death Dis. 2018;9(3):390. Published 2018 Mar 9. doi:10.1038/s41419-018-0419-y(IF:5.638)
[4] Chen L, Luo W, Zhang W, et al. circDLPAG4/HECTD1 mediates ischaemia/reperfusion injury in endothelial cells via ER stress. RNA Biol. 2020;17(2):240-253. doi:10.1080/15476286.2019.1676114(IF:5.477)
[5] Chu H, Wang W, Luo W, et al. CircHECTD1 mediates pulmonary fibroblast activation via HECTD1. Ther Adv Chronic Dis. 2019;10:2040622319891558. Published 2019 Nov 27. doi:10.1177/2040622319891558(IF:4.455)
[6] Cui S, Li F. RHPN1‑AS1 promotes ovarian carcinogenesis by sponging miR‑6884‑5p thus releasing TOP2A mRNA. Oncol Rep. 2021;46(4):221. doi:10.3892/or.2021.8172(IF:3.906)

arcticzymes尿嘧啶-DNA糖基化酶

Cod Uracil-DNA Glycosylase

鳕鱼尿嘧啶-DNA糖基化酶

Cod UNG酶的主要优点

PCR携带预防

关于PCR预防的一般信息

RT-qPCR中的PCR预防

Cod UNG是仅有兼容一步式RT-qPCR的UNG

应用

活性定义

反应buffer

酶保存液

储存

热失活

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